瑞沃德-光纖記錄實驗手冊 -嗅覺研究應用白皮書

為生命品質的提升貢獻智慧和力量,成為世界級領先企業(yè)。 4 4 6 82.嗅覺行為訓練原理u 2.1.2延遲非匹配樣本任務DNMS(DelayedNonMatchtosampletask) 2.1.3延遲配對偶聯任務DPA(DelayedpairedAssociationtask) .使用光纖記錄技術應用至嗅覺研究isau實驗設備和材料 4.2.2器具消毒、儀器檢查 400-966-9516l深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司 4,3.5埋植陶瓷插針及固定嗅覺頭桿 aa光纖記錄與嗅覺行為實驗 4,4.2光纖記錄結合嗅覺行為實驗 5.5耗材參數搭配 2.嗅覺研究數據34 深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516l深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516l 1.3.1超100小時穩(wěn)定采集 1.4.1滿足皮瓦級微弱信號檢測需求(軸突i膠質細胞) 2.嗅覺行為訓練系統(tǒng)主要功能特點44 深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516l深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516l 3.1外側內嗅皮層直接編碼獎賞關聯性學習 記憶下丘腦環(huán)路調控海馬神經發(fā)生促進記憶提取對抗焦慮樣行為 s.嗅覺行為訓練系統(tǒng)應用案例so5.1延遲期間的內側前額葉活動有助于學習工作記憶任務 1.3光纖及陶瓷插針的的NA值是什么意思?代表什么意義? 1.5融合光纖是什么?和一分二光纖的區(qū)別? 2.嗅覺訓練系統(tǒng)常見問題及解析58 2.2嗅覺記憶認知行為訓練實驗會用到多少個 深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516l深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516l 2.4嗅覺行為訓練能同步進行電生理記錄實驗嗎? 2.5嗅覺行為訓練過程中產生的實驗氣味擴散到實驗室是否構成危害? 400-966-9516l深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司第一章初學者導航本章將介紹光纖記錄發(fā)展歷史和嗅覺研究的基本知識,如果你是剛開始學習光纖記錄技術并應用到嗅覺研究上,以下的概要內容將對你非常有幫助。1.光纖記錄發(fā)展歷史光學來測量熒光分子在大腦中發(fā)出的光信號。那么從這個原理中,我們能夠明白,實現這個實驗需要能夠在大腦表達熒光的探針工具,同時需要一套可以傳輸熒光,檢測熒光的設備。目前最常用的熒光工具分為鈣信號探針,神經遞質信號探針,電壓敏感探針等。因為實驗應用的動物模型種類很多,同時我們還需要研究特定腦區(qū)甚至特定種類細胞,所以基因編輯技術已經廣泛應用在探針的開發(fā)上。2014年,斯坦福大學的karlDeisseroth教授實驗室在發(fā)表的文章中首次命名了末梢鈣活動的同時追蹤,結合光遺傳技術,闡明了腹側背蓋區(qū)-伏隔核的神經投射在編碼和預測社交行為中的作用。基于遺傳編碼鈣指示劑的發(fā)展,實驗人員可以實現細胞類型特異性的標記,監(jiān)測小鼠在完成復雜行為任務過程中一群特定類型細胞的平均活動。這種技術的出現對于編碼社交行為、學習記憶和恐懼等行為以及病理回路水平神經信號的探測具有里程碑式的意義。近年來,隨著可遺傳編碼熒光指示劑的不斷更新迭代和神經遞質探針的開發(fā),應用光纖記錄技術來檢測清醒自由活動動物神經系統(tǒng)的鈣信號及神經遞質,以反應神經元活動和神經遞質的調節(jié)過程,已成功發(fā)表近千篇文章,并成為發(fā)育、神經可塑性和神經退行性疾病等研究的重要技術手段。深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516lrwd@rwdls.comI深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司2.嗅覺研究基本知識大腦持續(xù)從周圍環(huán)境接收大量的感官刺激,例如氣味、光線、聲音、碰觸等。在生命體正常狀態(tài)下,大腦靈活地調整各種信號通路,高效處理感官刺激信息。嗅覺是基于前期的解剖和功能研究,已知嗅覺傳導包括3個部分:①嗅裂的嗅覺神經元接受嗅刺激,經嗅神經到嗅球;②嗅球換元經嗅束到達初級嗅覺皮層,包括前嗅核、梨狀皮層、杏仁核及內嗅區(qū)等;③傳遞至次級嗅覺皮層,包括海馬體、額眶皮質、島葉及等。值得一提的是,嗅覺、味覺和三叉神經功能雖是3種截然不同的方式,但在日常生活中,他們往往是伴隨激活的。嗅覺作為關鍵的感覺之一,就感知能力來說極為復雜,人類可以辨識約一萬種以上的不同氣味,許多生物雖然沒有很好的視力,卻有相當敏銳的嗅覺,嗅覺的重要性逐漸被人們認識。嗅覺感受器的類型是所有感覺系統(tǒng)中最多的,小鼠有著約1000種編碼嗅覺感受器的基因,占了全基因組的3%。而人類功能性的嗅覺感受器編碼基因大約為400個,還有約600個假基因。氣味多是一系列化合物的復雜成分構成,所以當我們感受一種氣味時,其實是不同的嗅覺感受器產生不同強度的響應,綜合感受處理嗅覺信息。因此,嗅覺信息整合處理的嗅覺環(huán)路機制本身,就是非常有價值的科學問題。另外,大量臨床研究發(fā)現,許多腦部病變的發(fā)生都伴隨著嗅覺障礙,例如頭部外傷、丘腦或前額葉皮質病變、顱內壓增高等病變,另外在阿爾茨海默癥、路易體癡呆、帕金森病、亨廷頓舞蹈病、脊髓小腦性共濟失調等神經系統(tǒng)疾病中也障礙。在動物實驗研究中,嗅覺作為驅動認知行為的重要感覺模式,在嗅覺辨別、學習記憶、決策、沖動等認知行為中發(fā)揮重要作用,基于嗅覺刺激的行為學實驗在相關研究中應用廣泛,推動了認知及神經系統(tǒng)疾病機制的研究進展。