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文檔簡(jiǎn)介
1、關(guān)于腫瘤細(xì)胞株的選擇,確實(shí)是一個(gè)很麻煩的問(wèn)題,各類(lèi)文獻(xiàn)中提到過(guò)的細(xì)胞株有很多,但是一般而言,我覺(jué)得,對(duì)于我們做裸鼠腫瘤模型,細(xì)胞株的選擇應(yīng)該考慮一下幾個(gè)方面:1. 國(guó)際公認(rèn)度,雖然SFDA的指導(dǎo)原則上表示只要是建株細(xì)胞株均可以,但是一般來(lái)說(shuō),還是應(yīng)該盡量考慮國(guó)際上比較公認(rèn)的細(xì)胞株。2. 體內(nèi)生長(zhǎng)情況,很多細(xì)胞株,在文獻(xiàn)中有很高的出鏡率,但是實(shí)際上,基本都是從體外開(kāi)始有名,所以很多人就硬生生的往體內(nèi)套,結(jié)果就是吃力不討好,比如樓主提到的A549,還有MCF-7,都是很有名氣的細(xì)胞株,但是在體內(nèi)卻不是一個(gè)好的試驗(yàn)對(duì)象,成瘤率低,生長(zhǎng)慢,均一度差?,F(xiàn)在國(guó)內(nèi)的很多研發(fā)單位,特別是一些公司的領(lǐng)導(dǎo)們,缺乏
2、這方面的認(rèn)識(shí),動(dòng)不動(dòng)就把這些著名的細(xì)胞株掛在嘴邊,硬壓著一線的研究人員去花功夫做這些細(xì)胞株,作的不好,就懷疑大家的水平如何如何的,奶奶的,對(duì)此非常生氣!3. 藥物的敏感性,這一點(diǎn)常常被大家忽視,大部分的裸鼠腫瘤模型都是為抗腫瘤藥物的篩選以及研究服務(wù)的,但是常常大家只考慮了這個(gè)細(xì)胞株是不是好做,但是沒(méi)有考慮到細(xì)胞株本身對(duì)于藥物的敏感性,比如Lovo細(xì)胞,國(guó)際公認(rèn)度也還可以,體內(nèi)生長(zhǎng)情況也很棒,但是對(duì)于藥物的敏感性不佳,大部分的常規(guī)化療藥物到了它這里,抑瘤率都會(huì)下降,顯而易見(jiàn),對(duì)于抗腫瘤藥物的篩選來(lái)說(shuō),它不是一個(gè)好的選擇。另外說(shuō)一點(diǎn),體內(nèi)與體外的關(guān)系,現(xiàn)在做體內(nèi)的人,常常被體外的人牽著鼻子走,體外
3、做出來(lái)什么什么細(xì)胞株敏感,體內(nèi)的人就得吭哧吭哧的去做這個(gè),但是卻死活做不好,其實(shí),現(xiàn)在我和一些老前輩們的觀點(diǎn)是,體內(nèi)和體外應(yīng)該協(xié)調(diào)好細(xì)胞株的選擇問(wèn)題,體外的人手上有大把的細(xì)胞株可以選擇,如果,體內(nèi)的人不去和他們協(xié)調(diào),那么將永遠(yuǎn)被牽著鼻子走,受累還不討好,應(yīng)該大家坐下來(lái),一起選擇2030種細(xì)胞株作為常規(guī)的篩選細(xì)胞株,這就足夠了,細(xì)胞株選擇的時(shí)候考慮好方向(胃癌、肝癌、肺癌什么的)、靶點(diǎn)(EGF、vEGF等等),不能漫無(wú)邊際的抓著哪個(gè)體內(nèi)就的做哪個(gè),誰(shuí)也沒(méi)有這個(gè)本事啊。以下給出一些細(xì)胞株供大家參考:頭頸部腫瘤沒(méi)有特別好的細(xì)胞株,Hep2(喉癌)、CNE(鼻咽癌)湊活,比較慢,但是可以接受。肺癌不要
4、和我提什么A549,不好伺候,NCI-H460(大細(xì)胞肺癌)還不錯(cuò),生長(zhǎng)速度快,成瘤率好,但是技術(shù)不好的話,均一度會(huì)差一些,水平過(guò)關(guān)的話,開(kāi)始試驗(yàn)的時(shí)候SD應(yīng)該為平均值的1/3,對(duì)藥物很敏感,特別是紫杉醇,非常敏感。SPC-A-1(肺腺癌),馬馬虎虎過(guò)得去,速度不是很快,但是也還能接受。胃癌MNK-45,日本細(xì)胞株,公認(rèn)度也可以,比較好。BGC-823,很好的公認(rèn)度,生長(zhǎng)有些慢。食道癌Eca-109,我們找不到其他的東西,只能用它,一般般,有點(diǎn)不好伺候。前列腺癌PC-3、DU-145,都是不錯(cuò)的細(xì)胞株,用它們沒(méi)錯(cuò)的。結(jié)腸癌HT-29吧,生長(zhǎng)還可以,Lovo對(duì)藥物的敏感性差了點(diǎn)。肝癌這個(gè)是比較頭
5、痛的一個(gè)領(lǐng)域,Bel-7402,SMMC7721只能說(shuō)湊活,還有國(guó)內(nèi)自己建株的QGY生長(zhǎng)特性不錯(cuò),但是公認(rèn)度差了點(diǎn)。白血病我自己都沒(méi)有做出來(lái)過(guò),嘿嘿,K562和HL60都不好整。表皮癌A431,這家伙,棒極了,在我手上,每次試驗(yàn)只需要淘汰一兩只,剩下的SD小于平均值的1/4,我很喜歡它,主要是EGFR高表達(dá),做這方面的藥物,少不了它!乳腺癌不要用MCF-7,MDA-MB-435、MDA-MB-468、Bcap-37都不錯(cuò),其中Bcap-37也是EGFR高表達(dá)。卵巢癌SK-ov-3不錯(cuò)的。宮頸癌比較麻煩,Hela細(xì)胞株自身的生長(zhǎng)特性就不佳,另外安全性方面也很不好,女生勿近,我們以前做過(guò)一個(gè)C33
6、A,還可以,對(duì)藥物很敏感,生長(zhǎng)比較慢,成瘤率也偏差,用的人也不多,但是沒(méi)有辦法阿。想起來(lái)的就這些,剩下的大家補(bǔ)充吧。二、1.裸鼠的狀態(tài)裸鼠的年齡,比如5-7比9容易成瘤,因?yàn)檫@時(shí)免疫系統(tǒng)不夠強(qiáng);或者如果裸鼠由于試驗(yàn)系統(tǒng)染菌而長(zhǎng)毛或感染,則成瘤率可能會(huì)受影響2.細(xì)胞接種量動(dòng)物腫瘤一般接種2600萬(wàn)/只就100%成瘤,而人癌則需要1000萬(wàn)以上才能較高的成瘤3.細(xì)胞狀態(tài)腫瘤細(xì)胞的活力,生長(zhǎng)狀態(tài),是否對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,有無(wú)污染也對(duì)成瘤影響很大三、接種量 要查文獻(xiàn)來(lái)確定接種量,在找不到任何相關(guān)資料的情況下,最高就用到1*107/0.2ml/site,再高也沒(méi)有意義了。如果你的細(xì)胞很小,1*107/
7、0.1ml也可以操作,不至于很粘稠,那么最好是1*107/0.1ml/site。查文獻(xiàn)看他們的構(gòu)建條件是什么樣的,比如培養(yǎng)條件,接種量,接種位置什么的,是不是一定要用雌性鼠等等。 有的瘤株也有可能很容易成瘤,而且生長(zhǎng)速度很快。建議用幾只動(dòng)物試試不同的接種濃度,萬(wàn)一能夠長(zhǎng)出來(lái),而且還長(zhǎng)得很快,那你就要根據(jù)情況選擇一個(gè)合適的濃度了?;旧弦话阏J(rèn)為比較合適的接種濃度有這么幾個(gè)特征:1. 接種后10到15天左右可以開(kāi)始試驗(yàn)。2. 開(kāi)始試驗(yàn)時(shí)可以用于試驗(yàn)的動(dòng)物數(shù)不少于6070%,而且SD不大于平均值的1/3左右。3
