流式細胞儀臨床應用手冊

目錄TOC\o"1-2"\h\z\u第一局部流式細胞術簡介1第二局部流式工程檢測列表4第三局部流式細胞術在各類疾病中的應用7第一章感染性疾病7第二章腫瘤、細胞治療應用9第三章血液系統(tǒng)疾病14第四章器官移植檢測15第五章風濕免疫性疾病16第六章呼吸系統(tǒng)疾病18第七章消化系統(tǒng)疾病20第八章泌尿系統(tǒng)疾病21第九章心腦血管疾病22第十章婦產(chǎn)科及兒科相關疾病24第十一章內(nèi)分泌患者免疫功能檢測26第十二章皮膚科疾病27第一局部流式細胞術簡介1流式細胞術定義流式細胞儀是集激光技術、電子物理技術、光電測量技術、計算機技術以及細胞熒光化學技術、單克隆抗體技術為一體的新型高科技儀器，為生物醫(yī)學與臨床檢驗學開展提供了最強有力的工具。流式細胞分析技術(flowcytometry，F(xiàn)CM)又稱流式細胞術，是20世紀70年代開展起來的一種快速、準確、客觀的檢測技術，它能夠同時檢測快速直線流動狀態(tài)中的單個細胞或微球的多項物理及生物學特性--在極短的時間內(nèi)高速分析上萬個甚至是幾十萬個細胞，并能同時從一個細胞中測得多個參數(shù)，對其加以定性定量分析，還可以對特定群體加以分選。目前，流式細胞術已經(jīng)廣泛用于臨床應用與根底研究，在免疫學、遺傳學、血液學、腫瘤學、細胞生物學、細胞遺傳學、生物化學等醫(yī)學與生命科學所有領域內(nèi)發(fā)揮著重要的作用。2流式細胞儀工作原理制備成單細胞懸液的標本或單個微粒在上樣前進行熒光染色。流式細胞儀檢測到上樣管后，產(chǎn)生一定的氣體壓力將待測樣本壓入流動池。同時鞘液〔不含細胞或微粒的緩沖液〕在儀器產(chǎn)生的高壓作用下從鞘液管噴出，鞘液管入口方向與樣本流形成一定的角度，形成一個圓形的鞘液流，包圍著細胞或微粒高速流動，使待測細胞在鞘液的包裹下單行排列，逐個地通過流式細胞儀的激光聚焦區(qū)〔流動池〕，從而被檢測到，并發(fā)出散射光及熒光等多種光學信號。光學信號通過光電信號轉(zhuǎn)換器及電子信號處理系統(tǒng)采集及分析后，最后以圖形的形式將數(shù)據(jù)結果顯示在電腦屏幕上。3流式細胞儀的主要結構光學系統(tǒng)，液流系統(tǒng)，信號處理及放大系統(tǒng)，計算機系統(tǒng)。4流式細胞儀檢測信號散射光信號：FSSS熒光信號：FL1FL2FL3FL4…5流式結果數(shù)據(jù)分析雙參數(shù)點圖分析雙參數(shù)點圖分析單參數(shù)直方圖分析雙參數(shù)點圖分析雙參數(shù)點圖分析單參數(shù)直方圖分析三維圖分析雙參數(shù)密度圖分析雙參數(shù)等高圖分析三維圖分析雙參數(shù)密度圖分析雙參數(shù)等高圖分析6流式細胞儀檢測樣品可用于流式細胞儀檢測的樣本種類多樣，包括各種細胞〔如外周血、骨髓、細針穿刺、灌洗液、實體組織、懸浮或貼壁培養(yǎng)的細胞〕，微生物，人工合成微球等；血清、血漿、培養(yǎng)上清、細胞裂解液等。如果檢測樣本為實體組織時，我們可以用物理化學〔天然，機械研磨/消化〕等方法將其制備成單細胞懸液5×105－1×107cells/ml，并在上機前用300目篩網(wǎng)過濾。7流式細胞儀檢測范圍細胞結構細胞功能細胞大小細胞外表/胞漿/核的特異性抗原細胞顆粒度細胞活性細胞外表面積細胞內(nèi)/外細胞因子核漿比例酶活性DNA含量和細胞周期激素結合位點RNA含量、蛋白質(zhì)含量細胞受體……蛋白磷酸化鈣離子濃度……第二局部流式工程檢測列表序號工程名稱工程內(nèi)容參考值標本要求1淋巴細胞亞群T細胞亞群EDTA或肝素抗凝全血0.5～1mlT淋巴細胞CD3+72±7%輔助/誘導性T細胞〔Th，Ti〕CD3+CD4+43±9%抑制/殺傷性T細胞〔Ts，Tc〕CD3+CD8+30±9%Th/TsCD4/CD81.42±0.89B淋巴細胞CD3-CD19+11.56±2.54%NK細胞CD3-CD(16+