深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516lrwd@rwdls.comI深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司嗅覺系統(tǒng)示意圖參考文獻:2.LUO,L.(2020).principlesofNeurobiology(2nded.).Garlandscience,3.DUW,chenF.[Applicationresearchanddezazhi.2022Jun;36(6):482-486.chinese.深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516lrwd@rwdls.comI深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司第二章工作原理及數據采集分析本章節(jié)將解釋光纖記錄及嗅覺行為實驗的工作原理、優(yōu)點,并展示相關的實驗操作步驟、實驗注意事項及數據分析等內容。3.光纖記錄的優(yōu)點4.使用光纖記錄技術應用至嗅覺研究5.光纖記錄實驗注意事項7.嗅覺研究數據8.光纖記錄數據分析1.光纖記錄工作原理1.1基本原理人類大腦有大約900億個神經元,這些神經元通過突觸相互連接,形成復雜的神經網絡,從而產生各種復雜的功能。大腦可以合成和釋放數百種神經遞質,神經信號通過突觸釋放的神經遞質在神經元之間傳遞。當神經興奮傳遞到突觸末端時,會刺激突觸上的鈣通道打開,促進鈣離子的流入,細胞內鈣離子的濃度瞬時上升,驅動突觸小泡將神經遞質釋放到突觸間隙,并與突觸后膜上的受體結合,將神經遞質信號傳遞給下一個神經元,從而逐步傳遞信息。深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516lrwd@rwdls.comI深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司以鈣離子的檢測為例,在神經系統(tǒng)中,靜息狀態(tài)下神經元的細胞內鈣濃度約為50-100nM,但當神經元興奮時,細胞內鈣離子濃度會增加10-100倍,因此我們可以通過注射鈣離子基因編碼指示劑(calciumindicator,如GcaMPSRcaMPS等)來標記鈣離子。常見的基因編碼鈣離子指示劑來自于綠色熒光蛋白(GFP等)及其變異體(例如循環(huán)排列GFP、YFP、CFP、RFP等)的熒光蛋白質,可與鈣調蛋白(caM)和肌球蛋白輕鏈激酶M13域結合。當神經活動增強時,鈣通道打開,大量構重排,從而增強綠色熒光信號。光纖記錄系統(tǒng)的技術原理是借助鈣濃度的變化與神經元活動之間的嚴格對應關系,使用特殊的熒光指示劑或熒光探針,將神經元中鈣離子的濃度通過熒光強度表達,并被光纖記錄系統(tǒng)捕獲,從而達到檢測神經元活動的目因此,我們可以通過檢測鈣信號的變化來表征神經元的活動,進而研究神經元活動與動物行為之間的相關性,探索復雜行為背后的調節(jié)機制。深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516lrwd@rwdls.comI深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司光纖記錄檢測神經遞質信號的原理與上述相同,把對結構變化敏感的熒光蛋白 變,并增強熒光信號,結合現有的成像技術,實時監(jiān)測神經遞質濃度的動態(tài)變化。1.2光纖記錄常用的熒光指示劑通過病毒注射、轉染等技術手段,可以將上述可遺傳編碼的指示劑或探針表達在細胞或小鼠腦部?，F在使用較廣泛的基因編碼鈣離子指示劑有:GcaMP、pericams、cameleons、TN-XXL和Twitch等,其中GcaMP6GcaMP7由于有著超強的敏感度,現在被廣泛應用于活體鈣成像研究。以下是常見基因編碼鈣離子指深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516lrwd@rwdls.comI深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司GcaMP6GcaMP6SGcaMP6mGcaMP6fneuritisornervefibHighcontrast,suitablefobeusedwithGcaMPjRcaMplbAxon-GcaMPAxon-GcaMPMarktheaxon(膽囊收縮素),VIP(血管活性常肽),ecB(內源性大麻素)等。因為鈣信號以及神經遞質的信號變化周期相對較慢(ms),如果我們想要記錄膜電位的快速信號,就需要使用電壓敏感探針(GEVI)等相關工具。膜電位的變化是突觸電位和動作電位的直接標志。在某些情況下,深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516lrwd@rwdls.comI深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司在了解這些熒光指示劑之后,我們需要清楚該如何將指示劑表達到動物體內。常見的辦法有病毒轉染,動物雜交等。以腦立體定位注射為例,整體實驗流程包括:①選擇合適的病毒工具(病毒包含著指示劑的編碼信息)注射到特定位置;②在注射位點埋植光纖,用于傳送激發(fā)光和收集發(fā)射光,并固定嗅覺頭桿,用于將小鼠固定于嗅覺行為訓練系統(tǒng)的固定器上;③等待2-3周時間,病毒表達后即可結合嗅覺訓練系統(tǒng)1.3熒光信號的激發(fā)當動物準備完成,需要選擇一款合適的系統(tǒng)用于收集分析熒光信號。光纖記錄系統(tǒng)基本的組成包括激發(fā)光源,濾光片,二色像鏡,探測器,以及能夠傳輸激發(fā)光和發(fā)射光的光纖耗材等。