仁康醫(yī)院檢驗科微生物操作

武岡市展輝醫(yī)院微生物檢驗標準操作程序

展輝醫(yī)院檢驗科

微生物檢驗操作程序(SOP)

(第一版)

制作人：劉新平

啟用日期：2011年5月28日

i錄

微生物室工作崗位職責.........................4

微生物檢驗室內(nèi)質(zhì)控操作程序(SOP)................4

微生物室標本接收程序(SOP)............................8

微生物室標本接種程序(SOP)............................9

病原微生物污染處理程序(SOP).................……10

血液及骨髓培養(yǎng)標準操作程序(SOP)...............11

痰(咽拭)培養(yǎng)標準操作程序(SOP)...............12

尿液培養(yǎng)標準操作程序(SOP).....................……13

膽汁培養(yǎng)標準操作程序(SOP)......................……14

腦脊液培養(yǎng)標準操作程序(SOP).................……15

膿液及傷口分泌物培養(yǎng)標準操作程序(SOP)……16

糞便培養(yǎng)標準操作程序(SOP).....................……17

穿剌液培養(yǎng)標準操作程序(SOP)..................……19

生殖系統(tǒng)細菌培養(yǎng)程序(SOP).....................……20

細菌常規(guī)鑒定程序(SOP)....................................21

細菌涂片染色程序(SOP).............................……28

革蘭陽性球菌的鑒定...........................30

葡萄球菌屬的鑒定...........................30

微球菌屬的鑒定......................……32

鏈球菌屬的鑒定.............................32

腸球菌屬的鑒定......................……33

氣球菌屬的鑒定.............................34

革蘭陰性球菌的鑒定...........................35

奈瑟菌屬細菌的鑒定.........................35

韋榮球菌屬細菌鑒定.........................35

革蘭陽性桿菌的鑒定...........................36

李斯特菌屬與丹毒絲菌屬的鑒定........……36

棒狀桿菌屬的鑒定...........................36

諾卡菌屬的鑒定......................……37

紅球菌屬的鑒定.............................38

芽胞桿菌屬的鑒定.............................38

腸桿菌科的細菌鑒定...........................38

弧菌屬的鑒定.................................39

氣單胞菌屬的鑒定.............................40

不動桿菌屬的鑒定.............................40

莫拉菌屬的鑒定...............................41

金黃桿菌屬的鑒定.............................41

假單胞菌屬的鑒定.............................41

嗜血桿菌屬的鑒定.............................42

放線桿菌屬的鑒定.............................42

產(chǎn)堿桿菌屬的鑒定.............................43

布魯菌屬的鑒定...................................................43

軍團菌屬的鑒定...................................................43

彎曲桿菌科細菌的鑒定.............................................43

消化球菌屬和消化鏈球菌屬的鑒定...................................44

擬桿菌屬及梭桿菌屬的鑒定.........................................44

厭氧無芽胞革蘭陽性桿菌的鑒定.....................................44

梭狀芽胞桿菌屬的鑒定.............................................45

臨床真菌的檢驗及鑒定.............................................46

毛癬菌屬的鑒定.................................................46

小泡子菌屬的鑒定................................46

念珠菌屬的鑒定..................................47

隱球菌屬的鑒定..................................47

曲霉菌屬的鑒定.................................48

毛霉屬和根霉菌屬的鑒定...................……48

鐮他霉屬的鑒定..................................48

馬爾尼菲青霉菌的鑒定............................48

莢膜組織胞漿菌的鑒定............................49

申克抱子絲菌的鑒定..............................49

微生物藥敏試驗程序................................49

藥敏質(zhì)控程序......................................51

醫(yī)院環(huán)境"P-生.1學監(jiān)7則...............................53

空氣含菌量的監(jiān)測.........................……53

工作人員手細菌監(jiān)測..............................54

物體表面細菌的監(jiān)測.......................……54

消毒劑的監(jiān)測....................................55

無菌物品的監(jiān)測..................................55

血液培養(yǎng)儀BacT/ALERT3DSelect操作程序.....…56

ATB,rM接種操作程序................................56

微生物鑒定/藥敏鑒定ATB?操作................…57

微生物室工作崗位職責

1、負責全院臨床各科細菌檢驗標本的驗收，各種微生物檢測；細菌培養(yǎng)手工和上機分析鑒定及

藥敏試驗；支原體和衣原體檢測；院感監(jiān)測及其室內(nèi)室間質(zhì)控工作等。各項操作嚴格按照標準化操

作程序（SOP）進行。

2、每天檢查細菌自動分析儀工作是否正常；觀察培養(yǎng)箱溫度、室內(nèi)濕度、冰箱溫度是否符合要

求，并做好記錄。查看培養(yǎng)基、各種生化管、試劑、藥敏紙片、染色液等是否滿足檢測要求，并及

時更新或配制。

3、檢查細菌培養(yǎng)申請單及原始登記本，確定標本接種是否正確。觀察培養(yǎng)基、血液增菌培養(yǎng)

