GBT 32065.9-2019 海洋儀器環(huán)境試驗方法 第9部分長霉試驗（正式版）

海洋儀器環(huán)境試驗方法2019-03-25發(fā)布中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會IGB/T32065《海洋儀器環(huán)境試驗方法》'擬分為以下若干部分：——第1部分：總則；——第2部分：低溫試驗；——第5部分：高溫貯存試驗；——第7部分：交變濕熱試驗；——第10部分：鹽霧試驗；——第12部分：碰撞試驗；——第13部分：傾斜和搖擺試驗；——第17部分：溫度-濕度-振動綜合試驗。本部分為GB/T32065的第9部分。本部分按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本部分由中華人民共和國自然資源部提出。本部分由全國海洋標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(SAC/TC283)歸口。1)第1部分至第7部分已于2015年發(fā)布。1海洋儀器環(huán)境試驗方法第9部分：長霉試驗GB/T32065的本部分規(guī)定了海洋儀器及組件長霉試驗的試驗要求、試驗步驟和相關(guān)信息。本部分適用于評定海洋儀器及組件長霉的程度和長霉對海洋儀器及組件性能功能的影響。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T32065.1—2015海洋儀器環(huán)境試驗方法第1部分：總則3試驗要求3.1試驗順序一般按照GB/T32065.1—2015中第9章的規(guī)定進(jìn)行，已做過鹽霧、砂塵試驗的試驗樣品需進(jìn)行清理后方可進(jìn)行長霉試驗。3.2試驗時間長霉試驗的試驗時間為28d。如果試驗雙方的約定要求檢查對功能和電性能的影響，試驗時間為3.3試驗溫度和相對濕度本試驗溫度和相對濕度的要求如下：a)溫度：30℃±1℃;b)相對濕度：95%±5%。3.4試驗菌種本試驗菌種的要求如下：a)推薦使用表1的菌種進(jìn)行試驗，如需要還可按3.4d)對菌種進(jìn)行調(diào)整。b)菌種和冷凍孢子應(yīng)按照菌種提供者推薦的方式進(jìn)行培養(yǎng)和貯存。如果菌種和冷凍孢子不立即使用，應(yīng)保藏在5℃~10℃的環(huán)境中；激活后用于保藏的菌種從接種容器上標(biāo)明的接種日期算起，培養(yǎng)時間不少于14d,但不超過28d。c)在制備霉菌孢子懸浮液前，不應(yīng)取下裝有菌種的容器塞子，一個打開的菌種容器只能制備一次孢子懸浮液。d)可在本試驗要求的菌種基礎(chǔ)上加入其他霉菌菌種，增加的菌種應(yīng)按其對材料的降解情況進(jìn)行選擇，但不應(yīng)選擇對表1中的菌種有明顯抑制作用的菌種。2表1試驗選用的菌種種類霉菌名稱菌種編號受影響的材料黑曲霉AS3.3928織物、乙烯樹脂、敷形涂覆、絕緣材料等土曲霉AS3.3935帆布、紙板、紙繩狀青霉AS3.3875織物、塑料、棉織品赭綠青霉AS3.4302塑料、織物宛氏擬青霉AS3.4253塑料、皮革綠色木霉AS3.2942塑料、織物短柄帚霉AS3.3985橡膠球毛殼霉AS3.4254纖維素注：菌種編號為中國普通微生物菌種保藏管理中心于2003年編著的《菌種目錄》中的菌種編號。3.5試驗設(shè)備試驗設(shè)備的要求如下：a)試驗箱(室)應(yīng)能提供滿足本試驗要求的溫度、濕度條件；b)試驗箱(室)中直接用來生成濕度的水應(yīng)采用蒸餾水；c)試驗箱(室)的內(nèi)壁和頂部的凝結(jié)水不應(yīng)滴落到試驗品上；d)試驗箱(室)內(nèi)流經(jīng)試驗樣品和對照條的風(fēng)速應(yīng)控制在0.5m/s～1.7m/s之間。3.6試驗中斷與其他環(huán)境試驗不同，長霉試驗涉及活的微生物。如果試驗期間中斷，應(yīng)考慮涉及微生物活性的情況。如果中斷出現(xiàn)在試驗的最初10d,則使用新的試驗樣品或清潔過的原試驗樣品重做試驗。如果中斷出現(xiàn)在試驗的后期，則檢查試驗樣品長霉的情況：若試驗樣品已長霉，則不必重新試驗；若對照條存在活菌，但無跡象顯示試驗樣品長霉，則按下面給出的指導(dǎo)進(jìn)行處理：a)相對濕度降低。