（江蘇專用）高考生物一輪復(fù)習(xí) 基因工程與蛋白質(zhì)工程試題（含解析）-人教版

專題25基因工程與蛋白質(zhì)工程

【考情探究】

課標(biāo)解讀

否怕分析備考指導(dǎo)

考點(diǎn)考向

基因工程的基因工程的原理基因工程在“生物工程結(jié)合最近幾年的高考,預(yù)計(jì)2021

1

原理與技術(shù)與技術(shù)技術(shù)”模塊中占有舉足年高考中考查的重點(diǎn)還會(huì)延續(xù)

基因工程的基因工程的應(yīng)用輕重的地位,是高考命題以往考向，特別是對(duì)基因工程的

2

應(yīng)用與發(fā)展蛋白質(zhì)工程的熱點(diǎn)之一。高考對(duì)本?；竟ぞ?、構(gòu)成基因表達(dá)載體與

題的考查主要集中在基PCR技術(shù)的綜合性考查。因此,

因工程基本工具的作用在復(fù)習(xí)備考的過程中，要注意歸

和特點(diǎn)、基因工程操作步納梳理基因工程的基礎(chǔ)知識(shí)，熟

驟以及基因工程在生產(chǎn)記基因工程基本工具、基本操作

和實(shí)踐中的應(yīng)用等方面;程序、鑒定方法、蛋白質(zhì)工程等

試題多以最新科技信息基礎(chǔ)知識(shí),加強(qiáng)對(duì)基因表達(dá)載體

材料為情境,結(jié)合具體實(shí)圖形的理解與應(yīng)用。并通過必要

例分析，突出對(duì)限制酶、的題型訓(xùn)練，鞏固基礎(chǔ)知識(shí)、掌

DNA的粗提DNA粗提取與鑒

3PCR技術(shù)、基因表達(dá)載體握解題的方法和技巧，并進(jìn)行歸

取與鑒定定

的構(gòu)建、目的基因的檢測(cè)納總結(jié)，以達(dá)到觸類旁通之效。

和鑒定等內(nèi)容的考查，且本專題中的“蛋白質(zhì)工程”將

多以非選擇題形式呈現(xiàn)。結(jié)合在基因工程中組題考查，可

高考對(duì)“DNA的粗提取與能是高考的新考向，也應(yīng)該加以

鑒定”的考查主要表現(xiàn)重視。同時(shí)還應(yīng)注意加強(qiáng)與細(xì)胞

在對(duì)實(shí)驗(yàn)原理、操作方法工程、胚胎工程的橫向聯(lián)系，重

與目的等方面，且多以選視“DNA的粗提取與鑒定”的實(shí)

擇題形式呈現(xiàn)驗(yàn)考查

【真題探秘】

（2018課標(biāo)全國(guó)I,38,15分）問答下列問鹿：

一、*棧生坊

昌枝生我。'I'"<HBovi）和科恩（S.CnhMi）將明?爪■核

心

精體蛋白恭翦血倉(cāng)直更后事人mw細(xì)也中進(jìn)行T國(guó)壽校羊井洲爪母植楂體*自&因?yàn)閕|

舉

友達(dá).該研究除證叨T質(zhì)?？梢宰鳛檎殷w外.還證明廣什么能與虎獨(dú)姐令在一起.X.他在大殖

餌M技乃（|>本題以6■因_______________________________（答出兩點(diǎn)即可）桿黃中衣運(yùn)呢？

工和為大背景,通過提供新材

（2）體外取組的質(zhì)忖可通過—初虧的—.…

料,才女學(xué)生理解、分析問題?冬同工制?中，爻體傭腦為大心肝

和知識(shí)應(yīng)用的能力：方法導(dǎo)人大煬fl黃細(xì)也：而體外重組的啤茵體DNA咽常需

的世蜘時(shí)，才用C。"處理大的桿

（2）試題設(shè)計(jì)既有如正點(diǎn)的蛉與.組裝成完整理曲體后.才能通過侵

翰，僅2處于格曼金，MCQ”今

合.也有知識(shí)點(diǎn)的感體和迂移

染的方法將收組的卬出體DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞在細(xì)曲、Q的H他法.

心肌細(xì)胞.葉內(nèi)姍胞中.可作為第組唾首體而士細(xì)胞的

“臭延先窠（1）佟仆*組的質(zhì)歸可■以選人受住如胞：4■枚土揚(yáng)米因可在厚杖向電中表達(dá)

I（2>tt<K牛上餐白（泰冬也曲作要白）如聲

/（3）,白蜂果陷更杳色第

基礎(chǔ)篇

考點(diǎn)1基因工程的原理與技術(shù)

【基礎(chǔ)集訓(xùn)】

1.（2019江蘇常州一模,25）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，其原理與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制類似（如圖