深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516lrwd@rwdls.comI深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司選擇不同種類的配件導致了系統(tǒng)的核心功能有所差示劑的激發(fā)波長范圍進行選擇,Gcamp的激發(fā)波長集中在450nm-480nm之間,而Rcamp激發(fā)波長集中在550nm-600nm之間。同時需要選擇合適的激發(fā)功率,例如GcaMP的激發(fā)功率在20W~50uW之間較為合適,如果功率過高,則容易導550nm之間,而Rcamp發(fā)射波長集中在570nm-630nm之間。不同熒光蛋白激發(fā)及發(fā)射波長范圍PMT光電倍增管靈敏度高,適合用于極弱信號的檢測,但是僅可用于單通道實驗;CCD可用于多通道記錄,但是成像速度較慢;CMOS具有更好的性價比,可用于多通深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516lrwd@rwdls.comI深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司道記錄,同時圖像處理速度很快。多通道實驗記錄可以使用多分支光纖,通過一個系統(tǒng)就可以記錄多個腦區(qū)或者多只動物的信號變化,極大拓展研究場景及提高實驗效l光纖耗材等需要選擇帶有黑色保護層,且自發(fā)熒光較低的材質,可以更好的避免環(huán)境光以及自發(fā)熒光對于信號的干擾。光纖記錄實驗的耗材選擇可以參考以下文對于不同顏色的熒光指示劑,探測器通過軟件控制激發(fā)光以及探測器的特定開放時間,或者選擇增加探測器,將兩種信號進行獨立采集,以區(qū)分兩種不同的信號。從上圖中可看出,410nmLED470nmLED560nmLED激發(fā)光源在特定幀率下(可通過軟件設置)交替輸出。而兩個探測器,cameral只在410&470nmLED輸出的時候進行同步采集信號(對應收集綠色熒光信號),camera2只在560nmLED輸出的時候進行同步采集信號(對應收集紅色熒光信號)。在瑞沃德光纖記錄系統(tǒng)中,采用了雙檢測器、分時序采集的設計。雖然較多的文擾。但是單探測器使用的是雙波段濾光片(可對綠色和紅色同時通過),有可能會有深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司非常少的串擾影響。這是因為470nmLED存在一定可能性激發(fā)紅色熒光探針,從而讓紅色熒光增強,造成串擾。鈣離子指示劑在405-420nm波長光激發(fā)時,其熒光強度隨細胞內ca2+濃度變化維持一個恒定的狀態(tài)。因此,可以從一定程度上認為410nm激發(fā)所對應的熒光信中,可以針對性將背景信號去除,從而獲取真實信號。2.嗅覺行為訓練原理嗅覺行為訓練原理是基于嗅覺刺激關聯飲水獎勵反饋,建立認知學習范式,通過獎勵強化小鼠學習識別不同氣味,快速幫助用戶開展基于嗅覺刺激的認知評估實驗?？杉嫒莨膺z傳、光纖記錄、電生理等系統(tǒng)拓展實驗場景,推動課題進展。也可專用于穩(wěn)定傳遞實驗氣味,結合下游場景進行實驗。2.1經典實驗范式400-966-9516l深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司為生命品質的提升貢獻智慧和力量,成為世界級領先企業(yè)。嘴獲得飲水獎勵;聞到氣味B時,舔珉水嘴不會有飲水獎勵,且要求小鼠拒絕舔珉水2.1.2延遲非匹配樣本任務DNMS在該任務中,訓練小鼠根據氣味的不匹配關系做出正確響應以獲得飲水獎勵。給小鼠先后聞兩個氣味,若兩個氣味不同,則舔珉水嘴獲得飲水獎勵;反之,若為同種氣味,舔珉水嘴不會有飲水獎勵,且要求小鼠拒絕舔珉水嘴。2.1.3延遲配對偶聯任務DPA(DelayedpairedAssoc在該任務中,訓練小鼠根據氣味的配對偶聯關系做出正確響應以獲得飲水獎勵。給小鼠先后聞兩種不同的氣味,固定氣味組合是有獎勵試驗組(例如氣味A&D,氣味B&C),小鼠舔珉水嘴獲得飲水獎勵;另外氣味組合是無獎勵試驗組(例如氣味A&C,氣味B&D),小鼠舔珉水嘴不會有飲水獎勵,且要求小鼠拒絕舔珉水嘴。2.2常用實驗氣味酯類甲酸丙酯甲酸丁酯乙酸乙酯乙酸丙酯乙酸異戊酯異戊烯醇1-丁醇1-戊醇叔戊醇正己醇酮類2-己酮環(huán)己酮2-庚酮苯類醛類苯乙醛其他檸檬醛丁香油醋酸選擇一款合適的系統(tǒng)將有助于你的實驗。如果你想深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966s-9516lrwd@IW為生命品質的提升貢獻智慧和力量,成為世界級領先企業(yè)。練系統(tǒng)有更多的了解,歡迎聯系我們!3.光纖記錄的優(yōu)點研究清醒和自由活動動物的神經系統(tǒng)是當代神經科學研究的一個關鍵檢測與神經元活動相關的鈣信號,我們能夠更好地理解復雜的神經回路。近年來,包括雙光子顯微鏡、單光子顯微鏡和光纖記錄在內的技術發(fā)展使我們能夠實時檢測動物過去,大多數體內鈣成像都是在雙光子顯微鏡下進行的。雙光子顯微鏡是一種熒光成像技術,其中兩束相干激光通過顯微鏡的目鏡聚焦到由點擴散函數定義的點,類似于選擇性激發(fā)類熒光分子的共焦顯微鏡。在雙光子顯微鏡中,激發(fā)光的波長接近700-1000nm,接近紅外光譜。在體雙光子成像的第一個優(yōu)點是更長波長的光在組織中散射更少,穿透更深;第二個是良好的分辨率,不僅可以顯示單個神經元,還可以雙光子顯微鏡中的激光掃描技術也用于在體內成像過程中檢測神經元動力學,但區(qū)分信號和噪聲的激發(fā)功率通常需要足夠高,從而導致一定程度的漂白,雙光子顯微鏡在成像深度方面受到許多因素深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司(GRIN)晶狀體,可以看到更深的大腦區(qū)域,但由于物鏡的大小,大多數皮層或其他大腦結構通常需要完全移除,為晶狀體植入騰出空間,這會對動物造成較大的手術損傷。在大多數情況下,選擇大腦表層作為研究區(qū)域最合適,因為損傷最小,分辨率更高。雙光子顯微鏡體內鈣成像的另一個缺點是由于物鏡的大小,動物必須被頭部固定。