8、. 開(kāi)始試驗(yàn)三、四周后腫瘤重量大于1g,并且沒(méi)有潰爛。當(dāng)然,這些條件都是錦上添花的東西,如果以1*107/site都勉勉強(qiáng)強(qiáng)長(zhǎng)出腫瘤,那么就不必過(guò)多的去考慮它了。 接種部位 接種部位:腋窩中部外側(cè)皮下為好。皮下腫瘤模型中,想要成瘤率高就接種在腋下。接種時(shí)由裸鼠體側(cè)腰部稍靠上的部位進(jìn)針,要保證與接種點(diǎn)的距離小于針頭的長(zhǎng)度,向頭部方穿行,絕對(duì)不能刺破皮膚或者刺破肌肉層,當(dāng)針頭到達(dá)接種位點(diǎn)時(shí)注射,退出針頭,這樣操作的目的并不完全是避免漏液,其實(shí)熟練后,不需要皮下穿行也不會(huì)漏液,主要是避免污染,進(jìn)針點(diǎn)還有少量污染的可能性的,針頭在皮下穿行一段后,接種點(diǎn)離進(jìn)針點(diǎn)較遠(yuǎn),最大限
9、度減少污染的可能。如果是用于正式實(shí)驗(yàn),那么一只老鼠就只能接種一個(gè)位點(diǎn),不可以接種多個(gè)位點(diǎn)用于保證可用的模型數(shù)。因?yàn)樵谟行┣闆r下,一個(gè)老鼠身上有多于一個(gè)腫瘤的情況下,會(huì)有相互影響的可能,無(wú)論這幾個(gè)腫瘤相距有多遠(yuǎn)。要是想多打幾個(gè)部位做做預(yù)試驗(yàn),倒也不是不可以,但是我覺(jué)得,基本上沒(méi)有什么必要。 皮膚不用繃得太緊,平展就可以了,另外接種的時(shí)候進(jìn)針點(diǎn)很靠下,針頭在皮下走一段再注射,速度不要太快。注射前針頭稍微動(dòng)一動(dòng),能動(dòng)就說(shuō)明在皮下,否則可能在皮內(nèi)或者肌肉內(nèi)。一般來(lái)說(shuō)都是有鼓包的但是要是你接種位置太深入腋窩,你是看不到鼓包的。主要靠針頭稍微動(dòng)一動(dòng)來(lái)判斷。 是否應(yīng)用免疫抑制
10、劑 裸鼠皮下種瘤后,可以通過(guò)應(yīng)用免疫抑制劑,比如環(huán)磷酰胺(2mg每只,打兩天)來(lái)加速瘤體的生長(zhǎng),當(dāng)然我知道裸鼠是T免疫缺陷動(dòng)物,但是人家說(shuō)的CTX可以進(jìn)一步抑制裸鼠的體液免疫和NK細(xì)胞殺傷的保護(hù)作用,可以加快瘤子的生長(zhǎng),這樣造模的周期很短,也可以進(jìn)行人為的控制,不知道這個(gè)觀點(diǎn)是不是有道理,實(shí)踐中是不是真有人這么做呢? 樓上說(shuō)的文獻(xiàn)中也有報(bào)道,而且還有預(yù)先用放射照射抑制動(dòng)物免疫功能再接種的方法,但是一般常規(guī)應(yīng)用中大多數(shù)時(shí)候不推薦這么做。另外還有一個(gè)問(wèn)題應(yīng)該被考慮到,大家現(xiàn)在都在琢磨著怎么讓腫瘤出瘤的更快,造模周期更短,但是如果人為的把腫瘤生長(zhǎng)加速,其實(shí)對(duì)實(shí)驗(yàn)并不好。因?yàn)樵炷V?/p>
11、期短,很可能生長(zhǎng)速度也會(huì)被加快,腫瘤可能很快就潰爛了,這樣就不得不被迫中止實(shí)驗(yàn),而用藥卻沒(méi)有用到足夠的時(shí)間,藥效還沒(méi)有發(fā)揮出來(lái)就結(jié)束了,這樣是很不利的。所以一般情況下,應(yīng)該盡量的復(fù)合這個(gè)瘤株本身的生長(zhǎng)特性,不應(yīng)該過(guò)多地去加以人為的干擾。 是否用手術(shù)標(biāo)本荷瘤 如果是藥效試驗(yàn),不建議用手術(shù)標(biāo)本,因?yàn)镾FDA的臨床前研究指導(dǎo)原則上明確指出要用建株的腫瘤株進(jìn)行試驗(yàn),因?yàn)橛檬中g(shù)標(biāo)本的試驗(yàn)可重復(fù)性太差,你這個(gè)標(biāo)本萬(wàn)一沒(méi)有保存好,斷掉了,你自己都很難重復(fù)出上次的試驗(yàn)結(jié)果。國(guó)外的文獻(xiàn)上看到的卻很少有人用手術(shù)標(biāo)本構(gòu)建模型進(jìn)行試驗(yàn)。取材的部位:腫瘤生長(zhǎng)活躍,狀態(tài)良好,結(jié)締組織比較少
12、的地方。運(yùn)送途徑:無(wú)菌、冰浴保溫,無(wú)菌培養(yǎng)液浸泡,時(shí)間不能超過(guò)1個(gè)小時(shí)。最好一個(gè)小時(shí)內(nèi)就能夠接種到動(dòng)物體內(nèi)。接種部位:腋下。另外,手術(shù)標(biāo)本還有一個(gè)風(fēng)險(xiǎn):你不能保證取得的標(biāo)本一定能夠順利地成瘤并且用于試驗(yàn)。 注意事項(xiàng) A裸鼠的周齡,B腫瘤細(xì)胞:何種腫瘤,接種細(xì)胞的數(shù)量(用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的,活力高的)記數(shù)要準(zhǔn)確,C接種方式:注意不要漏液,否則會(huì)損失細(xì)胞數(shù)量D飼養(yǎng)環(huán)境:要求是SPF條件 具體操作 1.能不能成瘤,首先要考慮你的腫瘤細(xì)胞系能否成瘤,其次關(guān)鍵是你的腫瘤細(xì)胞數(shù),一般腫瘤細(xì)胞存活力還是蠻高的,所以你重點(diǎn)要考慮細(xì)胞數(shù)的問(wèn)題,但最高不要超過(guò)1*10
13、7。 2.接種時(shí)間,最好在1小時(shí)之內(nèi)完成。但在我實(shí)際操作過(guò)程中,裸鼠的數(shù)量又多,1小時(shí)之內(nèi)根本做不完的,所以你可以預(yù)先將細(xì)胞放在冰盒里暫為保存。效果還是不錯(cuò)的。 3.成瘤時(shí)間,每個(gè)腫瘤細(xì)胞不太一樣,細(xì)胞數(shù)合適,一般一周左右應(yīng)該能出來(lái)了;另外,如果你是打皮下,你要考慮是否有打到深層組織,比如肌肉,那即使成瘤了,也不大好摸出來(lái)。 腹腔注射 1、腹腔注射進(jìn)針的位置在腹中線與小鼠兩后肢上沿連交叉以下的位置。 2、腹腔注射很少會(huì)打到腸管,因?yàn)槟c子在碰到硬物時(shí)會(huì)縮起來(lái),當(dāng)然前提是你的進(jìn)針不是特別深,如果你的整個(gè)針頭都扎入了腹腔,那么腸子是無(wú)處可