如果下列其中一條出現(xiàn)，則重新開始試驗；否則重新建立試驗條件并從中斷點處繼續(xù)試驗。1)相對濕度低于50%;2)相對濕度低于70%達(dá)4h或以上；3)對照條上的霉菌出現(xiàn)衰退。b)溫度降低。試驗箱的溫度降低一般會延緩霉菌的生長。如果相對濕度不變，則重新建立試驗條件，然后從溫度降低到規(guī)定允差之下的時間點繼續(xù)試驗；否則按3.6a)的規(guī)定執(zhí)行。c)溫度升高。升高的溫度可能會顯著影響霉菌的生長。如果下列其中一條出現(xiàn)，則重新開始試驗；否則重新建立試驗條件并從中斷點處繼續(xù)試驗。1)溫度超過40℃;2)溫度超過31℃達(dá)4h或以上；3)對照條上的霉菌出現(xiàn)衰退。4試驗步驟4.1試驗準(zhǔn)備試驗開始前，對試驗箱(室)、試驗用器皿等進(jìn)行滅菌。按照試驗雙方的約定確定試驗持續(xù)時間、菌3種、試驗樣品試驗期間的技術(shù)狀態(tài)等并記入表A.1。4.1.2孢子懸浮液的制備將純菌種分別培養(yǎng)在菌種提供者推薦的培養(yǎng)基上，并按照菌種提供者推薦的培養(yǎng)條件培養(yǎng)14d~28d。如菌種提供者未推薦培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，則應(yīng)將純菌種分別培養(yǎng)在合適的培養(yǎng)基上(如馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基),并在30℃培養(yǎng)14d～28d。向各菌管中緩慢加入0.05g/L潤濕劑(如十二烷基硫酸鈉或二辛基硫代丁二酸鈉)的水溶液10mL。將鉑絲或者鎳鉻絲在火焰上燒至赤紅以消毒并冷卻，用其輕刮菌種表面以釋放孢子。輕輕振蕩液體以使孢子分散而不分離出菌絲碎片。將懸浮液通過無菌玻璃纖維層或孔徑為40μm～100μm的微過濾器過濾到無菌離心管中。過濾后的孢子懸浮液離心分離后，去掉上清液。用不少于10mL的無菌蒸餾水將沉淀物再懸浮、離心。如此清洗孢子3次。選用表2中的不含有蔗糖的無機(jī)鹽溶液稀釋孢子，用顯微計數(shù)法將孢子濃度稀釋到1.0×10?/mL~2.0×10°/mL,用無機(jī)鹽溶液配制的孢子懸浮液要在48h之內(nèi)使用，并按照4.5.1進(jìn)行孢子懸浮液活力驗證。將相同體積的單一孢子溶液混合制備成混合孢子懸浮液，混合孢子懸浮液需在6h內(nèi)使用。4.1.3對照條的制備試驗步驟如下：a)按照表2制備營養(yǎng)液，營養(yǎng)液在20℃時的pH應(yīng)為6.0～6.5,若需要，可用0.01mol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)，然后放在高壓蒸汽滅菌器(121℃)中滅菌20min;b)將對照條放入滅菌后的營養(yǎng)液中浸泡，接種前從營養(yǎng)液中取出，滴干。對照條推薦使用白色濾紙或未經(jīng)處理的棉織品制成。表2營養(yǎng)液成分試劑濃度試劑濃度磷酸二氫鉀(KH?PO?)氯化鉀(KCl)磷酸氫二鉀(K?HPO?)硫酸亞鐵(FeSO·7H?O)0.01硫酸鎂(MgSO?·7H?O)蔗糖硝酸鈉(NaNO?) ——44.2預(yù)處理無需清潔試驗樣品可直接進(jìn)行試驗；若需要清潔試驗樣品，則應(yīng)在清潔完成后至少72h才開始試驗，以使揮發(fā)性物質(zhì)蒸發(fā)。4.3初始檢測試驗開始前，記錄實驗室內(nèi)的環(huán)境條件，按試驗雙方的約定進(jìn)行外觀檢查(若需要，則拍照),電性能、機(jī)械性能以及其他性能檢測(若需要),并將相關(guān)信息記入表A.1。按照以下步驟和要求進(jìn)行：a)在接種前應(yīng)將試驗樣品放置在工作中的試驗箱(室)內(nèi)(溫度：30℃±1℃,相對濕度：95%±5%)至少4h;b)按照要求的技術(shù)狀態(tài)將試驗樣品和對照條安裝在試驗箱(室)內(nèi)合適的支架上；c)用噴霧器將混合孢子懸浮液噴在對照條以及試驗樣品上；d)接種后立即開始試驗，試驗期間應(yīng)將隨時間變化的試驗箱(室)內(nèi)溫度和相對濕度記入表A.2;e)試驗期間每7d為試驗箱換氣一次，每次換氣時間不大于3min,直至試驗結(jié)束；f)在試驗7d時，依據(jù)4.5.2中試驗箱(室)生長環(huán)境驗證結(jié)果決定是否繼續(xù)試驗，并將驗證結(jié)果記入表A.1;g)在試驗7d～10d時，依據(jù)孢子活力驗證結(jié)果決定是否繼續(xù)試驗，并將驗證結(jié)果記入表A.1;h)在試驗結(jié)束時，檢查對照條上的霉菌生長情況，與試驗7d時相比若無增加，則本次試驗無效。