醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法 第3部分：微生物學(xué)試驗(yàn)方法

ICS11.040.20

CCSC.31

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T14233.3—20XX

`

醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法

第3部分：微生物學(xué)試驗(yàn)方法

Testmethodsforinfusion,transfusion,injectionequipmentformedicaluse—

Part3:Microbiologicaltestmethods

(點(diǎn)擊此處添加與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)一致性程度的標(biāo)識(shí))

（征求意見(jiàn)稿）

在提交反饋意見(jiàn)時(shí)，請(qǐng)將您知道的相關(guān)專利連同支持性文件一并附上。

20XX-XX-XX發(fā)布20XX-XX-XX實(shí)施

GB/T14233.3—20XX

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件是GB/T14233《醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法》的第3部分。GB/T14233已經(jīng)發(fā)布

了以下部分：

——第1部分：化學(xué)分析方法；

——第2部分：生物學(xué)試驗(yàn)方法；

——第3部分：微生物學(xué)試驗(yàn)方法。

本文件由國(guó)家藥品監(jiān)督管理局提出。

本文件由全國(guó)醫(yī)用輸液器具標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（SAC/TC106）歸口。

本文件起草單位：山東省醫(yī)療器械和藥品包裝檢驗(yàn)研究院

本文件主要起草人：

II

GB/T14233.3—20XX

引言

GB/T14233《醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法》擬由三個(gè)部分構(gòu)成。

——第1部分：化學(xué)分析方法。目的在于給出醫(yī)用輸液、輸血、注射器具的化學(xué)分析方法。

——第2部分：生物學(xué)試驗(yàn)方法。目的在于給出醫(yī)用輸液、輸血、注射器具的生物學(xué)試驗(yàn)方法。

——第3部分：微生物學(xué)試驗(yàn)方法。目的在于給出醫(yī)用輸液、輸血、注射器具的微生物學(xué)試驗(yàn)方

法

在輸液、輸血和注射器具產(chǎn)品上進(jìn)行的微生物學(xué)試驗(yàn)一般包括：

——對(duì)無(wú)菌成品進(jìn)行的無(wú)菌檢查；

——對(duì)無(wú)菌成品進(jìn)行的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查；

——GB/T19973.1給出的產(chǎn)品上微生物總數(shù)的測(cè)定；

——GB/T19973.2給出的用于滅菌過(guò)程的定義、確認(rèn)和維護(hù)的無(wú)菌試驗(yàn)。

本文件涵蓋上述內(nèi)容。

本文件給出的“無(wú)菌檢查”適用于經(jīng)受常規(guī)滅菌劑量或無(wú)菌加工的產(chǎn)品，是在參考藥典方法的基礎(chǔ)上

根據(jù)輸液、輸血和注射器具的具體特點(diǎn)制定的。同時(shí)，本文件的本部分取代GB/T14233.2-2005中的“無(wú)

菌試驗(yàn)”。無(wú)菌檢查常用于監(jiān)督抽檢。無(wú)菌檢查若不符合規(guī)定，表明產(chǎn)品在該檢驗(yàn)條件下發(fā)現(xiàn)微生物污

染，該結(jié)論可以證實(shí)供試品代表的總體有存活微生物。

無(wú)菌檢查不推薦用于產(chǎn)品放行。YY/T0615系列標(biāo)準(zhǔn)對(duì)無(wú)菌醫(yī)療器械產(chǎn)品規(guī)定的無(wú)菌保證水平為

10-6。若要證明10-6的無(wú)菌保證水平，需要對(duì)數(shù)百萬(wàn)件產(chǎn)品進(jìn)行無(wú)菌檢查。無(wú)菌檢查是破壞試驗(yàn)，顯然

如此高的檢驗(yàn)數(shù)量無(wú)法實(shí)現(xiàn)，故無(wú)菌檢查無(wú)法用于證實(shí)供試品代表的總體滿足10-6的無(wú)菌保證水平，不

推薦用于產(chǎn)品放行。無(wú)菌檢查若符合規(guī)定，僅表明供試品在該檢驗(yàn)條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染，即“未檢

出”。

本文件給出的“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查”適用于經(jīng)受常規(guī)滅菌劑量或無(wú)菌加工的產(chǎn)品，是在參考藥典方法的

基礎(chǔ)上根據(jù)輸液、輸血和注射器具的具體特點(diǎn)制定的。同時(shí)，本文件的本部分取代GB/T14233.2-2005

中的“細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)”。細(xì)菌內(nèi)毒素檢查常用于日常質(zhì)量控制以及監(jiān)督抽檢。目前，鱟試劑法是醫(yī)療器

械細(xì)菌內(nèi)毒素檢查最主要的試驗(yàn)方法。

本文件給出的“生物負(fù)載測(cè)定”適用于未經(jīng)滅菌的產(chǎn)品，是GB/T19973.1在醫(yī)用輸液、輸血和注射器

具上的具體應(yīng)用。生物負(fù)載包含微生物數(shù)量、特征和特性的范疇，本文件給出的生物負(fù)載測(cè)定特指滅菌

前產(chǎn)品上微生物數(shù)量的試驗(yàn)方法。

本文件給出的“無(wú)菌試驗(yàn)”適用于經(jīng)受低于常規(guī)滅菌劑量的產(chǎn)品，是GB/T19973.2在醫(yī)用輸液、輸血

和注射器具的具體應(yīng)用。該試驗(yàn)用于證實(shí)經(jīng)受一定滅菌條件后的所有產(chǎn)品中有存活微生物的產(chǎn)品數(shù)量，