14、躲了。 3、腹腔注射進(jìn)針后,你可以將針頭左右擺動(dòng)一下,如果是正確的,這時(shí)會(huì)有一種很自由無(wú)障礙的感覺(jué),進(jìn)針角度撐握在小于45度,針頭進(jìn)入長(zhǎng)度不超過(guò)3厘米左右。 用大、小白鼠做實(shí)驗(yàn)時(shí),以左手抓住動(dòng)物,使腹部向上,右手將注射針頭于左(或右)下腹部刺入皮下,使針頭向前推 0.51.0cm,再以45度角穿過(guò)腹肌,固定針頭,緩緩注入藥液(圖2-5),為避免傷及內(nèi)臟,可使動(dòng)物處于頭低位,使內(nèi)臟移向上腹。若實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為家兔,進(jìn)針部位為下腹部的腹白線離開(kāi)1cm處腫瘤倍增時(shí)間 腫瘤動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)P湍[瘤的倍增時(shí)間(doubling time),應(yīng)該是在瘤體積100800之
15、間計(jì)算,但是一組動(dòng)物有10只,每周測(cè)量2次瘤體積,如果我想計(jì)算從200倍增到400的時(shí)間的話,10只動(dòng)物不會(huì)在我測(cè)量體積的時(shí)候正好到200或400,那么,在計(jì)算的時(shí)候,具體應(yīng)該怎么做? Geddes 等29將結(jié)節(jié)倍增時(shí)間的計(jì)算公式表示為:DT =(ln 2 t)/ln(V2/V1),V1、V2分別是前后兩次測(cè)量的體積, t是兩次測(cè)量的時(shí)間間隔 你的問(wèn)題有歧義,我覺(jué)得可以有幾下幾種理解: 1.測(cè)量的時(shí)候,對(duì)于某個(gè)老鼠來(lái)說(shuō),第一次可能測(cè)出來(lái)的體積是189.26(不是正好200),第二次是415.31(不是正好400),
16、對(duì)于其他的動(dòng)物都有這樣的問(wèn)題, 2.對(duì)于十只老鼠來(lái)說(shuō),測(cè)量的時(shí)候,可能1號(hào)老鼠是189.26,2號(hào)是312.57,3號(hào)是110.89.,這也是一種理解,我的意見(jiàn)是:測(cè)量一段比較長(zhǎng)的時(shí)間,每只老鼠可以獨(dú)立計(jì)算倍增時(shí)間,然后計(jì)算平均值,SD等,用統(tǒng)計(jì)學(xué)處理的手段。 個(gè)體差異 同一批種幾十只老鼠,有的就長(zhǎng)不出來(lái),有的長(zhǎng)得很大,使評(píng)價(jià)藥效很困難。排除接種懸液未搖勻的可能后,還有什么原因可能造成這一點(diǎn)?可能是是個(gè)體差異了。其中,老鼠年齡是一個(gè)很大的因素。本人就遇到過(guò)2個(gè)月的老鼠接種腫瘤以后,有的長(zhǎng)有的不
17、長(zhǎng)的情況。如果控制好試驗(yàn)條件,動(dòng)物也比較均一的話,一般腫瘤生長(zhǎng)都會(huì)很好的控制在一定范圍的 腫瘤模型新藥申報(bào) zym145286做的腫瘤模型實(shí)驗(yàn)是用于新藥申報(bào)用,現(xiàn)在有一些問(wèn)題還不能校準(zhǔn),我做的是人癌模型,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為裸鼠. 1. 新藥報(bào)批中,有明確的要求說(shuō)腫瘤來(lái)源必須是體內(nèi)傳代3次以上嗎? 2. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,對(duì)于取出腫瘤塊的質(zhì)量有沒(méi)有明確的規(guī)定呢?還是跟其他種鼠一樣,要求平均瘤重不小于1g或者不大于20%的瘤快質(zhì)量不小于400mg, 3. 實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)指標(biāo)相對(duì)腫瘤增殖率T/C(%),指的是瘤體積比還是瘤質(zhì)量比?
18、;4. 實(shí)驗(yàn)申報(bào)材料是否需要附屬實(shí)驗(yàn)動(dòng)物裸鼠的照片?若需要附屬的話,照片沒(méi)有沒(méi)有什么要求怎么照的,是鼠活的時(shí)候的照片還是實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死鼠后在擺好位置照? 5. 申報(bào)材料中附圖要求是腫瘤的生長(zhǎng)曲線還是不同時(shí)間測(cè)量的T/C值對(duì)時(shí)間所做的曲線?還是兩個(gè)都要有呢? 6. 實(shí)驗(yàn)分組分5組,空白溶劑對(duì)照組,藥物高中低三個(gè)劑量組,陽(yáng)性藥物有效濃度對(duì)照組. 這樣可以嗎?要是不可以,還需要怎么分呢? 7. 實(shí)驗(yàn)材料中是否需要包含該實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血液相關(guān)指標(biāo)的數(shù)值呢?比如:白細(xì)胞數(shù)量,骨髓的影響等等 8. 一次實(shí)驗(yàn)有效后
19、,是不是也需要重復(fù)實(shí)驗(yàn)三次?那三次的數(shù)據(jù)都需要包含在數(shù)據(jù)中嗎? swordzjsh具體問(wèn)題回答如下: 1.沒(méi)有問(wèn)題,新老原則均明確要求體內(nèi)三代以上,并且不能超過(guò)1520代(人腫瘤)。 2. 新原則已經(jīng)沒(méi)有瘤重的指標(biāo),只考察瘤體積,也沒(méi)有對(duì)試驗(yàn)結(jié)束后的腫瘤大小有明確要求,但是老的指導(dǎo)原則有這方面的要求。 3. 新的原則是指瘤體積,老的指瘤重,實(shí)際上在數(shù)據(jù)處理的時(shí)候一般瘤體積和瘤重的數(shù)據(jù)都會(huì)加入,分別計(jì)算相應(yīng)的T/C。 4. 需要,常見(jiàn)的有兩種:一種是處死后擺放并拍攝整鼠照片,還有一種是剝?nèi)∧[瘤后拍攝腫瘤的照片,還是那
20、句話,最好都有,至少資料中放一個(gè),另外一份備好,答辯的時(shí)候可以隨時(shí)展示。另外,以前不允許數(shù)碼拍攝,要求光學(xué)照相機(jī),以防電腦編輯,不知道現(xiàn)在還有沒(méi)有類(lèi)似的要求。 5.有的人要看腫瘤生長(zhǎng)曲線,有的人要看T/C的曲線,不過(guò)一般放生長(zhǎng)曲線的多一些,記住,生長(zhǎng)曲線現(xiàn)在要求RTV,相對(duì)腫瘤體積。以前報(bào)批的時(shí)候就可以放RTV曲線了,現(xiàn)在更是RTV的天下。 6.一般來(lái)說(shuō),正式試驗(yàn)基本上就是這么設(shè)計(jì)了,但是你最好有這些劑量、療程、給藥途徑等的設(shè)計(jì)依據(jù),比如權(quán)威文獻(xiàn)、你們的預(yù)試驗(yàn)等材料備問(wèn)。當(dāng)然,如果你的藥物有些特別的地方,那么要根據(jù)他的具體特點(diǎn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)。 7. 這個(gè)是錦上
