用于生物技術(shù)產(chǎn)品及生物制品生產(chǎn)的細(xì)胞基質(zhì)的來源和鑒定

(158) (158) (158) (158)2.指導(dǎo)原則 (159) (159)2.1.1前言 (159) 2.1.3細(xì)胞基質(zhì)的產(chǎn)生 (161) (161)2.2.1細(xì)胞庫(kù)系統(tǒng) (162)2.2.2細(xì)胞建庫(kù)的步驟 (163) (164) (165) (166)2.3.2純度的檢測(cè) (166) (166) (167)2.3.3細(xì)胞基質(zhì)的穩(wěn)定性 (168)2.3.4細(xì)胞核學(xué)和致瘤性試驗(yàn) (169) (170) (171)本指導(dǎo)原則的目的是對(duì)用于生產(chǎn)生物技術(shù)產(chǎn)品及生的人和動(dòng)物細(xì)胞系、微生物細(xì)胞系及其細(xì)胞庫(kù)的制備和鑒立合適的標(biāo)準(zhǔn)提供指導(dǎo)意見。本文件還為申請(qǐng)產(chǎn)品上市時(shí)歷史上，由于細(xì)胞源性的生物制品存在外來污用于制備產(chǎn)品的細(xì)胞特性的擔(dān)憂，引發(fā)了一些對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量體有關(guān)。由此，業(yè)界達(dá)成共識(shí)，認(rèn)為細(xì)胞基質(zhì)的特性以及相關(guān)的事件將影響產(chǎn)品的質(zhì)量和安全性。為有效地控制產(chǎn)本文件對(duì)從后生動(dòng)物和微生物細(xì)胞培養(yǎng)來源的制品本指導(dǎo)原則涵蓋了所有具備細(xì)胞庫(kù)系統(tǒng)的細(xì)胞基質(zhì)它們具有生產(chǎn)供人類體內(nèi)或體外使用的生物技術(shù)產(chǎn)品及品的全部潛能。體外診斷試劑不在本文件范圍之內(nèi)。動(dòng)的細(xì)胞系是指所有后生動(dòng)物，包括體外永生化的傳代細(xì)制備的任何產(chǎn)品，不包括細(xì)胞代謝物如抗生素、氨基酸化合物和其他低分子物質(zhì)。用于制備基因治療產(chǎn)品或胞庫(kù)也應(yīng)遵循本指導(dǎo)原則。某些生物制品，如某些病毒是直接從動(dòng)物組織或器官的原代細(xì)胞培養(yǎng)物中制備胞、不建庫(kù)，因此，在本文中未被提及。但適用于原為確保制品的質(zhì)量和安全性，需提供一份支持載生產(chǎn)生物技術(shù)產(chǎn)品及生物制品的細(xì)胞基質(zhì)的歷史，還應(yīng)它們?nèi)炕虿糠謥碓从谀讣?xì)胞系的歷史，以便將細(xì)胞基究和開發(fā)階段所發(fā)生的事件與生產(chǎn)制品所用的特定細(xì)胞在開發(fā)過程中應(yīng)詳細(xì)記錄細(xì)胞基質(zhì)的操作。對(duì)細(xì)胞歷記載僅是鑒定細(xì)胞基質(zhì)的內(nèi)容之一。一般來說，對(duì)細(xì)胞歷史資料的缺乏不會(huì)影響產(chǎn)品的批準(zhǔn)，但就會(huì)更多的依賴其他方應(yīng)說明所用細(xì)胞基質(zhì)的細(xì)胞來源(實(shí)驗(yàn)室制備對(duì)于微生物細(xì)胞，應(yīng)提供產(chǎn)生細(xì)胞系的物種、株和已遺傳和表型特征。如可能，還應(yīng)提供其致病性、毒素產(chǎn)物操作和篩選的描述、細(xì)胞內(nèi)源性和外源性因子的鑒別、特對(duì)于來源于后生動(dòng)物的傳代細(xì)胞系，通常通過估計(jì)其的倍增數(shù)，或在規(guī)定的稀釋倍數(shù)下的傳代次數(shù)或所需天數(shù)決定其培養(yǎng)周期。對(duì)于體外有限傳代的二倍體細(xì)胞系，應(yīng)個(gè)研究、開發(fā)和生產(chǎn)階段，準(zhǔn)確估計(jì)其群體倍增數(shù)。