從而預(yù)測(cè)達(dá)到預(yù)定的無(wú)菌保證水平所需滅菌劑量。為便于區(qū)分，本文件用“無(wú)菌檢查”和“無(wú)菌試驗(yàn)”分別

表示兩種試驗(yàn)類型。

III

GB/T14233.3—20XX

醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法

第3部分：微生物學(xué)試驗(yàn)方法

1范圍

本文件規(guī)定了醫(yī)用輸液、輸血、注射器具無(wú)菌檢查、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查以及生物負(fù)載測(cè)定和無(wú)菌試驗(yàn)

方法。

本文件適用于醫(yī)用輸液、輸血、注射器具，其他類型醫(yī)療器械產(chǎn)品可參照本文件進(jìn)行。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB18280.2醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌輻射第2部分：建立滅菌劑量

GB/T19973.1醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌微生物學(xué)方法第1部分：產(chǎn)品上微生物總數(shù)的確定

GB/T19973.2醫(yī)療器械的滅菌微生物學(xué)方法第2部分：用于滅菌過(guò)程的定義、確認(rèn)和維護(hù)的無(wú)菌

試驗(yàn)

《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版第四部

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

3.1

樣品份額sampleitemportion，SIP

用于測(cè)試醫(yī)療保健產(chǎn)品的規(guī)定部分。

[來(lái)源：ISO11139:2018,3.244]

3.2

無(wú)菌檢查testforsterility

在經(jīng)無(wú)菌加工或滅菌工藝處理的產(chǎn)品上所進(jìn)行的藥典規(guī)定的技術(shù)操作。

[來(lái)源：ISO11139:2018，3.298]

3.3

無(wú)菌試驗(yàn)testofsterility

開(kāi)發(fā)、確認(rèn)或再鑒定過(guò)程中要求的一項(xiàng)技術(shù)操作，用于確定產(chǎn)品或其份額上是否有存活微生物存在。

3.4

直接接種法directinoculationmethod

無(wú)菌檢查/無(wú)菌試驗(yàn)方法之一，系將產(chǎn)品直接浸沒(méi)于液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。

3.5

薄膜過(guò)濾法membranefiltrationmethod

1

GB/T14233.3—20XX

無(wú)菌檢查/無(wú)菌試驗(yàn)方法之一，系將液體產(chǎn)品或非液體產(chǎn)品經(jīng)過(guò)沖洗液洗脫后的洗脫液進(jìn)行薄膜過(guò)

濾，對(duì)濾膜進(jìn)行培養(yǎng)。

3.6

培養(yǎng)基灌裝法mediumfillingmethod

無(wú)菌檢查/無(wú)菌試驗(yàn)方法之一，系將液體培養(yǎng)基灌裝入產(chǎn)品內(nèi)部腔體或者通路進(jìn)行培養(yǎng)。

3.7

培養(yǎng)基洗脫法mediumelutionmethod

無(wú)菌檢查/無(wú)菌試驗(yàn)方法之一，系用液體培養(yǎng)基對(duì)產(chǎn)品上可能存在的微生物進(jìn)行洗脫，收集洗脫培

養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

3.8

生物負(fù)載測(cè)定testofbioburden

測(cè)定產(chǎn)品存活微生物總數(shù)的試驗(yàn)方法。

3.9

沖洗法Flushing

生物負(fù)載測(cè)定方法之一，系讓沖洗液通過(guò)產(chǎn)品內(nèi)腔制備供試液。

3.10

振搖法Shaking

生物負(fù)載測(cè)定方法之一，系將產(chǎn)品浸入裝有沖洗液的適當(dāng)容器中進(jìn)行振搖制備供試液。

3.11

超聲法：Ultrasonication

生物負(fù)載測(cè)定方法之一，系將產(chǎn)品浸入裝有沖洗液的適當(dāng)容器中進(jìn)行超聲處理制備供試液。

3.12

回收率recoveryefficiency

衡量某一特定技術(shù)從產(chǎn)品上轉(zhuǎn)移、采集和/或培養(yǎng)微生物的能力。

[來(lái)源：ISO11139:2018,3.228]

3.13

生物負(fù)載校正因子bioburdencorrectionfactor

用以存活微生物計(jì)數(shù)時(shí)補(bǔ)償無(wú)法完全從產(chǎn)品和/或微生物培養(yǎng)中采集的數(shù)值。

[來(lái)源：ISO11139:2018,3.24]

3.14

生物負(fù)載估計(jì)值bioburdenestimate

通過(guò)將生物負(fù)載校正因子應(yīng)用于生物負(fù)載計(jì)數(shù)而確定的值。

[來(lái)源：ISO11139:2018,3.25]

4無(wú)菌檢查

4.1材料與儀器

4.1.1培養(yǎng)基

無(wú)菌檢查用培養(yǎng)基通常為硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（FTM）和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(TSB)。培養(yǎng)基的

配制、滅菌、貯藏以及質(zhì)量控制等宜符合《中國(guó)藥典》1101、9203的要求。

2

GB/T14233.3—20XX

4.1.2菌種

表1列舉了無(wú)菌檢查常用菌種。以下菌種主要用于培養(yǎng)基靈敏度檢查、方法確認(rèn)以及陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)。

菌種的來(lái)源、復(fù)蘇、貯藏、傳代、使用等宜符合《中國(guó)藥典》1101、9203的要求。

表1無(wú)菌檢查常用菌種

菌種類型常用菌種

金黃色葡萄球菌

枯草芽孢桿菌

需氧菌

銅綠假單胞菌

大腸埃希菌

厭氧菌生孢梭菌

白色念珠菌

真菌

黑曲霉

注：方法回收率確認(rèn)試驗(yàn)一般采用芽孢桿菌芽孢。

4.1.3稀釋液、沖洗液

無(wú)菌檢查用稀釋液、沖洗液通常為0.1%無(wú)菌蛋白胨水溶液、pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液等，

其制備宜符合《中國(guó)藥典》1101的要求。

4.1.4培養(yǎng)容器

薄膜過(guò)濾器、試管、三角瓶等。

4.1.5儀器

天平、壓力蒸汽滅菌器、潔凈工作臺(tái)、生物安全柜、薄膜過(guò)濾裝置、培養(yǎng)箱等。

4.2試驗(yàn)環(huán)境

供試品處理及接種培養(yǎng)基宜在不低于萬(wàn)級(jí)潔凈實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的潔凈工作臺(tái)或生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，或在不

低于十萬(wàn)級(jí)潔凈實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的隔離器系統(tǒng)中進(jìn)行。涉及生物安全的操作，應(yīng)在生物安全實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的生物安

全柜中進(jìn)行。

4.3方法設(shè)計(jì)及確認(rèn)

4.3.1方法設(shè)計(jì)

4.3.1.1檢驗(yàn)量

通常選擇整件供試品進(jìn)行每種培養(yǎng)基的檢查。若供試品性狀不允許，可選擇代表性部分進(jìn)行試驗(yàn)，

包括：

——按比例代表供試品每種材料的部分，或；

——整件供試品最難滅菌的部分，或；

——與患者接觸的供試品部分。

3

GB/T14233.3—20XX

4.3.1.2供試品處理及接種培養(yǎng)基

視供試品具體性狀，按照如下方法進(jìn)行供試品處理及接種培養(yǎng)基。

直接接種法：將供試品剪碎或拆散處理，浸沒(méi)于培養(yǎng)基中。宜保證培養(yǎng)基與供試品充分接觸；宜規(guī)

定培養(yǎng)容器內(nèi)培養(yǎng)基用量和高度。

培養(yǎng)基洗脫法：用培養(yǎng)基充分沖洗供試品內(nèi)部/表面，對(duì)洗脫培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。宜規(guī)定培養(yǎng)基用量、

沖洗時(shí)間。

培養(yǎng)基灌裝法：將培養(yǎng)基灌裝入供試品內(nèi)部，密封，直接培養(yǎng)。宜規(guī)定培養(yǎng)基用量。

薄膜過(guò)濾法：用沖洗液充分沖洗供試品內(nèi)部/表面，合并沖洗液，制得供試液。將供試液薄膜過(guò)濾，

對(duì)濾膜進(jìn)行培養(yǎng)。宜規(guī)定沖洗液種類、沖洗液用量、沖洗時(shí)間。

考慮到微生物采集效率，在適用情況下，宜優(yōu)先選用直接接種法或培養(yǎng)基灌裝法進(jìn)行供試品處理及

接種培養(yǎng)基。對(duì)于僅聲稱內(nèi)部無(wú)菌的供試品，直接接種法不適用。對(duì)于結(jié)構(gòu)組成復(fù)雜的供試品，可對(duì)其

拆解后分別進(jìn)行供試品處理及接種培養(yǎng)基。對(duì)于內(nèi)裝液體的容器類產(chǎn)品，可僅對(duì)內(nèi)裝液體采用薄膜過(guò)濾

法進(jìn)行試驗(yàn)。

4.3.1.3培養(yǎng)及觀察

宜符合《中國(guó)藥典》1101的要求。

4.3.1.4陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)

對(duì)含抗菌成分的供試品，參照《中國(guó)藥典》1101進(jìn)行陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)，應(yīng)生長(zhǎng)良好。

4.3.1.5陰性對(duì)照試驗(yàn)

參照《中國(guó)藥典》1101進(jìn)行陰性對(duì)照試驗(yàn)，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。

4.3.1.6結(jié)果判斷

宜符合《中國(guó)藥典》1101的要求。

4.3.2方法確認(rèn)

4.3.2.1方法適用性試驗(yàn)

進(jìn)行供試品無(wú)菌檢查時(shí)，宜參照《中國(guó)藥典》1101進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)，以確認(rèn)所采用的方法適合

于該供試品的無(wú)菌檢查。若檢查方法或供試品發(fā)生變化可能影響檢驗(yàn)結(jié)果時(shí)，應(yīng)重新進(jìn)行方法適用性試

驗(yàn)。

4.3.2.2方法回收率確認(rèn)試驗(yàn)

當(dāng)采用培養(yǎng)基洗脫法和薄膜過(guò)濾法時(shí)，除進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)外，宜結(jié)合風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及方法原理，參

照GB/T19973.1進(jìn)行方法回收率確認(rèn)試驗(yàn)來(lái)了解微生物回收率。

4.4供試品測(cè)試

4.4.1檢驗(yàn)數(shù)量

一般宜隨機(jī)抽取不少于2個(gè)最小包裝的供試品。該檢驗(yàn)數(shù)量不包括陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)供試品用量。

4

GB/T14233.3—20XX

4.4.2檢驗(yàn)方法

采用經(jīng)4.3.2確認(rèn)的方法進(jìn)行試驗(yàn)。

4.4.3試驗(yàn)報(bào)告

試驗(yàn)報(bào)告中宜給出下列信息：

a)供試品名稱、批號(hào)、規(guī)格型號(hào)；

b)檢驗(yàn)數(shù)量；

c)檢驗(yàn)量；

d)供試品處理及接種培養(yǎng)基方法；

e)觀察結(jié)果；

f)結(jié)果判斷。

5細(xì)菌內(nèi)毒素檢查

5.1材料與儀器

5.1.1材料

細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品、細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品、鱟試劑、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（宜符合《中國(guó)藥

典》1143的要求）等。

5.1.2反應(yīng)容器

安瓿、試管、微孔板等，宜符合《中國(guó)藥典》1143的要求。

5.1.3儀器

電熱鼓風(fēng)干燥箱、恒溫水浴箱/試管恒溫儀、旋渦混合器、潔凈工作臺(tái)等。

5.2試驗(yàn)環(huán)境

供試液制備宜在潔凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。除非在供試品操作時(shí)會(huì)對(duì)試驗(yàn)人員安全造成風(fēng)險(xiǎn)，通常內(nèi)毒素

檢查不需要在受控環(huán)境中進(jìn)行。試驗(yàn)人員宜使用無(wú)菌技術(shù)操作供試品，避免供試品污染。

5.3方法設(shè)計(jì)及確認(rèn)

5.3.1方法設(shè)計(jì)

5.3.1.1檢驗(yàn)量

通常選擇整件供試品進(jìn)行試驗(yàn)。

若供試品性狀不允許，可結(jié)合供試品臨床使用風(fēng)險(xiǎn)，選擇代表性部分進(jìn)行試驗(yàn)。包括：

——按比例代表供試品每種材料的部分，或；

——整件供試品最容易污染細(xì)菌內(nèi)毒素的部分，或；

——與患者接觸的供試品部分。

5.3.1.2供試液制備

5

GB/T14233.3—20XX

5.3.1.2.1確定浸提介質(zhì)最大體積

根據(jù)規(guī)定的細(xì)菌內(nèi)毒素限值確定浸提介質(zhì)最大體積，浸提介質(zhì)最大體積計(jì)算公式：

···························································(1)

?

式中：V=?

V——浸提介質(zhì)最大體積，mL；

L——供試品細(xì)菌內(nèi)毒素限值，EU/件；

λ——所用鱟試劑靈敏度標(biāo)示值，EU/mL。

目前，與心血管系統(tǒng)或淋巴系統(tǒng)接觸的醫(yī)療器械供試品的推薦細(xì)菌內(nèi)毒素限值為每件不超過(guò)20EU，

與腦脊液接觸的醫(yī)療器械供試品的推薦細(xì)菌內(nèi)毒素限值為每件不超過(guò)2.15EU。

5.3.1.2.2供試品浸提

以細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水為浸提介質(zhì)，選用下列適宜方法進(jìn)行浸提。浸提條件一般選擇（37±1）℃

浸提不少于1h。視供試品具體性狀，按照如下方法進(jìn)行供試液的制備。

——采用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水浸泡供試品內(nèi)腔的方法制備供試液。若存在內(nèi)腔不易浸泡等情況，

宜將供試品剪碎或拆散處理，保證細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水充分接觸供試品內(nèi)部。

——將供試品整體置于無(wú)熱原玻璃器皿內(nèi)，必要時(shí)可將供試品剪碎或拆散處理，加入細(xì)菌內(nèi)毒素

檢查用水振搖數(shù)次。

對(duì)于結(jié)構(gòu)組成復(fù)雜的供試品，可對(duì)其拆解后分別進(jìn)行浸提，浸提后將浸提液收集，即得供試液，進(jìn)

行試驗(yàn)。對(duì)于內(nèi)裝液體的容器類產(chǎn)品，可直接將內(nèi)裝液體作為供試液。部分供試品的供試液制備方法可

參照相應(yīng)的國(guó)家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，如GB18671、YY/T1282等。

5.3.2方法確認(rèn)

5.3.2.1干擾試驗(yàn)