21、添花的指標(biāo),對(duì)于藥效試驗(yàn)來(lái)說(shuō),沒(méi)有明確要求,但是一定要有體重和死亡的數(shù)據(jù)。 8. 老原則要求重復(fù)兩次,一共三次試驗(yàn),新原則前幾稿要求重復(fù)一次,一共三次試驗(yàn),但是最新一稿我沒(méi)有看到對(duì)于重復(fù)試驗(yàn)的要求,但是作為藥理研究的基本常識(shí),重復(fù)試驗(yàn)是一定需要的,作為正式試驗(yàn)的重復(fù)試驗(yàn)應(yīng)該把數(shù)據(jù)和結(jié)果分析都列入報(bào)告中,重復(fù)試驗(yàn)之間是同等重要的。 zym145286: 針對(duì)您的回答,我仍有幾點(diǎn)不解 1.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后瘤的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)問(wèn)題,您說(shuō)新原則沒(méi)有指標(biāo),那么老原則(就是現(xiàn)在還遵循的原則)具體是多少呢,能不能說(shuō)明一下啊? 2. T/C標(biāo)準(zhǔn)按照體積計(jì)
22、算的時(shí)候,按照的是哪個(gè)時(shí)間點(diǎn)的體積呢,還是說(shuō)整個(gè)測(cè)量過(guò)程的體積都要算? 3.還有一個(gè)比較基本的問(wèn)題,不要笑話我了,呵呵,那個(gè)RTV是怎樣算出來(lái)的?是用藥組數(shù)據(jù)減去空白組數(shù)據(jù)嗎?還是其他算法? 4.正式實(shí)驗(yàn)中,每組的動(dòng)物數(shù)量是多少?6只,還是10-12只? 5.對(duì)給藥時(shí)間有沒(méi)有什么具體要求呢,就是說(shuō)有沒(méi)有上限,比如不可以超過(guò)一個(gè)月啊什么的? swordzjsh 1. 老原則的標(biāo)準(zhǔn)就是你寫(xiě)出來(lái)的那個(gè)。 2. 整個(gè)測(cè)量過(guò)程的體積都要算,可以用T/C對(duì)時(shí)間點(diǎn)作圖的那種。實(shí)際上,不知道你有沒(méi)有老的指導(dǎo)原則,上面有一個(gè)表,那個(gè)
23、表里面匯總了一些試驗(yàn)的基本信息,那個(gè)表里面要填增殖率,一般是選效果最好的那一天的數(shù)據(jù)填上去。 3. RTV = Vt / V0。其中V0為分籠給藥時(shí)(即d0)測(cè)量所得腫瘤體積,Vt為每一次測(cè)量時(shí)的腫瘤體積。RTV是針對(duì)每一只小鼠計(jì)算的。 4. 對(duì)于裸鼠來(lái)說(shuō),5到10 只,要根據(jù)你的藥物的性質(zhì)來(lái)定,如果SD較大,建議多設(shè)幾只,容易做出統(tǒng)計(jì)差異。如果SD較小,不少于6只,因?yàn)橐笤囼?yàn)過(guò)程中動(dòng)物死亡率不超過(guò)20%,6只動(dòng)物死了一只還可以接受,要是5只動(dòng)物死了一只就是20%了。 5. 沒(méi)有具體
24、的要求,一般在3到5周,常見(jiàn)為三周,并且保證腫瘤長(zhǎng)到足夠的大小。如果有特別的原因可以變化試驗(yàn)周期,但是一般都是加長(zhǎng)而不會(huì)縮短。 實(shí)驗(yàn)分組與標(biāo)記 baobaogao197759: 我的實(shí)驗(yàn)是觀察藥物對(duì)lewis肺癌的生長(zhǎng)的影響。 1、實(shí)驗(yàn)分為五組(模型組、陽(yáng)性對(duì)照組(CTX)藥物大、中、小劑量組)。我不清楚需不需要設(shè)置陰性對(duì)照組(就是不造模組,)2、C57小鼠怎樣標(biāo)記,有剪趾、穿耳孔的方法。但是具體的操作沒(méi)有說(shuō)明,能否介紹一下。 swordzjsh 1.不需要設(shè)normal組,因?yàn)槟[瘤的生長(zhǎng)和評(píng)價(jià)非常明顯,不會(huì)有干擾的可能。
25、2. 我一般是剪耳號(hào),一只小鼠兩只耳朵,每只耳朵可以剪上側(cè)和下側(cè)兩個(gè)位點(diǎn),你可以自己指定組合,比如我們是這樣的:左上為一號(hào),左下為二號(hào),右上為三號(hào),右下為四號(hào),左側(cè)上下為五號(hào),右側(cè)上下為六號(hào),左上右上為七號(hào),左下右下為八號(hào). 細(xì)胞懸浮液體 roger150 ,在做腫瘤模型用細(xì)胞接種時(shí),細(xì)胞懸浮在什么液體里面.有沒(méi)用matrigel同細(xì)胞混勻后再接種的? Swordzjsh:一般來(lái)說(shuō),可以懸浮在相應(yīng)的無(wú)血清培養(yǎng)基、PBS、saline中,接種效果以上三種次第降低。用matrigel是一種促進(jìn)腫瘤形成生長(zhǎng)的手段,如果本身腫瘤生長(zhǎng)不是特別困難不建議用
26、它,但是一些比如A549之類(lèi)的細(xì)胞株,接種后五六十天還只有600700mm3的腫瘤,就可以考慮使用matrigel。使用matrigel的時(shí)候要注意低溫操作,因?yàn)槭覝叵耺areigel就有可能固化。一般是在冰浴中操作。 白血病腫瘤,皮下注射or靜脈注射? abaiabai 我的理解是,靜脈注射反應(yīng)的是疾病全身播散的作用,皮下注射便于觀察瘤塊大小,衡量用藥效果,應(yīng)該結(jié)合自己試驗(yàn)的目的選擇注射方法 我最近剛剛實(shí)驗(yàn)比較了一下靜脈注射和皮下接種白血病細(xì)胞株,從理論上說(shuō)靜脈接種似乎皮下接種更接近白血病的生物行為特點(diǎn),但是根據(jù)我的實(shí)驗(yàn)和以前的文獻(xiàn),靜脈接種小鼠的平均
27、生存期很短,我的不超過(guò)10天,我還試驗(yàn)性的進(jìn)行了化療,結(jié)果幾乎全死了,而皮下接種者結(jié)果穩(wěn)定。所以選皮下還是靜脈,應(yīng)該根據(jù)自己的試驗(yàn)?zāi)康膩?lái)定,長(zhǎng)期的實(shí)驗(yàn)好像不太適合用靜脈注射的方法。 swordzjsh 皮下或者靜脈注射都可以,看你的細(xì)胞株了,也有用腹腔注射的。 小鼠的捉拿 從籠盒內(nèi)將小鼠尾部捉住并提起,放在籠蓋(或表面粗糙的物體)上,輕輕向后拉鼠尾,在小鼠向前掙脫時(shí),用左手拇指和食指抓住兩耳和頸部皮膚,無(wú)名指、小指和手掌心夾住背部皮膚和尾部,并調(diào)整好動(dòng)物在手中的姿勢(shì)。這類(lèi)捉拿方法多用于灌胃以及肌肉、腹腔和皮下注射等。如若進(jìn)行心臟采血、解剖、外
