GB∕T 40368-2021 植物代謝產(chǎn)物胰蛋白酶抑制因子測(cè)定 酶聯(lián)免疫吸附法（正式版）

ICS07.080CCSA40GB/T40368—2021植物代謝產(chǎn)物胰蛋白酶抑制因子測(cè)定酶聯(lián)免疫吸附法國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)IGB/T40368—2021本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由全國(guó)生化檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC387)提出并歸口。公司。1GB/T40368—2021植物代謝產(chǎn)物胰蛋白酶抑制因子測(cè)定酶聯(lián)免疫吸附法本文件規(guī)定了植物代謝產(chǎn)物胰蛋白酶抑制因子的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定方法。本文件適用于大豆及其制品中代謝產(chǎn)物胰蛋白酶抑制因子的測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。樣品經(jīng)處理后，樣液中胰蛋白酶抑制因子與微孔板中包被的胰蛋白酶抑制因子抗體(捕獲抗體)結(jié)合，洗板除去未結(jié)合的其他成分，再與胰蛋白酶抑制因子的酶標(biāo)抗體結(jié)合，加酶標(biāo)底物顯色，用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值，計(jì)算胰蛋白酶抑制因子含量。5試劑和材料除非另有規(guī)定，本方法所用化學(xué)試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的二級(jí)水。5.1胰蛋白酶抑制因子檢測(cè)試劑盒：參見附錄A。5.2胰蛋白酶抑制因子：純度≥95%,CAS號(hào)為9035-81-8。5.3應(yīng)按照試劑盒說明書所述，配制所需溶液。6儀器設(shè)備6.1小型粉碎機(jī)。6.3勻漿機(jī)。6.4渦旋混合器。6.6具塞離心管：15mL。2GB/T40368—20216.8試劑盒所要求的儀器。7樣品的制備與保存稱取100g樣品，用小型粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，粉碎后的樣本過孔徑0.9mm分樣篩。裝入清潔密封容7.2半固態(tài)樣品8試驗(yàn)步驟法進(jìn)行稀釋和檢測(cè)。8.2測(cè)定按照酶聯(lián)免疫試劑盒所述操作步驟對(duì)待測(cè)試樣(液)進(jìn)行定量檢測(cè)。8.3平行試驗(yàn)8.4空白試驗(yàn)8.5陽(yáng)性質(zhì)控根據(jù)待測(cè)樣本中胰蛋白酶抑制因子的含量，選擇一個(gè)合適的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，以確定試驗(yàn)過程的操作準(zhǔn)確性。9試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理按照試劑盒說明書提供的計(jì)算方法或者計(jì)算機(jī)軟件，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度與吸光度變化關(guān)系繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。GB/T40368—20219.2待測(cè)液濃度計(jì)算按照試劑盒說明書提供的計(jì)算方法以及計(jì)算機(jī)軟件，將待測(cè)液吸光度代入9.1所獲得標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，計(jì)算待測(cè)液質(zhì)量濃度(p)。9.3結(jié)果計(jì)算樣品中胰蛋白酶抑制因子的含量按式(1)計(jì)算： (1)式中：X——樣品中胰蛋白酶抑制因子的含量，單位微克每千克(μg/kg);p——從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上得到的樣品中胰蛋白酶抑制因子質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);V——樣本提取液體積，單位為毫升(mL);a——在前處理過程中的稀釋倍數(shù)；m——試樣的稱樣量，單位為克(g)。計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，保留3位有效數(shù)字。10精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的20%。11準(zhǔn)確度本方法供酶聯(lián)免疫試劑盒測(cè)試的胰蛋白酶抑制因子溶液加標(biāo)濃度為0.5ng/mL時(shí)，平均回收率為83.0%～120.7%。當(dāng)供酶聯(lián)免疫試劑盒測(cè)試的胰蛋白酶抑制因子溶液加標(biāo)濃度為1.0ng/mL時(shí)，平均回收率為85.3%～111.6%。當(dāng)供酶聯(lián)免疫試劑盒測(cè)試的胰蛋白酶抑制因子溶液加標(biāo)濃度為5.0ng/mL時(shí)，平均回收率為93.7%～101.9%。當(dāng)稱取大豆、豆粕等固態(tài)樣本1.00g時(shí)，胰蛋白酶抑制因子的檢出限為200pg/kg,定量限為300pg/kg。當(dāng)稱取豆腐、豆乳等半固態(tài)樣本1.00g時(shí)，胰蛋白酶抑制因子的檢出限為20μg/kg,定量限為30μg/kg。當(dāng)稱取豆奶、豆?jié){等液態(tài)樣本1.00g時(shí)，胰蛋白酶抑制因子的檢出限為2μg/kg,定量GB/T40368—2021(資料性)A.1包被胰蛋白酶抑制因子抗體(捕獲抗體)的酶標(biāo)板。A.4胰蛋白酶抑制因子標(biāo)準(zhǔn)溶液：0