對(duì)未知或可疑的供試品，初次進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查之前應(yīng)先參照《中國(guó)藥典》1143進(jìn)行干擾試驗(yàn)，

以檢驗(yàn)供試品對(duì)所選用的試驗(yàn)方法是否有抑制或增強(qiáng)作用。當(dāng)鱟試劑、供試品來(lái)源、產(chǎn)品配方或生產(chǎn)工

藝等發(fā)生了任何可能影響細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果的改變時(shí)，應(yīng)重新進(jìn)行干擾試驗(yàn)。

5.4供試品測(cè)試

5.4.1檢驗(yàn)數(shù)量

同一批號(hào)一般宜隨機(jī)抽取不少于3個(gè)最小包裝的供試品。

5.4.2檢驗(yàn)方法和結(jié)果判定

應(yīng)采用經(jīng)5.3.2確認(rèn)對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查已經(jīng)排除干擾的供試液按照《中國(guó)藥典》1143法中規(guī)定的凝

膠法或光度測(cè)定法進(jìn)行試驗(yàn)和結(jié)果判定。

5.5試驗(yàn)報(bào)告

試驗(yàn)報(bào)告中宜給出下列信息：

a)供試品名稱、批號(hào)、規(guī)格型號(hào)；

6

GB/T14233.3—20XX

b)檢驗(yàn)數(shù)量；

c)檢驗(yàn)量；

d)供試液制備方法；

e)細(xì)菌內(nèi)毒素限值；

f)結(jié)果判定。

6生物負(fù)載測(cè)定

6.1材料與儀器

6.1.1培養(yǎng)基

生物負(fù)載測(cè)定用培養(yǎng)基通常為胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（TSA）。培養(yǎng)基的配制、滅菌、貯藏以及質(zhì)

量控制等宜符合《中國(guó)藥典》1105、9203的要求。當(dāng)產(chǎn)品中有疑似厭氧菌時(shí)，可增加適宜的培養(yǎng)基。

6.1.2菌種

表2列舉了生物負(fù)載測(cè)定常用菌種。以下菌種主要用于培養(yǎng)基的適用性檢查、方法確認(rèn)。菌種的來(lái)

源、復(fù)蘇、貯藏、傳代、使用等宜符合《中國(guó)藥典》1105、9203的要求。

表2生物負(fù)載測(cè)定常用菌種

菌種類型常用菌種

金黃色葡萄球菌

需氧菌銅綠假單胞菌

枯草芽孢桿菌

白色念珠菌

霉菌和酵母菌

黑曲霉

注：方法回收率確認(rèn)試驗(yàn)一般采用芽孢桿菌芽孢。

6.1.3洗脫液、稀釋液

宜采用GB/T19973.1規(guī)定的洗脫液、稀釋液。

6.1.4儀器

天平、壓力蒸汽滅菌器、生物安全柜、薄膜過(guò)濾裝置、培養(yǎng)箱等。

6.2試驗(yàn)環(huán)境

供試液制備及移至培養(yǎng)基宜在不低于十萬(wàn)級(jí)潔凈實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的生物安全柜或潔凈工作臺(tái)或百級(jí)潔凈

區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。涉及生物安全的操作，應(yīng)在生物安全實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的生物安全柜中進(jìn)行。

6.3方法設(shè)計(jì)及確認(rèn)

6.3.1方法設(shè)計(jì)

6.3.1.1樣品份額（SIP）

7

GB/T14233.3—20XX

宜符合GB/T19973.1的要求。

6.3.1.2微生物采集

視產(chǎn)品具體性狀，按照如下方法進(jìn)行微生物采集，制備供試液。

沖洗法：讓沖洗液沖洗產(chǎn)品內(nèi)部，宜規(guī)定接觸時(shí)間、沖洗液用量及沖洗流量。

振搖法（手工或機(jī)械方式）：將產(chǎn)品整體或拆解后浸入裝有沖洗液的適當(dāng)容器中進(jìn)行振搖，宜規(guī)定

接觸時(shí)間、沖洗液用量、振搖頻率。

超聲法：將產(chǎn)品整體或拆解后浸入裝有沖洗液的適當(dāng)容器中，將容器在超聲波清洗器中進(jìn)行處理，

或?qū)⒊曁筋^浸入到容器內(nèi)沖洗液中進(jìn)行洗脫，宜規(guī)定超聲處理的額定頻率、處理時(shí)間、產(chǎn)品放置位置。

對(duì)于管路類和容器類產(chǎn)品，一般優(yōu)先選擇沖洗法進(jìn)行微生物采集。對(duì)于結(jié)構(gòu)組成復(fù)雜的產(chǎn)品，可對(duì)

其拆解后分別進(jìn)行微生物采集。當(dāng)單件產(chǎn)品生物負(fù)載較低時(shí)，可以合并多件產(chǎn)品進(jìn)行微生物采集。對(duì)于

