液相色譜儀流動相脫氣的目的和方法 液相色譜常見問題解決方法

第第頁液相色譜儀流動相脫氣的目的和方法液相色譜常見問題解決方法流動相脫氣是液相色譜儀提高檢測性能和保護色譜柱的有效措施。

一、液相色譜儀液相色譜儀流動相脫氣的目的：

1、使色譜泵輸液均勻精準(zhǔn)，減小脈動。

2、提高保留時間和色譜峰面積的重現(xiàn)性。

3、防止氣泡引起尖峰。

4、使基線穩(wěn)定，提高信噪比。

5、降低溶劑的紫外吸取本底。

6、削減死體積。

7、防止填料氧化。

二、液相色譜儀流動相常用的脫氣方法：

1、吹氦脫氣法：

利用液體中氦氣的溶解度比空氣低的特性，連續(xù)吹氦脫氣，效果較好，適合全部溶劑。但成本高，使用較少。

2、加熱回留法：

脫氣效果比較好，但操作多而雜。

3、超聲波脫氣法：

操作簡單，但脫氣效果不理想。

4、抽真空脫氣法：

利用真空泵降壓至0.05～0.07MPa，可除去溶劑中的氣體。但抽真空會引起混合溶劑組分的變化，從而影響試驗的重現(xiàn)性，多用于單一溶劑體系。

5、在線真空脫氣法：

利用膜滲透技術(shù)，在線真空脫氣，智能掌控，成本低，脫氣效果明顯優(yōu)于以上幾種方法，并適用于多元溶劑體系。

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有關(guān)液相色譜儀的系統(tǒng)構(gòu)成介紹液相色譜儀系統(tǒng)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分構(gòu)成。

儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相；

被流動相載入色譜柱（固定相）內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的調(diào)配系數(shù)；

在兩相中作相對運動時，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附—解吸的調(diào)配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別；

被分別成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀；

數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來高效液相色譜儀緊要有進樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分別系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)；

下面將分別敘述其各自的構(gòu)成與特點。

進樣系統(tǒng)

一般接受隔膜注射進樣器或高壓進樣間完成進樣操作，進樣量是恒定的。

這對提高分析樣品的重復(fù)性是有益的。

輸液系統(tǒng)

該系統(tǒng)包括高壓泵、流動相貯存器和梯度儀三部分。

高壓泵的一般壓強為47～44X10Pa，流速可調(diào)且穩(wěn)定，當(dāng)高壓流動相通過層析柱時；

可降低樣品在柱中的擴散效應(yīng)，可加快其在柱中的移動速度；

這對提高辨別率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。

流動相貯存器和梯度儀，可使流動相隨固定相和樣品的性質(zhì)而更改；

包括更改洗脫液的極性、離子強度、PH值，或改用競爭性抑制劑或變性劑等。

這就可使各種物質(zhì)（即使僅有一個基團的差別或是同分異構(gòu)體）都能獲得有效分別。

分別系統(tǒng)

該系統(tǒng)包括色譜柱、連接管和恒溫器等。

色譜柱一般長度為10～50cm（需要兩根連用時，可在二者之間加一連接管）；

內(nèi)徑為2～5mm，由優(yōu)質(zhì)不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成；

住內(nèi)裝有直徑為5～10μm粒度的固定相（由基質(zhì)和固定液構(gòu)成）。

固定相中的基質(zhì)是由機械強度高的樹脂或硅膠構(gòu)成；

它們都有惰性（如硅膠表面的硅酸基因基本已除去）、多孔性（孔徑可達1000？）和比表面積大的特點；

加之其表面經(jīng)過機械涂漬（與氣相色譜中固定相的制備一樣）；

或者用化學(xué)法偶聯(lián)各種基因（如磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長度碳鏈的烷基等）或配體的有機化合物。

因此，這類固定相對結(jié)構(gòu)不同的物質(zhì)有良好的選擇性。

例如，在多孔性硅膠表面偶聯(lián)豌豆凝集素（PSA）后，就可以把成纖維細(xì)胞中的一種糖蛋白分別出來。

另外，固定相基質(zhì)粒小，柱床極易達到均勻、致密狀態(tài)，極易降低渦流擴散效應(yīng)。

基質(zhì)粒度小，微孔淺，樣品在微孔區(qū)內(nèi)傳質(zhì)短。這些對縮小譜帶寬度、提高辨別率是有益的。

依據(jù)柱效理論分析，基質(zhì)粒度小，塔板理論數(shù)N就