對(duì)關(guān)于細(xì)胞基質(zhì)的產(chǎn)生，應(yīng)提供詳細(xì)的制備過染因子。應(yīng)提供培養(yǎng)基的組分，特別是提供關(guān)于人或動(dòng)物的物質(zhì)，如血清、酶、水解產(chǎn)物或其他活細(xì)胞方面的資料供的資料還應(yīng)包括來源、制備和質(zhì)控方法、檢測(cè)結(jié)果和質(zhì)證。還應(yīng)提供有關(guān)上述方面的文獻(xiàn)。這些資料將用于詳外源因子來源的可能途徑，并作為制品風(fēng)險(xiǎn)－獲但這不是必需的。特別是當(dāng)多個(gè)細(xì)胞系產(chǎn)生于同一種母細(xì)胞系評(píng)估的信息。比如，骨髓瘤細(xì)胞系可以作為母細(xì)胞系建立雜交對(duì)于重組產(chǎn)品，細(xì)胞系是指克隆自一個(gè)祖細(xì)胞且含有參閱其他有關(guān)(如地區(qū)或國(guó)際性)指導(dǎo)原則。對(duì)于非重組疫苗，細(xì)胞系是指來源于那些選擇用作制備主細(xì)胞未經(jīng)進(jìn)一步修飾的母細(xì)胞系的細(xì)胞。對(duì)源于雜交瘤的產(chǎn)品，細(xì)胞基質(zhì)是指骨髓瘤母細(xì)胞系和其他母細(xì)胞系融合后產(chǎn)生的用連續(xù)傳代培養(yǎng)的細(xì)胞生產(chǎn)生物技術(shù)產(chǎn)品及生大優(yōu)點(diǎn)是每批產(chǎn)品都有一個(gè)經(jīng)檢定過的共同起源，胞庫(kù)。生產(chǎn)商可制備自己的細(xì)胞庫(kù)，也可從外部獲得。方法。生產(chǎn)商應(yīng)說明持續(xù)提供細(xì)胞的策略方案，包括生胞庫(kù)的預(yù)期利用率、制備新細(xì)胞庫(kù)所預(yù)期的間隔時(shí)間體細(xì)胞，它們的體外壽命有限或其他的技術(shù)因素使細(xì)胞克切合實(shí)際；或未被克隆的細(xì)胞群體，對(duì)某種用途來講已足必須指出，MCB和WCB在諸如培養(yǎng)基組分和培許有差別，制備MCB和WCB的培養(yǎng)條件也許與產(chǎn)品生產(chǎn)時(shí)如果細(xì)胞培養(yǎng)條件的改變不影響產(chǎn)品質(zhì)量，就不必重新胞或重新制備MCB或WCB庫(kù)。重要的是經(jīng)過鑒定的細(xì)胞在一些微生物表達(dá)系統(tǒng)中，對(duì)每批新細(xì)胞基質(zhì)進(jìn)行新避免被污染的細(xì)胞基質(zhì)(或細(xì)胞庫(kù))用于生庫(kù)，這將延誤產(chǎn)品上市或開發(fā)的時(shí)機(jī)。應(yīng)該認(rèn)識(shí)到?jīng)]細(xì)胞庫(kù)檢測(cè)方案能檢測(cè)出所有可能潛在的污染；因此，細(xì)胞建庫(kù)期間采取預(yù)防措施，才是確保細(xì)胞不被污染，的容器(瓶子、安頓或其他合適的器皿)和密細(xì)胞庫(kù)的方法包括所用的凍存劑、培養(yǎng)基以及細(xì)胞保存生產(chǎn)商應(yīng)闡明避免微生物污染和避免被實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞交叉污染的方法，還應(yīng)介紹可追蹤細(xì)胞庫(kù)容器的方法括記錄系統(tǒng)，以及能經(jīng)受保存、貯藏和從貯藏中復(fù)蘇時(shí)生產(chǎn)商應(yīng)說明細(xì)胞建庫(kù)的過程。細(xì)胞建庫(kù)通常是容器數(shù)量或擴(kuò)大容器培養(yǎng)以獲得足夠量的細(xì)胞，并足夠量的容器中。為了確保每個(gè)容器中的內(nèi)容物完培養(yǎng)細(xì)胞采用幾個(gè)器皿的，應(yīng)把所有培養(yǎng)器皿中的細(xì)胞將懸浮在培養(yǎng)基中的一批細(xì)胞，定量分裝到無菌容器中并在適宜條件下密封和貯藏。