內(nèi)裝液體的容器類產(chǎn)品，直接將內(nèi)裝液體作為供試液。如果如上方法不適用，宜按照GB/T19973.1選擇

其他適宜方法。

6.3.1.3移至培養(yǎng)基

取供試液，采用標(biāo)稱孔徑不大于0.45μm，直徑一般為50mm的分析濾膜進(jìn)行薄膜過(guò)濾；供試液薄膜

過(guò)濾前，先將少量沖洗液過(guò)濾以潤(rùn)濕濾膜。需要時(shí)，對(duì)過(guò)濾后的濾膜進(jìn)行沖洗。取出濾膜，菌面朝上貼

于TSA平板上。

6.3.1.4微生物培養(yǎng)

將TSA平板在（30~35）℃培養(yǎng)（3～7）天。

6.3.1.5微生物計(jì)數(shù)

菌落蔓延生長(zhǎng)的平板不宜計(jì)數(shù)。每張濾膜上的菌落數(shù)宜不超過(guò)100cfu。當(dāng)菌落數(shù)較多時(shí)，可取適

宜稀釋級(jí)的供試液進(jìn)行測(cè)試。若濾膜上無(wú)菌落生長(zhǎng)，記為＜1cfu。

6.3.2方法確認(rèn)

6.3.2.1方法回收率確認(rèn)試驗(yàn)

按照GB/T19973.1進(jìn)行方法回收率確認(rèn)試驗(yàn)，得到生物負(fù)載校正因子。由于醫(yī)用輸液、輸血、注射

器具一般生物負(fù)載含量較低，通常選擇產(chǎn)品接種法進(jìn)行方法回收率確認(rèn)試驗(yàn)，通過(guò)在產(chǎn)品上接種已知數(shù)

量的選定微生物形成人工生物負(fù)載確定回收率。許多特殊產(chǎn)品或復(fù)雜產(chǎn)品存在不易接種或接種后不易干

燥等情況，可將產(chǎn)品放置于自然環(huán)境或用菌懸液浸泡等方式提高其生物負(fù)載后，采用重復(fù)回收法來(lái)確認(rèn)

回收率。對(duì)于內(nèi)裝液體的容器類、注射器類等產(chǎn)品，直接將內(nèi)裝液體作為供試液，此情況下無(wú)需進(jìn)行方

法回收率確認(rèn)試驗(yàn)。

6.3.2.2方法適用性試驗(yàn)

若產(chǎn)品可能含有在生物負(fù)載測(cè)試條件下有抑菌作用的物質(zhì)，除進(jìn)行方法回收率確認(rèn)試驗(yàn)外，宜參照

《中國(guó)藥典》1105進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)，以證明產(chǎn)品不會(huì)抑制微生物生長(zhǎng)或檢出。

6.4產(chǎn)品測(cè)試

6.4.1檢驗(yàn)數(shù)量

8

GB/T14233.3—20XX

隨機(jī)選取同批次3～10件產(chǎn)品。

6.4.2檢驗(yàn)方法

采用經(jīng)6.3.2確認(rèn)過(guò)的方法進(jìn)行試驗(yàn)。

6.4.3菌數(shù)報(bào)告

以每件產(chǎn)品為單位報(bào)告微生物計(jì)數(shù)結(jié)果。

6.4.4生物負(fù)載估計(jì)值計(jì)算

6.4.4.1按式（2）計(jì)算每件產(chǎn)品的生物負(fù)載估計(jì)值。

·······················································(1)

??

式中：?=?×?

Mi——第i件產(chǎn)品生物負(fù)載估計(jì)值，單位為菌落形成單位（cfu）；

f——生物負(fù)載校正因子；

Yi——第i件產(chǎn)品菌落數(shù)，單位為菌落形成單位（cfu）。

6.4.4.2所有產(chǎn)品生物負(fù)載估計(jì)值的均值即為該批產(chǎn)品生物負(fù)載估計(jì)值。

6.4.5試驗(yàn)報(bào)告

試驗(yàn)報(bào)告中宜給出下列信息：

a)產(chǎn)品名稱、批號(hào)、型號(hào)；

b)檢驗(yàn)數(shù)量；

c)樣品份額；

d)微生物采集方法；

e)生物負(fù)載校正因子；

f)每個(gè)產(chǎn)品的生物負(fù)載估計(jì)值（若適用）；

g)生物負(fù)載估計(jì)值。

7無(wú)菌試驗(yàn)

7.1材料與儀器

7.1.1培養(yǎng)基

無(wú)菌試驗(yàn)用培養(yǎng)基通常為胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（TSB）。培養(yǎng)基的配制、滅菌、貯藏以及質(zhì)量控

制等宜參照《中國(guó)藥典》1101、9203進(jìn)行。其中，培養(yǎng)基的適用性檢查時(shí)培養(yǎng)溫度為（30±2）℃。當(dāng)

