魚類生理學(xué)實驗專家講座

魚類生理學(xué)試驗

動物醫(yī)學(xué)系伍莉魚類生理學(xué)實驗專家講座第1頁試驗一

魚類生理學(xué)試驗慣用儀器

試驗基本操作技術(shù)

魚類生理學(xué)實驗專家講座第2頁一、魚類生理學(xué)試驗地位本課程共20課時，屬專業(yè)基礎(chǔ)課程成績計算：匯報90%，考勤10%二、魚類生理學(xué)試驗方法魚類生理學(xué)實驗專家講座第3頁三、魚類生理學(xué)試驗?zāi)繕?biāo)1.掌握基本試驗方法；2.掌握主要儀器操作方法；3.掌握生理試驗基本技能；4.獨(dú)立分析試驗結(jié)果、寫出規(guī)范試驗匯報。魚類生理學(xué)實驗專家講座第4頁四、魚類生理學(xué)試驗要求1.試驗前：教師和學(xué)生均做好試驗準(zhǔn)備工作。2.試驗中：教師簡明講解試驗原理、關(guān)鍵步驟、試驗要求等。學(xué)生領(lǐng)取器材，償還時復(fù)核，損壞登記，丟失賠償。3.試驗后：償還試驗用具，動物尸體按指定位置放置，輪番清掃清潔衛(wèi)生；轉(zhuǎn)錄、整理試驗結(jié)果，及時上交試驗匯報。魚類生理學(xué)實驗專家講座第5頁五、慣用生理儀器使用（一）刺激系統(tǒng)1.刺激器2.刺激電極（1）普通電極（2）保護(hù)電極（3）Zn-Cu弓（二）引導(dǎo)、換能系統(tǒng)1.壓力換能器2.張力換能器魚類生理學(xué)實驗專家講座第6頁（三）放大系統(tǒng)（信號調(diào)整）放大器：可將生物電信號放大數(shù)千倍（四）顯示、統(tǒng)計系統(tǒng)1.記紋鼓2.生理統(tǒng)計儀慣用有二道、四道及八道儀等3.計算機(jī)生物信號采集處理系統(tǒng)魚類生理學(xué)實驗專家講座第7頁六、魚類生理試驗基本操作技術(shù)（一）手術(shù)器械1.刀：手術(shù)刀（指壓式、執(zhí)筆式、反挑式）2.剪：外科剪、眼科剪3.鑷：外科鑷、眼科鑷4.鉗：止血鉗5.其它：探針、玻璃分針、蛙板、鋅銅弓、蛙心夾等（二）試驗動物選擇健康動物魚類生理學(xué)實驗專家講座第8頁七、魚類麻醉劑麻醉劑能夠降低魚體新陳代謝，降低對魚體傷害，提升存活率。（一）麻醉劑作用原理麻醉劑首先抑制腦皮質(zhì)（觸覺喪失期），再作用于基底神經(jīng)節(jié)與小腦（興奮期），最終作用于脊髓（麻醉期）。過大劑量或過長接觸可深及髓質(zhì)，使呼吸與血管舒縮中樞麻痹，最終造成死亡。魚類生理學(xué)實驗專家講座第9頁（二）魚類麻醉過程行為特征表1麻醉程度分期及魚類行為表現(xiàn)注：“±”-正常；“＋”-略失；“－”-喪失。行為表現(xiàn)分期視覺觸覺重壓肌張力平衡感鰓蓋頻率備注第Ⅰ期（輕度鎮(zhèn)靜期）±±＋＋＋正常第Ⅱ期（深度鎮(zhèn)靜期）－－＋＋＋略降低用于普通運(yùn)輸?shù)冖笃冢ㄆ胶馐д{(diào)期）－－＋＋－增加第Ⅳ期（麻醉期）－－＋－－增加或降低最正確操作時期第Ⅴ期（深度麻醉期）－－－－－慢馬上進(jìn)行復(fù)蘇第Ⅵ期（延髓麻醉期）－－－－－停頓無法恢復(fù)，死亡魚類生理學(xué)實驗專家講座第10頁表2復(fù)蘇過程分期及魚類行為表現(xiàn)復(fù)蘇過程行為表現(xiàn)第Ⅰ期身體靜止，呼吸恢復(fù)，鰓蓋開始振動第Ⅱ期部分平衡及運(yùn)動恢復(fù)第Ⅲ期平衡完全恢復(fù)，對外界反應(yīng)恢復(fù)第Ⅳ行為完全恢復(fù)正常魚類生理學(xué)實驗專家講座第11頁1.MS-222（間氨基苯甲酸乙酯甲烷磺酸鹽）MS-222易處理、效力快速、安全性高，被美國國家食品及藥品管理局（FDA）同意為漁用麻醉劑。MS-222可采取浸泡、噴霧和注射等方法使用。MS-222主要在脾臟、肝臟中積聚，過高濃度會引發(fā)死亡。MS-222適宜活魚運(yùn)輸，將魚放在清水中僅1min就能清醒，但FDA要求經(jīng)MS-222麻醉魚，食用必須經(jīng)過21d休藥期才可銷售；另外，因為其價格昂貴限制了它應(yīng)用。魚類生理學(xué)實驗專家講座第12頁2.丁香酚（2-甲氧-4丙烯基酚）全麻劑，是一個植物香料，丁香酚及其代謝物能夠快速從血液和組織中排出，不會誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生有毒和突變物質(zhì)，在醫(yī)學(xué)上作為牙科鎮(zhèn)痛劑被廣泛應(yīng)用。丁香酚無殘留期，是正當(dāng)水產(chǎn)麻醉劑，能同時滿足安全性、高效性和低成本要求，已廣泛應(yīng)用于親魚采卵、活魚運(yùn)輸以及手術(shù)中，對鯉魚、真鯛、鰻魚等有強(qiáng)烈麻醉作用。與MS-222相比，丁香酚毒性更小，無殘留，但它入麻時間與復(fù)蘇時間比MS-222更長。魚類生理學(xué)實驗專家講座第13頁3.C02C02是唯一被允許用來運(yùn)輸食用魚化學(xué)麻醉劑。用C02麻醉魚，沒有藥品消退期，食用魚可直接上市銷售，但其麻醉時間和復(fù)蘇時間相對較長，麻醉水溶液使用濃度范圍很窄，且只對部分魚有麻醉作用，因而應(yīng)用范圍受到限制。如用C02輔助運(yùn)輸鯉成魚，須分別用高分壓（27.33KPa）和低分壓（13.17KPa）C02氣流交替刺激鯉成魚，經(jīng)15～30min后魚即進(jìn)入昏眠狀態(tài)，運(yùn)輸時間可維持1h左右，且死亡率很低。魚類生理學(xué)實驗專家講座第14頁也可用C02和02（50：50）混合氣體輔助運(yùn)輸活魚。直接往裝有鯽魚和鯉魚水體中注入氣體，使魚在水中行為逐步遲鈍。約25min后，魚便沉到水底“睡眠”，此時可將魚從水中撈出進(jìn)行運(yùn)輸，連續(xù)時間可超出30h。當(dāng)魚運(yùn)到目標(biāo)地后，再將它們放入水中并注入02，5min后即可清醒。魚類生理學(xué)實驗專家講座第15頁試驗二計算機(jī)生物信號采集處理系統(tǒng)