所示）。圖中引物為單鏈DNA片段，它是子鏈合成延伸的基礎(chǔ)。下列敘述正確的有（多

選）（）

腔性

B退火

Q延伸

Q變性

A.用PCR方法擴(kuò)增目的基因時(shí)不必知道基因的全部序列

B.設(shè)計(jì)引物時(shí)需要避免引物之間形成堿基互補(bǔ)配對(duì)而造成引物自連

C.退火溫度過高可能導(dǎo)致PCR反應(yīng)得不到任何擴(kuò)增產(chǎn)物

D.第四輪循環(huán)產(chǎn)物中同時(shí)含有引物A和引物B的DNA分子所占的比例為15/16

答案ABC

2.(2019江蘇華羅庚、江都、儀征三校聯(lián)考,33)下表是幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn),

圖1、圖2中標(biāo)注了相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)，其中切割位點(diǎn)相同的酶不重復(fù)標(biāo)注。請(qǐng)回答下

歹IJ問題：

限制酶BamHIBelISau3AIHindHI

1I1I

識(shí)別序列及GGATCCTGATCAGATCAAGCTT

切割位點(diǎn)CCTAGGACTAGTCTAGTTCGAA

tftt

圖2

(1)用圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒,應(yīng)選用兩種限制酶切割,酶切后的載體

和目的基因片段,通過酶作用后獲得重組質(zhì)粒。為了擴(kuò)增重組質(zhì)粒,需將其轉(zhuǎn)入處于

態(tài)的大腸桿菌。

(2)為了篩選出轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌,應(yīng)在篩選平板培養(yǎng)基中添加，平板上長(zhǎng)

出的菌落,常用PCR鑒定,所用的引物組成為圖2中。

(3)若Bamll1酶切的DNA末端與BelI酶切的DNA末端連接，連接部位的6個(gè)堿基對(duì)序列

為，對(duì)于該部位，這兩種酶(填“都能”“都不能”或“只有一種能”)切

開。

(4)若用Sau3AI切圖1質(zhì)粒最多可能獲得種大小不同的DNA片段。

答案(l)BclI和HindHIDNA連接感受態(tài)(2)四環(huán)素引物甲和引物丙

(3)TGATCCACTAGG或GGATCACCTAGT都不能(4)7

考點(diǎn)2基因工程的應(yīng)用與發(fā)展

【基礎(chǔ)集訓(xùn)】

（2019江蘇六合高級(jí)中學(xué)2月月考,18）中華鯨是地球上最古老的脊椎動(dòng)物,被稱為“活化

石”。研究者試圖通過蛋白質(zhì)工程改造中華鰥體內(nèi)的某些蛋白質(zhì)，使其更加適應(yīng)現(xiàn)在的水域

環(huán)境，以下說法錯(cuò)誤的是（）

A.該工程可以定向改變蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)

B.改造蛋白質(zhì)是通過改造基因結(jié)構(gòu)而實(shí)現(xiàn)的

C.改造后的中華鱷和現(xiàn)有中華婚仍是同一物種

D.改造后的中華鮑的后代不具有改造的蛋白質(zhì)

答案D

考點(diǎn)3DNA的粗提取與鑒定

【基礎(chǔ)集訓(xùn)】

1.（2018江蘇南京、鹽城一模，12）下列有關(guān)“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)的敘述，錯(cuò)誤的是

（）

A.雞血細(xì)胞是較理想的實(shí)驗(yàn)材料

B.NaCl溶液濃度越高,DNA的溶解度越大

C.在用酒精析出DNA時(shí),最好使用體積分?jǐn)?shù)為95%的冷酒精溶液

D.DNA溶液中加入二苯胺試劑,沸水浴加熱,檢測(cè)結(jié)果呈藍(lán)色

答案B

2.（2019江蘇蘇州一模,13）如圖為“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)（以雞血細(xì)胞液為實(shí)驗(yàn)材料）

中部分操作步驟示意圖，圖中裝置可以進(jìn)行該實(shí)驗(yàn)的多個(gè)步驟。若在下列操作之前甲燒杯中

已加入相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)材料或溶液,相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

A.若向甲燒杯中倒入蒸儲(chǔ)水并快速攪拌,則在裝置乙完成過濾之后棄去濾液

B.若向甲燒杯中加入2mol/L的NaCl溶液,則在裝置乙完成過濾之后保留濾液

C.若向甲燒杯中緩緩加入蒸儲(chǔ)水并輕緩攪拌,則在裝置乙完成過濾之后保留粘稠物

D.若在甲燒杯中加入體積分?jǐn)?shù)為95%的冷酒精并輕輕攪拌，則玻棒上會(huì)出現(xiàn)絲狀物

答案A

綜合篇

提升與基因工程中工具酶相關(guān)的問題分析

【綜合集訓(xùn)】

1.（2019江蘇海安期末）科研人員通過基因工程實(shí)現(xiàn)了甘露聚糖酶基因在豬腸道野生酵

母菌中的表達(dá)，使原來不能被豬利用的粗纖維在豬腸道內(nèi)被分解成可直接被吸收的單糖。如

圖為構(gòu)建工程菌的部分過程,其中介導(dǎo)序列能引導(dǎo)載體整合到酵母菌的染色體DNA上。請(qǐng)據(jù)

圖回答:

限制酶識(shí)別序列和切割位點(diǎn)