瓶生長狀況，如發(fā)現(xiàn)有細菌生長立即進行移種，并涂片革蘭染色，將細菌的染色特性及形態(tài)做好記

錄，及時通知臨床醫(yī)生。

4、檢測分析細菌，挑取可疑菌落涂片革蘭染色鏡檢，將菌落純分于血平板，做生化鑒定和藥敏

試驗或上機分析鑒定，并及時發(fā)放檢驗結果報告。

5、做好菌種的保存，對一些難得的菌株、標準菌株等要定期移種，一般一月一次，低溫保存；

做好移種記錄，并做好生物安全防護。

6、定期做好所用藥敏紙片的質(zhì)控，每周一次并有記錄；3-6個月畫一次質(zhì)控圖并有分析；對檢

驗樣本的數(shù)量、樣本的陽性率、各種細菌的耐藥性、各類細菌檢出構成的百分比進行統(tǒng)計，并打印

成文統(tǒng)一保存。

7、經(jīng)常保持室內(nèi)的清潔衛(wèi)生，生活垃圾與醫(yī)療垃圾要分裝處理；每天下班對室內(nèi)空氣進行消

毒處理；生物安全防護嚴格執(zhí)行醫(yī)院《醫(yī)務人員職業(yè)暴露防護制度》。

微生物檢驗室內(nèi)質(zhì)控操作程序（sop）

一、目的：規(guī)范微生物檢驗及室內(nèi)質(zhì)量控制，保證細菌檢測及藥敏結果的可靠性。

二、程序的更改：該標準操作程序的更改，可由任一使用本程序的操作人員提出，并報請專'也

組長及科主任批準簽字后生效。

三、控制方法

（一）對實驗室人員的要求

每個實驗室的技術人員數(shù)要充足，且要具備良好的職'也道德。凡參加細菌檢驗的技術人員，要

有一定的理論知識和實踐能力水平。要有廣泛的基礎訓練教育，而且要在一位有經(jīng)驗的微生物學家

的監(jiān)督下，進行實際工作的嚴格訓練，對新工作人員，除教會基本原理和操作外，還應對其進行職

業(yè)道德教育。

（二）實驗室操作手冊

制定微生物檢驗室標準化操作程序的手冊，內(nèi)容要全面，文字應簡練，間隔一定時間要進行修

改、刪舊補新。操作手冊一般包括以下內(nèi)容：①實驗室的規(guī)章制度：包括各級人員職責、權限及各

項有效的制度，如標本的接收、報告的發(fā)送、交接班、輪換、消毒隔離及安全制度等?②樣品采集、

運送與處理；③細菌檢驗流程及檢測工具；④檢驗方法與質(zhì)控方法（細菌分離、培養(yǎng)、鑒定與藥物

敏感試驗）；⑤試劑和培養(yǎng)基質(zhì)量控制；⑥儀器操作手冊；⑦報告方式；⑧臨床意義及參考數(shù)據(jù)；

⑨實驗室安全。

（三）儀器設備的質(zhì)控

1、高壓滅菌器及干熱滅菌器：使用滅菌器應遵守儀器操作規(guī)程。物品滅菌時，應同時放入監(jiān)

控指標。生物指標應用嗜熱脂肪芽胞桿菌懸液，裝入試管或安培瓶，也可用紙帶?；瘜W指標用對熱

敏感的染料標記的變色帶子。滅菌時，將試管或安培瓶、紙條或變色帶等夾放在試驗包裹中，以監(jiān)

視滅菌效果。對大型滅菌器，監(jiān)視指標應放在不同位置。

2、培養(yǎng)箱、水浴箱及冰箱：①溫度要求：培養(yǎng)箱35℃±1℃；水浴箱37℃±0.5七；冰箱4℃

±2℃,冰格一5℃±1℃；低溫冰箱一20℃±2℃；超低溫冰箱一80℃±10℃。②溫度記錄：每天在

工作開始和結束時記錄溫度，這類儀器要放入最高、最低溫度計監(jiān)視。

3、二氧化碳培養(yǎng)箱：二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)的CO2含量控制在5%—10%之間。