一、系統(tǒng)組成與工作原理PCLAB-UE由硬件和軟件兩部分組成，硬件主要完成對各種生物電信號與非電生物信號進(jìn)行調(diào)理、放大，并對信號進(jìn)行模/數(shù)（A/D）轉(zhuǎn)換，使之進(jìn)入計算機(jī)。軟件主要對已經(jīng)數(shù)字化了生物信號進(jìn)行顯示、統(tǒng)計、存放、處理及打印輸出，同時對系統(tǒng)各部分進(jìn)行控制，與操作者進(jìn)行人機(jī)對話。魚類生理學(xué)實驗專家講座第16頁二、主界面

從上到下依次分為：標(biāo)題欄、菜單欄、工具欄、狀態(tài)提醒欄及采樣窗、控制面板和數(shù)據(jù)窗等其它多個對應(yīng)子窗口組成。魚類生理學(xué)實驗專家講座第17頁三、使用方法1.設(shè)置：標(biāo)準(zhǔn)配置，恢復(fù)出廠時配置2.新建：試驗項目→填寫信息→試驗窗口→開始試驗3.采樣：統(tǒng)計試驗數(shù)據(jù)4.控制面板參數(shù)調(diào)整（1）通道功效調(diào)整（2）刺激參數(shù)調(diào)整5.文件存放：F：/文件名：09水養(yǎng)3-呼吸（左2）6.編輯：打開原文件→選擇→復(fù)制→打開“工具”下“畫圖”→處理文件→復(fù)制圖片→存盤到F：/魚類生理學(xué)實驗專家講座第18頁試驗三影響血液凝固原因紅細(xì)胞脆性測定血紅蛋白測定魚類生理學(xué)實驗專家講座第19頁影響血液凝固原因