J

EcoRI

GAATTC

1

BamHI

GGATCC

I

BgHI

AGATCT

SalIJ

GTCGAC

⑴①過程中需要的工具酶是,其最適溫度的范圍一般是

（a.55~60℃,b.70~75℃,c.90~95℃）。②③過程中的工具酶作用的化學(xué)鍵是。

（2）①過程利用野生酵母菌染色體DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增介導(dǎo)序列時(shí),科研人員設(shè)計(jì)了如下一對(duì)引

物:5'-|GAATTC|GACCTCAAATCAGGTAGG-3'和3'-TTGCATTGACTTACA|CCTAGG|-5',其中下劃線部分

序列的設(shè)計(jì)依據(jù)是,方框部分序列的設(shè)計(jì)目的

是。

⑶若BamllI酶切的DNA末端與BglH酶切的DNA末端可以被DNA連接酶連接，原因

是，連接后的部位，這兩種酶（填“都能”“都不能”或

“只有一種能"）切開,原因是o

（4）若使用EcoRI和SalI酶對(duì)重組表達(dá)載體進(jìn)行完全酶切并鑒定，可得到種DNA片

段。

答案（D熱穩(wěn)定性DNA聚合酶（Taq酶或耐高溫的DNA聚合酶）b.70~75℃磷酸二酯鍵

（2）介導(dǎo)序列兩端的部分DNA序列使擴(kuò)增出的介導(dǎo)序列兩端含有限制酶EcoRI和BamllI的

識(shí)別序列（便于構(gòu)建重組質(zhì)粒）（3）黏性末端序列互補(bǔ)（或黏性末端相同）都不能連接后

該部位不再是BamHl酶與BglH酶的識(shí)別序列（4）3

2.圖（a）中的三個(gè)DNA片段上依次表示出了EcoRI、BamHI和Sau3AI三種限制性內(nèi)切酶的

識(shí)別序列與切割位點(diǎn)，圖（b）為某種表達(dá)載體的示意圖（載體上的EcoRI、Sau3AI的切點(diǎn)是

唯一的）。

-C*AATTC-----------------&ATCC-----------------?CATC-

------CTTAACCCTAGCCTAG

tft

圖（a）

圖⑹

根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí)，回答下列問題:

(1)經(jīng)BamllI酶切后得到的目的基因可以與上述表達(dá)載體被酶切后的產(chǎn)物連接，理

由是o

(2)若某人利用圖(b)所示的表達(dá)載體獲得了甲、乙、丙三種含有目的基因的重組子，如圖(c)

所示。這三種重組子中，不能在宿主細(xì)胞中表達(dá)目的基因產(chǎn)物的有,不能表達(dá)的原因

是_______________________________________________________________________________

(3)DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶,常見的有和,

其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是，

答案(l)Sau3AI兩種酶切割后產(chǎn)生的片段具有相同的黏性末端(2)甲和丙甲中目的

基因插入在啟動(dòng)子的上游，丙中目的基因插入在終止子的下游,二者的目的基因均不能被轉(zhuǎn)

錄(3)E?coliDNA連接酶ODNA連接酶ZDNA連接酶

應(yīng)用篇

應(yīng)用口蹄疫病毒VP1基因在胡蘿卜中的表達(dá)及轉(zhuǎn)基因大米的培育

【應(yīng)用集訓(xùn)】

我們?nèi)粘３缘拇竺字需F含量極低，科研人員通過基因工程等技術(shù)，培育出了鐵含量比普通

大米高60%的轉(zhuǎn)基因水稻，改良了稻米的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)。如圖為培育轉(zhuǎn)基因水稻流程示意圖，請(qǐng)回

答下列問題:

鐵結(jié)合蛋白基因

導(dǎo)入農(nóng)桿儲(chǔ)

潮忠素

抗性基因

的農(nóng)桿菌

組Ti質(zhì)粒加人培養(yǎng)基/

開花后水稻

未成熟的胚

起傷組紈轉(zhuǎn)移上竺巴

MS培養(yǎng)基繇T黑

⑴鐵結(jié)合蛋白基因可來自菜豆，且基因的脫氧核甘酸序列已知，可以用

法獲得此目的基因或用技術(shù)擴(kuò)增此目的基因。

（2）構(gòu)建重組Ti質(zhì)粒時(shí),通常要用分別切割

將重組Ti質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌時(shí),可以用處理農(nóng)桿菌,使重組Ti質(zhì)粒易于導(dǎo)入。

（3）將含有重組Ti質(zhì)粒的農(nóng)桿菌與水稻愈傷組織共同培養(yǎng)時(shí)，通過培養(yǎng)基2的篩選培養(yǎng)，可以

獲得；培養(yǎng)基3與培養(yǎng)基2的區(qū)別是o

檢測(cè)培育轉(zhuǎn)基因水稻的目的是否達(dá)到，需要檢測(cè)轉(zhuǎn)基因水

稻。

（4）為研究外源基因的遺傳方式,將T。植株上收獲的種子種植成小株系,檢測(cè)各單株的潮霉素

抗性。在檢測(cè)的多數(shù)/株系內(nèi)，抗潮霉素植株與潮霉素敏感植株的比例為3：1,此結(jié)果說明

外源基因的遺傳符合定律。有少數(shù)Z株系的植株表現(xiàn)為對(duì)潮霉素敏感,但其體

內(nèi)能檢測(cè)到鐵結(jié)合蛋白基因，造成這一結(jié)果最可能的原因

是。

答案（1）化學(xué)合成（或從基因文庫(kù)中獲?。㏄CR（2）（同種）限制性核酸內(nèi)切酶含目的基

因的DNA片段和質(zhì)粒CaCh溶液（3）含有重組質(zhì)粒（或含有潮霉素抗性基因）的愈傷組織

生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的比例不同（成熟）種子中鐵含量（4）（基因）分離潮霉素抗性基因