產(chǎn)品中有疑似厭氧菌時(shí)，可增加適宜的培養(yǎng)基。

7.1.2菌種

表3列舉了無(wú)菌試驗(yàn)常用菌種。以下菌種主要用于培養(yǎng)基的適用性檢查、方法確認(rèn)。菌種的來(lái)源、

復(fù)蘇、貯藏、傳代、使用等宜符合《中國(guó)藥典》1101、9203的要求。

表3無(wú)菌試驗(yàn)常用菌種

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GB/T14233.3—20XX

菌種類型常用菌種

金黃色葡萄球菌a,b

銅綠假單胞菌a

需氧菌

大腸埃希菌b

枯草芽孢桿菌ab

白色念珠菌ab

真菌

黑曲霉ab

注：若適用，方法回收率確認(rèn)試驗(yàn)一般采用芽孢桿菌芽孢。

a為培養(yǎng)基的適用性檢查用菌種

b為方法適用性試驗(yàn)用菌種

7.1.3稀釋液、沖洗液

采用GB/T19973.1規(guī)定的洗脫液、稀釋液。

7.1.4培養(yǎng)容器

薄膜過(guò)濾器、試管、三角瓶等。

7.1.5儀器

天平、壓力蒸汽滅菌器、薄膜過(guò)濾裝置、潔凈工作臺(tái)、生物安全柜、培養(yǎng)箱等。

7.2試驗(yàn)環(huán)境

同4.2。

7.3方法設(shè)計(jì)及確認(rèn)

7.3.1方法設(shè)計(jì)

7.3.1.1樣品份額（SIP）

宜符合GB/T19973.2的要求。

7.3.1.2產(chǎn)品處理及接種培養(yǎng)基

同4.3.1.2。

7.3.1.3培養(yǎng)及觀察

宜符合GB/T19973.2的要求。培養(yǎng)條件一般采用（30±2）℃，培養(yǎng)14天。

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GB/T14233.3—20XX

7.3.1.4結(jié)果判斷

宜按照GB/T19973.2判斷是否有微生物生長(zhǎng)。

7.3.2方法確認(rèn)

7.3.2.1方法適用性試驗(yàn)

同4.3.2.1。其中，培養(yǎng)溫度為（30±2）℃。

7.3.2.2方法回收率確認(rèn)試驗(yàn)

同4.3.2.2。

7.4產(chǎn)品測(cè)試

7.4.1檢驗(yàn)數(shù)量

宜符合GB18280.2等滅菌過(guò)程確認(rèn)及常規(guī)控制標(biāo)準(zhǔn)要求。

7.4.2檢驗(yàn)方法

采用經(jīng)7.3.2確認(rèn)的方法進(jìn)行試驗(yàn)。

7.4.3試驗(yàn)報(bào)告

試驗(yàn)報(bào)告中宜給出下列信息：

a）產(chǎn)品名稱、批號(hào)、型號(hào)；

b）滅菌日期；

c）滅菌批號(hào)；

d）滅菌劑量（若適用）；

e）檢驗(yàn)數(shù)量；

f）樣品份額；

g）產(chǎn)品處理及接種培養(yǎng)基方法；

h）觀察結(jié)果；

i）結(jié)果判斷。

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GB/T14233.3—20XX

參考文獻(xiàn)

［1］GB18280.3醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌輻射第2部分：劑量測(cè)量指南

［2］GB18671一次性使用靜脈輸液針

［3］GB/T19973.1醫(yī)療器械的滅菌微生物學(xué)方法第1部分：產(chǎn)品上微生物總數(shù)的測(cè)定

［4］GB/T19973.2醫(yī)療器械的滅菌微生物學(xué)方法第2部分：用于滅菌過(guò)程的定義、確認(rèn)和維

護(hù)的無(wú)菌試驗(yàn)

［5］YY/T0618醫(yī)療器械細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)方法常規(guī)監(jiān)控與跳批檢驗(yàn)

［6］YY/T1282一次性使用靜脈留置針

［7］《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版第四部

［8］ISO11737-1Sterilizationofhealthcareproducts—Microbiologicalmethods

—Part1:Determinationofapopulationofmicroorganismsonproducts

［9］ISO11737-2Sterilizationofhealthcareproducts-Microbiologicalmethods-Part

2:Testsofsterilityperformedinthedefinition,validationandmaintenanceofasterilization

process

12

GB/T14233.3—20XX

目次

前言............................................................................II

引言...........................................................................III

1范圍.................................................................................1

2規(guī)范性引用文件.......................................................................1

3術(shù)語(yǔ)和定義...........................................................................1

4無(wú)菌檢查.............................................................................2

5細(xì)菌內(nèi)毒素檢查.......................................................................5

6生物負(fù)載測(cè)定.........................................................................7

7無(wú)菌試驗(yàn).............................................................................9

參考文獻(xiàn)........................................................................12

I

GB/T14233.3—20XX

醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法

第3部分：微生物學(xué)試驗(yàn)方法

1范圍

本文件規(guī)定了醫(yī)用輸液、輸血、注射器具無(wú)菌檢查、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查以及生物負(fù)載測(cè)定和無(wú)菌試驗(yàn)

方法。

本文件適用于醫(yī)用輸液、輸血、注射器具，其他類型醫(yī)療器械產(chǎn)品可參照本文件進(jìn)行。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB18280.2醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌輻射第2部分：建立滅菌劑量

GB/T19973.1醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌微生物學(xué)方法第1部分：產(chǎn)品上微生物總數(shù)的確定

GB/T19973.2醫(yī)療器械的滅菌微生物學(xué)方法第2部分：用于滅菌過(guò)程的定義、確認(rèn)和維護(hù)的無(wú)菌

試驗(yàn)