28、科手術(shù)等實(shí)驗(yàn)時(shí),就必須要固定小鼠。使小鼠呈仰臥位(必要時(shí)先進(jìn)行麻醉),用橡皮筋將小鼠固定在小鼠實(shí)驗(yàn)板上。如若不麻醉,則將小鼠放人保定架里,固定好保定架的封口。 小鼠性情較溫順,一般不會(huì)咬人,比較容易抓取固定。通常用右手提起小鼠尾巴將其放在鼠籠蓋或其它粗糙表面上,在小鼠向前掙扎爬行時(shí),用左手拇指和食指捏住其雙耳及頸部皮膚,將小鼠置于左手掌心、無(wú)名指和小指夾其背部皮膚和尾部,即可將小鼠完全固定。在一些特殊的實(shí)驗(yàn)中,如進(jìn)行尾靜脈注射時(shí),可使用特殊的固定裝置進(jìn)行固定,如尾靜脈注射架或粗的玻璃試管。如要進(jìn)行手術(shù)或心臟采血應(yīng)先行麻醉再操作,如進(jìn)行解剖實(shí)驗(yàn)則必須先行無(wú)痛處死后再進(jìn)行。 實(shí)
29、驗(yàn)動(dòng)物的編號(hào) 編號(hào)的方法很多,根據(jù)動(dòng)物的種類(lèi)數(shù)量和觀察時(shí)間長(zhǎng)短等因素來(lái)選擇合適的標(biāo)記方法。 (一) 掛牌法:將號(hào)碼烙壓在圓形或方形金屬牌上(最好用鋁或不銹鋼的,它可長(zhǎng)期使用不生銹),或?qū)⑻?hào)碼按實(shí)驗(yàn)分組編號(hào)烙在栓動(dòng)物頸部的皮帶上,將此頸圈固定在動(dòng)物頸部。該法適用于狗等大型動(dòng)物。(二) (二)打號(hào)法:用刺數(shù)鉗(又稱(chēng)耳號(hào)鉗)將號(hào)碼打在動(dòng)物耳朵上。打號(hào)前用蘸有酒精的棉球擦凈耳朵,用耳號(hào)鉗刺上號(hào)碼,然后在烙印部位用棉球蘸上溶在食醋里的黑墨水擦抹。該法適用于耳朵比較大的兔、狗等動(dòng)物。 (三)針刺法:用七號(hào)或八號(hào)針頭蘸取少量碳素墨水,在耳部、前后肢以及尾部等處刺入皮
30、下,在受刺部位留有一黑色標(biāo)記。該法適用于大小鼠、豚鼠等。在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量少的情況下,也可用于兔、狗等動(dòng)物。 (四)化學(xué)藥品涂染動(dòng)物被毛法:經(jīng)常應(yīng)用的涂染化學(xué)藥品有 涂染紅色:0.5中性紅或品紅溶液。涂染黃色:3-5苦味酸溶液。 涂染黑色:煤焦油的酒精溶液。 根據(jù)實(shí)驗(yàn)分組編號(hào)的需要,可用一種化學(xué)藥品涂染實(shí)驗(yàn)動(dòng)物動(dòng)物背部被毛就可以。如果實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量較多,則可以選擇兩種染料。該方法對(duì)于實(shí)驗(yàn)周期短的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物較合適,時(shí)間長(zhǎng)了染料易退掉;對(duì)于哺乳期的子畜也不適合,因母畜容易咬死子畜或把染料舔掉。 (五)剪毛法:該法適用于大、中型動(dòng)物,如狗、兔等。方法是用剪毛
31、刀在動(dòng)物一側(cè)或背部剪出號(hào)碼,此法編號(hào)清楚可靠,但只適于短期觀察。 (六)打孔或剪缺口法:可用打孔機(jī)在兔耳一定位置打一小孔來(lái)表示一定的號(hào)碼。如用剪子剪缺口,應(yīng)在剪后用滑石粉捻一下,以免愈合后看不出來(lái)。該法可以編至1 9999號(hào),此種方法常在飼養(yǎng)大量動(dòng)物時(shí)作為終身號(hào)采用。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分組 (一)分組的原則:進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí),經(jīng)常需要將選擇好的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按研究的需要分成若干組。動(dòng)物分組應(yīng)按隨機(jī)分配的原則,使每只動(dòng)物都有同等機(jī)會(huì)被分配到各個(gè)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組中去,以避免各組之間的差別,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,特別是進(jìn)行準(zhǔn)確的統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn),必須在隨機(jī)分組的基礎(chǔ)上進(jìn)行。
32、60;每組動(dòng)物數(shù)量應(yīng)按實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)短、實(shí)驗(yàn)類(lèi)型及統(tǒng)計(jì)學(xué)要求而定。如果是慢性實(shí)驗(yàn)或需要定期處死動(dòng)物進(jìn)行檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn),就要求選較多的動(dòng)物,以補(bǔ)足動(dòng)物自然死亡和認(rèn)為處死所喪失的數(shù)量,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)有合乎統(tǒng)計(jì)學(xué)要求的動(dòng)物數(shù)量存在。 (二)建立對(duì)照組:分組時(shí)應(yīng)建立對(duì)照組。1.自身對(duì)照組:是指實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)而言。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物本身在實(shí)驗(yàn)處理前、后兩個(gè)階段的各項(xiàng)相關(guān)數(shù)據(jù)就分別是對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,此法可排除生物間的個(gè)體差異。2.平行對(duì)照組:有正對(duì)照組和負(fù)對(duì)照組兩種。給實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物某種處理,小鼠采血方法 1.割(剪)尾采血 當(dāng)所需血量很少時(shí)采用本法。固定動(dòng)物并露出鼠尾。將尾部毛剪去后消毒,然