56)+14.91±4.87%2細胞免疫表型CD45RA/CD45ROEDTA或肝素抗凝全血0.5～1ml幼稚/靜止T細胞CD45RA+CD45RO-記憶性T細胞CD45RA-CD45RO+活化T細胞CD45RA+CD45RO+CD3/CD4/CD29輔助性T細胞〔Th〕CD3+CD4+CD29+16.92±5.35%誘導性T細胞(Ti)CD3+CD4+CD29-CD3/CD8/CD28抑制性T細胞〔Ts〕CD3+CD8+CD28-15.99±5.13%殺傷性T細胞〔Tc〕CD3+CD8+CD28+13.22±4.18%調(diào)節(jié)性T細胞CD4+CD25+FOXP3+3淋巴細胞亞群活化程度分析HLA-DR總活化T淋巴細胞靜止T淋巴細胞活化B淋巴細胞CD3+HLA-DR+CD3+HLA-DR-CD3-HLA-DR+3.1±1.3%67.10±11.69%7.42±3.22%EDTA或肝素抗凝全血0.5～1ml活化的輔助性/誘導性T細胞CD4+HLA-DR+活化的抑制性/殺傷性T細胞CD8+HLA-DR+4細胞因子檢測Th1/Th2Th1:IFN-γ18.7±5.03%EDTA或肝素抗凝全血0.5～1mlTh2：IL-42.99±0.72%5HLA-B27檢測HLA-B27/HLA-B7HLA-B27+/HLA-B7-陽性標準：HLA-B27+/HLA-B7-百分比＞80%，同時平均熒光強度＞8.0EDTA或肝素抗凝全血0.5～1ml6造血干細胞造血干細胞相對計數(shù)造血干細胞絕對計數(shù)CD45/CD34CD45/CD34,絕對計數(shù)微球0.58±0.29%EDTA或肝素抗凝全血0.5～1ml7白血病/淋巴瘤免疫分型急性白血病1〕初治AL分型粗分首選根本抗體：CD45、CD10、CD19、CD34、CD13、CD33、CD7、CD117、HLADR、MPO、cCD3、CD79a2〕AL細分推薦選擇抗體：AML：CD15、CD11b、CD64、CD4、CD16、CD41、CD61、CD71、GPA、CD56T-ALL：CD4、CD8、CD3、CD5、CD2、CD1a、CD16、CD56、TdT、αβTCR、γδTCRB-ALL：CD20、CD22、CD38、κ/λ、μEDTA或肝素抗凝骨髓或外周血慢性淋巴增生性疾病〔CLD〕/淋巴瘤First:CD5,CD19,kappa,lamdaCD3,CD20,CD23,CD10,CD45B-cell:CD22,FMC7,CD11c,CD103，CD38,CD25,CD79b,heavychain，(約12-15Ab)T-cell:CD4,CD7,CD8,CD2,CD56，CD16,TCRα/β，TCRγ/δ，(16個Ab)特殊用途:CD30,bcl-2,TdT，CD1a,CD34,CD71EDTA或肝素抗凝骨髓或外周血淋巴瘤組織8T細胞受體TCR系列檢測TCRVβ1-249多藥耐藥基因檢測P糖蛋白檢測CD24310PNH診斷CD55/CD59紅細胞CD55/CD59粒細胞CD55/CD59CD55+＞95%,CD59+＞90%CD55+＞95%,CD59+＞90%EDTA或肝素抗凝全血0.5～1ml11網(wǎng)織紅細胞/網(wǎng)織血小板網(wǎng)織紅細胞網(wǎng)織血小板TO網(wǎng)織紅：0.005～0.024%EDTA或肝素抗凝全血0.5～1ml12血小板相關檢測血小板相關抗體IgA,IgG,IgM枸櫞酸鈉抗凝全血0.5～1ml血小板膜外表糖蛋白CD41/CD42a/CD61血小板活化功能CD61/CD62p/CD6313細胞周期DNA周期和倍體分析DNA分析診斷腫瘤1.出現(xiàn)非整倍體細胞峰，DI>1.1或DI<0.92.無明顯的異倍體，但S期>15%3.無明顯的異倍體，但G0/1的CV>10%，S期在10%-15%4.S+G2/G1/0>20%EDTA或肝素〕抗凝全血〔0.5～1ml〕,胸水、腹水、尿液、灌洗液、穿刺液〔2×106細胞〕，穿刺、活檢各種實體組織〔0.1cm3以上〕14細胞凋亡細胞凋亡檢測AnnexinV/PIAnnexinV/7-AAD第三局部流式細胞術在各類疾病中的應用第一章感染性疾病自有人類以來，就有感染性疾病。