《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版第四部

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

3.1

樣品份額sampleitemportion，SIP

用于測(cè)試醫(yī)療保健產(chǎn)品的規(guī)定部分。

[來(lái)源：ISO11139:2018,3.244]

3.2

無(wú)菌檢查testforsterility

在經(jīng)無(wú)菌加工或滅菌工藝處理的產(chǎn)品上所進(jìn)行的藥典規(guī)定的技術(shù)操作。

[來(lái)源：ISO11139:2018，3.298]

3.3

無(wú)菌試驗(yàn)testofsterility

開(kāi)發(fā)、確認(rèn)或再鑒定過(guò)程中要求的一項(xiàng)技術(shù)操作，用于確定產(chǎn)品或其份額上是否有存活微生物存在。

3.4

直接接種法directinoculationmethod

無(wú)菌檢查/無(wú)菌試驗(yàn)方法之一，系將產(chǎn)品直接浸沒(méi)于液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。

3.5

薄膜過(guò)濾法membranefiltrationmethod

1

GB/T14233.3—20XX

無(wú)菌檢查/無(wú)菌試驗(yàn)方法之一，系將液體產(chǎn)品或非液體產(chǎn)品經(jīng)過(guò)沖洗液洗脫后的洗脫液進(jìn)行薄膜過(guò)

濾，對(duì)濾膜進(jìn)行培養(yǎng)。

3.6

培養(yǎng)基灌裝法mediumfillingmethod

無(wú)菌檢查/無(wú)菌試驗(yàn)方法之一，系將液體培養(yǎng)基灌裝入產(chǎn)品內(nèi)部腔體或者通路進(jìn)行培養(yǎng)。

3.7

培養(yǎng)基洗脫法mediumelutionmethod

無(wú)菌檢查/無(wú)菌試驗(yàn)方法之一，系用液體培養(yǎng)基對(duì)產(chǎn)品上可能存在的微生物進(jìn)行洗脫，收集洗脫培

養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

3.8

生物負(fù)載測(cè)定testofbioburden

測(cè)定產(chǎn)品存活微生物總數(shù)的試驗(yàn)方法。

3.9

沖洗法Flushing

生物負(fù)載測(cè)定方法之一，系讓沖洗液通過(guò)產(chǎn)品內(nèi)腔制備供試液。

3.10

振搖法Shaking

生物負(fù)載測(cè)定方法之一，系將產(chǎn)品浸入裝有沖洗液的適當(dāng)容器中進(jìn)行振搖制備供試液。

3.11

超聲法：Ultrasonication

生物負(fù)載測(cè)定方法之一，系將產(chǎn)品浸入裝有沖洗液的適當(dāng)容器中進(jìn)行超聲處理制備供試液。

3.12

回收率recoveryefficiency

衡量某一特定技術(shù)從產(chǎn)品上轉(zhuǎn)移、采集和/或培養(yǎng)微生物的能力。

[來(lái)源：ISO11139:2018,3.228]

3.13

生物負(fù)載校正因子bioburdencorrectionfactor

用以存活微生物計(jì)數(shù)時(shí)補(bǔ)償無(wú)法完全從產(chǎn)品和/或微生物培養(yǎng)中采集的數(shù)值。

[來(lái)源：ISO11139:2018,3.24]

3.14

生物負(fù)載估計(jì)值bioburdenestimate

通過(guò)將生物負(fù)載校正因子應(yīng)用于生物負(fù)載計(jì)數(shù)而確定的值。

[來(lái)源：ISO11139:2018,3.25]

4無(wú)菌檢查

4.1材料與儀器

4.1.1培養(yǎng)基

無(wú)菌檢查用培養(yǎng)基通常為硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（FTM）和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(TSB)。培養(yǎng)基的

配制、滅菌、貯藏以及質(zhì)量控制等宜符合《中國(guó)藥典》1101、9203的要求。

2

GB/T14233.3—20XX

4.1.2菌種

表1列舉了無(wú)菌檢查常用菌種。以下菌種主要用于培養(yǎng)基靈敏度檢查、方法確認(rèn)以及陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)。

菌種的來(lái)源、復(fù)蘇、貯藏、傳代、使用等宜符合《中國(guó)藥典》1101、9203的要求。

表1無(wú)菌檢查常用菌種

菌種類型常用菌種

金黃色葡萄球菌

枯草芽孢桿菌

需氧菌

銅綠假單胞菌

大腸埃希菌

厭氧菌生孢梭菌

白色念珠菌

真菌

黑曲霉

注：方法回收率確認(rèn)試驗(yàn)一般采用芽孢桿菌芽孢。

4.1.3稀釋液、沖洗液

無(wú)菌檢查用稀釋液、沖洗液通常為0.1%無(wú)菌蛋白胨水溶液、pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液等，

其制備宜符合《中國(guó)藥典》1101的要求。

4.1.4培養(yǎng)容器

薄膜過(guò)濾器、試管、三角瓶等。

4.1.5儀器

天平、壓力蒸汽滅菌器、潔凈工作臺(tái)、生物安全柜、薄膜過(guò)濾裝置、培養(yǎng)箱等。

4.2試驗(yàn)環(huán)境