33、后浸在45左右的溫水中數(shù)分鐘,使尾部血管充盈。再將尾擦干,用銳器(刀或剪刀)割去尾尖0.3-0.5cm,讓血液自由滴入盛器或用血紅蛋白吸管吸取,采血結(jié)束,傷口消毒并壓迫止血。也可在尾部作一橫切口,割破尾動(dòng)脈或靜脈,收集血液的方法同上。每鼠一般可采血10余次以上。小鼠每次可取血0.1ml,大鼠0.30.5ml。 2.鼠尾刺血法 大鼠用血量不多時(shí)(僅做白細(xì)胞計(jì)數(shù)或血紅蛋白檢查),可采用本法。先將鼠尾用溫水擦拭,再用酒精消毒和擦拭,使鼠尾充血。用7號(hào)或8號(hào)注射針頭,刺入鼠尾靜脈,拔出針頭時(shí)即有血滴出,一次可采集1050mm3。如果長(zhǎng)期反復(fù)取血,應(yīng)先靠近鼠尾末端穿刺,以
34、后再逐漸向近心端穿刺。 3.眼眶靜脈叢采血 采血者的左手拇食兩指從背部較緊地握住小鼠或大鼠的頸部(大鼠采血需帶上紗手套),應(yīng)防止動(dòng)物窒息。當(dāng)取血時(shí)左手拇指及食指輕輕壓迫動(dòng)物的頸部?jī)蓚?cè),使眶后靜脈叢充血。右手持續(xù)接7號(hào)針頭的1ml注射器或長(zhǎng)頸(34cm)硬質(zhì)玻璃滴管(毛細(xì)管內(nèi)徑0.5-1.0mm),使采血器與鼠面成45的夾角,由眼內(nèi)角刺入,針頭斜面先向眼球,刺入后再轉(zhuǎn)180度使斜面對(duì)著眼眶后界。刺入濃度,小鼠約23mm,大鼠約45mm。當(dāng)感到有阻力時(shí)即停止推進(jìn),同時(shí),將針退出約0.1-0.5mm,邊退邊抽。若穿刺適當(dāng)血液能自然流入毛細(xì)管中,當(dāng)?shù)玫剿璧难亢螅闯?/p>
35、去加于頸部的壓力,同時(shí),將采血器拔出,以防止術(shù)后穿刺孔出血。 若技術(shù)熟練,用本法短期內(nèi)可重復(fù)采血均無(wú)多大困難。左右兩眼輪換更好。體重20-25g的小鼠每次可采血 0.2-0.3ml;體重200-300g大鼠每次可采血0.5-1.0ml,可適用于某些生物化學(xué)項(xiàng)目的檢驗(yàn)。4.斷頭取血 采血者的左手拇指和食指以背部較緊地握住大(小)鼠的頸部皮膚,并作動(dòng)物頭朝下傾的姿勢(shì)。右手用剪刀猛剪鼠頸,約1/2-4/5的頸部前剪斷,讓血自由滴入盛器。小鼠可采用約0.81.2ml;大鼠約5-10ml。 5.心臟采血 鼠類(lèi)的心臟較小,且心率較快,心臟采血比
36、較困難,故少用?;铙w采血方法與豚鼠相同。若做開(kāi)胸一次死亡采血,先將動(dòng)物作深麻醉,打開(kāi)胸腔,暴露心臟,用針頭刺入右心室,吸取血液。小鼠約0.5-0.6ml;大鼠約0.8-1.2ml。 6.頸動(dòng)靜脈采血 先將動(dòng)物仰位固定,切開(kāi)頸部皮膚,分離皮下結(jié)締組織,使頸靜脈充分暴露,可用注射器吸出血液。在氣管兩側(cè)分離出頸動(dòng)脈,離心端結(jié)扎,向心端剪口將血滴入試管內(nèi)。 7.腹主動(dòng)脈采血 最好先將動(dòng)物麻醉,仰臥固定在手術(shù)架上,從腹正中線皮膚切開(kāi)腹腔,使腹主動(dòng)脈清楚暴露。用注射器吸出血液,防止溶血。或用無(wú)齒鑷子剝離結(jié)締組織,夾住動(dòng)脈近心端,用尖頭手術(shù)剪刀
37、,剪斷動(dòng)脈,使血液噴入盛器。 8.股動(dòng)(靜)脈采血 先由助手握住動(dòng)物,采血者左手拉直動(dòng)物下肢,使靜脈充盈?;蛘咭圆珓?dòng)為指標(biāo),右手用注射器刺入血管。體重15-20g 小鼠采血約0.2-0.8ml,大鼠約0.4-0.6ml。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用藥量的確定及計(jì)算方法 (一)動(dòng)物給藥量的確定 1. 先用少量小鼠粗略地探索中毒劑量或致死劑量,然后用小于中毒量的劑量,或取致死量的若干分之一作為應(yīng)用劑量,一般可取1/101/5。 2. 植物藥粗制劑的劑量多按生藥折算。 3. 化學(xué)藥品可參考化學(xué)結(jié)
38、構(gòu)相似的已知藥物, 特別是化學(xué)結(jié)構(gòu)和作用都相似的劑量。 4. 確定劑量后,如第一次用藥的作用不明顯,動(dòng)物也沒(méi)有中毒的表現(xiàn),可以加大劑量再次實(shí)驗(yàn)。如出現(xiàn)中毒現(xiàn)象,作用也明顯,則應(yīng)降低劑量再次實(shí)驗(yàn)。在一般情況下,在適宜的劑量范圍內(nèi),藥物的作用常隨劑量的加大而增強(qiáng)。所以有條件時(shí),最好同時(shí)用幾個(gè)劑量作實(shí)驗(yàn),以便迅速獲得關(guān)于藥物作用的較完整的資料。如實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)劑量與作用強(qiáng)度之間毫無(wú)規(guī)律時(shí),則更應(yīng)慎重分析。 5. 用大動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí),防止動(dòng)物中毒死亡,開(kāi)始的劑量可采用鼠類(lèi)的1/151/2,以后可根據(jù)動(dòng)物的反應(yīng)調(diào)整劑量。 6. 確定動(dòng)物
39、給藥劑量時(shí),要考慮給藥動(dòng)物的年齡大小和體質(zhì)強(qiáng)弱。 一般說(shuō)確定的給藥劑量是指成年動(dòng)物的,如是幼齡動(dòng)物,劑量應(yīng)減小。如以狗為例:6 個(gè)月以上的狗給藥劑量為1份時(shí),36個(gè)月的給1/2份, 4589日的給1/4份,2044日的給1/8 份,1019日的給1/16份。 7. 確定動(dòng)物給藥劑量時(shí),要考慮因給藥途徑不同,所用劑量也不同。 以口服量為100時(shí),皮下注射量為3050,肌肉注射量為2030,靜脈注射量為25。 (二)人與動(dòng)物的用藥量換算方法 人與動(dòng)物對(duì)同一藥物耐受性不同,一般動(dòng)物的耐受性要比人大,單位體重的用
40、藥量動(dòng)物比人要高。必須將人的用藥量換算成動(dòng)物的用藥量。一般可按下列比例換算: 人用藥量: 1 小鼠、大鼠: 50100兔、豚鼠: 1520 狗、貓: 510 以上系按單位體重口服用藥量換算。如給藥途徑為靜脈、皮下、腹腔注射,換算比例應(yīng)適當(dāng)減小些。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給藥途徑和方法 (一)皮下注射 注射時(shí)以左手拇指和食指提起皮膚,將連有5(1/2)號(hào)針頭的注射器刺入皮下。皮下注射部位一般狗、貓多在大腿外側(cè),豚鼠在后大腿的內(nèi)側(cè)或小腹部;大白鼠可在側(cè)下腹部。兔在背部或耳根部注射。蛙可在脊背部淋巴腔注射
41、。 (二)皮內(nèi)注射 皮內(nèi)注射時(shí)需將注射的局部脫去被毛,消毒后,用左手拇指和食指按住皮膚并使之繃緊,在兩指之間,用結(jié)核菌素注射器連4(1/2)細(xì)針頭,緊貼皮膚表層刺入皮內(nèi),然后再向上挑起并再稍刺入,即可注射藥液,此時(shí)可見(jiàn)皮膚表面鼓起一白色小皮丘。 (三)肌肉注射 肌肉注射應(yīng)選肌肉發(fā)達(dá),無(wú)大血管通過(guò)的部位,一般多選臀部。注射時(shí)垂直迅速刺入肌肉,回抽針?biāo)ㄈ鐭o(wú)回血,即可進(jìn)行注射。給小白鼠、大白鼠等小動(dòng)物作肌肉注射時(shí),用左手抓住鼠兩耳和頭部皮膚,右手取連有5(1/2)針頭的注射器,將針頭刺入大腿外側(cè)肌肉,將藥液注入。