1試驗?zāi)繕?biāo)以凝血時間為指標(biāo)，了解影響凝血原因，加深對生理止血過程了解。2試驗原理血液凝固是一個酶解激活過程，有各種凝血因子參加。依據(jù)凝血過程起動時凝血因子起源不一樣，可將凝血分為內(nèi)源性激活路徑和外源性激活路徑。魚類生理學(xué)實驗專家講座第20頁表1血液凝固及其影響原因試管號試驗處理凝血時間（秒）1空白2液體石蠟2滴3棉花少許4冰水環(huán)境5肝素4滴6草酸鉀4滴7肺組織浸液4滴5號管加CaCl24滴6號管加CaCl24滴魚類生理學(xué)實驗專家講座第21頁【注意事項】l.采血過程要盡可能快，以降低計時誤差，對比試驗采血時間要緊接著進(jìn)行。2.每支試管口徑大小及采血量要相對一致，不可相差太大。3.判斷凝血標(biāo)準(zhǔn)要一致，普通以傾斜試管達(dá)45°時試管內(nèi)血液不見流動為準(zhǔn)。魚類生理學(xué)實驗專家講座第22頁紅細(xì)胞脆性測定1.試驗?zāi)繕?biāo)學(xué)習(xí)測定紅細(xì)胞滲透脆性方法，了解細(xì)胞外液滲透張力對維持細(xì)胞正常形態(tài)與功效主要性。2.試驗原理正常紅細(xì)胞懸浮于等滲血漿中，若置于高滲溶液內(nèi)，則紅細(xì)胞會因失水而皺縮；反之，置于低滲溶液內(nèi)，則水進(jìn)入紅細(xì)胞，使紅細(xì)胞膨脹。如環(huán)境滲透壓繼續(xù)下降，紅細(xì)胞會因繼續(xù)膨脹而破裂，釋放血紅蛋白，稱之為溶血。紅細(xì)胞膜對低滲溶液有一定抵抗力，這一特征稱為紅細(xì)胞滲透脆性。魚類生理學(xué)實驗專家講座第23頁3.溶液配置表2不一樣濃度NaCl溶液配制管號123456789101%NaCl（mL）6.05.04.54.03.53.02.52.01.51.0蒸餾水(mL)4.05.05.56.06.57.07.58.08.59.0NaCl濃度（%）0.600.500.450.400.350.300.250.200.150.10魚類生理學(xué)實驗專家講座第24頁4.結(jié)果觀察①未溶血試管：液體下層有大量紅細(xì)胞下沉，上層為無色透明，表明無紅細(xì)胞破裂。②不完全溶血試管：液體下層有紅細(xì)胞下沉，上層出現(xiàn)透明淡紅色，表明部分紅細(xì)胞已經(jīng)破裂，稱為不完全溶血。②完全溶血試管：液體完全變成透明紅色，管底無紅細(xì)胞下沉。魚類生理學(xué)實驗專家講座第25頁【注意事項】1.試管要潔凈，加抗凝血量要一致。2.配制NaCI溶液時應(yīng)力爭準(zhǔn)確、無誤。3.混勻時，輕輕傾倒1～2次，損少機(jī)械震動，防止人為溶血。4.靜置時間足夠，應(yīng)在光線明亮處判定結(jié)果。