4、厭氧缸及厭氧培養(yǎng)箱：工作時應保證絕對無氧，在使用時應用化學和生物學兩種指標進行

監(jiān)視?；瘜W指標用美藍或刃天青，無氧時均為無色；生物學指標用諾維氏芽胞梭菌，如厭氧裝置有

隙縫時，該細菌即不生長。把粒應新鮮并具有活性，用過鈿粒通過加熱160C1.5—2小時，重新活

化后使用。

5、生物安全箱處理：對含有分枝桿菌和致病性真菌的標本，或培養(yǎng)物是需要的。穿過通風櫥

表面的氣流，不應小于30.38M/分，用于消除櫥內(nèi)污染的紫外線燈及濾過裝置，必須每隔3個月校

正其性能一次，不合格者應調(diào)換。

6、接種環(huán)要求長5—8cm,環(huán)直徑約3mm；尿定量接種環(huán)，應定期檢驗其容量是否準確，否則

應予校準；接種針長5—8cm。

臨床微生物實驗室常用儀器設備的質(zhì)量控制標準見下表。

表1常用儀器設備的質(zhì)量控制

儀器設備名稱控制標準允許范圍監(jiān)控方法和頻率

光學顯微鏡每年4次或需要時，作清潔與調(diào)試

培養(yǎng)箱35℃±1℃每天觀察記錄溫度

二氧化碳培養(yǎng)菌每天觀察記錄溫度和

溫度35℃±1℃二氧化碳濃度

氣體5%-10%<10%

冰箱每天觀察記錄溫度

冷臧室4℃±2℃

冷凍室-5℃±1℃

低溫冰箱-20℃±2c每天觀察記錄溫度

使用時觀察并記錄溫度、壓力，每周用嗜熱芽抱菌

壓力蒸汽滅菌器121℃2121℃

或每次用化學方法測試滅菌效果

隨著醫(yī)學檢驗學科的不斷發(fā)展，許多自動化儀器和微量生化反應系統(tǒng)相繼進入微生物實驗室。

給細菌和真菌的培養(yǎng)、鑒定與藥敏試驗，帶來快速準確的結果。對于這些儀器設備的質(zhì)量控制，可

根據(jù)廠商說明書推薦的方法去做，確保測試系統(tǒng)的靈敏度和精密度。

（四）培養(yǎng)基的質(zhì)控

實驗室每一次制備的培養(yǎng)基作為一批，標明批號；商品培養(yǎng)基則以同一時間內(nèi)生產(chǎn)的，相同批

號作為一批。如果同一批號不在同一個月內(nèi)使用，則培養(yǎng)基應重新用標準菌株進行考核。因此，必

須對培養(yǎng)基作以下三方面質(zhì)控。

1、一般性狀

培養(yǎng)基一般性狀包括外觀、厚度、pH值等。剛配制的液體培養(yǎng)基，其外觀應透明、清亮、無

混濁、無沉淀，顏色符合要求。新鮮的固體培養(yǎng)基應具有特定的顏色，表面濕潤但無水汽、平整、

光潔無凹坑和氣泡。整塊平板厚薄均勻，一般厚度在3mm,但MH平板的厚度不得小于4mm。

斜面的長度不得超過試管長度的2/3。應經(jīng)常觀察貯存培養(yǎng)基的質(zhì)量是否合格。若試管內(nèi)液體培

養(yǎng)基液面降低，表明水分蒸發(fā)，培養(yǎng)基濃縮。當固體培養(yǎng)基發(fā)生顏色改變，表面干燥，出現(xiàn)裂紋或

邊緣的瓊脂與平板或試管分離時，應不再使用。培養(yǎng)基的pH是細菌生長的重要條件之一，一般而

言合格培養(yǎng)基的pH應在規(guī)定值上下0.2的范圍之內(nèi)。

2、無菌試驗

新制備的培養(yǎng)基，要按批號隨機抽取一定數(shù)量的樣品作無菌試驗。對于壓力蒸氣滅菌后傾注的

固體培養(yǎng)基，抽樣后放35℃±rc溫箱培養(yǎng)24-48h；滅菌后經(jīng)無菌操作分裝的液體培養(yǎng)基，要

全部放入35℃±1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h；對有些無需高壓滅菌，只需煮沸消毒的選擇性培養(yǎng)基要