42、(四)腹腔注射 用大、小白鼠做實(shí)驗(yàn)時(shí),以左手抓住動(dòng)物,使腹部向上,右手將注射針頭于左(或右)下腹部刺入皮下,使針頭向前推 0.51.0cm,再以45度角穿過(guò)腹肌,固定針頭,緩緩注入藥液,為避免傷及內(nèi)臟,可使動(dòng)物處于頭低位,使內(nèi)臟移向上腹。若實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為家兔,進(jìn)針部位為下腹部的腹白線離開(kāi)1cm處。 (五)靜脈注射 小白鼠和大白鼠:一般采用尾靜脈注射,鼠尾靜脈有三根,左右兩側(cè)及背側(cè)各一根,左右兩側(cè)尾靜脈比較容易固定,多采用,背側(cè)一根也可采用,但位置容易固定。操作時(shí)先將動(dòng)物固定在鼠筒內(nèi)或扣在燒杯中,使尾巴露出,尾部用4550的溫水浸潤(rùn)半分
43、鐘或用酒精擦拭使血管擴(kuò)張,并可使表皮角質(zhì)軟化,以左手拇指和食指捏住鼠尾兩側(cè),使靜脈充盈,用中指從下面托起尾巴,以無(wú)名指和小指夾住尾巴的末梢,右手持注射器連4(1/2)號(hào)細(xì)針頭,使針頭與靜脈平行(小于30),從尾下四分之一處(約距尾尖2-3厘米)處進(jìn)針,此處皮薄易于刺入,先緩注少量藥液,如無(wú)阻力,表示針頭已進(jìn)入靜脈,可繼續(xù)注入。注射完畢后把尾部向注射側(cè)彎曲以止血。如需反復(fù)注射,應(yīng)盡可能從末端開(kāi)始,以后向尾根部方向移動(dòng)注射。 幾種常用的動(dòng)物不同給藥途徑的注射量 (六)淋巴囊注射 蛙類(lèi)常采用此法,因其皮下有數(shù)個(gè)淋巴囊,注入藥物甚易吸收
44、。腹部淋巴囊和頭背淋巴囊常作為蛙類(lèi)給藥途徑。一般多選用腹部淋巴囊給藥。注射時(shí)將針頭從蛙大腿上端刺入,經(jīng)大腿肌層入腹壁肌層,再進(jìn)入腹壁皮下,即進(jìn)入淋巴囊,然后注入藥液。有時(shí)也可采用胸淋巴囊給藥。方法是將針頭刺入口腔,使穿過(guò)下頜肌層入胸淋巴囊內(nèi)注入藥液,一次最大注射量為1毫升。蛙全身分布為咽、胸、背、腹側(cè)、腹、大腿和腳等七個(gè)淋巴囊。 (七)經(jīng)口給藥 在急性試驗(yàn)中,經(jīng)口給藥多用灌胃法,此法劑量準(zhǔn)確,適用于小白鼠、大白鼠、家兔等動(dòng)物。 小鼠、大鼠(或豚鼠)用輸血針頭或小號(hào)腰穿針頭,將其尖端斜面磨劑,用焊錫在針尖周?chē)敢粓A頭,注意勿堵塞針孔,即成灌胃針;亦可用燒成圓頭的硬質(zhì)
45、玻璃毛細(xì)管或特制的塑料毛細(xì)秋,作為導(dǎo)管。灌胃時(shí)將針按在注射器上,吸入藥液。左手抓住鼠背部及頸部皮膚將動(dòng)物固定,右手持注射器,將灌胃針插入動(dòng)物口中,沿咽后壁徐徐插入食道。動(dòng)物應(yīng)固定成垂直體位,針插入時(shí)應(yīng)無(wú)阻力。若感到阻力或動(dòng)物掙扎時(shí),應(yīng)立即停止進(jìn)針或?qū)⑨槹纬?,以兔損傷或穿破食道以及誤入氣管。一般當(dāng)灌胃針插入小鼠34cm,大鼠或豚鼠4-6cm后可將藥物注入。常用的灌胃量小鼠為0.2-1ml,大鼠1-4ml,豚鼠為1-5ml。各種動(dòng)物一次灌胃能耐受的最大容積小鼠為0.5-1.0ml,大鼠4-7ml,豚鼠為4-7ml,家兔為80-150ml,狗為200-500ml。 八)其它途徑給藥
46、0; 1呼吸道給藥 呈粉塵、氣體及蒸氣或霧等癥狀存在藥物或毒氣,均需要通過(guò)動(dòng)物呼吸道給藥。如一般實(shí)驗(yàn)時(shí)給動(dòng)物乙醚作吸入麻醉,給動(dòng)物吸一定量的氨氣、二氧化碳等觀察呼吸、循環(huán)等變化;給動(dòng)物定期吸入一定量的SO2。鋸末煙霧等可造成慢性氣管炎動(dòng)物模型等;特別在毒物學(xué)實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用更為廣泛。 2皮膚給藥 為了鑒定藥物或毒物經(jīng)皮膚的吸收作用、局部作用、致敏作用和光感作用等,均需采用經(jīng)皮膚給藥方法。如家兔和豚鼠常采用背部一定面積的皮膚脫毛后,將一定藥液涂在皮膚上,藥液經(jīng)皮膚吸收。 3脊髓腔內(nèi)給藥 此法主要用于椎管麻醉或抽取腦脊液。的灌胃針頭
47、的頭端用錫或者適宜的方法處理了針頭的銳口,自己用砂紙不可能將所有的銳口都磨掉,用這樣的針頭灌胃,損失小鼠食道的可能性比較大。 2.抓住小鼠,使其頭、頸和身體呈一直線。抓小鼠的動(dòng)作很簡(jiǎn)單,左手的小指和無(wú)名指抓住小鼠的尾巴,另外三個(gè)手指抓住小鼠的頸部即可。因?yàn)樾∈笫冀K在活動(dòng)中,若一次抓的感覺(jué)不是很順手,要放開(kāi)重新抓,不要逞強(qiáng)進(jìn)行下一步操作。 3. 抓好小鼠就可以灌胃了,一般用1ml的注射器配灌胃針頭。灌胃針頭從小鼠的嘴角進(jìn)入,壓住舌頭,抵住上顎,輕輕向內(nèi)推進(jìn),進(jìn)入食管后會(huì)有一個(gè)刺空感,進(jìn)入食道后就可以推注藥液了。(我認(rèn)為,所謂的灌胃,不必要灌胃針頭進(jìn)入小鼠的胃部,進(jìn)入
48、食管后就可以推藥了,這樣對(duì)小鼠食道的損傷要小點(diǎn),特別是要長(zhǎng)期灌胃給藥的情況下。)當(dāng)然,灌胃針頭也可以再往里面深入一點(diǎn),防止藥液從口中流出。 4. 灌胃容積一般是0.10.2ml/10g,最大0.35ml/10g,每只小鼠的灌胃最大容積不超過(guò)0.8ml。 小鼠腹腔注射 1. 小鼠腹腔注射可以用1ml的注射器,配合4號(hào)針頭。 2. 腹腔注射時(shí)右手持注射器,左手的小指和無(wú)名指抓住小鼠的尾巴,另外三個(gè)手指抓住小鼠的頸部,使小鼠的頭部向下。這樣腹腔中的器官就會(huì)自然倒向胸部,防止注射器刺入時(shí)損傷大腸、小腸等器官。進(jìn)針的動(dòng)作要輕柔,防止刺
49、傷腹部器官。 3. 尤其是對(duì)于體重較小的小鼠,腹腔注射時(shí)針頭可以在腹部皮下穿行一小段距離,最好是從腹部一側(cè)進(jìn)針,穿過(guò)腹中線后在腹部的另一側(cè)進(jìn)入腹腔,注射完藥物后,緩緩拔出針頭,并輕微旋轉(zhuǎn)針頭,防止漏液。 4. 小鼠腹腔注射的給藥容積一般為510ml/kg。 小鼠靜脈注射 操作步驟: 1. 首先要固定小鼠,最簡(jiǎn)單的固定方法就是把小鼠放在盒子里面,讓它的尾巴伸在盒蓋的外面,用手抓住小鼠尾巴,輕輕往外拽,就可以固定好小鼠了。這種固定方法,小鼠可以在盒子里面活動(dòng),固定的也不是很牢固,但是只要你尾靜脈注射的手法很熟練,就足以
50、用來(lái)注射了。 還有的固定方法就是用一個(gè)小的圓筒,最好是金屬做的,(可以在當(dāng)?shù)氐蔫F匠鋪,或者買(mǎi)白鐵鋪里面定做)首先是金屬比較結(jié)實(shí),而且可以用來(lái)固定在鐵架臺(tái)上,方便操作。圓筒的一段有個(gè)蓋子可以拿下來(lái),蓋子中間有個(gè)小孔,可以讓小鼠的尾巴伸出來(lái)(中間的小孔可以用膠布纏一下,防止銳利的邊緣割傷小鼠尾巴)。另外一段可以用金屬網(wǎng)的結(jié)構(gòu),網(wǎng)的形狀可以做成子彈頭的頭端形狀。網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)可以讓光線透近來(lái),方便小鼠鉆進(jìn)圓筒里面。圓筒的長(zhǎng)度約10cm,直徑約 34cm,可以做個(gè)系列長(zhǎng)度和直徑的圓筒,適合不同大小的小鼠。 2. 固定好小鼠后就是注射了,一般用一次性的1ml的注射器就可
51、以了,玻璃 的1ml的注射器也可以用,針頭用4號(hào)的就可以了。 3. 注射前首先要讓小鼠的血管充盈??梢圆捎?5%的酒精棉球擦拭的方法或者采用溫水浸泡的方法。若小鼠的血管很不清楚,推薦采用溫水浸泡的方法,水溫以不燙手為宜。溫水浸泡23分鐘后,取出小鼠尾巴,用干棉球擦拭。等一會(huì)兒,待血管充盈后,酒精棉球擦拭后就可以進(jìn)針了。若血管還不充盈,可以反復(fù)用溫水浸泡,切不可冒險(xiǎn)注射,除非你手法很熟練,另當(dāng)別論。 4. 小鼠尾部共有四條血管,一般認(rèn)為左右的兩條靜脈比較容易注射,多采用這兩條靜脈進(jìn)針。一般要求進(jìn)針部位靠近小鼠的尾端,這樣若注射失敗的話,還可以再向
52、上選擇進(jìn)針點(diǎn)。但是進(jìn)針部位也不可以太靠下,因?yàn)樵酵?,靜脈越細(xì),操作越難,一般以小鼠尾巴下三分之一的位置比較好。 5. 最關(guān)鍵的就是進(jìn)針了。進(jìn)針時(shí)操作者左手食指和拇指固定住小鼠的尾巴,讓小鼠的尾巴在經(jīng)過(guò)拇指后向下彎曲,進(jìn)針點(diǎn)靠近拇指指甲。針頭和血管呈約30°角,針尖斜面朝上,輕輕挑刺入皮膚后針頭立即和血管平行,一般情況下一次就可以進(jìn)入血管,可以將針頭刺入血管一大半,左右輕輕晃動(dòng)針頭,確定針頭在血管內(nèi),就可以推注藥液了,正常情況下,推注的過(guò)程應(yīng)該沒(méi)有明顯阻力,血管也不會(huì)鼓起。推液時(shí)動(dòng)作宜輕柔,若發(fā)現(xiàn)血管鼓起,那是針頭沒(méi)有刺入血管,需立即拔出針頭。 皮下注射
53、給藥 將藥液推入皮下結(jié)締組織,經(jīng)毛細(xì)血管、淋巴管吸收進(jìn)入血液循環(huán)的過(guò)程。作皮下注射常選項(xiàng)背或大腿內(nèi)側(cè)的皮膚。操作時(shí),常規(guī)消毒注管。此法可采血0.81.2ml。 swordzjsh腫瘤造模實(shí)驗(yàn)中的一點(diǎn)心得: 動(dòng)物選擇:KM小鼠,裸鼠,C57 等均可作為,但是個(gè)人認(rèn)為KM能做出來(lái)最好,畢竟比較有普遍性,還是正常生理狀態(tài)的健康動(dòng)物,比較有說(shuō)服力,還便宜,裸鼠或者其他特定品種,比較適合特定的瘤株 瘤株類(lèi)型: H22 S180; EAC 等 關(guān)于腫瘤細(xì)胞活力的問(wèn)題:一般買(mǎi)回來(lái)的瘤株,需要經(jīng)過(guò)復(fù)蘇過(guò)程,很多
54、人復(fù)蘇以后就直接給動(dòng)物接種了,或者傳一代以后就開(kāi)始實(shí)驗(yàn)了,一般這個(gè)時(shí)候腫瘤細(xì)胞活力往往是不夠的,很難在短時(shí)間內(nèi)長(zhǎng)到規(guī)定重量,所以建議至少在動(dòng)物體內(nèi)傳2代,讓腫瘤細(xì)胞活力充分體現(xiàn)以后再開(kāi)始用于實(shí)驗(yàn)。 關(guān)于接種部位的問(wèn)題:以小鼠為例一般可以選擇腋下或者后肢,有的文章說(shuō)是背部接種,但是背部血管不發(fā)達(dá),營(yíng)養(yǎng)不夠,一般不建議采用。接種一般采用皮下注射,針頭我喜歡沿皮膚水平進(jìn)入,然后挑起表皮,注射,接種后3天我開(kāi)始給藥。 給藥時(shí)間:一般從開(kāi)始造模起2周內(nèi)我就會(huì)處理動(dòng)物了,因?yàn)槟[瘤如果擴(kuò)散后會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物的大量死亡,畢竟是腫瘤啊,動(dòng)物大量死亡的時(shí)間也相對(duì)集中,也許前一天還好,過(guò)一晚上就死掉不
55、少,那個(gè)時(shí)候你哭都找不到墳頭,只要腫瘤差不多夠重了就處理吧。 關(guān)于進(jìn)食水的問(wèn)題:別個(gè)都要死掉了,就別吝嗇了,想吃就吃,想喝就喝吧。 關(guān)于模型對(duì)照組的問(wèn)題: 我已經(jīng)在別的帖子里面強(qiáng)調(diào)過(guò)了,這次再?gòu)?qiáng)調(diào)一下,接種以后一定要每天去騷擾它們一下,我有次試驗(yàn)偷懶,模型組沒(méi)有管他們,結(jié)果模型組的腫瘤最后比給藥組還小,都只有綠豆大,導(dǎo)致試驗(yàn)失敗,郁悶死,后來(lái)重做的時(shí)候每天堅(jiān)持給模型組生理鹽水,結(jié)果腫瘤瘋長(zhǎng)。說(shuō)起來(lái)很奇怪,但是這個(gè)是事實(shí),以后我再?zèng)]有偷懶過(guò),每次都成功復(fù)制出了模型。 關(guān)于腫瘤重量的問(wèn)題:模型組腫瘤重量應(yīng)該不低于0。5g,我不記得在哪本書(shū)上看到的了,反正是有個(gè)規(guī)定的 剝瘤 zhangweilcb:腋窩的腫瘤長(zhǎng)到第12天時(shí),腫瘤在2.0g左右,我在剝瘤子時(shí)感覺(jué)比較困難,對(duì)于一個(gè)瘤子,在剝的前半段還是比較好剝的,但越往里越難剝,主要是瘤子在腋窩深處和小鼠的右肢長(zhǎng)到一塊,不容易區(qū)分,每次剝完后,在最里面總感覺(jué)還剩一點(diǎn)腫瘤在那里。而且,經(jīng)常把血管剪破,導(dǎo)致血液流出。不知該如何處理。腫瘤細(xì)胞可否接種到小鼠腋窩偏下,或是接近腹部?我想這樣在剝瘤子時(shí)會(huì)輕松些,請(qǐng)指教。 swordzjsh:接種的時(shí)候要精確控制接種在皮下,靠皮內(nèi)會(huì)與皮膚強(qiáng)烈粘連,靠肌肉會(huì)與肌肉強(qiáng)烈粘連,而且不要太靠腋窩里面,可以往尾部靠一些,多接幾次體會(huì)一下吧
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