感染性疾病又稱“傳染病”，嚴重時甚至可以改變了人類的歷史文明。如十四世紀蒙古帝國的興起，驍勇善戰(zhàn)的騎兵把鼠疫傳播至歐洲，造成歐洲中世紀的黑死病，流行四五百年之久，許多城市因鼠疫流行而荒蕪甚至消失。感染性疾病的治療就是一場病原體與機體免疫系統(tǒng)的戰(zhàn)爭，當感染發(fā)生時，免疫系統(tǒng)的變化往往能很敏感地反映感染的狀態(tài)與程度。因此，對機體免疫系統(tǒng)的檢測有助于對感染的診斷、治療效果的動態(tài)觀察，監(jiān)測藥物療效，判斷疾病的預后。檢測工程及臨床意義1淋巴細胞亞群感染科FCM指標〔外周血〕CD3+CD3+CD4CD3+CD8+CD19+CD3-CD16+56+CD4+/CD8+肝炎↓↓↓↑↓↑慢性丙肝↓↓↓↓↑病毒性中型肝炎↓↓↑↑↓肝硬化↓↓↑↓細胞病毒感染↓↓↓流行性出血熱↓↓↑↑↓↓成人麻疹↓↓↓↓兒童麻疹↓↑↓傳單↑↓↑↓↓↓登革熱↓↓↓乙腦↓↓↑↑HIV感染↓↓↑↓術后CMV感染↓↑↓2細胞免疫表型、淋巴細胞活化程度分析CD45RO+CD45RA+的活化細胞增高；術后感染的評價：術后感染CD3↓、CD4↓、CD8↑、NK↑、HLA-DR↑；鑒別急性/慢性病毒感染，判定抗病毒藥物治療效果：急性感染性疾病及病毒感染進展期，CD45RO記憶性T細胞增高；慢性感染性疾病或接受抗病毒治療后，記憶性T細胞降低。3細胞因子檢測3.1移植術后監(jiān)測：急排Th1↑；3.2細胞外感染：Th2↑；細胞內(nèi)感染：Th1↑；3.3作為過敏性哮喘、過敏性皮炎治療的評價指標：Th2↑；3.4惡性腫瘤：Th2↑；3.5自身免疫?。篢h1↑；3.6耐受：Th2↑；4中性粒細胞CD64抗原檢測正常：中性粒細胞CD64指數(shù)〔中性粒細胞CD64平均熒光強度/淋巴細胞CD64平均熒光強度〕≤1；感染或組織損傷：中性粒細胞CD64指數(shù)＞1。第二章腫瘤、細胞治療應用腫瘤中的應用免疫系統(tǒng)能夠通過免疫機制對腫瘤進行特異性應答和非特異性應答，該過程涉及多種免疫細胞及其分泌的產(chǎn)物,它們相互影響，相互調(diào)節(jié)，相輔相成，共同完成免疫監(jiān)視功能。雖然機體有免疫監(jiān)視機制，但腫瘤仍發(fā)生并持續(xù)開展，原因是腫瘤細胞存在多種免疫逃逸機制。眾多臨床實驗和研究說明，宿主對機體內(nèi)發(fā)生的腫瘤免疫逃逸，表現(xiàn)為特異性的細胞免疫、體液免疫及非特異性免疫低下。眾所周知，機體的細胞免疫由T淋巴細胞介導，體液免疫由B細胞〔CD3-CD19+〕介導，非特異性免疫以NK細胞〔CD3-/CD56+16+〕。T淋巴細胞進一步分為輔助性T淋巴細胞(Th，CD3/CD4)和細胞毒性/抑制性T淋巴細胞(Tc/Ts，CD3/CD8)，Th和Tc對于抗原刺激的應答，輔助性T淋巴細胞分泌細胞因子抑制腫瘤細胞，Ts那么抑制機體免疫功能。所以腫瘤患者的免疫力低下表現(xiàn)為CD3+，CD3+CD4+，CD3-CD56+CD16+，CD19+含量明顯低于正常人，而且CD4/CD8比例倒置。所以了解評估腫瘤患者的免疫狀態(tài)有重要的臨床意義。檢測工程及臨床意義1在腫瘤進展和預后中的意義國內(nèi)外研究說明腫瘤的進展和預后取決于腫瘤細胞的侵潤性與機體免疫功能的變化。所以連續(xù)監(jiān)測腫瘤患者的免疫狀態(tài)是腫瘤患者病程監(jiān)控和預后的重要指標。已有眾多報道乳腺癌、結腸直腸癌、胃癌、肺癌、食管癌等腫瘤，當病程進展、轉(zhuǎn)移或者復發(fā)時機體的T細胞、B細胞、NK細胞整體減低。特別是抑制性免疫細胞比例增加是腫瘤預后的非常重要的指標。GilbertoFilaci報道在結腸癌、胃癌、肺癌、胰腺癌、腎癌、卵巢癌、乳腺癌、頭頸癌等患者中，從T1-T4分級CD8+CD28-Ts細胞明顯增高〔P<0.01〕，而且CD8+CD28-增高程度與患者的生存期明顯相關〔P<0.0001〕，說明CD28分子具有重要的臨床意義。同時SasadaT,IchiharaF,CurielTJ等在胃癌、食管癌、卵巢癌等報道，同樣有抑制作用的CD4+CD25+〔Treg細胞〕增高預示著腫瘤沒有得到控制，患者生存期縮短。也有文獻報道記憶型T淋巴細胞CD4+CD45RO+的表達降低與腫瘤轉(zhuǎn)移相關。2腫瘤治療效果監(jiān)控Hansbrough曾報道腫瘤患者術后第一天CD4減少，CD8增加，CD4/CD8比值下降，術后3-4天免疫細胞水平開始恢復，說明有效的腫瘤切除，解除了腫瘤細胞對機體的免疫抑制，免疫功能增強。臨床可通過術前后連續(xù)監(jiān)測免疫功能來了解術后患者的恢復情況。化療對于腫瘤患者是把雙刃劍。對于惡性腫瘤患者，有效的化療有可能促進腫瘤患者T淋巴細胞功能的恢復，化療后CD3+，CD4+、NK細胞、CD3+HLA-DR+顯著增高，CD4+CD25+，CD8+CD28-降低到達正常水平。但由于個體差異和變化，有的化療會明顯降低機體的免疫力，及時調(diào)整適宜化療方案，或者給于免疫支持，不但可以殺傷腫瘤細胞還可以重塑機體的免疫力，提高患者的生活質(zhì)量。KAZUHIKO研究證明化療后的毒副作用程度〔惡心嘔吐/乏力/食欲不振〕與CD4/CD8比例負相關，同時CD4+CD25+比例正相關，說明化療過程中機體免疫狀態(tài)與生活質(zhì)量息息相關。3細胞因子變化根據(jù)T細胞分泌的細胞因子不同，可分為Th1〔CD4+IFNg+〕和Th2〔CD4+IL4+〕。Th1與細胞免疫相關，Th2與腫瘤體液免疫相關。腫瘤發(fā)生時機體細胞免疫低下，所以多種腫瘤患者體內(nèi)以Th2細胞為主，Th1明顯減少；隨著腫瘤的開展，Th2細胞比例上升；當Th1細胞上升提示免疫體系恢復；Th1細胞下降，Th2升高提示復發(fā)、殘留或轉(zhuǎn)移。切除腫瘤后Th2細胞下降，Th1細胞升高。4細胞周期分析人體正常的體細胞均具有比擬穩(wěn)定的DNA二倍體含量，當人體發(fā)生癌變或具有惡性潛能的癌前病變時，在其發(fā)生、開展過程中可伴隨細胞DNA含量的異常改變。所以DNA非整倍體出現(xiàn)是癌前病變發(fā)生癌變的一個重要指標。對于非整倍體的腫瘤，其惡性程度高，復發(fā)率高，轉(zhuǎn)移率高，預后差；近二倍體和二倍體腫瘤，那么預后較好。DNA診斷腫瘤標準，如下：出現(xiàn)非整倍體細胞峰，DI>1.1或DI<0.9；無明顯的異倍體，但S期>15%；無明顯的異倍體，但G0/1的CV>10%，S期在10%-15%；S+G2/M>20%。臨床意義FCM指標〔外周血〕CD3+CD3+CD4+CD3+CD8+CD3-CD16+56+CD4+CD25+CD8+CD28-CD4+CD45RO+CD3+HLADR+CD4+/CD8+Th1Th2腫瘤進展↓↓↑↓↑↑↓↓↑預后不良↓↓↑↑↑↓復發(fā)轉(zhuǎn)移↓↓↑↓↓↓↓↑有效手術↑↑↓↑↓↓↑↑↓↓有效化療↑↑↓↑↓↓↑↓生活質(zhì)量差↓↓↑↓↑↑↓↓細胞治療應用細胞治療可以利用某些具有特定功能的細胞來治療疾病?，F(xiàn)在細胞治療在造血及免疫系統(tǒng)疾病、腫瘤性疾病、心血管系統(tǒng)疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、肌肉骨骼相關疾病、糖尿病等多種疾病的臨床治療中得到廣泛的應用。特別成為腫瘤輔助治療的重要手段，其中過繼性免疫治療在腫瘤中應用最廣。細胞免疫治療的關鍵是輸注細胞的數(shù)量和質(zhì)量，因而在體外培養(yǎng)出大量、高質(zhì)量的效應細胞成為治療效果。檢測工程及臨床意義1CIK和DC-CIK在腫瘤細胞治療中應用CIK是將人外周血單個核細胞在體外用多種細胞因子〔如抗CD3單克隆抗體、IL-2和IFN-γ等〕共同培養(yǎng)一段時間后獲得的一群異質(zhì)細胞。CIK細胞中的效應細胞是主要來源于CD4-CD8+細胞的CD3+CD56+細胞，兼具有T淋巴細胞強大的抗瘤活性和NK細胞的非MHC限制性殺瘤優(yōu)點。因此，應用CIK細胞被認為是新一代抗腫瘤過繼細胞免疫治療的首選方案。CIK細胞與DC細胞共培養(yǎng)可使CIK細胞獲得更快的增殖速率和更強的抗腫瘤活性，利用DC-CIK免疫治療聯(lián)合放化療及手術治療，有助于減少惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移與復發(fā)，進一步提高臨床療效。CIK/DC-CIKCIK/DC-CIK治療程序治療前病人免疫狀況評價T亞群、NK、DC1、DC2、CD80、CD86評價是患者否適合做，細胞能否培養(yǎng)，評估培養(yǎng)狀態(tài)采集MNCMNC數(shù)目、純度、T亞群、NK、CIK數(shù)目及比例是否到達培養(yǎng)要求、調(diào)節(jié)細胞數(shù)MNC數(shù)目、T亞群、NK、CIK、CD11CDC數(shù)目及比例、CD3、CD8、DC活化狀況培養(yǎng)過程培養(yǎng)是否達標、確定回輸時機回輸后T亞群、NK、CIK、DC1、DC2、DC活化、細胞因子療效評價、監(jiān)測、下次治療的時機FCM檢測工程意義2干細胞治療干細胞作為一類既有自我更新能力、又有多分化潛能的細胞，具有非常重要臨床應用價值，所以現(xiàn)正日益廣泛地用于各種血液病、腫瘤及某些遺傳性疾病的治療。應用最廣泛的是造血干細胞移植，就是給完全喪失造血功能的患者通過中心靜脈輸入造血干細胞，使患者骨髓恢復再造血功能的一種治療方法。主要適用于再生障礙性貧血等造血功能障礙性疾病、急、慢性白血病、惡性淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤等造血系統(tǒng)腫瘤。現(xiàn)在自體造血干移植也用在乳腺癌、卵巢癌、神經(jīng)母細胞瘤等實體腫瘤經(jīng)超大劑量化療后、全身放療后的骨髓功能的重建。在造血干細胞移植過程中，需要根據(jù)移植者的體重來確定移植細胞數(shù)量，而且需要保證移植的干細胞的功能，所以造血干細胞移植前準確定量干細胞數(shù)量和活性非常重要。FCM檢測工程臨床意義CD45+CD34+7AAD-造血干細胞采集、培養(yǎng)過程中監(jiān)測干細胞數(shù)目和活性；移植前根據(jù)體重不同確定輸入數(shù)量CD3+CD8+監(jiān)測移植者免疫狀態(tài),CIK培養(yǎng)過程中監(jiān)測CIK誘導情況CD3+CD4+監(jiān)測移植者免疫狀態(tài),CIK培養(yǎng)過程中監(jiān)測CIK誘導情況CD3+CD56+監(jiān)測移植者免疫狀態(tài),準確知道CIK培養(yǎng)過程中CIK細胞數(shù)量CD11C+骨髓來源DC成熟標志，監(jiān)測誘導分化DC細胞數(shù)量CD80+/CD86+DC活化標志DC1〔髓系DC〕/DC2〔淋巴系DC〕細胞治療前后檢測周血中含量了解免疫狀態(tài)和治療效果第三章血液系統(tǒng)疾病檢測工程及臨床意義1白血病淋巴瘤〔見白血病淋巴瘤病例分析手冊〕2貧血網(wǎng)織紅細胞計數(shù)，評價療效。3血小板減少3.1再生障礙性貧血等：血小板計數(shù)：在血小板<2萬/ul或造血異常導致血小板大小不均勻時，血球計數(shù)儀結果誤差很大，流式計數(shù)最準確；網(wǎng)織血小板計數(shù)：評價療效；ITP：血小板相關抗體檢測，正常為陰性。4出凝血疾病血小板活化：CD62p、CD63>3%提示血小板活化，有凝血傾向。5陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿PNH實驗室診斷金標準，CD55、CD59，正常人陽性表達>95%，患者表達下降或缺失。第四章器官移植檢測檢測工程及臨床意義1骨髓移植CD34+造血干細胞計數(shù)，保證移植所需細胞量。2移植后監(jiān)測2.1排斥反響的評價CD3+/CD25+高于正常5-10%以上，說明即將或已發(fā)生排斥反響；CD4/CD8比值下降提示并發(fā)兇險感染，<0.2%那么必須停用免疫抑制劑；CD3+/HLA-DR+增加5-10%且不伴有CD25+增加提示巨細胞病毒感染；CD4+/CD45RA+及Th17數(shù)量與急性排斥反響嚴重程度正相關；NK細胞〔CD3-CD16+56+〕是參與急性免疫排斥反響的重要效應細胞；Th1〔CD4+INF+〕是介導急慢性免疫排斥反響的主要細胞。排斥反響的調(diào)控Treg〔CD4+CD25+CD127dim〕對移植后急慢性排斥反響起負調(diào)控作用；DC細胞：mDC細胞抑制免疫排斥反響的發(fā)生，pDC通過Treg維持免疫耐受。第五章風濕免疫性疾病風濕免疫系統(tǒng)疾病主要包括風濕病和免疫病。風濕一詞起源于古希臘。公元前4世紀，《希波克拉底全集》有關人體解剖一文中認為：人體的體液由于濕冷而下注于四肢、內(nèi)臟引起疾病，即為風濕。我國《黃帝內(nèi)經(jīng)》(公元前5世紀)也把風寒濕三氣雜合為痹。因為風濕病大多累及關節(jié)而引起疼痛，所以風濕這一詞一直沿用至今，風濕病是一種全身性疾病，主要累及結締組織，大多數(shù)病人有關節(jié)、肌肉的病變。與機體的免疫學異常有關，是屬于自身免疫性疾病。因此，對機體免疫系統(tǒng)的檢測能有效地幫助判斷疾病的發(fā)生及監(jiān)控治療療效，判斷預后。檢測工程及臨床意義1淋巴細胞亞群及絕對計數(shù)疾病FCM指標〔外周血〕CD3+CD3+CD4+CD3+CD8+CD3-CD16+56+CD4+/CD8+自身免疫性疾病SLE↓↓↑類風濕性關節(jié)炎↓↓↑自身免疫性溶血性貧血↓↓↑重癥肌無力↓↓↑免疫缺陷病AIDS↓↓↑↓CD4+T淋巴細胞記數(shù)測定的主要意義：

①用于HIV感染者的疾病分期：凡CD4+T淋巴細胞＜200/μl或CD4+T淋巴細胞的百分比＜14%的HIV感染者可歸入艾滋病。

②判斷HIV感染者的臨床合并癥〔各種時機性感染與CD4+T淋巴細胞的相關性〕，如CD4+T淋巴細胞＜200/μl時，很容易發(fā)生卡氏肺囊蟲肺炎；而巨細胞病毒感染和鳥分支桿菌感染常發(fā)生于CD4+T淋巴細胞＜50/μl的病人，極少見于CD4+T淋巴細胞＞100/μl的病人。

③幫助確定抗HIV藥物治療及時機性感染預防性治療的適應癥，例如，當CD4+T淋巴細胞＜200/μl時，應給予抗卡氏肺囊蟲肺炎的預防性治療。

④抗HIV藥物療效的重要判斷指標。2淋巴細胞免疫表型分析淋巴細胞免疫表型分析聯(lián)合淋巴細胞亞群分析，能更全面的評價細胞免疫狀態(tài)，評估機體的免疫功能，監(jiān)測藥物療效，判斷疾病的預后。如：風濕性關節(jié)炎關節(jié)液中CD4+CD29+細胞增多。多發(fā)性硬化〔MS〕、SLE患者外周血CD4+CD45RA+細胞減少。3HLA-B27檢測HLA-B27是MHCI類抗原，在有核細胞上廣泛表達，其表達與強直性脊柱炎高度相關，在其它血清陰性骨關節(jié)病也有明顯表達。強直性脊柱炎HLA-B27陽性率超過90%Reiter’s綜和癥HLA-B27陽性率為70-90%銀屑病性關節(jié)炎HLA-B27陽性率為50-70%葡萄膜炎HLA-B27陽性率為40-50%第六章呼吸系統(tǒng)疾病T淋巴細胞是抗原特異性淋巴細胞，它不僅具有識別體外多種“非己”抗原和排除抗原能力，且對免疫應答起重要的調(diào)節(jié)作用。重癥肺炎患者T淋巴細胞因大量凋亡而總數(shù)降低，亞群的變化又造成免疫功能的紊亂。且感染因素對患者T細胞活化障礙，機體的細胞免疫功能具有抑制作用，導致機體免疫力下降。因此，檢測T淋巴細胞亞群具有非常重要的臨床意義。支氣管哮喘是以嗜酸粒細胞、Ｔ細胞等多種炎癥細胞在氣道中浸潤為特征的疾病，哮喘患者氣道炎癥的支氣管黏膜活檢標本及支氣管肺泡灌洗液〔BALF〕中Ｔ細胞明顯增加，并以活化Ｔ細胞為主，Ｔ細胞數(shù)量、活化程度與氣道高反響性呈正相關；活化T細胞在外周血增加，氣道炎癥中以Th2細胞增加為主。嗜堿性粒細胞及活化狀態(tài)的檢測，用于快速準確篩選過敏源。檢測工程及臨床意義1淋巴細胞亞群，如下表疾病FCM指標〔外周血〕CD3+CD3+CD4+CD3+CD8+CD19+CD3-CD16+56+CD4+/CD8+兒童反復呼吸道感染↓↓↑↓兒童呼吸道合胞病毒肺炎兒童非呼吸道合胞病毒肺炎↑TH1↑↓↑兒童病毒性肺炎TH1↑↑SARS↓↓↓老年醫(yī)院獲得性肺炎↓↓↓重癥肺炎↓慢性阻塞性肺病↓↑哮喘急性發(fā)作期↑↑↑哮喘緩解期↑↑↑矽肺↓↓↓肺結核↓↓↑↓↓2CD19與CD23用于鑒別支氣管炎與哮喘。3Th1/Th2檢測作為過敏性哮喘、過敏性皮炎治療的評價指標：Th2↑。4CRTH2和CD203c用于鑒定嗜堿性粒細胞5測定肺泡灌洗液中的淋巴細胞表型，可用于鑒別診斷某些肺部疾病疾病CD3+CD4+CD8+CD4+/CD8+結節(jié)病明顯增多明顯增多明顯下降升高特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化(IPF)顯著降低顯著增多明顯降低肺部腫瘤數(shù)目無明顯增多下降第七章消化系統(tǒng)疾病在致病因素作用下，消化系統(tǒng)能否發(fā)生疾病，取決于全身和消化系統(tǒng)本身的防御代償能力，如唾液、胃酸的殺菌作用；消化管的運動及復雜反射動作〔嘔吐、腹瀉〕排除有害因子；大網(wǎng)膜對病原、異物的包裹；隨血液或淋巴液到達肝臟的某些毒物，可通過肝臟解毒后排出等。當致病因子突破了各種防線，對消化系統(tǒng)造成某種損害時，由于人體的免疫反響和感染的病毒數(shù)量與毒力不同，引起病變類型及損傷程度也不同，因而表現(xiàn)為不同的臨床病理類型。淋巴細胞免疫表型分析聯(lián)合淋巴細胞亞群分析，能更全面的評價細胞免疫狀態(tài)，評估機體的免疫功能，監(jiān)測藥物療效，判斷疾病的預后。檢測工程及臨床意義疾病FCM指標〔外周血〕CD3+CD3+CD4+CD3+CD8+CD19+CD3-CD16+56+CD4+/CD8+胃炎合并十二指腸潰瘍↑↓胃炎〔淺表、萎縮、肥厚〕↓↓↑↓大腸癌↓↓↑↑↓膽管癌↓↓↑↓胃癌↓↓↑↓↓食管癌↓↓↑↓↓直腸癌↓↓↑↓↓疣狀胃炎↓↓↑輪狀病毒腸炎↓↑↓潰瘍性結腸炎↓↓↓↓第八章泌尿系統(tǒng)疾病泌尿系統(tǒng)各器官(腎臟、輸尿管、膀胱、尿道)都可發(fā)生疾病，并涉及整個系統(tǒng)。泌尿系統(tǒng)的疾病既可由身體其他系統(tǒng)病變引起，又可影響其他系統(tǒng)甚至全身。其主要表現(xiàn)在泌尿系統(tǒng)本身，如排尿改變、尿的改變、腫塊、疼痛等，但亦可表現(xiàn)在其他方面，如高血壓、水腫、貧血等。泌尿系統(tǒng)疾病的性質(zhì)，多數(shù)和其他系統(tǒng)疾病類似，包括先天性畸形、感染、免疫機制、遺傳、損傷、腫瘤等；但又有其特有的疾病，如腎小球腎炎、尿石癥、腎功能衰竭等。在泌尿科臨床中，必須時刻聯(lián)系全身狀況來考慮問題。淋巴細胞免疫表型分析聯(lián)合淋巴細胞亞群分析，能更全面的評價細胞免疫狀態(tài)，評估機體的免疫功能，監(jiān)測藥物療效，判斷疾病的預后。檢測工程及臨床意義淋巴細胞亞群疾病FCM指標〔外周血〕CD3+CD3+CD4+CD3+CD8+CD19+CD3-CD16+56+CD4+/CD8+泌尿系統(tǒng)感染↓↓↑↑前列腺炎↓↓↓↓慢性腎小球腎炎↓↓↓腎病綜合癥↓↓↑↓出血性腎病綜合癥↓↑↓膜性腎小球腎炎↑↓↓第九章心腦血管疾病1臨床意義心腦血管疾病是是嚴重威脅人類健康的疾病，其死亡率，致殘率是各種病因之首。通過流式細胞儀對一些指標進行測定，可以更早診斷和預防心腦血管疾病的發(fā)生，以及監(jiān)測心腦血管疾病的治療結果，判斷預后有著重要的意義。