取部分瓊脂，放入無菌肉湯管培養(yǎng)24h；上述試驗證實無細菌生長時才算合格。若有細菌生長，說

明培養(yǎng)基制備過程中已受雜菌污染，除了尋找原因外，應不再使用。

3、細菌生長試驗

所有的培養(yǎng)基在使用前除了做無菌試驗外，還必須做細菌生長試驗以測定培養(yǎng)基性能是否符合

要求。要用已知的標準菌株，按照NCCLS推薦的方法作質(zhì)控。質(zhì)控所需的標準菌株分2種：一

種是已知的可在某種培養(yǎng)基上生長，并產(chǎn)生典型生物學性狀的，對培養(yǎng)基中的某種物質(zhì)產(chǎn)生陽性反

應的菌株；另一種是用已知的不能在某種培養(yǎng)基上生長，或?qū)ε囵B(yǎng)基中的某種物質(zhì)產(chǎn)生陰性生化反

應的菌株。表2列出10種常用固體培養(yǎng)基的質(zhì)量鑒定標準及所需標準菌株。

無論是廠家的成品培養(yǎng)基，還是實驗室自制的培養(yǎng)基，都應經(jīng)過上述三方面的檢驗，才能證實

其質(zhì)量是否合格。廠家應將所做的試驗內(nèi)容，形成書面的質(zhì)量鑒定送交客戶保存。實驗室自行配制

過程中應對上述鑒定內(nèi)容有明確記載。此外，還應對培養(yǎng)基配制原料的性狀、批號、失效期，以及

配制過程各個環(huán)節(jié)的操作形成記錄。常用培養(yǎng)基的質(zhì)量鑒定見下表。

表210種常用培養(yǎng)基的質(zhì)量鑒定表

培養(yǎng)基名稱質(zhì)控菌株ATCC鑒定標準

血平板金黃色葡萄球菌25923中度到大量生長

化膿性鏈球菌19615生長，P-溶血

肺炎鏈球菌6305生長，a溶血

大腸埃希菌25922生長

巧克力平板流感嗜血桿菌10211生長

腦膜炎奈瑟菌13090生長

淋病奈瑟菌43096生長

伊紅美藍平板鼠傷寒沙門菌14028生長，無色到琥珀色菌落

大腸埃希菌25922生長，藍黑菌落，金屬光澤

糞腸球菌29212部分抑制

麥康凱平板大腸埃希菌25922生長，紅色菌落

奇異變形桿菌12453生長，無色菌落，遷徙現(xiàn)象部分抑制

鼠傷寒沙門菌14028生長，無色菌落

糞腸球菌29212部分抑制

SS平板鼠傷寒沙門菌14028生長，無色菌落，有或無黑心

福氏志賀菌12022生長，無色菌落

糞腸球菌29212全部抑制

大腸埃希菌25922部分或全部抑制

TCBS平板霍亂弧菌9459生長，黃色菌落

副溶血弧菌17802生長，藍色菌落

大腸埃希菌25922部分或全部抑制

營養(yǎng)瓊脂平板福氏志賀菌12022中度到大量生長

沙保弱平板白色念珠菌10231生長

大腸埃希菌25922部分或全部抑制

羅氏培養(yǎng)基結核分枝桿菌H37Ra25177生長

大腸埃希菌25922部分或全部抑制

淋病選擇性淋病奈瑟菌43096生長

培養(yǎng)基奇異變形桿菌43071部分抑制

表皮葡萄球菌12228部分抑制

常用培養(yǎng)基、染色液及生化反應的種類繁多，其相應的質(zhì)控菌株也有數(shù)十余種，這些菌株應來

源于世界上專門保存菌種的權威機構。如美國菌種保藏中心(ATCC)：英國的國家典型菌種保藏中心

(NCTC)；或我國衛(wèi)生部藥檢生物制品檢定所菌種保藏中心(CMCC)等。

下面介紹一下質(zhì)控菌株的保存方法

(1)一般保存方法：用高層瓊脂保存，使細菌處于代謝緩慢狀態(tài)，并按照各種細菌生長的情況作

定期移種。此方法是最簡單的保存方法，最長可保存一年細菌不會死亡。但細菌經(jīng)多次移種后，性

狀可能發(fā)生變異。

(2)低溫冰箱保存方法：取數(shù)環(huán)對數(shù)生長期的細菌混懸于小牛血清或無菌脫纖維羊血0.5—1ml

中，容器中加入無菌玻璃珠數(shù)枚，速凍后(液氮內(nèi))，貯存于-40℃低溫冰箱中保存。需用時無菌鑲

子取出一枚玻璃珠置培養(yǎng)基中，即可獲得新鮮菌種。這種方法可長期保存細菌。

(3)真空冷凍干燥法：該方法最為可靠，具有不改變菌種性狀，可長期保存，對保存條件適應性

強等優(yōu)點。

(五)試劑質(zhì)控

臨床微生物實驗室常用的試劑，包括染色液、診斷血清及各種生化反應試劑等。各種染色液配

制后，必須用適應的標準菌株作陽性和陰性對照后方可使用；各種生化反應試驗的培養(yǎng)基及試劑，

必須用化學純或分析純試劑配制，并且陽性與陰性菌株作性能試驗，再注明批號，按試劑性質(zhì)，分

別予以避光冷藏，在有效期限內(nèi)使用；定期以陽性與陰性菌株進行監(jiān)控。

1、染色液質(zhì)控

細菌室最常用的染色液是革蘭染色液和抗酸染色液。對自制的染色液，要求將整個配制過程的

操作步驟形成記錄并保存；配好的染色液應貼上寫有染色液名稱、配制日期、配制人的標簽：初次

使用時必須用革蘭陽性球菌和革蘭陰性桿菌標準株作質(zhì)量鑒定，以證實染色液配制無誤；商品化染

色液應對試劑名稱、批號、存放條件、失效期等說明；廠家應向客戶提供染色液鑒定的質(zhì)量保證書。

按照CLIA88的規(guī)定，染色液應每周作一次質(zhì)量控制，用金黃色葡萄球菌(ATCC25923),大腸埃

希菌(ATCC25922)作革蘭染色液的室內(nèi)質(zhì)控。用結核分枝桿菌H37Ra(ATCC25177)對抗酸染色

液進行質(zhì)量鑒定。過期的染色液應不再使用。

2.、常用生化試劑的質(zhì)控

隨著細菌鑒定儀和快速微量生化鑒定板條的普及，臨床微生物檢驗常用的生化試劑種類II趨減

少，對這些試劑的質(zhì)控要求見表3。此外，應注意在用試劑貯存時的避光、冷藏等要求，保證試劑

的穩(wěn)定性。不要使用過期的試劑。

3、診斷血清的質(zhì)控

診斷血清是一種重要的細菌鑒定的試劑，應從有資質(zhì)的生產(chǎn)單位購買。驗收時必須看清生產(chǎn)批

號、血清效價、透明度與色澤。初次使用時應注意：工作濃度并與原用的診斷血清對照比較后再用

于病人樣品的測試。試驗中應注意無菌操作，避免細菌污染。要經(jīng)常檢查貯存在4℃冰箱中的各種

血清，若發(fā)現(xiàn)混濁，出現(xiàn)絮狀，應停止使用。為保證血清凝集反應結果準確，應每3個月對血清進

行一次質(zhì)控；不要使用過期的血清。

表3常用試劑的質(zhì)量鑒定

試劑名稱陽性對照菌種陰性對照菌種監(jiān)控頻率

凝固酶血漿金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌每天

桿菌肽A群鏈球菌B群鏈球菌每周

Optochin紙片肺炎鏈球菌每周

10%去氧膽酸鈉肺炎鏈球菌每周

三氯化鐵(馬尿酸鈉試驗)B群鏈球菌A群鏈球菌每次

過氧化氫金黃金葡萄球菌A群鏈球菌每天

氧化酶銅綠假單胞菌大腸埃希菌每天

甲基紅試劑大腸埃希菌產(chǎn)氣腸桿菌每周

VP試劑產(chǎn)氣腸桿菌大腸埃希菌每周

三氯化鐵(苯丙刎酸脫氫酶試驗)奇異變形桿菌大腸埃希菌每周

“X”因子條狀物嗜沫嗜血桿菌副流感嗜血桿菌每周

“V”因子條狀物副流感嗜血桿菌流感嗜血桿菌每周

“X+V”因子條狀物流感嗜血桿菌每周

副流感嗜血桿菌

芽管血清白色念珠菌熱帶念珠菌每次

微生物室標本接收程序(SOP)

