GB∕T 39670-2020 寵物飼料中硝基呋喃類代謝物殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

B46中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)寵物飼料中硝基呋喃類代謝物殘留量的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法L-2020-12-14發(fā)布2021-07-01實(shí)施國家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)ⅠGB／T39670—2020本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任。本標(biāo)準(zhǔn)由全國飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC76)提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中華人民共和國南京海關(guān)、中華人民共和國淮安海關(guān)、江蘇海企長(zhǎng)城股份有限公司、淮陰師范學(xué)院。1GB／T39670—2020寵物飼料中硝基呋喃類代謝物殘留量的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了寵物飼料中硝基呋喃類代謝物(3-氨基-2-唑酮、5-嗎啉甲基-3-氨基-2-唑烷基酮、1-氨基-乙內(nèi)酰脲、氨基脲）殘留量的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于以動(dòng)物源性成分為主要原料制成的寵物飼料中硝基呋喃類代謝物(3-氨基-2-唑酮、5-嗎啉甲基-3-氨基-2-唑烷基酮、1-氨基-乙內(nèi)酰脲、氨基脲）殘留量的測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T20195動(dòng)物飼料試樣的制備3縮略語下列縮略語適用于本文件。AOZ:3-氨基-2-唑酮(3-amino-2-oxalidinone)SEM：氨基脲(semicarbazide)試樣經(jīng)三氯乙酸沉淀蛋白質(zhì)，游離出硝基呋喃類代謝物，在避光條件下用鄰硝基苯甲醛衍生化、乙酸乙酯提取后，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測(cè)，同位素內(nèi)標(biāo)法定量。5試劑或材料除非另有規(guī)定外，僅使用分析純?cè)噭?.1水：GB/T6682,一級(jí)。5.6二甲基亞砜。2GB／T39670—20205.9鄰硝基苯甲醛。(5.6)中?，F(xiàn)用現(xiàn)配。(5.4),用水定容至1000mL。靜置分層后，棄去乙腈層。5.16標(biāo)準(zhǔn)品：AOZ(CAS:80-65-9)、AMOZ(CAS:43056-63-9)、AHD·HCl(CAS:2827-56-7)、SEM·5.18標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：分別準(zhǔn)確稱取適量硝基呋喃類代謝物標(biāo)準(zhǔn)品(5.16),用甲醇(5.5)溶解定容，配制510mL存，有效期為7天。5.21同位素內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備溶液：分別準(zhǔn)確稱取適量硝基呋喃類代謝物同位素內(nèi)標(biāo)(5.17),用甲醇(5.5)溶解下避光保存，有效期為3個(gè)月。5光保存，有效期為7天。6儀器設(shè)備6.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源(ESI)。6.3水浴恒溫振蕩器：37℃±1℃。6.4離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于8000r/min。6.5渦旋混勻器。6.6氮吹儀。3GB／T39670—2020徑篩，混勻裝于密封容器，備用。于密封容器，備用。-18℃8試驗(yàn)步驟54mL558mL8.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備50mL8.4.1液相色譜參考條件流動(dòng)相：A：乙腈(5.2),B：乙酸銨緩沖溶液(5.13),梯度洗脫程序見表1。表1梯度洗脫程序時(shí)間/minA/%B/%5504GB／T39670—20208.4.2質(zhì)譜參考條件電離方式：電噴霧電離，正離子模式(ESI+);檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM);電噴霧電(IS)壓：5500V;離子源溫度(TEM):500℃;碰撞室出口電壓(CXP):6V。多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)離子對(duì)、駐留時(shí)間、去簇電壓和碰撞能量見表2。表2硝基呋喃代謝物及內(nèi)標(biāo)的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）離子對(duì)、駐留時(shí)間、去簇電壓及碰撞能量的參考值被測(cè)物名稱≈)駐留時(shí)間/ms去簇電壓(DP)/V碰撞能量(CE)/VAOZ236.0>104.1AMOZAHDSEM209.0>192.2D4-AOZ240.1>134.1D5-AMOZ252.0>134.1212.0>168.1a為定量離子。8.4.3標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和試樣溶液測(cè)定在儀器的最佳條件下，分別取標(biāo)準(zhǔn)系列溶液(8.3)和試樣溶液(8.2)上機(jī)測(cè)定。硝基呋喃類代謝物標(biāo)準(zhǔn)溶液的定量離子色譜圖參見附錄A。之內(nèi)。根據(jù)表2選擇的定性離子對(duì)，比較試樣譜圖中硝基呋喃類代謝物定性離子的相對(duì)離子豐度與濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中對(duì)應(yīng)的定性離子的相對(duì)離子豐度，若偏差不超過表3規(guī)定的范圍，則可判定為樣品中存在對(duì)應(yīng)的硝基呋喃類代謝物。5GB／T39670—2020表3定性測(cè)定時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差%>50>20~50>10~20≤10%±20±25±30±50以硝基呋喃類代謝物的濃度為橫坐標(biāo)，硝基呋喃類代謝物和內(nèi)標(biāo)峰面積比值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)應(yīng)不低于0.99。試樣溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液中硝基呋喃類代謝物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍內(nèi)，如超出范圍，應(yīng)重新試驗(yàn)或?qū)⒃嚇尤芤汉蜆?biāo)準(zhǔn)系列溶液做相應(yīng)稀釋后重新測(cè)定。9試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理計(jì)算：式中：A—試樣溶液中硝基呋喃類代謝物的峰面積；′sAis—試樣溶液中硝基呋喃類代謝物同位素內(nèi)標(biāo)的峰面積；As—標(biāo)準(zhǔn)溶液中硝基呋喃類代謝物的峰面積；′測(cè)定結(jié)果以平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，保留3位有效數(shù)字。10精密度6GB／T39670—2020附錄A（資料性附錄）硝基呋喃類代謝物標(biāo)準(zhǔn)溶