沒有表達(dá)（或“潮霉素抗性基因丟失”）

【五年高考】

考點(diǎn)1基因工程的原理與技術(shù)

1.（2019江蘇單科，16,2分）下列生物技術(shù)操作對(duì)遺傳物質(zhì)的改造，不會(huì)遺傳給子代的是

（）

A.將胰島素基因表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌,篩選獲得基因工程菌

B.將花青素代謝基因?qū)胫参矬w細(xì)胞,經(jīng)組培獲得花色變異植株

C.將腸乳糖酶基因?qū)肽膛Ｊ芫?培育出產(chǎn)低乳糖牛乳的奶牛

D.將腺甘酸脫氨酶基因轉(zhuǎn)入淋巴細(xì)胞后回輸患者,進(jìn)行基因治療

答案D

2.（2019江蘇單科,33,8分）圖1是某基因工程中構(gòu)建重組質(zhì)粒的過程示意圖，載體質(zhì)粒P0

具有四環(huán)素抗性基因（tet，）和氨芳青霉素抗性基因（amp'）。請(qǐng)回答下列問題:

圖1

(l)EcoRV酶切位點(diǎn)為；T?”，Ec。RV酶切出來的線性載體Pl為末端。

(2)用TaqDNA聚合酶進(jìn)行PCR擴(kuò)增獲得的目的基因片段,其兩端各自帶有一個(gè)腺喋吟脫氧核

昔酸。載體P1用酶處理,在兩端各添加了一個(gè)堿基為的脫氧核甘酸，形成P2;P2

和目的基因片段在酶作用下,形成重組質(zhì)粒P3o

(3)為篩選出含有重組質(zhì)粒P3的菌落，采用含有不同抗生素的平板進(jìn)行篩選，得到A、B、C

三類菌落，其生長(zhǎng)情況如下表(“+”代表生長(zhǎng)，“-”代表不生長(zhǎng))。根據(jù)表中結(jié)果判斷，應(yīng)選

擇的菌落是(填表中字母)類，另外兩類菌落質(zhì)粒導(dǎo)入情況分別

是、。

菌落類型平板類型ABC

無抗生素+++

氨芾青霉素++-

四環(huán)素+--

氨茉青霉素+四環(huán)素+--

(4)為鑒定篩選出的菌落中是否含有正確插入目的基因的重組質(zhì)粒，擬設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR鑒

定。圖2所示為甲、乙、丙3條引物在正確重組質(zhì)粒中的相應(yīng)位置,PCR鑒定時(shí)應(yīng)選擇的一

對(duì)引物是o某學(xué)生嘗試用圖中另外一對(duì)引物從某一菌落的質(zhì)粒中擴(kuò)增出了400bp

片段,原因是。

圖2

答案(8分)(1)平(2)胸腺喀咤(T)DNA連接(3)BA類菌落含有POC類菌落未轉(zhuǎn)入

質(zhì)粒(4)乙丙目的基因反向連接

3.(2018江蘇單科,32,8分)為生產(chǎn)具有特定性能的a-淀粉酶,研究人員從某種海洋細(xì)菌中

克隆了a-淀粉酶基因(1656個(gè)堿基對(duì))，利用基因工程大量制備a-淀粉酶，實(shí)驗(yàn)流程見圖。

請(qǐng)回答下列問題：

(1)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增a-淀粉酶基因前,需先獲得細(xì)菌的。

(2)為了便于擴(kuò)增的DNA片段與表達(dá)載體連接,需在引物的端加上限制性酶切位點(diǎn),

且常在兩條引物上設(shè)計(jì)加入不同的限制性酶切位點(diǎn)，主要目的

是o

(3)進(jìn)行擴(kuò)增時(shí),反應(yīng)的溫度和時(shí)間需根據(jù)具體情況進(jìn)行設(shè)定,下列選項(xiàng)中的設(shè)定與引

物有關(guān),的設(shè)定與擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度有關(guān)。(填序號(hào))