一、目的：確保送檢標本合格及檢驗結果的正確性和及時性。

二、操作方法

1.接收標本應做好查對，對不合格標本或標本與檢驗單不符合的，應及時與臨床聯(lián)系，直至

標本送檢合格并做好記錄。

⑴痰液標本：先看外觀(膿性粘液狀)，再直接涂片鏡檢，低倍鏡下白細胞＞25個、上皮細

胞＜10個/每個視野，為合格痰液；應無菌容器盛裝。

⑵無菌體液標本：檢查盛裝器皿或試管必須消毒滅菌，標本數(shù)量多少是否符合要求，是否有污

染的可能；盡量在用藥前采集標本。

⑶大便標本：要取病變部位(膿、血粘液)盛裝消毒盒內(nèi)；容易干燥的標本：如咽拭子、膿液

拭子、泌尿生殖道拭子等采集后要及忖送檢、接種。

⑷尿液標本：要留取晨尿3-5ml于無菌瓶中，防止污染；厭氧菌培養(yǎng)的標本，其送檢環(huán)境是否

滿足；各種標本做好原始單的登記。

2.標本編號規(guī)則

(1)BacT/ALERT3D60型血培養(yǎng)編號按流水號+位置號。

(2)接種平板常規(guī)標本按流水號，每年從1開始編號。

(3)標本涂片編號：

①涂片查找抗酸菌：T+編號；

②涂片找真菌、桿菌：B+編號；

③球菌涂片：C+編號。

(4)院感標本按每月從1編號。

3.標本登記規(guī)則

⑴細菌室要有細菌培養(yǎng)登記本、傳染病登記本、各種涂片染色登記本，并在電腦上登記每天接

受的標本，和細菌培養(yǎng)鑒定及藥敏資料。

⑵登記內(nèi)容必須完整準確，包括編號、患者姓名、性別、年齡、科室、床號、標本來源、住院

號、細菌名及各種藥敏結果。

⑶對法定傳染病的結果，要登在傳染病登記本上，并報告院防?？?。

⑷各項登記必須準確登記年、月、日，方便查詢。

⑸對有特殊耐藥機制的細菌，必須準確記錄其產(chǎn)酶結果。

微生物室標本接種程序（SOP）

?、目的：保證標本正確接種到合適的培養(yǎng)基中，使細菌能得到充分的生長和能分離出單個菌

落，獲得純培養(yǎng)而供分析鑒定。

二、操作方法

1、右手持接種工具，在火焰上燒灼接種環(huán)變紅而滅菌。

2、左手持標本容器或試管，用接種環(huán)挑取標本，采用分段劃線法接種于平皿上；無菌組織來

源的標本應接種增菌液，放35℃培養(yǎng)箱中。當從標本器皿或平板上挑取菌落后，應立即塞上試管

塞或扣上平皿蓋以防污染。

3、挑取標本時，應注意選擇反映感染的病理部分。如糞便挑取粘液膿血部分；純化細菌應從

原代培養(yǎng)基上挑取單個可疑菌落；從液體培養(yǎng)基中取菌，將接種環(huán)在培養(yǎng)液中蘸取一環(huán)即可，并

編號記錄。

4、接種時可根據(jù)標本，以快速、提高陽性率為前題，采用不同的接種方法，選擇不同的培養(yǎng)

基。

5、接種后，應在火焰上燒灼接種工具，所用工具應放回原處。

6、下表1是各種標本細菌培養(yǎng)應選擇的培養(yǎng)基。如尿液接種方法：在火焰上燒紅接種環(huán)，無

菌手續(xù)挑取中段尿50uL在血瓊脂平板和麥康凱平板中做分段劃線接種，放35c培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

表4各種標本選擇的培養(yǎng)基

標本名稱接種培養(yǎng)基

尿液血平板（BM）、麥康凱（MCK）

糞便麥康凱（MCK）、血平板、SS

痰液、咽拭子、灌洗液血平板、巧克力平板、麥康凱（MCK）

痰液、白帶等檢驗真菌沙保羅培養(yǎng)基、血平板

白帶、前列腺液巧克力平板（TM）、血平板

傷口分泌物、膿汁血平板、麥康凱（MCK）

血液、脊髓液專用血培養(yǎng)瓶

腦脊液巧克力平板、血平板、肉湯管

注：巧克力平板接種后放入5%-10%CO2環(huán)境中35℃培養(yǎng)中培養(yǎng)。

血培養(yǎng)瓶包括PLUS+AEROBIC/F（細菌、真菌培養(yǎng)）

PLUS+ANAEROBIC/F（厭氧菌培養(yǎng)）

PEDC-PLUS/F（兒童血、腦脊液培養(yǎng)）

MYCO/F-LYTIC（結核培養(yǎng)）

病原微生物污染處理程序（SOP）

1、廢棄標本處理

⑴血液、穿剌液、腦脊液無菌手續(xù)抽取后，立即注入血培養(yǎng)瓶中送檢。用后的針頭放入利器盒

中，注射器毀形裝入黃色塑料袋中統(tǒng)一焚燒處理。

⑵尿液、痰液用帶蓋的無菌瓶子盛放送檢，接種完后，標本瓶子放進帶蓋的污物桶中，統(tǒng)一焚

燒處理。

⑶生殖道標本、傷口分泌物等用無菌帶蓋棉簽試管送檢，接種后，標本試管放入帶蓋污物桶中，

統(tǒng)一焚燒處理。

⑷涂片的玻片使用后，放入盛有2000mg/L含氯消毒液桶中，浸泡后煮沸30分鐘滅菌處理，

清洗干凈。

2、使用后的衛(wèi)生物品處理

⑴廢棄的塑料培養(yǎng)基、一次性衛(wèi)生用品、過期的菌株及痰盒放進黃色塑料袋子集中放進高壓鍋

消毒后焚燒。

⑵檢驗后帶菌玻璃培養(yǎng)皿，集中統(tǒng)?放進高壓鍋消毒后，清洗干凈烤干再用。

⑶凡用于吸取菌液的吸嘴、吸管，一律放入2000mg/L含氯消毒液中浸泡后焚燒。

3、被細菌污染操作臺面或地面的處理：應立即用2000mg/L含氯消毒液擦拭或用2000mg/L含

氯消毒液灑到污染點上，浸泡30分鐘后擦洗干凈。

4、職業(yè)暴露后處理

⑴手被污染后應立即浸泡到含氯消毒液中或用碘伏消毒處理。

⑵若眼睛或粘膜污染，則用無菌生理鹽水沖洗，滴抗菌素眼藥水處理。

⑶無故剌傷，若被病原體污染，應立即用碘伏消毒、口服抗菌素處理；并報告防?？朴嘘P部門,

根據(jù)不同病原體采取相應的應急措施，包括預防接種和抗菌素治療等。

血液及骨髓細菌培養(yǎng)標準操作程序（SOP）

1、標本采集

⑴山病房護士在病人發(fā)熱初期或發(fā)熱高峰時抽取血液，采集血量5—10ml,為培養(yǎng)液的1/10為

宜（兒童為3—5ml）；骨髓1-3ml。

⑵標本采集注意事項，執(zhí)行《臨床檢驗標本采集指南》。注意嚴格無菌操作，標本采集后應立

即注入血培養(yǎng)瓶充分混勻，防止凝固，并立即送檢。

2、檢驗程序

圖1血液、骨髓（增菌需、厭氧培養(yǎng)）

涂片染色鏡檢分離，養(yǎng)____________直接藥與■式驗

I435℃6：8小時

血平板和^弓克力平板血平板*口麥康凱小報告

（⑩培養(yǎng)及代氧培養(yǎng)）（厭氧培養(yǎng)）

________a芋察________

涂片］色鏡檢_______________________赳岳_____________

血清學卜驗生嬴應藥敏

確定報告

3、機檢程序：

⑴培養(yǎng)瓶放入BacT/ALERT3D自動細菌培養(yǎng)儀里，若有細菌生長儀器自動報警，取出移種血

平板做進一步培養(yǎng)分析鑒定。

⑵用一次性注射器以無菌技術抽取瓶內(nèi)培養(yǎng)物涂片，做革蘭氏染色，將染色特性結果電話通知

臨床醫(yī)生。

⑶取生長物移種血平板、麥康凱平板放35℃培養(yǎng)16-20小時。

⑷肉眼觀察血平板、麥康凱平板上的菌落特征并做革蘭氏染色。

⑸若是革蘭陽性球菌：根據(jù)血平板溶血生長情況和涂片細菌形態(tài)做PC12測試板鑒定。

⑹若是革蘭陰性桿菌：作氧化酶試驗，并做NC21測試板鑒定。

4、報告結果

⑴菌體鑒定到種或型及所測得的抗生素MIC試驗結果。

⑵培養(yǎng)七天后如果陰性，BacT/ALERT3D儀器自動報警，取出培養(yǎng)瓶盲傳血平板、巧克力平板、

麥康凱平板及革蘭氏染色。有細菌就報XX菌生長；如無細菌則報告：“培養(yǎng)7天無細菌生長”。

痰（咽試）培養(yǎng)標準操作程序（sop）

1、常見病原菌

表5下呼吸道標本培養(yǎng)常見病原菌

革蘭陽性菌革蘭陰性菌

金黃色葡萄球菌腦膜炎奈瑟氏菌

化膿性鏈球菌流感嗜血桿菌

肺炎鏈球菌腸桿菌科細菌

結核分枝桿菌非發(fā)酵菌

白喉棒狀桿菌嗜肺軍團菌

假絲酵母菌擬桿菌

2、標本采集：為清晨經(jīng)漱口的第一口痰，且新鮮深咳出者，收集時應避免受唾液污染；將痰

吐入無菌帶蓋的痰杯中送檢。

⑴痰標本肉眼觀察：顏色，粘度，有無血絲或膿性，若標本為水狀且明顯是唾液，涂片鏡檢上

皮細胞＞25,白細胞很少為不合格，重送標本。

3、檢驗程序

圖2痰液

結核釁查血平叫麥康凱巧克叫板涂片革蘭染種鏡檢

抗嬴言―羅氏培泉基需厭舉各一C02培養(yǎng)1#-24小時初步布告

菌落觀察［涂片染色________

鑒擊贏贏去驗

確定報告

⑴涂片革蘭氏染色檢查：挑選痰液中膿性或帶血部分，涂成均勻薄片，革蘭氏染色鏡檢。除了

解痰標本收集是否合格外，還可根據(jù)鏡檢所見發(fā)初步報告；如見排列成葡萄狀的G+c,可報告為“找

到G+c,形似葡萄球菌”;如見到瓜子仁形或矛頭狀的尖端相背，成雙排列短鏈狀，且有明顯莢膜的革

蘭陽性球菌時，可報告為：“找到革蘭氏陽性球菌，形似肺炎鏈球菌等”。

⑵痰標本的接種：分別將痰標本接種于血平板、巧克力平板或麥康凱平板上。

⑶培養(yǎng)：將血平板、麥康凱平板置于35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)；將巧克力平板置于5%—10%82環(huán)境