魚類生理學(xué)實驗專家講座第26頁血紅蛋白測定1試驗?zāi)繕?biāo)掌握比色法測定動物血紅蛋白含量方法。2試驗原理血紅蛋白顏色與氧結(jié)合量相關(guān)，當(dāng)用一定氧化劑將其氧化時，可使其轉(zhuǎn)變?yōu)榉€(wěn)定、棕色高鐵血紅蛋白，而且顏色與血紅蛋白濃度成正比。所以，可與標(biāo)準(zhǔn)色板進(jìn)行對比，求出血紅蛋白濃度，即每升血液中含血紅蛋白克數(shù)（g.L-1）。魚類生理學(xué)實驗專家講座第27頁3試驗對象：動物種類不限4方法與步驟：使用沙里氏血紅蛋白計測定。比色法是用HCl使血紅蛋白酸化形成粽色高鐵血紅蛋白，然后和標(biāo)準(zhǔn)比色板進(jìn)行比色。（1）血紅蛋白計由標(biāo)準(zhǔn)比色箱和測定管組成。測定管兩側(cè)有刻度，一側(cè)為血紅蛋白量絕對值，以每100mL血液中所含血紅蛋白克數(shù)表示；另一側(cè)為相對值，以％（即相當(dāng)于正常平均值百分?jǐn)?shù)）來表示。魚類生理學(xué)實驗專家講座第28頁血紅蛋白測定①先檢驗血紅蛋白吸管和測定管是否清潔，如不清潔則依次用自來水→蒸餾水→無水乙醇清洗。②將0.1N鹽酸加入測定管中至刻度“2”處。③用血紅蛋白吸管吸收血液至刻度20μL處，用脫脂棉擦凈外壁血液后，馬上將血液緩緩吹入測定管鹽酸中，并利用上層鹽酸將吸管重復(fù)洗滌屢次（防止起泡），使吸管中血液全部進(jìn)入鹽酸液層中，混勻。④酸化10min后，逐滴加入蒸餾水使液體顏色變淺，邊加邊混勻并與標(biāo)準(zhǔn)比色板比較，至二者顏色相同為止。⑤讀出測定管內(nèi)液體凹面最低處刻度，即為每100mL血液中血紅蛋白克數(shù)。魚類生理學(xué)實驗專家講座第29頁【注意事項】1.吹血入測定管時，不宜用力過猛，防止起泡以影響讀數(shù)。2.稀釋時應(yīng)逐滴加入，預(yù)防稀釋過量。3.血液與鹽酸作用時間不能少于10min，不然血紅蛋白不能充分轉(zhuǎn)變?yōu)楦哞F血紅蛋白，使結(jié)果偏低。4.用血紅蛋白吸管吸血時要準(zhǔn)確，比色應(yīng)在自然光下進(jìn)行。魚類生理學(xué)實驗專家講座第30頁試驗匯報撰寫1試驗原理2材料與方法2.1主要器材2.2主要藥品2.3試驗動物2.4試驗方法2.4.1Hb測定：按魚類生理學(xué)試驗方法進(jìn)行[1]。2.4.2RBC脆性測定：按魚類生理學(xué)試驗方法進(jìn)行[1]。2.4.3影響血凝原因：按魚類生理學(xué)試驗方法進(jìn)行[1]。魚類生理學(xué)實驗專家講座第31頁3試驗結(jié)果3.1Hb含量及RBC脆性測定表1鳙魚Hb含量及RBC脆性測定分組Hb測定含量（g/L）RBC脆性測定（NaCl%）最小抵抗最大抵抗試驗組對照組750.48～0.400.33～0.21魚類生理學(xué)實驗專家講座第32頁3.2不一樣原因?qū)ρ耗虝r間影響表2血液凝固及其影響原因試管號試驗處理凝血時間（秒）1空白2液體石蠟4滴3棉花少許4冰水環(huán)境5肝素4滴6草酸鉀4滴7肺組織浸液4滴5號管加CaCl24滴6號管加CaCl24滴魚類生理學(xué)實驗專家講座第33頁4分析與探討4.1Hb測定結(jié)果比對照高（或低、或基本一致），從操作過程方面說明原因：……。4.2RBC脆性測定結(jié)果，與對照組相比，最小抵抗高（或低、或基本一致），最大抵抗……，從操作過程方面說明原因：……。4.3凝血時間測定結(jié)果表明，××處理能加緊（抑制或不凝）血液凝固，為何？××管加CaCl2后凝固，為何？（從凝血機(jī)制分析）5參考文件[1]楊秀平.動物生理學(xué)試驗[M].北京：高等教育出版社，，85-99.魚類生理學(xué)實驗專家講座第34頁家兔Hb、RBC脆性測定及影響血凝原因觀察

1試驗相關(guān)信息及目標(biāo)2材料2.1動物2.2主要藥品：2.3主要儀器：3試驗方法：簡述或按生理試驗指導(dǎo)書a～b頁介紹方法進(jìn)行[1]。

4結(jié)果4.1家兔Hb、RBC脆性測定：見表1。分組試驗組對照組Hb（g/L）RBC脆性（NaCL%）最小抵抗最大抵抗80-1500.6～

0.550.4～0.35表1家兔Hb、RBC脆性測定4.2家兔血凝時間測定：見表2。表2不一樣原因?qū)彝醚龝r間影響5討論5.1家兔Hb測定結(jié)果與對照比較，其值偏高，原因：5.2家兔RBC脆性測定結(jié)果與對照比較，其值，原因：5.3家兔血凝時間測定結(jié)果表明，時間長短，原因：參考文件[1]陳杰.家畜生理學(xué)（第四版）[M].北京：中國家業(yè)出版社，，23-34.血凝時間（S）試驗管號處理原因草+Ca++肝素+Ca++對照棉花肝素冰水石蠟草肺組織[2]王力.論文題目[J].中國獸醫(yī)雜志，（25）9：12-23.魚類生理學(xué)實驗專家講座第35頁試驗四蛙心收縮統(tǒng)計和心肌特征證實