目前實驗者通過使用圓柱形或球形跑步機使得動物能夠稍微自由移動,或者通過一個虛擬現實場景進一步實現動物自由移動。然而,這種虛擬現實加頭部固定成像的方法,已經遭到許多科學家的質疑。一部分研究者認為,頭部固定的動物在實驗期間一直處在物理約束和情緒壓力下,因此無法證明神經元對外界的響應在虛擬現實和自由探索下是等價的。更重要的是,許多社會行為,比如母嬰分離、交配和攻擊防御行為,都不能用頭部固定的實驗來研究?；谖⑿惋@微鏡的單光子活體鈣成像,研究人員可以記錄自由活動動物的鈣信號。該微型顯微鏡通過與梯度折射率(GRIN)的透鏡連接,可完成長時間內群體神經元活動的觀察。這種裝置體積小,可以固定在動物頭上,不會嚴重阻礙其運動。這項技術的發(fā)展使得微型顯微鏡成為研究發(fā)育、神經可塑性和神經退化性疾病的一種非常有用的工具。盡管使用微型顯微鏡在自由活動的動物中進行鈣成像有很強的實用性,但這種方法仍存在一定局限性。與雙光子相比,單光子成像背景熒光更高,并且更容易發(fā)生光散射。并且在某些行為學實驗在應用受限,比如水迷宮和強迫游泳實驗。此外,由于GRIN透鏡植入物的直徑范圍為0.5mm~1mm,不可避免地會造成一定范圍的組織損傷,這可能會影響研究的關鍵回路。光纖記錄系統(tǒng)原理上主要分為熒光激發(fā)系統(tǒng)和收集系統(tǒng),即向實驗動物大腦特定腦區(qū)注射一定量的鈣染料或遺傳編碼的鈣指示劑,并在相同位置植入一根直徑200-深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516l深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516l光經PMT或CMOS傳感器轉換為電信號,隨后經數據采集卡被傳送至記錄系統(tǒng),以達到實時觀察所研究腦區(qū)群體神經細胞鈣熒光活動的目的。并且由于光纖探頭的體積小和質量輕,研究人員可以同時對多個大腦區(qū)域進行記錄。參考文獻:advancesininvivocalciummeasurementstrategies[J].AcschemNeurosci.4.使用光纖記錄技術應用至嗅覺研究4.1實驗設備和材料異氟烷麻醉系統(tǒng)、立體定位儀、數碼顯微鏡或雙目體視鏡、玻璃微電拉制儀、微量注射泵、剃毛工具、手術刀、眼科攝、眼科剪、棉簽、碘伏、AA毒、陶瓷插針、陶瓷插針夾持器、小鼠頭部固定桿、顱鉆、鉆頭(0.8mm)、顱釘 (M1.0XL2.0mm)、螺絲刀(45*1mm)、生理鹽水、牙托粉水(義齒基托聚合物,自凝型)、紅霉素眼膏、抗生素等。4.2術前準備4.2.1確定目標腦區(qū)坐標確定目標腦區(qū)位點通常有兩種策略:①通過使用立體定位圖譜,尋找目標腦區(qū)具體位置,讀取目標腦區(qū)深度、矢狀、冠狀坐標,最終確定目標腦區(qū)的三維坐標。○通過閱讀參考文獻,獲取方法中涉及目標腦區(qū)的坐標。400-966-9516l深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司文獻中坐標常用標注:AP:anteroposterior,前購前后;ML:mediolateral,中縫左右;DV:dorsoventral,顱骨(硬腦膜)平面向下。注意事項:文獻中坐標選取的z軸參考點包括:面的Z軸讀值等。由于病毒表達時間較久,建議先用普通染料做預實驗,確定目標腦4.2.2器具消毒、儀器檢查實驗前使用酒精擦拭手術器械,檢查各種實驗耗材是否準備完整;檢查立體定位4.2.3實驗動物準備選取實驗動物檢查其健康狀況,并進行體重稱量。4.3動物手術4.3.1動物麻醉及固定400-966-9516l5)用適配器將小鼠固定在腦立體定位儀上,并將異氟烷濃度調整為1.5-2%。小鼠固定在腦立體定位儀上)麻醉深度可通過對腳趾捏合無反應(監(jiān)測腳趾捏合反應)來確認,手術期間每20min一次。400-966-9516l深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司8)在頭皮表面下注入0.1ml利多卡因,以提供局部鎮(zhèn)痛作用。9)涂抹紅霉素眼膏,避光以保護眼睛。4.3.2暴露顱骨1)將小鼠麻醉及固定在適配器上后,從前到后(眼睛之間到顱骨后部)做切2)用蘸有生理鹽水的棉簽擦拭切口,將頭骨表面清理干凈,確保頭骨干凈(沒有血液,毛皮或組織)并且干燥(使用干燥的棉簽吸生理鹽水或血液)。小鼠暴露顱骨4)將連接好玻璃電極的微量注射泵夾持到定位儀深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516l深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516l量Bregma點左右兩側旁開2.3mm處顱骨的高度差,小于0.03mm則認為左右顱骨水平,大于0.03mm則需要調節(jié)耳桿的高度來調整水平;前后方向測量Bregma點和Lambda點的高度差,也需小于0.03mm,若大于0.03mm則上7)在目標標記點處用顱鉆進行開顱并挑開硬腦膜。此外還需鉆兩個預留孔,用于埋植顱釘。如果鉆孔過程發(fā)生出血,使用棉簽清潔血液,再使用一塊可吸收的顱骨鉆孔4.3.3病毒注射深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司1)從冰箱中取出病毒。4)將玻璃電極針移動至目標位點上方,然后下針至目標位點后(下針過程保持5)注射完成后靜置10min10min后將微量注射器抬起(拔針過程保持勻速4.3.4埋植顱釘顱釘(小螺絲)植入深度約0.5mm左右,避免過深壓迫大腦,過淺固定不牢小,導致光纖不好埋植;也防止太靠近目標腦區(qū),對目標腦區(qū)損傷過大,影響實驗結果。顱骨鉆孔完成后,還需清理顱骨表面的顱骨碎屑,并用生理鹽水清洗并吸干水分或血液,保證顱骨表面干凈干燥。深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司4.3.5埋植陶瓷插針及固定嗅覺頭桿(插針應位于鉆頭產生的窗口上方)。纖維的底部周圍,避免涂到夾持器上。