例如，含有細(xì)胞凍存劑的培養(yǎng)基中然后轉(zhuǎn)移到液氮的氣體或液態(tài)中或在相當(dāng)?shù)某蜏貤l件存。其他的保存和貯藏方法也是可用的，但要根據(jù)細(xì)胞的而定?？傊瑧?yīng)使細(xì)胞保持一定的生存能力，來滿足生生產(chǎn)商應(yīng)提供預(yù)防計(jì)劃，例如，在多個(gè)冷藏罐中分別保庫(kù)，使用備用電源，使用自動(dòng)液氮填充系統(tǒng)，將部分MCB和在生產(chǎn)中體外細(xì)胞的壽命應(yīng)從解凍一個(gè)或多個(gè)容器始算起。對(duì)于二倍體細(xì)胞系，其體外壽命應(yīng)以細(xì)胞的倍對(duì)建庫(kù)細(xì)胞基質(zhì)的鑒定和檢測(cè)是生物技術(shù)產(chǎn)品及生物否存在來自其他細(xì)胞系的細(xì)胞、外源和內(nèi)源因子以及其他物(如來自于宿主的毒素或抗生素)。檢測(cè)的目于生產(chǎn)的細(xì)胞基質(zhì)的特性、純度和適用性。在有些情況下他方面如致癌性或細(xì)胞核學(xué)的檢測(cè)也是有用的。對(duì)某一質(zhì)選擇何種檢測(cè)方案要根據(jù)細(xì)胞的生物學(xué)特性(如用的試驗(yàn)方法而定。細(xì)胞基質(zhì)的鑒定程度將影響以后的生度試驗(yàn)和鑒別實(shí)驗(yàn)，對(duì)將要注冊(cè)的每一產(chǎn)品在細(xì)胞培養(yǎng)期的內(nèi)容，進(jìn)行以下所列的有關(guān)試驗(yàn)并在申請(qǐng)制品上市時(shí)將則中有關(guān)rDNA表達(dá)載體方面的內(nèi)容，進(jìn)行核苷酸和氨基方面的鑒定。也可用類似的方法對(duì)基因序列明確并已要對(duì)那些編碼復(fù)雜的天然產(chǎn)品序列進(jìn)行分析，如相關(guān)的如條件具備，應(yīng)鼓勵(lì)生產(chǎn)商在細(xì)胞基質(zhì)鑒定先進(jìn)方法和技術(shù)改進(jìn)，但新方法的特異性、靈敏度和應(yīng)采用合適的試驗(yàn)證明建庫(kù)的細(xì)胞就是它本身。鑒可利用細(xì)胞的表型或遺傳型特征，但不必作所有的試驗(yàn)。對(duì)MCB作鑒別試驗(yàn)，而對(duì)每個(gè)WCB僅作有限對(duì)于貼壁生長(zhǎng)的人或動(dòng)物細(xì)胞，可采用形態(tài)學(xué)分析與試驗(yàn)相結(jié)合的方法。在大多數(shù)情況下，同工酶分析足以或動(dòng)物細(xì)胞庫(kù)的種屬來源；依據(jù)細(xì)胞系的歷史情況他合適的試驗(yàn)。對(duì)于種族來源亦可用其他替代技術(shù)予以確認(rèn)，如用染色體條帶分析或種屬特異性抗血清的方法。替代顯示其獨(dú)特的標(biāo)志物。例如，通過使用染色體細(xì)胞遺傳學(xué)限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性，串聯(lián)重復(fù)數(shù)目的變化，或基因組性標(biāo)記物的存在，就可認(rèn)為是適宜的鑒別試驗(yàn)方法。目對(duì)于大多數(shù)微生物細(xì)胞，分析細(xì)胞在選擇性培養(yǎng)基上情況就可用以確證宿主細(xì)胞庫(kù)的宿主細(xì)胞種屬特性。對(duì)于大腸桿菌時(shí)，由于有許多不同的株，可考慮采用生物學(xué)鑒別方法，如噬菌體分類，作為鑒別試驗(yàn)的補(bǔ)充。對(duì)于質(zhì)粒庫(kù)，可按ICH文件中有關(guān)表達(dá)載體分析的內(nèi)容進(jìn)行特性評(píng)估。目標(biāo)產(chǎn)品的表評(píng)估MCB和WCB的生物學(xué)純度，即游離的外源微生物和外源細(xì)胞污染，是細(xì)胞開發(fā)和建庫(kù)的關(guān)鍵部分。在設(shè)計(jì)和進(jìn)試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)考慮選擇性試劑和抗生素對(duì)檢測(cè)外源微生物藥典、日本藥局方或美國(guó)藥典所記載的用于測(cè)試微應(yīng)檢測(cè)MCB和WCB是否存在支原體。目前所用的包括肉湯培養(yǎng)基的方法以及指示劑細(xì)胞培養(yǎng)法是適用的。用于體測(cè)試的方法在歐洲藥典、日本藥局方和FDA“用于生產(chǎn)生物如果生物負(fù)荷和支原體測(cè)定方法通過三方進(jìn)對(duì)于細(xì)胞基質(zhì)中可能污染病毒的檢測(cè)，應(yīng)根據(jù)細(xì)胞系養(yǎng)史，通過篩選和相關(guān)的特異性試驗(yàn)，選用可檢測(cè)廣譜病細(xì)胞基質(zhì)的純度會(huì)由于污染相同或不同種系的低。選擇什么樣的純度試驗(yàn)方法取決于該細(xì)胞是否存在被細(xì)胞系交叉污染的機(jī)會(huì)。有時(shí)，在同一實(shí)驗(yàn)室會(huì)同時(shí)培不同的細(xì)胞系，在細(xì)胞建庫(kù)過程中，當(dāng)進(jìn)行開放性操作時(shí)注意避免與其他細(xì)胞系同時(shí)開放操作而導(dǎo)致交叉污染。的開放性操作過程中(如細(xì)胞擴(kuò)增、細(xì)胞混合或細(xì)胞分裝等只要在此操作間有另一種細(xì)胞系存在，就應(yīng)檢測(cè)該細(xì)胞外，從細(xì)胞基質(zhì)中成功地制得所預(yù)期的產(chǎn)品是方法和材料以及存在于建庫(kù)實(shí)驗(yàn)室中的其他生物等等。例如，細(xì)胞鑒定的另一個(gè)目的是考察細(xì)胞在生產(chǎn)中的適用胞基質(zhì)穩(wěn)定性主要應(yīng)考慮兩個(gè)方面進(jìn)行，即生產(chǎn)產(chǎn)品的評(píng)估培養(yǎng)期間的穩(wěn)定性，至少應(yīng)考察兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)。一個(gè)時(shí)間點(diǎn)是采用最少傳代數(shù)的細(xì)胞，另一個(gè)時(shí)間點(diǎn)是申請(qǐng)上市的生產(chǎn)中達(dá)到或超過細(xì)胞體外傳代限度的細(xì)胞。用于生產(chǎn)的細(xì)胞體外傳代限度，應(yīng)根據(jù)從中試生產(chǎn)規(guī)?；蛏a(chǎn)規(guī)模的細(xì)胞擴(kuò)增代數(shù)到建議或超高建議的生產(chǎn)代次限度所得的資料來確定。生產(chǎn)時(shí)進(jìn)行一次。生產(chǎn)預(yù)期產(chǎn)品的一致性是對(duì)細(xì)胞基質(zhì)進(jìn)行評(píng)估的主要內(nèi)容。用于此類評(píng)估的試驗(yàn)類型和試驗(yàn)項(xiàng)目將根據(jù)細(xì)胞基質(zhì)的性指南中的方法，通過核酸檢測(cè)或產(chǎn)品分析，對(duì)表達(dá)載體上編碼序列的一致性進(jìn)行驗(yàn)證。對(duì)于非重組細(xì)胞系，其預(yù)期產(chǎn)品碼序列已在建立MCB或WCB時(shí)檢測(cè)過，在生產(chǎn)中細(xì)胞培養(yǎng)達(dá)超過體外代次限度時(shí)，應(yīng)通過核酸檢測(cè)或純化蛋白質(zhì)制品在規(guī)定的貯藏條件下，建庫(kù)細(xì)胞的穩(wěn)定性一般需通過臨床試驗(yàn)用樣品來驗(yàn)證。當(dāng)儲(chǔ)存的細(xì)胞復(fù)蘇生產(chǎn)供臨床試驗(yàn)用樣品時(shí)，對(duì)細(xì)胞存活力的測(cè)定數(shù)據(jù)可證明這些復(fù)蘇細(xì)胞在過程中仍然保存活力。通過制備臨床試驗(yàn)用樣品，可證實(shí)復(fù)蘇細(xì)胞能用于生產(chǎn)所需的產(chǎn)品。以上這些資料需納入到申報(bào)卷宗支或多支冷凍保藏的細(xì)胞庫(kù)細(xì)胞被解凍后、用來制備生當(dāng)一支或多支冷凍保藏的MCB被解凍并用于制備新的WCB時(shí)進(jìn)間對(duì)生產(chǎn)用細(xì)胞庫(kù)進(jìn)行活力測(cè)試。如果細(xì)胞基質(zhì)的活根據(jù)細(xì)胞類型、產(chǎn)品的性質(zhì)以及生產(chǎn)工藝，決定是否要采用胞核學(xué)和致瘤性試驗(yàn)來評(píng)價(jià)二倍體細(xì)胞系的安全定一個(gè)新的細(xì)胞系。采用廣泛的分析方法測(cè)定非整倍染的新細(xì)胞系不需要作細(xì)胞核學(xué)測(cè)定，因細(xì)胞遺傳學(xué)分析估細(xì)胞基質(zhì)的特性或純度。對(duì)文獻(xiàn)已記載具有致瘤性的細(xì)對(duì)于高度純化和不含細(xì)胞的制品，只要通過生產(chǎn)工藝致瘤性試驗(yàn)。用于非純化制品的新細(xì)胞基質(zhì)，是否需進(jìn)性試驗(yàn)和染色體分析，應(yīng)具體情況具體分析。用已知是或具有異常細(xì)胞核的細(xì)胞系生產(chǎn)含有細(xì)胞或未高度純化細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞核學(xué)或致瘤性的鑒定，因?yàn)閷?duì)這些細(xì)胞系證實(shí)其具有二倍體細(xì)胞的細(xì)胞核，并確認(rèn)其潛在的致瘤性胞核學(xué)和致瘤性分析的方法可參見WHO的文獻(xiàn)“WHO：動(dòng)物世界衛(wèi)生組織WHO生物制品標(biāo)準(zhǔn)化專家委員會(huì)第47次報(bào)細(xì)胞庫(kù)是指活細(xì)胞被等量均一地獨(dú)立分裝后保存于規(guī)定條件下的一個(gè)細(xì)胞的保存庫(kù)。這個(gè)保存庫(kù)里面的每一細(xì)胞系是指一群來自原代細(xì)胞，并經(jīng)一系列培養(yǎng)傳代傳代細(xì)胞系有無限生長(zhǎng)能力的細(xì)胞系。常被體外細(xì)胞傳代周期指從MCB小瓶細(xì)胞融化至生產(chǎn)獲的這段時(shí)間，它可以用培養(yǎng)所耗的時(shí)間來表示，或用細(xì)胞數(shù)的倍增水平來表示，當(dāng)細(xì)胞采用規(guī)定的步驟稀釋培養(yǎng)物進(jìn)MCB（主細(xì)胞庫(kù)）在指定條件下從選定的細(xì)胞克隆制備而得的單批細(xì)胞，它被分裝到多個(gè)容器中，并在規(guī)定的母細(xì)胞可用于產(chǎn)生細(xì)胞基質(zhì)或中間細(xì)胞系的微生物表達(dá)系統(tǒng)，通常把母細(xì)胞稱作宿主細(xì)胞。對(duì)WCB(工作細(xì)胞庫(kù))在規(guī)定的培養(yǎng)條件下，從培養(yǎng)的MCB細(xì)胞中獲得的相同來源的勻質(zhì)細(xì)胞懸液并進(jìn)行等量分裝的獨(dú)附件1：原代細(xì)胞基質(zhì)本指導(dǎo)原則中的一般原則通常適用于采用鑒定過胞制備的生物技術(shù)產(chǎn)品及生物制品。然而，許多生物制像鑒定建庫(kù)細(xì)胞那樣在生產(chǎn)之前對(duì)其進(jìn)行全面鑒定。此外管存在著這些不同，但對(duì)用于生物制品生產(chǎn)的原代細(xì)胞基行適用性和安全性的檢測(cè)方法在很多方面與本文件和其本附件列出了用原代細(xì)胞生產(chǎn)的生物制品在申請(qǐng)有關(guān)原代細(xì)胞的組織來源及用于制備原代細(xì)胞基質(zhì)的個(gè)適當(dāng)時(shí)期，應(yīng)對(duì)動(dòng)物進(jìn)行檢疫。在有些國(guó)家，動(dòng)物應(yīng)在原代細(xì)胞的國(guó)家檢疫。對(duì)一些特殊要求，生應(yīng)提供用于制備原代細(xì)胞基質(zhì)的原材料及組成成分的資源性成分證明檢測(cè)不出污染物和外源因子的檢測(cè)方法和結(jié)應(yīng)提供從組織分離細(xì)胞、建立