【試驗?zāi)繕?biāo)】學(xué)習(xí)蟾蜍心臟活動描記方法，觀察心肌收縮特點?！驹囼炘怼啃募∮行Р粦?yīng)期尤其長，幾乎占據(jù)了整個收縮期和舒張早期。在此期內(nèi)任何刺激均不能引發(fā)心肌收縮。所以心肌不會產(chǎn)生強(qiáng)直收縮，心臟總是有節(jié)律舒縮。在心臟舒張早期之后，給心肌一次有效刺激，會引發(fā)心臟一次期前收縮，緊接著出現(xiàn)一次較長間歇——代償間歇。魚類生理學(xué)實驗專家講座第36頁【試驗對象】蛙或蟾蜍【試驗藥品】任氏液【試驗方法與步驟】

1.試驗準(zhǔn)備（1）在體蛙心制備：取蛙一只，破壞腦、脊髓，仰臥固定于蛙板上。左手持鑷子提起胸骨后端皮膚剪一小口，然后向左、右兩側(cè)鎖骨外側(cè)剪開皮膚、肌肉，剪斷左右鎖骨，使創(chuàng)口呈一倒三角形，充分暴露心臟部位，并用眼科剪剪開心包膜，徹底暴露心臟。魚類生理學(xué)實驗專家講座第37頁（2）觀察心臟結(jié)構(gòu)識別蛙心臟。自心臟腹面可觀察到心室、心房、動脈球和主動脈。用玻璃分針向前翻轉(zhuǎn)蛙心，暴露心臟后面可觀察到靜脈竇和心房。（3）連接試驗裝置將蛙心夾上細(xì)線與張力換能器相連，讓心臟搏動信號傳入計算機(jī)生物信號采集處理系統(tǒng)。將銅絲與心室接觸良好并固定穩(wěn)妥后，與刺激器輸出連接。魚類生理學(xué)實驗專家講座第38頁2.試驗項目（1）描記正常曲線，觀察曲線收縮相和舒張相。（2）用中等強(qiáng)度單個閾上刺激在收縮期刺激心室，有何改變？為何？（3）用中等強(qiáng)度單個閾上刺激在舒張中后期刺激心室，有何改變？為何？（4）心肌“全或無”反應(yīng)：用絲線在靜脈竇與心房之間作一結(jié)扎，心臟停頓跳動。然后給予閾下及不同強(qiáng)度閾上刺激，觀察蛙心收縮強(qiáng)度改變。魚類生理學(xué)實驗專家講座第39頁【結(jié)果及分析】1.心縮期單個閾上刺激，心臟有何改變，為何？2.心舒期單個閾上刺激，心臟有何改變，為何？3.第一結(jié)扎后，心房、心室活動有何改變，為何？4.閾下刺激心縮曲線幅度有何改變，為何？5.不一樣強(qiáng)度閾上刺激，心縮曲線幅度有何改變，為何？魚類生理學(xué)實驗專家講座第40頁【注意事項】1.破壞蛙大腦和脊髓要徹底。2.經(jīng)常給心臟滴加任氏液，以保持心臟適宜環(huán)境。3.張力傳感器與蛙心夾之間絲線應(yīng)保持適宜擔(dān)心度。4.銅絲與心室接觸良好同時，還應(yīng)盡可能不讓其妨礙心臟自發(fā)收縮。魚類生理學(xué)實驗專家講座第41頁試驗五魚類呼吸運(yùn)動影響原因1目標(biāo)：觀察魚類呼吸運(yùn)動影響原因。2原理：魚類在數(shù)次呼吸運(yùn)動后，會出現(xiàn)一次洗滌運(yùn)動，以清除進(jìn)入口腔和鰓異物，確保氣體交換順利進(jìn)行。3材料：鯉魚（或鯽魚）、1g/L硫酸酮液。4項目：4.1正常呼吸曲線描記；4.2向水中（5L）通入CO2氣體，統(tǒng)計呼吸運(yùn)動改變；4.3分別向水中加入1g/L硫酸酮液5mL和50mL，使其濃度分別為1mg/L和10mg/L，統(tǒng)計呼吸運(yùn)動改變；4.4加入溫水，使水溫遲緩升到35℃，統(tǒng)計呼吸運(yùn)動改變。魚類生理學(xué)實驗專家講座第42頁試驗六離體小腸平滑肌生理特