成牙科水泥小心滴涂于頭桿和頭骨連接處以固定頭桿。深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516lrwd@rwdls.comI深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司4.4光纖記錄與嗅覺行為實驗光纖記錄系統(tǒng)與嗅覺訓練系統(tǒng)聯用場景一般分為:①在小鼠接收氣味刺激時記錄神經元鈣信號變化,則可在2-3周鈣熒光病毒表達,同步開啟嗅覺實驗及光纖記錄實病毒表達后,先進行嗅覺記憶認知行為前期訓練,再結合光纖記錄系統(tǒng)同步進行氣味4.4.1嗅覺行為訓練①小鼠適應頭桿及訓練環(huán)境:將小鼠固定于軀體固定器,放入嗅覺行為訓練箱中適應,訓練前3天,每天適應5分鐘。2小鼠飲水剝奪:訓練前24小時,取走小鼠飼養(yǎng)籠水瓶以進行飲水剝奪。①舔水訓練:訓練小鼠建立舔珉水嘴獲得飲水獎勵的初步認知,以小鼠能夠主動連續(xù)舔珉水嘴獲得飲水獎勵為評估標準,通常訓練1-2天即可。實驗參數見下深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516lrwd@rwdls.comI深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司2氣味相關舔水訓練:小鼠建立氣味為線索時舔珉水嘴獲得飲水獎勵的進一步認知,以小鼠在氣味釋放后主動舔珉水嘴獲得飲水獎勵的行為正確率達到70%為評估指標,通常訓練2-3天即可。實驗參數見下圖。氣味相關舔水訓練實驗參數1氣味相關舔水訓練實驗參數2深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司味B時,舔珉水嘴不會有飲水獎勵,且要求小鼠拒絕舔珉水嘴。以小鼠在GO氣味釋為的綜合正確表現比率達到85%為評估指標,通常訓練3-5天即可。實驗參數見下圖。GO-Nogo范式實驗參數1深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司等待時長-ns兩次舔水間隔≤ns才視為連續(xù)sccm(standardcubiccentimeterperminutes)氣流量單位:標況下每分鐘1立方厘米(1ml/min)稀釋氣流-sccm空氣氣路的氣流量Hit總數正確舔水次數odor實驗氣味動作延遲期偽隨機次數每4次Trial執(zhí)行偽隨機規(guī)則分配Trial出現順序及次數主動獎勵的Trial次數-n前n次Trial系統(tǒng)自動給水誘導小鼠舔水4.4.2光纖記錄結合嗅覺行為實驗使用光纖記錄系統(tǒng)采集動物在嗅覺行為實驗中大腦的鈣熒光信號,通過分析軟件處理鈣熒光信號數據,并結合嗅覺行為實驗對動物的行為進行分析。深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司1)用BNC線將光纖記錄系統(tǒng)和嗅覺行為訓練系統(tǒng)連接起來,以在小鼠接收氣味刺激和獲得飲水獎勵時輸出TTL信號給光纖記錄系統(tǒng)打標。嗅覺訓練系統(tǒng)設置TTL信號端口2)將小鼠固定于嗅覺行為箱中,利用套管將光纖與小鼠頭部陶瓷插針進行連3)開啟嗅覺行為訓練系統(tǒng)實驗程序及光纖記錄系統(tǒng)同步采集熒光信號。5.光纖記錄實驗注意事項根據光纖記錄的實驗程序,當信號記錄不好時,可以考慮以下因素。5.1儀器連接及參數設置深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516l深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516l助于采集到熒光信號。調節(jié)幀率及曝光時長注意事項:深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司①若未記錄到信號,可適當調高光源功率;②動物腦區(qū)較大,病毒注射量可適量增加;③病毒注射后也可先不埋植插針,待2-3周后病毒表達,陶瓷插針連接光纖一起植入,邊植入插針邊檢測鈣信號。5.2病毒病毒應即拿即用,避免反復凍融?；钚缘?表達效率低,轉染效果差,甚至未表達。建議選擇轉染效率更高的病毒工具。神經元在相應實驗條件下,沒有被激活,檢測不到信號。5.3病毒注射1)手術前定位:在病毒注射前,我們可以先注射臺盼藍進行預實驗進行練習,通過預實驗對腦區(qū)精準定位,提高后面實驗的成功率。腦區(qū)坐標定位參考:調平時注意左右高度差小于0.03mmo深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司2)病毒注射:選擇較細直徑的玻璃電極可以減少注射損傷,對于淺層腦區(qū)注射實驗,還可以減少病毒泄露。建議病毒注射后留針10mino3)病毒注射檢測:切腦片看熒光表達。熒光染色實驗拍不出帶有熒光的細胞,可能原因是顯微鏡聚焦未在神經細胞這一層上(如上圖出現模糊團狀,可能會是細胞)、注射的腦區(qū)與病毒反應的特異深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司注意事項:如果沒有明顯的陽性信號,可能原因有手術中腦區(qū)定位有偏差導致病毒注射位置不對(目標腦區(qū)很小的話會常存在這個問題)、病毒注射后順著腦室流走、病毒注射5.4陶瓷插針埋植位置1)病毒注射與陶瓷插針植入可以在同一個手術進行,避免二次手術對小鼠造成3)定期查看定位儀操作臂與夾持器的固定情況,防止角度偏差。4)病毒注射表達區(qū)域與陶瓷插針的植入位置需要保持接近,二者位置超過100深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司5.5耗材參數搭配1)光纖記錄實驗對環(huán)境光比較敏感,建議實驗在光線相對穩(wěn)定、昏暗的環(huán)境下進行。光纖記錄更適合選擇黑色陶瓷插針與黑色陶瓷套管,可避免環(huán)境光對熒光信號的影響。