1.1血小板活化血小板在正常的血液中處于靜息的狀態(tài)，當血管內(nèi)皮損傷或在某些生理或病理因素的作用下，血小板發(fā)生活化反響，導致動脈內(nèi)血栓形成。用流式測定活化血小板膜糖蛋白為評價血小板在體內(nèi)的活化程度提供了準確特異性指標。國內(nèi)外文獻結果顯示，血栓性心腦血管疾病患者比正常人在血小板活化水平有明顯升高，隨著病情加重活化比率有增高趨勢，治療后會降低，但也不會降到和正常人一樣的水平，由于血小板的慢性活化，會成為血栓性疾病復發(fā)的病因。因此，即使臨床病癥緩解后，也要長期服用抗凝藥物。CD62P為血小板活化的特異性指標。1.2循環(huán)內(nèi)皮細胞檢測循環(huán)內(nèi)皮細胞簡稱CEC，是在高血壓，急性心肌堵塞，腫瘤，血栓性疾病等外周血中出現(xiàn)的一種非血液細胞，其形態(tài)類似于血管內(nèi)皮細胞，因此成為循環(huán)內(nèi)皮細胞。CEC的數(shù)量在很多血管損傷性疾病中顯著升高，并與血管內(nèi)皮的損傷的嚴重程度有關，因為被認為是各種血管性疾病內(nèi)皮損傷的標志物。例如，CEC的數(shù)量可作為非ST段抬高的急性心梗的早期，特異性，獨立的診斷標志物，可使早期診斷率明顯提高3%，它還是急性心?；颊哳A后的判斷因素之一。循環(huán)內(nèi)皮細胞的標志CD45-CD31+CD146+。1.3微顆?！瞞icroparticleMP〕檢測微顆粒是細胞在一定條件下(活化刺激或凋亡時),外表產(chǎn)生微小的隆起，最終該細胞外表和局部內(nèi)容物形成獨立的顆粒并脫落下來而形成。微顆粒小于1μm，沒有細胞核，但擁有細胞膜的骨架，表達特異性的外表抗原。與心腦血管疾病有關的微顆粒主要有兩種：血小板微顆?！睵MP〕以及內(nèi)皮微顆粒(EMP)。當發(fā)生心腦血管疾病時，這兩種微顆粒的數(shù)目明顯升高，治療以后其數(shù)目降低，可恢復到正常人水平。PMP的標志是CD31+CD42b-，EMP的標志是CD31+CD42b+。2檢測工程A07790CD62P-FITCCLBThromb/6CE100tests5200,00IM1759UCD62PG1PE(cloneCLBThromb/6)ASR100tests4800,00IM1758CD61G1FITC(cloneSZ21)CE100tests4000,00IM3605CD61-PE(cloneSZ21)CE100tests5600,00IM0649UCD41G1-FITC(cloneP2)ASR100tests3000,00A07781CD41-PE(cloneP2)CE100tests4000,006607116CD41-PC5(cloneP2)RUO100tests6000,006607117CD41-ECD(cloneP2)RUO100tests5600,00A07483CD146(S-Endo)-PE(cloneTEA1/34)RUO100tests12000,00A22364CD146-PC5(cloneTEA1/34)RUO100tests11600,00IM1431UCD31G1-FITC(clone5.6E)ASR100tests6000,00IM2409CD31PE(clone1F11)RUO100tests12400,00A07782CD45-FITCJ33CE100tests3000,00A07783CD45-PEJ33CE100tests4000,00A07784CD45-ECDJ33CE100tests4800,00A07785CD45-PC5J33CE100tests5300,00IM2473CD45APCJ33CE100tests4000,00IM3548CD45PC7J33CE100tests5600,00IM0648UCD42BG1-FITC(cloneSZ2)ASR100tests3600,00IM1417UC