中，35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)18—24小時。

⑷觀察培養(yǎng)基的生長狀況，并定量每一種微生物的生長情況，以多量、中量及少量記錄。

⑸觀察培養(yǎng)基的生長情形后，可視需要取菌落作涂片，進行革蘭氏染色鏡檢。

⑹根據(jù)革蘭氏染色情況，挑取可疑菌落做生化鑒定或利用WalkAway-

40SI儀鑒定板進行鑒定和藥敏。

⑺若可能的話，可當II發(fā)出部分報告或最后確定報告。

⑻若是正常菌群生長，可報“無致病菌生長”：查出致病菌或條件致病菌，報告菌名和藥物敏

感試驗結果。

尿液培養(yǎng)標準操作程序（sop）

1、檢驗程序

圖3尿液

涂片古色鏡檢定蹇卜養(yǎng)分離培養(yǎng)（血平板、麥康凱）

淋球菌培養(yǎng)

菌率察

--------------------4---------------涂片染色巧克力平板

涂片染色鏡檢純培聲初步報告5%-10%CO2

鑒定、型試驗35℃18-24h

確定布告

2、標本的采集

⑴清潔外陰及尿道口周圍，自然排出的中段尿液1—3ml,導尿及恥骨吸取膀胱尿液5?10ml

裝于無菌容器，標本收集后立即送檢。

3、標本的處理

⑴涂片檢查：以無菌操作吸取尿5?10ml,放入無菌試管內(nèi)，經(jīng)3000r/min離心lOmin后，傾

去上清液，取其沉渣，涂片革蘭氏染色鏡檢。如發(fā)現(xiàn)有革蘭氏陰性雙球菌，存在細胞內(nèi)或細胞外

或者有念珠菌等，即可發(fā)出鏡檢初步報告。

⑵尿定量培養(yǎng)（菌落計數(shù)）

I平板接種法：用定量加液器取尿液50ul,滴在平板培養(yǎng)基上，用接種環(huán)涂抹均勻，放35℃

培養(yǎng)過夜，計數(shù)生長的菌落數(shù)，乘以20,求出每ml的菌數(shù)。

II傾注平板法：首先將無菌生理鹽水9.9ml分裝在試管中，加入被檢尿0.1ml,充分混勻，使成

100倍稀釋。取此液1ml放入直徑9cm滅菌平皿內(nèi)，同時加入己融化并冷至50℃的培養(yǎng)基與尿混

勻，待凝固后置35℃培養(yǎng)，生長菌落數(shù)乘以100即相當于每ml中菌數(shù)。

⑶培養(yǎng)基選擇：①血平板、麥康凱是基本培養(yǎng)基，一般的革蘭氏陽性和陰性菌均可生長。②淋

球菌培養(yǎng)：選用巧克力平板，并放入CO2環(huán)境中培養(yǎng)。③結核桿菌培養(yǎng)：選用羅氏培養(yǎng)基。

3.報告方式：如下情況需要進行鑒定和抗生素敏感試驗。

⑴革蘭陰性桿菌計數(shù)大于105cfu/ml；革蘭陽性球菌計數(shù)大于lO,cfu/ml有診斷意義。

⑵導尿標本的菌落計數(shù)超過lO'cfii/ml有臨床意義。

⑶以“恥骨抽取”所得到尿液上的任何微生物。

⑷與病人血液中所發(fā)現(xiàn)的微生物相同者。

（5）通過染色鏡檢，生化反應或上機分析鑒定，最后報告細菌名稱及藥敏試驗結果。

注：在血平板，巧克力平板，麥康凱平板上的菌落特征及生長情況都要記錄在“細菌培養(yǎng)登

記薄”上。

膽汁細菌培養(yǎng)標準操作程序（sop）

1.膽汁培養(yǎng)常見的病原菌

表6膽汁培養(yǎng)常見病原菌

革蘭陽性菌革蘭陰性菌

腸球菌大腸埃希菌

消化鏈球菌肺炎克雷伯氏菌

厭氧鏈球菌變形桿菌

葡萄球菌銅綠假單胞菌

傷寒及其它沙門菌

1、標本的采集：山臨床醫(yī)生在無菌操作下，抽取膽汁于無菌試管中送檢。

⑴膽汁標本采集方法有三種，即十二指腸引流法，膽囊穿刺法及手術直接采取法。

十二指腸引流法：無菌操作下用導管作十二指腸引流膽汁，分為A、B、C三部分。A液來自

膽管，為橙黃或金黃；B液來自膽囊為棕黃綠色；C液來自肝膽道為檸檬色。B液做細菌培養(yǎng)意義

較大。

⑵膽汁的接種量為培養(yǎng)液的1/10,無菌操作取B液5ml于培養(yǎng)瓶中輕輕混勻，放35℃溫箱中

培養(yǎng)。

2、標本的處理

⑴涂片檢查：一般不作涂片檢查，當臨床需要時，可將膽汁經(jīng)3000r/min離心lOmin后，取沉

淀涂片，革蘭氏染色鏡檢。根據(jù)細菌形態(tài)，排列及染色特性，發(fā)出初步報告。

3、細菌檢驗程序

圖4膽汁

涂干噪色需氧培養(yǎng)（增菌）厭氧產(chǎn)養(yǎng)

贏血平板、麥尚凱血,『板

涂片染色鏡檢,鑒定及藥敏試驗

確定報告

⑴增菌培養(yǎng)：膽汁本身有抑菌作用，接種普通肉湯后，膽鹽稀釋降低抑菌作用，為提高陽性檢

出率，膽汁的接種量為肉湯的1/10。

⑵分離培養(yǎng)：移種血平板、麥康凱，采用分區(qū)劃線接種，35℃增菌培養(yǎng)24h—72h觀察有無菌

生長，無菌生長則報告無細菌生長。

⑶結果觀察及鑒定：有細菌生長，根據(jù)生長細菌按常規(guī)或上機鑒定之。

4、報告方式

⑴沙門氏菌感染在膽汁中檢出率較高，但必須以血清凝集試驗為依據(jù)，報告血清型。

⑵正常膽汁應是無菌的，如培養(yǎng)出細菌即為致病菌，應報細菌的種、型及藥敏試驗結果。

腦脊液培養(yǎng)標準操作程序（sop）

1、標本的采集：在患者用藥前，由臨床醫(yī)師以無菌手續(xù)行腰椎穿刺，抽取腦脊液3-5ml,盛于

無菌試管中，立即送檢（切不可置冰箱冷藏）。

2、標本的處理

首先觀察腦脊液的外觀，除結核性腦膜炎，無菌性腦膜炎外；其他細菌引起的化膿性腦膜炎,

腦脊液多呈明顯混濁。取腦脊液標本以3000r/min離心lOmin,取沉淀物培養(yǎng)和涂片革蘭氏染色、

抗酸及墨汁染色鏡檢，根據(jù)染色鏡檢發(fā)出初步報告。

革蘭染色血平板（增菌）羅氏培養(yǎng)基血平板

黑汁染色j-------*---

抗酸染色5-10%CC）2培養(yǎng)I需氧培養(yǎng)25C卡養(yǎng)35y培養(yǎng)

菌M形態(tài),若有翟年長,涂片也色涂R染色

鑒定、書敏試驗

涂片染色鏡檢<______鏡檢

確定加告

⑴培養(yǎng)基的選擇：可先將腦脊液接種肉湯增菌、巧克力平板及羅氏培養(yǎng)基，再用肉湯增菌后接種

血平板、沙保羅平板等。

⑵結果觀察及鑒定：①涂片染色鏡檢：革蘭氏陰性雙球菌，呈腎形兩凹面相對成一圓形成雙排

列。②本菌屬細菌氧化酶及觸酶陽性，腦膜炎奈瑟菌能分解葡萄糖、麥芽糖，而淋病奈瑟氏菌只

分解葡萄糖相鑒別。

4、報告方式：如實報告鑒定結果及其藥敏結果。

膿液及傷口分泌物培養(yǎng)標準程序（sop）

1、檢驗程序

圖6膿液及傷/分泌物

涂片染色需氧培養(yǎng)厭氧培養(yǎng)結核菌培養(yǎng)

革蘭氏染色

抗酸染色分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)增菌培養(yǎng)

鏡檢血平板及巧克力平板葡萄糖血平板硫乙醇酸鈉肉湯

麥康凱平板牛心腦浸液平板皰肉增菌培養(yǎng)基

觀.菌落

涂片染I色鏡檢S培養(yǎng)

生化贏藥?試驗

確定報告

2、標本的采集

⑴創(chuàng)傷：用無菌鹽水清洗表面，用棉試子直接沾取膿液或分泌物。

⑵膿腫：消毒患部，無菌注射器抽取膿液2-5ml刺入無菌橡皮塞中送檢（注意厭氧菌的檢測）。

⑶檢查放線菌的標本應取多量膿液，要注意采集其中“硫磺顆?！边M行鑒定。

3、標本的處理

⑴涂片檢查：膿液標本均應涂片進行革蘭氏染色或抗酸染色，根據(jù)鏡下所見發(fā)出初步報告。

4、培養(yǎng)檢查

⑴培養(yǎng)接種:標本接種到血平板，麥康凱平板，置35℃培養(yǎng)，標本接種到巧克力平板置5-10%CC）2

環(huán)境35c培養(yǎng)16-24h?

⑵培養(yǎng)基菌落觀察及鑒定：血平板，巧克力平板，麥康凱平板上生長的細菌，按常規(guī)鑒定及藥

敏試驗。膿性標本涂片見大量細菌，而培養(yǎng)不生長者，應考慮厭氧菌感染，應做厭氧菌培養(yǎng)。

5、報告方式：對無菌組織部位的感染，分泌物中分離到細菌，一般均有臨床意義，要及時鑒

定和藥敏試驗。報告細菌名稱及藥敏試驗結果。

糞便細菌培養(yǎng)標準操作程序（sop）

1、引起感染性腹瀉的病原微生物有：①細菌性，產(chǎn)毒素型腹瀉：包括霍亂弧菌、腸毒素型大腸

埃希菌等；侵襲型腹瀉：包括志賀菌、腸致病大腸埃希菌和腸侵襲型大腸埃希菌等；食物中毒：包

括沙門菌、金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌、蠟樣芽胞桿菌和肉毒梭菌等；偽膜性腸炎：包括艱難

梭菌、葡萄球菌或真菌：慢性腹瀉：主要由結核桿菌、念珠菌引起。②真菌性：念珠菌、毛霉菌等。

引起腹瀉的致病菌見下表

表7常見引起腹瀉的致病菌

革蘭陽性菌革蘭陰性菌

金黃色葡萄球菌傷寒及其它沙門菌

結核分支桿菌志賀菌屬

難辨梭菌致病大腸埃希菌

蠟樣芽胞桿菌(ETEC>EPEC、EIEC>EHEC)

白色念珠菌弧菌屬菌種

毛霉菌氣單胞、鄰單胞菌種

小腸結腸炎耶爾森菌

彎曲菌

2、標本采集：采集糞便標本時;應挑取有膿血或粘液部分3?5克，盛于消毒的廣口瓶、蠟質(zhì)

紙盒或塑料盒內(nèi)及時送檢。

3、檢驗程序

圖7糞便或肛拭子

I______________________________

分m贏看養(yǎng)

II

sfw麥康凱及小平板亞硒酸「增菌培養(yǎng)基GN增菌培1基

（適于沙門氏菌屬）（志賀氏菌屬）

1I

SS及?康凱）平板