2)較大數值孔徑的耗材有助于熒光信號的傳輸,所有的配件耗材保持相同的芯3)使用高強度的激光器對光纖進行漂白,使得光纖等耗材的自發(fā)熒光降低,減4)檢查光纖是否有被小鼠咬破,造成損壞等。5.6儀器問題1)未連接光纖情況下,用燈光如手機手電筒等照射儀器出光口,在軟件上觀察物鏡是否有大量灰塵等臟污,如有,可能平時做完實驗沒給設備接口帶防塵帽,光纖接口鏡頭里的灰太多,信號檢測能力大幅下降。2)以上均沒問題,考慮設備故障,用熒光片試一試,看看信號有沒有變化。深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516lrwd@rwdls.comI深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司6.嗅覺行為實驗注意事項估,實驗周期約為7-10天,是認知評估的復雜實驗中相對高效的行為學訓練。實驗氣味傳遞的精準度、飲水獎勵的穩(wěn)定性、信號傳輸的同步性等是決定訓練成關鍵因素,為更高效的達標記憶訓練,我們從以下幾個方向小結了實驗過程中的注意事項,供大家快速定位解決問題。6.1儀器連接及系統(tǒng)設置1)儀器連接開啟后,軟件顯示如下系統(tǒng)報錯:應注意軟件-幫助-產品規(guī)格的選擇與實際儀器規(guī)格是否匹配,此處報錯為常規(guī)款儀器錯誤選擇了"電生理兼容款"產品規(guī)格,切換正確即可。2)軟件安裝后無法打開或打開后出現持續(xù)卡頓時,請檢查PC系統(tǒng)版本,olfactometer軟件對pc系統(tǒng)要求最低為windows10深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516lrwd@rwdls.comI深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司6.2訓練過程注意事項1)行為學實驗操作應盡可能輕柔操作,建議于實驗開始前三天對小鼠實施撫摸陪同玩耍行為,如使用棉麻手套則訓練全過2)小鼠禁水時長應適度,時長過短會導致禁水程度不夠小鼠不配合訓練,時長過長會導致小鼠脫水嚴重小鼠狀態(tài)不佳無法配合訓練,更重要的是有損小鼠健康,不符合動物實驗倫理原則。3)實驗需在安靜環(huán)境下進行,實驗過程中實驗人員應保持安靜,不可高聲談論,不可用力關門發(fā)出尖銳噪聲等。4)在結束每天的訓練后給小鼠提供自由飲水0.5-1.0小時很重要,有利于維持小鼠健康狀態(tài)及保持小鼠每次訓練禁水狀態(tài)的一致性。5)建議在每次訓練開始啟動程序測試水嘴出水,確保小鼠放入行為箱后即順利6)訓練全過程應保持水嘴獎勵側選擇的一致性,始終使用雙側水嘴或始終使用6.3實驗參數設置至8ul,以使得小鼠在當次訓練過程中得保持好的狀態(tài)完成全部訓練;session和trial參數的設置應相互協(xié)調,結合單次獎勵量計算出當次實驗的合適session400-966-9516lrwd400-966-9516lrwd@rwdls.comI深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司7.嗅覺研究數據實驗范式的訓練和測試,不同階段的數據形式略有不同,但核心參數始終一致,例如Hit、Miss、Falsechoice、correctrejection,用于判斷小鼠學習行為的達標程度,7.1數據采集量,實時計算小鼠舔水行為表現值,以Hit、Miss、Falsechoicecorrectrejection的次數和百分比兩種形式體現,并計算給出performancecorrectRat(正確表現比率)。同時,在訓練詳情界面的下方會實時顯示系統(tǒng)氣路狀態(tài),方便實驗人員獲取氣味釋放信息。如下圖所示:深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司在嗅覺行為訓練過程中軟件已實時采集統(tǒng)計各項結果參數,在實驗結束后,Results和Events數據以.csv格式文件進行存儲。Results.csv文件統(tǒng)計給出了嗅覺行為訓練的關鍵結果參數,包括Hit、Miss、Falsechoice、correctrejection的次數和百分比兩種形式,以及performancorrectRate(正確表現比率)。如我們在嗅覺行為訓練實驗方法提到的,以小鼠在拒絕行為的綜合正確表現比率達到85%為評估指標,performancecorrectRate85%,小鼠訓練達標視為學會了氣味區(qū)分,performancecorrectRate<85%,小Events.csv數據文件以時間軸線記錄了該實驗程序全過程事件,相當于原始數據,可抓取數據用第三方軟件進一步作圖分析。但通常而言,在Results.csv文件給出的關鍵結果參數已能滿足嗅覺行為訓練實驗的數據作圖需求。深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司8.光纖記錄數據分析光纖記錄的原始數據包含時間軸、不同通道對應的熒光值、事件標記信息。通過分析相對于初始基線熒光(F)的熒光變化()并觀察與鈣瞬變相對應反應?？紤]到GcaMP只有在與鈣離子結合時才會引發(fā)熒光增強,和jrGECO1a,同時使用獨特的410nmLED來獲取對照信號并排除噪聲。數據分析可以使用不同的軟件進行,如MATLAB、python或您選擇的其他分析8.1數據預處理400-966-9516lR821三色光纖記錄系統(tǒng)軟件集信號采集與數據分析于一體,在數據分析中,數據預處理過程包含平滑處理,基線矯正,運動矯正等功能正多數針對的是熒光信號因長時間記錄導致漂白信號逐步下降,或者光纖的自發(fā)熒光在長期記錄下逐步被漂白、基線逐步下降等情況。此情形的數據因為整體呈勢,不利于后續(xù)數據作圖分析,所以需要進行基線矯正。運動矯正采用410nm對照通道的數據,410nm數據可以用于反應背景噪音信號,運動矯正即將410nm數據與470nm數據進行擬合,通過算法從470nm數據中去除410nm數據的波動,得到真實的熒光數據。