①變性溫度②退火溫度③延伸溫度④變性時(shí)間

⑤退火時(shí)間⑥延伸時(shí)間

(4)如圖表示篩選獲得的工程菌中編碼a-淀粉酶的mRNA的部分堿基序列：

5'-UGCCAUCAACAAAUACUAAC回U...-3，

圖中虛線框內(nèi)mRNA片段包含個(gè)密碼子,如虛線框后的序列未知,預(yù)測(cè)虛線框后的第

一個(gè)密碼子最多有種。

(5)獲得工程菌表達(dá)的a-淀粉酶后，為探究影響酶活性的因素，以濃度為遇的可溶性淀粉為

底物測(cè)定酶活性，結(jié)果如下：

緩沖液50mmol/LNa2HP01-KIl2P0450mmol/LTris-HCl50mmol/LGly-Na0II

pH6.06.57.07.57.58.08.59.09.09.510.010.5

酶相對(duì)活性%25.440.249.863.270.195.599.585.368.163.741.520.8

根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，初步判斷該a-淀粉酶活性最高的條件

為。

答案（8分）（1）基因組DNA（2）5'使DNA片段能定向插入表達(dá)載體，減少自連（3）②

@（4）813（5）pH為8.5,緩沖液為50mmol/LTirs-HCl

4.（2017江蘇單科,33,8分）金屬硫蛋白（MT）是一類廣泛存在的金屬結(jié)合蛋白，某研究小組計(jì)

劃通過多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）擴(kuò)增獲得目的基因，構(gòu)建轉(zhuǎn)基因工程菌，用于重金屬?gòu)U水的凈化

處理。PCR擴(kuò)增過程示意圖如下,請(qǐng)回答下列問題：

?=CZ372℃|步驟3

口

55r步驟2=---------三-

_______________________-O_______0

t=a___________________________________—

------------:~~——55t1步驟2

72TI步驟3

第二輪循環(huán)0-------------

-------------B394-步驟］'--------------------------

（1）從高表達(dá)MT的生物組織中提取mRNA,通過獲得用于PCR擴(kuò)增。

（2）設(shè)計(jì)一對(duì)與MT基因兩端序列互補(bǔ)配對(duì)的引物（引物1和引物2）,為方便構(gòu)建重組質(zhì)粒,在

引物中需要增加適當(dāng)?shù)奈稽c(diǎn)。設(shè)計(jì)引物時(shí)需要避免引物之間形

成，而造成引物自連。

（3）圖中步驟1代表，步驟2代表退火，步驟3代表延伸，這三個(gè)步驟組成一輪循

環(huán)。

（4）PCR擴(kuò)增時(shí),退火溫度的設(shè)定是成敗的關(guān)鍵。退火溫度過高會(huì)破壞的堿基

配對(duì)。退火溫度的設(shè)定與引物長(zhǎng)度、堿基組成有關(guān)，長(zhǎng)度相同但的引物需要

設(shè)定更高的退火溫度。

（5）如果PCR反應(yīng)得不到任何擴(kuò)增產(chǎn)物，則可以采取的改進(jìn)措施有（填序號(hào):①升高

退火溫度②降低退火溫度③重新設(shè)計(jì)引物）。

答案（8分）（1）逆轉(zhuǎn)錄cDNA（2）限制性核酸內(nèi)切酶

堿基互補(bǔ)配對(duì)（3）變性（4）引物與模板G/C含量高（5）②③

5.（2015江蘇單科,32,9分）胰島素A、B鏈分別表達(dá)法是生產(chǎn)胰島素的方法之一。圖1是該

方法所用的基因表達(dá)載體，圖2表示利用大腸桿菌作為工程菌生產(chǎn)人胰島素的基本流程（融

合蛋白A、B分別表示B-半乳糖甘酶與胰島素A、B鏈融合的蛋白）。請(qǐng)回答下列問題:

加半乳糖甘前編碼區(qū)

啟動(dòng)子，iB

復(fù)制原點(diǎn)珂玲

胰島素

7

氨節(jié)育密素Rr>A或B鏈編碼區(qū)

抗性范因

圖1

a肽段

O給磅吆產(chǎn)W照隱注5）

大腸奇菌""雄合蛋臼A5胰島素A鏈加工

a.肽段?—--r1

*⑥國(guó)產(chǎn)Lj胰病

大腸?1浦融赤白B"^==康島素B鏈

圖2

（1）圖1基因表達(dá)載體中沒有標(biāo)注出來的基本結(jié)構(gòu)是。

（2）圖1中啟動(dòng)子是酶識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能啟動(dòng)目的基因的表達(dá);氨革青

霉素抗性基因的作用是。

（3）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)必需的工具酶有o

（4）B-半乳糖甘酶與胰島素A鏈或B鏈融合表達(dá),可將胰島素肽鏈上蛋白酶的切割位點(diǎn)隱藏

在內(nèi)部,其意義在于。

（5）溟化氟能切斷肽鏈中甲硫氨酸竣基端的肽鍵,用溟化氟處理相應(yīng)的融合蛋白能獲得完整

的A鏈或B鏈，且B-半乳糖甘酶被切成多個(gè)肽段，這是因

為。

（6）根據(jù)圖2中胰島素的結(jié)構(gòu),請(qǐng)推測(cè)每個(gè)胰島素分子中所含游離氨基的數(shù)量。你的推測(cè)結(jié)果

是_,理由是。

答案（9分）（1）終止子（2）RNA聚合作為標(biāo)記基因，將含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌篩選出

來（3）限制酶和DNA連接酶（4）防止胰島素的A、B鏈被菌體內(nèi)蛋白酶降解（5）B-半乳

糖甘酶中含多個(gè)甲硫氨酸，而胰島素A、B鏈中不含甲硫氨酸（6）至少2個(gè)兩條肽鏈的一

端各有一個(gè)游離的氨基,氨基酸R基團(tuán)中可能還含有游離的氨基

考點(diǎn)2基因工程的應(yīng)用與發(fā)展

6.（2019江蘇單科,29,8分）利用基因編輯技術(shù)將病毒外殼蛋白基因?qū)胴i細(xì)胞中，然后通過

核移植技術(shù)培育基因編輯豬,可用于生產(chǎn)基因工程疫苗。下圖為基因編輯豬培育流程,請(qǐng)回答

下列問題:

3號(hào)4號(hào)

⑴對(duì)1號(hào)豬使用處理，使其超數(shù)排卵，收集并選取處在

時(shí)期的卵母細(xì)胞用于核移植。

（2）采集2號(hào)豬的組織塊,用處理獲得分散的成纖維細(xì)胞,放置于370c的CO?

培養(yǎng)箱中培養(yǎng),其中CO?的作用是。

（3）為獲得更多基因編輯豬,可在胚胎移植前對(duì)胚胎進(jìn)行。產(chǎn)出的基因編輯豬的性染

色體來自號(hào)豬。

（4）為檢測(cè)病毒外殼蛋白基因是否被導(dǎo)入4號(hào)豬并正常表達(dá),可采用的方法有（填序

號(hào)）。

①DNA測(cè)序②染色體倍性分析

③體細(xì)胞結(jié)構(gòu)分析④抗原一抗體雜交

答案（8分）（1）促性腺激素減數(shù)第二次分裂中期（2）胰蛋白酶（膠原蛋白酶）維持培

養(yǎng)液的pH（3）分割2⑷①④

7.（2019天津理綜,9,12分）B基因存在于水稻基因組中，其僅在體細(xì)胞（2n）和精子中正常表

達(dá)，但在卵細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄。為研究B基因表達(dá)對(duì)卵細(xì)胞的影響,設(shè)計(jì)了如下實(shí)驗(yàn)。

水稻B基因

編碼指門的序列—基因T-DNA

V2ZZZZZZZZk^^

凡_耳每平■嚼

4水稻g苗

饕定9i&

轉(zhuǎn)基因

那毒案

k>*可在水稻卵細(xì)胞中啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng)子植株

據(jù)圖回答：

（DB基因在水稻卵細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄，推測(cè)其可能的原因是卵細(xì)胞中._______（單選）。

A.含B基因的染色體缺失

B.DNA聚合酶失活

C.B基因發(fā)生基因突變

D.B基因的啟動(dòng)子無法啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄

(2)從水稻體細(xì)胞或中提取總RNA,構(gòu)建文庫(kù),進(jìn)而獲得B基因編碼蛋白的

序列。將該序列與Luc基因(表達(dá)的熒光素酶能催化熒光素產(chǎn)生熒光)連接成融合基因(表達(dá)

的蛋白質(zhì)能保留兩種蛋白質(zhì)各自的功能)，然后構(gòu)建重組表達(dá)載體。

(3)在過程①、②轉(zhuǎn)化篩選時(shí)，過程中T-DNA整合到受體細(xì)胞染色體DNA上，過程

在培養(yǎng)基中應(yīng)加入卡那霉素。

(4)獲得轉(zhuǎn)基因植株過程中，以下鑒定篩選方式正確的是(多選)。

A.將隨機(jī)斷裂的B基因片段制備成探針進(jìn)行DNA分子雜交

B.以Luc基因?yàn)槟０逶O(shè)計(jì)探針進(jìn)行DNA分子雜交

C.以B基因編碼蛋白的序列為模板設(shè)計(jì)探針與從卵細(xì)胞提取的mRNA雜交

D.檢測(cè)加入熒光素的卵細(xì)胞中是否發(fā)出熒光

(5)從轉(zhuǎn)基因植株未成熟種子中分離出胚,觀察到細(xì)胞內(nèi)僅含一個(gè)染色體組,判定該胚是由未

受精的卵細(xì)胞發(fā)育形成的，而一般情況下水稻卵細(xì)胞在未受精時(shí)不進(jìn)行發(fā)育，由此表

明o

答案(共12分)(1)D(2)精子cDNA(3)②①(4)BCD(5)B基因表達(dá)能使卵細(xì)胞不

經(jīng)受精直接發(fā)育成胚

8.(2018課標(biāo)全國(guó)I,38,15分)回答下列問題：

(1)博耶(H.Boyer)和科恩(S.Cohen)將非洲爪蟾核糖體蛋白基因與質(zhì)粒重組后導(dǎo)入大腸桿菌

細(xì)胞中進(jìn)行了表達(dá)。該研究除證明了質(zhì)粒可以作為載體外，還證明了一

_______________________(答出兩點(diǎn)即可)。

(2)體外重組的質(zhì)粒可通過C/參與的方法導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞;而體外重組的噬菌體

DNA通常需與組裝成完整噬菌體后,才能通過侵染的方法將重組的噬菌體

DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞。在細(xì)菌、心肌細(xì)胞、葉肉細(xì)胞中，可作為重組噬菌體宿主細(xì)胞的

是o

(3)真核生物基因(目的基因)在大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)表達(dá)時(shí)，表達(dá)出的蛋白質(zhì)可能會(huì)被降解。為防

止蛋白質(zhì)被降解,在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)選用的大腸桿菌作為受體細(xì)胞,在蛋白質(zhì)純化

的過程中應(yīng)添加的抑制劑。

答案（1）體外重組的質(zhì)?？梢赃M(jìn)入受體細(xì)胞;真核生物基因可在原核細(xì)胞中表達(dá)（2）轉(zhuǎn)化

外殼蛋白（或答噬菌體蛋白）細(xì)菌（3）蛋白酶缺陷型蛋白酶

9.（2015海南單科,31,15分）在體內(nèi)，人胰島素基因表達(dá)可合成出一條稱為前胰島素原的肽

鏈，此肽鏈在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中經(jīng)酶甲切割掉氨基端一段短肽后成為胰島素原，進(jìn)入高爾基體的胰島

素原經(jīng)酶乙切割去除中間片段C后,產(chǎn)生A、B兩條肽鏈,再經(jīng)酶丙作用生成由51個(gè)氨基酸殘

基組成的胰島素。目前，利用基因工程技術(shù)可大量生產(chǎn)胰島素?；卮鹣铝袉栴}：

（D人體內(nèi)合成前胰島素原的細(xì)胞是,合成胰高血糖素的細(xì)胞是。

（2）可根據(jù)胰島素原的氨基酸序列,設(shè)計(jì)并合成編碼胰島素原的序列,用該序列

與質(zhì)粒表達(dá)載體構(gòu)建胰島素原基因重組表達(dá)載體,再經(jīng)過細(xì)菌轉(zhuǎn)化、篩選及鑒定，即可建立能

穩(wěn)定合成的基因工程菌。

（3）用胰島素原抗體檢測(cè)該工程菌的培養(yǎng)物時(shí)，培養(yǎng)液無抗原抗體反應(yīng),菌體有抗原抗體反應(yīng),

則用該工程菌進(jìn)行工業(yè)發(fā)酵時(shí)，應(yīng)從中分離、純化胰島素原。胰島素原經(jīng)酶處理便

可轉(zhuǎn)變?yōu)橐葝u素。

答案⑴胰島B細(xì)胞胰島A細(xì)胞（每空3分，共6分）

（2）DNA胰島素原（每空3分，共6分）

（3）菌體（3分）

考點(diǎn)3DNA的粗提取與鑒定

10.（2019江蘇單科，10,2分）下列關(guān)于DNA粗提取與鑒定的敘述，錯(cuò)課的是（）

A.用同樣方法從等體積兔血和雞血中提取的DNA量相近

B.DNA析出過程中，攪拌操作要輕柔以防DNA斷裂

C.預(yù)冷的乙醇可用來進(jìn)一步純化粗提的DNA

D.用二苯胺試劑鑒定DNA需要進(jìn)行水浴加熱

答案A

11.（2018江蘇單科，17,2分）關(guān)于還原糖、蛋白質(zhì)和DNA的鑒定實(shí)驗(yàn)，下列敘述正確的是

（）

A.在甘蔗莖的組織樣液中加入雙縮胭試劑,溫水浴后液體由藍(lán)色變成磚紅色

B.在大豆種子勻漿液中加入斐林試劑,液體由藍(lán)色變成紫色

C.提取DNA時(shí),在切碎的洋蔥中加入適量洗滌劑和食鹽,充分研磨,過濾并棄去濾液

D.將DNA粗提物溶解在2moi/LNaCl溶液中,加入二苯胺試劑，沸水浴后液體由無色變成藍(lán)色

答案D

12.（2015江蘇單科,25,3分）圖1、2分別為“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)中部分操作步驟示

意圖，下列敘述正確的是（多選）（）

理而細(xì)胞訥DNA濃熱溶滯

A.圖1、2中加入蒸儲(chǔ)水稀釋的目的相同

B.圖1中完成過濾之后保留濾液

C.圖2中完成過濾之后棄去濾液

D.在圖1雞血細(xì)胞液中加入少許嫩肉粉有助于去除雜質(zhì)

答案BCD

教師專用題組

1.（2014江蘇單科,23,3分）下列關(guān)于基因工程技術(shù)的敘述，錯(cuò)誤的是（多選）（）

A.切割質(zhì)粒的限制性核酸內(nèi)切酶均特異性地識(shí)別6個(gè)核甘酸序列

B.PCR反應(yīng)中溫度的周期性改變是為了DNA聚合酶催化不同的反應(yīng)

C.載體質(zhì)粒通常采用抗生素合成基因作為篩選標(biāo)記基因

D.抗蟲基因即使成功地插入到植物細(xì)胞染色體上也未必能正常表達(dá)

答案ABC

2.（2014江蘇單科,16,2分）下列關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)敘述,簿送的是（）

A.酵母和菜花均可作為提取DNA的材料

B.DNA既溶于2moi/LNaCl溶液也溶于蒸播水

C.向雞血細(xì)胞液中加蒸僧水?dāng)嚢?可見玻棒上有白色絮狀物

D.DNA溶液加入二苯胺試劑沸水浴加熱,冷卻后變藍(lán)

答案c

3.（2013江蘇單科,22,3分）小鼠雜交瘤細(xì)胞表達(dá)的單克隆抗體用于人體試驗(yàn)時(shí)易引起過敏

反應(yīng)，為了克服這個(gè)缺陷，可選擇性擴(kuò)增抗體的可變區(qū)基因（目的基因）后再重組表達(dá)。下列相

關(guān)敘述正確的是（多選）（）

A.設(shè)計(jì)擴(kuò)增目的基因的引物時(shí)不必考慮表達(dá)載體的序列

B.用PCR方法擴(kuò)增目的基因時(shí)不必知道基因的全部序列

C.PCR體系中一定要添加從受體細(xì)胞中提取的DNA聚合酶

D.一定要根據(jù)目的基因編碼產(chǎn)物的特性選擇合適的受體細(xì)胞

答案BD

4.（2018北京理綜,5,6分）用XhoI和SalI兩種限制性核酸內(nèi)切酶分別處理同一DNA片段,

酶切位點(diǎn)及酶切產(chǎn)物分離結(jié)果如圖。以下敘述不氐頌的是（）

XhoISalISalISalIXho

圖1酶切位點(diǎn)圖

①②

圖2電泳結(jié)果示意圖

A.圖1中兩種酶識(shí)別的核甘酸序列不同

B.圖2中酶切產(chǎn)物可用于構(gòu)建重組DNA

C.泳道①中是用SalI處理得到的酶切產(chǎn)物

D.圖中被酶切的DNA片段是單鏈DNA

答案D

5.（2017北京理綜,5,6分）為了增加菊花花色類型，研究者從其他植物中克隆出花色基因

C（圖1）,擬將其與質(zhì)粒（圖2）重組,再借助農(nóng)桿菌導(dǎo)入菊花中。

HamilI

￡coR1后動(dòng)子

次終止子\

EcoRIEcaRI4啟動(dòng)子）

L_______I■質(zhì)粒

Ic基因|潮毒索抗性基因*/

mi圖2

下列操作與實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟唬氖牵ǎ?/p>

A.用限制性核酸內(nèi)切酶EcoRI和連接酶構(gòu)建重組質(zhì)粒

B.用含C基因的農(nóng)桿菌侵染菊花愈傷組織,將C基因?qū)爰?xì)胞

C.在培養(yǎng)基中添加卡那霉素,篩選被轉(zhuǎn)化的菊花細(xì)胞

D.用分子雜交方法檢測(cè)C基因是否整合到菊花染色體上

答案C

6.（2014廣東理綜,25,6分）利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)按酸酯酶（CarE）制劑的流程如圖所示,下

列敘述正確的是（雙選）（）

|抗農(nóng)藥馬拉硫一小菜蛾卜而^QrE基因||表達(dá)載體|

|降解馬拉硫一殘商卜|CarE制劑用工程菌四大M桿菌網(wǎng)金組表達(dá)載體|

A.過程①需使用逆轉(zhuǎn)錄酶

B.過程②需使用解旋酶和PCR獲取目的基因

C.過程③使用的感受態(tài)細(xì)胞可用NaCl溶液制備

D.過程④可利用DNA分子雜交鑒定目的基因是否已導(dǎo)入受體細(xì)胞

答案AD

7.（2014重慶理綜,4,6分）如圖是利用基因工程培育抗蟲植物的示意圖。以下相關(guān)敘述,正確

的是（）

A.②的構(gòu)建需要限制性核酸內(nèi)切酶和DNA聚合酶參與

B.③侵染植物細(xì)胞后,重組Ti質(zhì)粒整合到④的染色體上

C.④的染色體上若含抗蟲基因，則⑤就表現(xiàn)出抗蟲性狀

D.⑤只要表現(xiàn)出抗蟲性狀就表明植株發(fā)生了可遺傳變異

答案D

8.(2012江蘇單科,32,9分)圖1表示含有目的基因D的DNA片段長(zhǎng)度(bp即堿基對(duì))和部分

堿基序列，圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列?，F(xiàn)有Msp【、BamHI>MboISmaI4

種限制性核酸內(nèi)切酶，它們識(shí)別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為C,CGG、G'GATCC.'GATC.

CCC'GGGO

請(qǐng)回答下列問題：

目的基因D

111111111r**i?H:I111i("i111111111111111

GGATCCCICCGCGCCCGCGGCATCC

CCTAGG(XXCCCGGGCCCCCTAGG

1113i11L.」iMi□iL.」iiiliiL.一1111iii111

(1)圖1的一條脫氧核甘酸鏈中相鄰兩個(gè)堿基之間依次由連接。

(2)若用限制酶SmaI完全切割圖1中DNA片段,產(chǎn)生的末端是末端，其產(chǎn)物長(zhǎng)度

為?

(3)若圖1中虛線方框內(nèi)的堿基對(duì)被T-A堿基對(duì)替換,那么基因D就突變?yōu)榛騞。從雜合子

中分離出圖1及其對(duì)應(yīng)的DNA片段,用限制酶SmaI完全切割，產(chǎn)物中共有種不同長(zhǎng)度

的DNA片段。

(4)若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過同種限制酶處理