4.5驗證試驗4.5.1孢子懸浮液活力檢查孢子活力的試驗步驟如下：a)在制備混合孢子懸浮液之前，將0.2mL～0.3mL的每種孢子懸浮液分別接種在無菌的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基或菌種提供者推薦的培養(yǎng)基上，每種菌種應(yīng)使用單獨的瓊脂平板；b)接種后的培養(yǎng)基應(yīng)在30℃±1℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7d～10d;c)培養(yǎng)結(jié)束后檢查霉菌的生長。任何一種試驗菌種在各平板的整個表面沒有出現(xiàn)大量生長都證明使用這些菌種孢子所進(jìn)行的試驗無效。4.5.2試驗箱內(nèi)生長環(huán)境檢查試驗箱生長環(huán)境的試驗步驟如下：a)制備至少3件對照條，并且對照條的長度至少要與試驗樣品的高度相等；b)在試驗箱內(nèi)將對照條靠近試驗樣品垂直懸掛，確保對照條和試驗樣品經(jīng)受相同的試驗環(huán)境；c)在試驗7d后，如試驗樣品相同位置的對照條上有至少90%的表面被霉菌覆蓋，則證明試驗箱內(nèi)環(huán)境符合試驗要求。試驗結(jié)束后應(yīng)立即按照表3在試驗箱(室)內(nèi)進(jìn)行外觀檢查(若需要，則拍照),在評定長霉等級后，用70%酒精去除表面菌絲，然后評定試驗樣品的侵染性質(zhì)和程度；如需要，則進(jìn)行試驗樣品電性能、機(jī)械性能及其他性能檢測。上述檢查或檢測如需在試驗箱外檢查，應(yīng)在8h之內(nèi)完成，否則應(yīng)將試驗樣品5放回試驗箱中至少12h,然后繼續(xù)檢查或檢測，并將檢測信息記入表A.1。表3外觀影響的評定等級生長程度等級注釋無0試驗樣品無霉菌生長微量1分散、稀少或非常局限的霉菌生長輕度2試驗樣品霉菌斷續(xù)蔓延或菌落松散分布，或整個試驗樣品有菌絲連續(xù)伸延，但霉菌下面的試驗樣品表面依然可見中度3霉菌大量生長，試驗樣品出現(xiàn)可視的結(jié)構(gòu)變化嚴(yán)重4厚重的霉菌生長注：使用本表作為指導(dǎo)，但若需要可增加更多其他描述。4.7試驗后滅菌試驗后應(yīng)對接觸霉菌或霉菌孢子的器皿、設(shè)備等進(jìn)行滅菌，已污染的材料在處理之前也應(yīng)進(jìn)行滅菌操作。滅菌方法參見附錄B。5相關(guān)信息當(dāng)使用本部分規(guī)定的方法時，試驗雙方的約定應(yīng)包含如下信息：a)預(yù)處理；b)試驗樣品試驗期間的技術(shù)狀態(tài)；c)增加的試驗菌種；d)試驗時間；e)電性能、機(jī)械性能以及其他性能檢測(只有要求測定性能損害時);f)初始檢測；g)最后檢測。6(規(guī)范性附錄)試驗樣品檢測數(shù)據(jù)記錄表表A.1試驗樣品檢測數(shù)據(jù)記錄表試驗項目樣品名稱樣品型號樣品編號樣品特征描述試驗時間、地點及環(huán)境條件地點時間溫度相對濕度名稱測量范圍準(zhǔn)確度等級或最大允許誤差證書編號有效期至試驗菌種試驗時間/d試驗樣品試驗期間的技術(shù)狀態(tài)試驗開始時間試驗結(jié)束時間初始檢測試驗樣品清潔要求及清潔方法外觀(若需要則拍照)或功能及電性能檢測過程檢測試驗箱內(nèi)生長環(huán)境驗證結(jié)果孢子活力驗證結(jié)果最后檢測外觀(若需要則拍照)或功能及電性能檢測記錄時間溫度℃相對濕度%記錄人備注(資料性附錄)B.1滅菌方法B.1.1化學(xué)溶液滅菌滅菌方法如下：a)器皿的滅菌：可用次氯酸鈉溶液沖洗或浸泡，溶液中的有效氯含量為：500mg/L～1000mg/L,如果采用浸泡的方法，浸泡時間不少于30min,然后用清水沖洗干凈；b)培養(yǎng)箱的滅菌：將培養(yǎng)箱的溫度設(shè)置在70℃,并保持1