8.2分析作圖將熒光數據與動物行為數據同步對比,選擇事件標記或者增加事件標記,對事件相關信號分析作圖。深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司事件分析8.3組間對比將不同組的數據進行組間對比,即可分析不同處理因素下熒光數據的差異。此外,還可結合行為學視頻同步分析動物的運動軌跡。深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司通過以上步驟,原始的熒光數據就可以直接出圖。深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司第三章光纖記錄與嗅覺研究應用在本章中,我們將簡單介紹一下光纖記錄系統(tǒng)和嗅覺行為訓練系統(tǒng),并展示一些真實的實驗示例,這些示例將有助于啟發(fā)您的實驗設計。410nm可以用來反射背景噪聲信號,從而確保獲得真實的熒光數據。R821三色多通道光纖記錄系統(tǒng)有三個激發(fā)光源(410nm、470nm和560nm)。該系統(tǒng)可以記錄綠色熒光指示劑如GcaMP和dlight或神經遞質探針的信號,以及紅色熒光指示劑如RcaMP、jrGECO1a或神經遞質探針的信號。瑞沃德嗅覺行為訓練系統(tǒng)有16氣瓶常規(guī)款(OM-16)、8氣瓶常規(guī)款(OM-8)、16氣瓶電生理兼容款(OM-16E)可供選擇,可用于小鼠學習記憶訓練,基于嗅覺刺激關聯飲水獎勵反饋,建立認知學習范式,幫助用戶快速開展記憶認知相關實嗅覺行為訓練系統(tǒng)支持多只動物進行多種氣味訓練,包氣味控制、信號傳輸、行為相機、隔音箱、桌面軟件等模塊,可拓展與光遺傳、光纖記錄、電生理等第三方設備聯用。配有專用軟件操控系統(tǒng)運行,精確控制氣味釋放,新程序。400-966-9516l嗅覺行為訓練系統(tǒng)可實現氣味刺激、嗅覺分辨、認知訓練等實驗任務,助力開展嗅覺功能、學習記憶認知、神經系統(tǒng)疾病等機制的研究,大大提瑞沃德嗅覺行為訓練系統(tǒng)3.光纖記錄與嗅覺研究應用案例5.嗅覺行為訓練系統(tǒng)應用案例1.光纖記錄系統(tǒng)主要功能特點1.1軟件功能強大1.1.1一鍵出圖熒光熱圖、曲線圖、動物軌跡圖等,支持一鍵分析出圖,省時省力。1.1.2一體化采集多種事件打標方式,包括:①外部信號輸入自動標記實時顯示,自由修改顏色;②手動標記實時顯示,自由修改事件名稱、顏色及快捷鍵;③行為學Rol標記實時顯示,自由修改事件名稱及顏色等,根據實驗需求自由選擇。深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516l深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516lRol事件輸出,實現閉環(huán)研究;②熒光信號實時輸出:采集數據實時傳輸至MATLAB,實時分析及閉環(huán)調控,進行個性化1.1.3全方位數據分析據處理功能。2)多維度結果輸出?？奢敵鰀eltaF/F、Z-score、peak統(tǒng)計、組間對比、事件步播放,行為學視頻可逐幀查看及處理。1.2系統(tǒng)集成高效1.2.1高集成化析,無需分開使用。兼容光遺傳。內置光遺傳接口,實現同位點刺激和記錄。1.2.2強拓展性深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516lrwd@rwdls.comI深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司1.3性能穩(wěn)定1.3.1超100小時穩(wěn)定采集1)高穩(wěn)定LED光源OLED激發(fā)光源功率穩(wěn)定,8小時連續(xù)輸出功率不穩(wěn)定度小于0.5%;壽命>10000小時,為穩(wěn)定采集保駕護航。2)低丟幀率相機。采集丟幀率低,小于0.02%,保證數據信號的真實性。3)獨特軟件控制系統(tǒng)。獨特的數據采集控制及存儲算法,保障了系統(tǒng)不卡頓、1.4采集靈敏擾,獲得準確信號。弱信號檢測需求;250FPS高幀率,滿足微弱且快速變化的信號需求。深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司干擾,信號采集更精準。2.嗅覺行為訓練系統(tǒng)主要功能特點2.1高通量單個電腦工作站可控制8通道箱體,實現8只小鼠同步訓練。2.2高靈敏度氣味切換迅速毫秒級別響應,舔水傳感模塊靈敏精準計數。2.3一體化氣味刺激模塊與舔水獎勵模塊關聯,一體化實現學習記憶訓練。2.4自動化2.5強兼容性2.6視頻監(jiān)控3.光纖記錄與嗅覺研究應用案例由于光纖記錄實驗的高效簡便,從該技術發(fā)明以來,已有近千篇文章發(fā)表;近年來嗅覺方向的研究也漸漸為研究人員所關注,嗅覺行為訓練實驗中結合光纖記錄系統(tǒng)深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516l深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516l對鈣信號進行記錄,分析神經元信號的變化,已成為研究人員探究嗅覺功能及認知活動中的重要技術手段。下面為大家舉例光纖記錄與嗅覺研究應用的幾個案例,幫助大3.1外側內嗅皮層直接編碼獎賞關聯性學習記憶越來越多的證據表明紋狀體多巴胺與獎賞關聯性學習密切相關,研究也發(fā)現內嗅皮層-海馬通路是編碼關聯學習的關鍵環(huán)路。內側內嗅 (LEC)在編碼記憶信息上的差異也廣泛被研究人員關注,外側內嗅皮層在編碼與物體氣味,形狀等特征信息相關的記憶時,與多巴胺獎賞信號的神經環(huán)路連接尚未闡光纖記錄系統(tǒng)、單細胞電生理記錄等技術手段,發(fā)現外側內嗅皮層海馬通路是編碼獎賞相關的學習記憶的關鍵環(huán)路,這一過程依賴于多巴胺和扇形細胞。研究團隊利用正確的次數在80%以上,就認為小鼠成功獲得習得性關聯記憶。