影響免疫組化染色的因素和對策專家講座

影響免疫組化染色原因及對策影響免疫組化染色的因素和對策專家講座第1頁良好免疫組化染色切片是正確判斷染色結(jié)果基礎和前提。因為免疫組化染色過程中存在很多步驟或步驟，每一個步驟或步驟都可能影響到染色最終止果，所以，要做好一張高質(zhì)量免疫組化切片并不是一件非常輕易事。需要病理技術(shù)員和病理醫(yī)生親密配合、相互協(xié)調(diào)、共同努力才能確保做出合格免疫組化切片。影響免疫組化染色的因素和對策專家講座第2頁一、影響免疫組化染色質(zhì)量原因1、標本固定手術(shù)標本及時固定是確保免疫組化染色質(zhì)量關(guān)鍵。未能及時固定組織，會造成細胞變性和自溶，造成結(jié)構(gòu)破壞和抗原物質(zhì)彌散，在免疫組化染色上表現(xiàn)為抗原定位改變和背景染色增高。過分固定會造成抗原決定簇封閉和抗原丟失。影響免疫組化染色的因素和對策專家講座第3頁同一病例ER表示情況ERER固定不及時固定二周后取材固定8小時后取材影響免疫組化染色的因素和對策專家講座第4頁未及時固定乳腺癌組織ER表示胞漿著色影響免疫組化染色的因素和對策專家講座第5頁影響免疫組化染色質(zhì)量原因2、切片質(zhì)量影響切片太厚、皺褶，刀痕，敷貼不牢靠，以及脫蠟不徹底，均會影響免疫組化染色質(zhì)量，易出現(xiàn)非特異性染色和染色不均勻。影響免疫組化染色的因素和對策專家講座第6頁影響免疫組化染色質(zhì)量原因3、抗原修復步驟影響抗原修復步驟在免疫組化染色中是極為主要步驟。不一樣修復時間、不一樣修復方法、不一樣抗原修復液，最終結(jié)果會有差異。影響免疫組化染色的因素和對策專家講座第7頁

同一蠟塊不一樣修復方式結(jié)果ERHer-2(2+)Her-2(1+)微波修復水浴修復影響免疫組化染色的因素和對策專家講座第8頁

同一蠟塊不一樣修復時間結(jié)果影響免疫組化染色的因素和對策專家講座第9頁

同一蠟塊使用不一樣修復液結(jié)果Ki-67EDTA檸檬酸影響免疫組化染色的因素和對策專家講座第10頁4、操作過程中細節(jié)問題影響滴加抗體未完全覆蓋組織，PBS殘留過多，操作過程中切片干燥等原因，會出現(xiàn)邊緣效應和染色不均勻及北京染色等。影響免疫組化染色的因素和對策專家講座第11頁抗體覆蓋組織不完全造成邊緣效應影響免疫組化染色的因素和對策專家講座第12頁抗體覆蓋不均勻灶狀著色影響免疫組化染色的因素和對策專家講座第13頁影響免疫組化染色質(zhì)量原因5、第一抗體、檢測系統(tǒng)影響使用不一樣克隆、不一樣種屬起源抗體，不一樣檢測系統(tǒng)，免疫組化染色會產(chǎn)生差異。使用三步法試劑盒（如SP法）生物素系統(tǒng)進行免疫組化染色時，假如操作不妥會產(chǎn)生較強背景染色。影響免疫組化染色的因素和對策專家講座第14頁影響免疫組化染色質(zhì)量原因6、顯色劑、復染劑影響不一樣DAB顯色試劑盒、不一樣顯色時間，會對免疫組化染色強度及級別判斷產(chǎn)生影響。蘇木素復染過深、過淺，對比都不清楚。影響免疫組化染色的因素和對策專家講座第15頁DAB顯色恰當GST-π影響免疫組化染色的因素和對策專家講座第16頁DAB顯色恰當CK5/6影響免疫組化染色的因素和對策專家講座第17頁Ki-67影響免疫組化染色的因素和對策專家講座第18頁胸腔積液離心包埋細胞塊免疫組化染色TTF-1CK7影響免疫組化染色的因素和對策專家講座第19頁Calponin影響免疫組化染色的因素和對策專家講座第20頁TOPOⅡ影響免疫組化染色的因素和對策專家講座第21頁CK5/6影響免疫組化染色的因素和對策專家講座第22頁P63影響免疫組化染色的因素和對策專家講座第23頁DAB顯色適當，蘇木素復染過淺影響免疫組化染色的因素和對策專家講座第24頁二、免疫組化染色質(zhì)量控制組織固定1、標本在離體后應馬上浸泡于相當于標本體積8~10倍標準固定液中，大標本要剖開固定。離體后標本固定前存放不得超出30分鐘。2、在實際工作中，就可操作性而言，10%緩沖福爾馬林是兼顧保留組織形態(tài)和抗原性通行、被廣泛接收選擇。3、適度、適時固定。普通而言，大標本只要做到及時切開固定，在室溫下12小時即可到達固定要求；為了適應免疫組化染色標準化需要，標本固定后應及時取材，通常固定時間不得超出24小時。4、到達固定時間要求而不能及時進入脫水程序標本，提議將標本置入70%乙醇中進行暫時保留直至進入組織脫水程序。影響免疫組化染色的因素和對策專家講座第25頁免疫組化染色質(zhì)量控制脫水及制片1、建立嚴格組織脫水試劑規(guī)范化更換制度，確保組織處理質(zhì)量。2、切片厚度普通3~4μm，厚薄均勻、平整，無刀痕、折疊，采取高質(zhì)量防脫載玻片。3、切片在60℃烤箱內(nèi)烤2~3小時，或者70℃烤箱內(nèi)1小時。4、脫蠟要和常規(guī)切片分開，使用單獨二甲苯，假如溫度過低或二甲苯使用次數(shù)較多，可適當延長脫蠟時間。影響免疫組化染色的因素和對策專家講座第26頁免疫組化染色質(zhì)量控制抗原修復抗原修復方式有各種，熱修復普通推薦高壓鍋熱修復法，不過微波修復也有其方便一面。影響抗原修復基本原因是加熱溫度和加熱時間，以及所使用修復液PH值。需要操作者在實際工作中探索總結(jié)，同時要依據(jù)每種抗體詳細要求，找到較適合修復方式?？乖迯颓‘斒欠?，直接關(guān)系到免疫組織化學染色成敗，深入影響最終結(jié)果正確判讀。影響免疫組化染色的因素和對策專家講座第27頁免疫組化染色質(zhì)量控制抗體及檢測系統(tǒng)選擇選擇優(yōu)良抗體和檢測試劑盒，新買抗體要進行敏感性測試，找到最正確抗原修復條件，每次試驗要設置對應陽性和陰性對照。試劑使用一定在其使用期內(nèi)，同時經(jīng)常觀察抗體使用過程中結(jié)果改變，如不理想要及時更換。影響免疫組化染色的因素和對策專家講座第28頁免疫組化染色質(zhì)量控制顯色和復染不要忽略顯色過程，和常規(guī)染色類似，顯色不恰當也會造成染色前功盡棄。不一樣組織、不一樣抗體顯色時間有差異，必要時使用顯微鏡觀察切片顯色效果。蘇木素復染過深過淺都會造成對比不清楚，不利于觀察評價。影響免疫組化染色的因素和對策專家講座第29頁免疫組化染色質(zhì)量控制影響免疫組化染色原因很多。在操作中應重視細節(jié)，