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文檔簡介
實(shí)例1:紫外線的誘變育種紫外線誘變一般采用15W紫外線殺菌燈,波長為2537A.燈與處理物的距離為15~30cm,照射時間依菌種而異,一般為幾秒至幾十分鐘。一般我們常以細(xì)胞的死亡率表示,希望照射的劑量死亡率控制在70~80%為宜。被照射的菌懸液細(xì)胞數(shù),細(xì)菌為106個/ml左右,霉菌孢子和酵母細(xì)胞為106~107個/ml。由于紫外線穿透力不強(qiáng),要求照射液不要太深,約0.5~1.0cm厚,同時要用電磁攪拌器或手工進(jìn)行攪拌,使照射均勻。由于紫外線照射后有光復(fù)活效應(yīng),所以照射時和照射后的處理應(yīng)在紅燈下進(jìn)行。
(二)操作步驟
1.將細(xì)菌培養(yǎng)液以3000r/min離心5min,傾去上清液,將菌體打散加入無菌生理鹽水再離心洗滌。
2.將菌懸液放入一巳滅菌的,裝有玻璃珠的三角瓶內(nèi)用手搖動,以打散菌體。將菌液倒入有定性濾紙的漏斗內(nèi)過濾,單細(xì)胞濾液裝入試管內(nèi),一般處于渾濁態(tài)的細(xì)胞液含細(xì)胞數(shù)可達(dá)108個/ml左右,作為待處理菌懸液。
3.取2~4m1制備的菌液加到直徑9cm培養(yǎng)皿內(nèi),放入一無菌磁力攪拌子,然后置磁力攪拌器上、15W紫外線下30cm處。在正式照射前,應(yīng)先開紫外線10min,讓紫外燈預(yù)熱,然后開啟皿蓋正式在攪拌下照射10~50s。操作均應(yīng)在紅燈下進(jìn)行,或用黑紙包住,避免白熾光。4.取未照射的制備菌液和照射菌液各o.5ml進(jìn)行稀釋分離,計數(shù)活菌細(xì)胞數(shù)。
5.取照射菌液2ml于液體培養(yǎng)基中(300ml三角瓶內(nèi)裝30ml培養(yǎng)液),120r/min振蕩培養(yǎng)4~6h。
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