400-966-9516l深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司LEC扇形細胞在獎賞關聯性學習中起關鍵作用深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司參考文獻:Natur2021,598(7880),321-326.3.2眶額皮層-紋狀體回路中細胞類型特異性影響強迫癥認知僵化許多精神疾病表現出認知僵化性功能障礙,無法靈活調整行為以適應不斷變化的環(huán)境的要求,這是強迫癥(OCD)的主要癥狀,通常表現為逆轉學習受損。在強迫癥的研究中,已經知道眼眶額葉皮層(OFC)轉學習缺陷有關。首都醫(yī)科大學的研究團隊利用經典的氣味刺激關聯舔水獎勵實驗范式設計了逆轉學習任務,同時聯用光遺傳學及光纖記錄系統(tǒng),發(fā)現眶額皮層活動是正常逆轉學習和細胞類型特異性功能障礙的基礎。當發(fā)生細胞類型特異性功能性增加減少,這導致對OFC興奮性神經元的抑制不足,進而影響對獎勵與非獎勵線索的響應偏好,最終導致逆轉學習變慢。該研究結果為探究強迫癥認知僵化的潛在治400-966-9516l深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司參考文獻:yang,z.;wu,G.;Liu,M.;sun,x.;xu,Q.;zhang,c.,etal.DysfunctionofMouseModelofobsessive-compulsiveDisorder.currBiol2021,31(2),381-393e4.400-966-9516l4.光纖記錄應用案例為大家舉例光纖記錄應用案例,幫助大家更好地了解光纖記錄在神經系統(tǒng)疾病中的應用,本案例使用瑞沃德多通道光纖記錄系統(tǒng)完成數據采集及分析工作。4.1記憶下丘腦環(huán)路調控海馬神經發(fā)生促進記憶提取對抗焦慮樣行為生、成熟并整合到現有環(huán)路中,并且這個過程由神經環(huán)路的活動進行動態(tài)調節(jié)。然Li等人聚焦于SUM-DG環(huán)路修飾的ABN發(fā)育的不同階段,通過光纖記錄、光遺傳、化學遺傳、膜片鉗和譜系示蹤等方法,揭示了SUM-DG環(huán)路修飾成年海馬新生神經元,促進記憶提取和對抗焦慮。在該研究中,Li等人使用光纖記錄方法檢測SUM-DG神經元投射的活性,結果發(fā)現在豐富環(huán)境(EE)中,小鼠SUM神經元活性顯著增加,并且SUM消融后,EE誘導的神經反應和ABN介導的行為改善被消除,提示SUM-DG環(huán)路修飾的ABN能深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司參考文獻:Liya-Dong,Luoyan-Jia,chenze-kaetal.Hypothalamicmodulationofadultmemoryandanxiety-likebehavior.[J].NatNeurosci,2022,25:630-645.5.嗅覺行為訓練系統(tǒng)應用案例在動物實驗研究中,嗅覺作為驅動認知行為的重要感覺模式,在嗅覺辨別、學習記憶、決策、沖動等認知行為中發(fā)揮重要作用。臨床研究也發(fā)現,許多腦部病變的發(fā)生都伴隨著嗅覺障礙,例如頭部外傷、丘腦或前額葉皮質病變、顱內壓增高等病變,等神經系統(tǒng)疾病中也存在嗅覺障礙?；谛嵊X刺激的行為學實驗在相關研究中應用廣泛,推動了認知及神經系統(tǒng)疾病機制的研究進展。下面將為大家舉例嗅覺行為訓練實驗應用案例,幫助大家更好地了解嗅覺行為訓練系統(tǒng)在神經研究領域中的應用。5.1延遲期間的內側前額葉活動有助于學習工作記憶任務工作記憶(WM)是認知過程的重要部分,涉及一段短暫的記憶保留期,稱為延遲期。多項研究表明在延遲期內側前額葉皮層(mpFC)活性升高,一篇發(fā)表在science上的研究進一步揭示了其在工作記憶任務中的功能作用。研究人員利用氣味果發(fā)現嗅覺行為學習表現在學習階段會受到損害,但在小鼠接受良好訓練后則不會。研究人員訓練小鼠在氣味移除的短暫時間內記住該氣味,在此延遲期間光遺傳學操縱小鼠內側前額葉皮層中的神經細胞活動會干擾小鼠在延遲期后聞到相同或不同氣味時的舔水行為表現。一旦小鼠成功學會DNMS任務,光遺傳操縱就不會影響隨后的舔深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516l深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516lmpFC)神經元活動對于學習工作記憶任務期間的400-966-9516l深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司抑制延遲期mpFC活動損害了工作記憶任務學習的表現參考文獻:深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516lrwd@rwdls.comI深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司第四章光纖記錄應用至嗅覺研究實驗設備及耗材瑞沃德在進行光纖記錄應用至嗅覺研究實驗的整體解決方案如下圖所示,包括麻1.麻醉定位3.結合嗅覺行為實驗進行熒光信號采集4.切片染色1.麻醉定位在給動物做手術時,動物需要保持持續(xù)麻醉狀態(tài),且此時動物頭部也處于固定狀態(tài)。所用設備:腦立體定位儀、麻醉機、呼吸機、數碼顯微鏡或雙目體視鏡、體溫維2.病毒注射、插針埋植及頭桿固定動物固定及調平后,首先要定位到研究的目標腦區(qū)位點并進行開顱手術,然后根深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516l深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司400-966-9516l據實驗設計,吸取對應的熒光蛋白病毒并注射到目標位點中,最后在相同位點植入陶瓷插針并通過牙托水泥固定。所用設備及耗材: