病原微生物評估綜合報告

病原微生物風險評定匯報模板1、生物風險評定依據(jù)1）病原微生物試驗室生物安全管理條例2）試驗室生物安全通用要求3）人間傳染病原微生物名目4）WHO試驗室生物安全手冊2、生物風險評定要素1）病原微生物特征；2）病原微生物相關(guān)試驗活動；3）試驗活感人員；4）試驗活動設(shè)施、設(shè)備和環(huán)境；5）風險認定和評定結(jié)論。3生物風險評定實施3.1病原微生物特征評定1）通常生物學特征：病原微生物起源、基因組及編碼、產(chǎn)物形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、細菌或病毒屬別和型別內(nèi)容或技術(shù)判定。2）致病性：臨床癥狀、潛伏期、病程、感染劑量、入侵部位、宿主類型、否產(chǎn)生毒素等。3）感染路徑：呼吸道、消化道、血液、媒介、皮膚感染等。4）環(huán)境中穩(wěn)定性：是指其抵御外界環(huán)境存活能力，不一樣微生物穩(wěn)定性不一樣，對病原微生物穩(wěn)定性評定除考慮其在自然界中穩(wěn)定性外，還應(yīng)考慮其對物理原因和化學消毒劑敏感性。5）致病性和感染劑量：不一樣病原致病性不一樣，即使同類病原不一樣菌（毒）株也有不一樣強度致病力；另微生物致病性和被感染者免疫狀態(tài)、易感性相關(guān)；暴露后果取決于病原微生物致病性和機體抵御力；不一樣屬、種、亞種、型病原微生物，甚至不一樣株病原微生物，其致病性各異；還取決于所感染病原微生物劑量，當大量病原微生物侵襲人體時，潛伏期通常較短，而病情則較為嚴重；不一樣個體被傳染后，可產(chǎn)生多種不一樣結(jié)局。6）傳輸路徑：傳輸方法包含呼吸道傳輸、經(jīng)過水和食物等消化道傳輸、接觸傳輸、血液傳輸、母嬰垂直傳輸、媒介傳輸?shù)?；傳輸結(jié)果包含一個病原可有多個傳輸路徑和多個病原能夠引發(fā)相同癥狀。7）試驗動物研究、試驗室感染。8）有效預(yù)防和診療方法：有效藥品、有效疫苗、疾病監(jiān)測手段、有效預(yù)防控制方法手段。3.2病原微生物試驗活動評定1）試驗活動：是指試驗室從事和人病原微生物菌（毒）種、樣本相關(guān)研究、教學培訓、檢測等活動。2）試驗活動類型包含：標本或樣品處理、離心、勻漿、超聲、移液操作、銳器使用、生物安全柜使用、醫(yī)療廢物消毒或高壓滅菌處理等。3）試驗活動風險影響原因：3a.氣溶膠產(chǎn)生：離心、旋轉(zhuǎn)、勻漿、接種環(huán)等。b.潛在傷害：注射器等銳器、酒精燈、玻璃器皿等。c.標本濃縮：來自臨床、現(xiàn)場、培養(yǎng)、濃縮等。d.毒株和細胞：野毒、減毒、疫苗株、毒素產(chǎn)生等。e.操作指導書。4)病原微生物動物試驗風險原因a.標準試驗室廢棄物處理程序。b.化學消毒劑選擇、配置和使用。c.物理消毒設(shè)備使用和維護。d.多種試驗材料、器具，尤其是銳器處理。e.動物試驗動物及其排泄物處理。5)廢棄物處理風險影響原因:a.標準試驗室廢棄物處理程序。b.化學消毒劑選擇、配置和使用。c.物理消毒設(shè)備使用和維護。d.多種試驗材料、器具，尤其是銳器處理。e.動物試驗動物及其排泄物處理。3.3試驗活感人員要求評定1）健康情況和健康歷史、耐藥和過敏。2）人員資質(zhì)和心里素質(zhì)。3）生物安全知識。4）微生物學專業(yè)知識。5）操作設(shè)施設(shè)備技能。6）免疫情況。7）培訓情況。8）應(yīng)急事件處理能力。3.4設(shè)施、環(huán)境和設(shè)備原因要求評定1）生物安全試驗室對應(yīng)等級設(shè)施。2）試驗室生物安全設(shè)備。3）試驗室檢測相關(guān)設(shè)備。4）應(yīng)急設(shè)施。5）設(shè)施設(shè)備管理、維護、校準和檢驗。3.5風險評定結(jié)論（降低風險方法）：1）病原微生物風險分類2）試驗活動和對應(yīng)設(shè)施設(shè)備要求3）個人防護裝備要求4）人員生物安全和專業(yè)技術(shù)資質(zhì)要求5）人員健康和素質(zhì)要求6）預(yù)防和診療方法要求7）菌（毒）種和試驗活動等風險管理要求8）應(yīng)急預(yù)案和方法要求4、生物安全委員會負責審核病原微生物風險評定匯報適宜性和科學性，并做出評定結(jié)論。生物因子生物危害評定匯報模板***菌危害評定匯報一、危害程度分類(一)分類等級(二)不一樣試驗操作生物安全試驗室等級要求二、背景資料(一)通常生物學特征1．形態(tài)染色2．培養(yǎng)特征(二)在外界環(huán)境穩(wěn)定性1．在自然環(huán)境中穩(wěn)定性和對溫度敏感性2．對日光和紫外線敏感性3．對化學因子敏感性(三)致病性和感染數(shù)量(四)傳輸路徑及暴露后果1．傳輸路徑2．暴露后后果(五)***菌宿主范圍(六)***菌預(yù)防、診療和診療1．預(yù)防2．診療3．診療三、試驗室試驗活動及其危險性和預(yù)防方法(一)試驗室試驗活動背景資料1．試驗活動內(nèi)容2．試驗包含***菌菌毒種背景資料3．試驗室***菌感染動物和培養(yǎng)物最高存量(二)可能造成不良后果原因和預(yù)防方法1．試驗樣品接收和開啟擬采取防護方法：2．試驗樣品涂片擬采取防護方法：3．***菌接種培養(yǎng)擬采取防護方法：4．***菌培養(yǎng)物和動物器官細菌再分離樣品制備擬采取防護方法：5．試驗樣品研磨6．***菌攻擊擬采取防護方法：7．感染動物喂養(yǎng)8．感染動物解剖9．動物血清標本和未經(jīng)滅活組織標本采集10．病理觀察用組織標本采集11．試驗儀器設(shè)備12試驗動物病原微生物潛伏感染13．培養(yǎng)物和試驗廢棄物銷毀14．室內(nèi)空氣、試驗用具和操作臺面污染15．菌種和培養(yǎng)物保藏(三)試驗室試驗活動危害評定四、工作人員素質(zhì)五、評定結(jié)論附表***菌試驗室試驗活動風險評定***試驗室工作人員個人素質(zhì)評價表金黃色葡萄球菌生物危害評定匯報一、金黃色葡萄球菌傳輸和致病

金黃色葡萄球菌在自然界中無處不在，在空氣、水、灰塵及人和動物排泄物中全部可找到。所以，食品受其污染機會很多。金黃色葡萄球菌腸毒素是個世界性衛(wèi)生問題，在美國由金黃色葡萄球菌腸毒素引發(fā)食物中毒占整個細菌性食物中毒33%，加拿大則更多，占45%，中國每十二個月發(fā)生這類中毒事件也很多。

金黃色葡萄球菌流行病學通常有以下特點：季節(jié)分布，多見于春夏季；中毒食品種類多，如奶、肉、蛋、魚及其制品。另外，剩飯、油煎蛋、糯米糕及涼粉等引發(fā)中毒事件也有報道；上呼吸道感染患者鼻腔帶菌率83%，所以人畜化膿性感染部位常成為污染源。

通常說，金黃色葡萄球菌可經(jīng)過以下路徑污染食品：食品加工人員、炊事員或銷售人員帶菌，造成食品污染；食品在加工前本身帶菌，或在加工過程中受到了污染，產(chǎn)生了腸毒素，引發(fā)食物中毒；熟食制品包裝不嚴，運輸過程受到污染；奶?；蓟撔匀橄傺谆蚯菪缶植炕摃r，對肉體其它部位污染。

而腸毒素形成條件包含：存放溫度，在37℃內(nèi)，溫度越高，產(chǎn)毒時間越短；存放地點，通風不良氧分壓低易形成腸毒素；食物種類，含蛋白質(zhì)豐富，水分多，同時含一定量淀粉食物，腸毒素易生成。

金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見病原菌，可引發(fā)局部化膿感染，也可引發(fā)肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。

葡萄球菌性菌血癥可發(fā)生于任何和血管內(nèi)導管或其它異物相關(guān)不足葡萄球菌膿腫或感染,它是嚴重燒傷病人死亡常見原因。連續(xù)性發(fā)燒常見,而且可伴有休克。

葡萄球菌性心內(nèi)膜炎尤其好發(fā)于靜脈注射給藥者和裝有些人工心臟瓣膜病人。忽然出現(xiàn)心臟雜音,膿毒性栓子和其它經(jīng)典體征便可作出可疑診療,確診需依據(jù)超聲心動圖和血培養(yǎng)。

葡萄球菌性骨髓炎關(guān)鍵見于兒童,可引發(fā)寒戰(zhàn),發(fā)燒和受累骨疼痛,繼之出現(xiàn)紅腫。關(guān)節(jié)周圍感染常引發(fā)關(guān)節(jié)積液,提醒為化膿性關(guān)節(jié)炎而不是骨髓炎。白細胞計數(shù)常＞15000/μl而且血培養(yǎng)常陽性。X線改變在10~14日內(nèi)不顯著,骨質(zhì)疏松和骨皮質(zhì)反應(yīng)甚至更長時間仍不能測出,而放射性核素骨掃描則常能較早出現(xiàn)異常。

現(xiàn)在葡萄球菌性小腸結(jié)腸炎很罕見,但若住院病人出現(xiàn)發(fā)燒,腸梗阻,腹痛和腹脹,低血壓或腹瀉,尤其是新近作過腹部手術(shù)或接收過抗生素者,可提醒本病。若糞便鏡檢發(fā)覺大片嗜中性白細胞和革蘭氏陽性球菌,則可能作出診療,但必需排除產(chǎn)毒性艱苦梭狀芽胞桿菌感染,這是抗生素相關(guān)性結(jié)腸炎最常見原因。

金黃色葡萄球菌致病力強弱關(guān)鍵取決于其產(chǎn)生毒素和侵襲性酶：a.溶血毒素：外毒素，分α、β、γ、δ四種，能損傷血小板，破壞溶酶體，引發(fā)肌體局部缺血和壞死；b.殺白細胞素：可破壞人白細胞和巨噬細胞；c.血漿凝固酶：當金黃色葡萄球菌侵入人體時，該酶使血液或血漿中纖維蛋白沉積于菌體表面或凝固，阻礙吞噬細胞吞噬作用。葡萄球菌形成感染易局部化和此酶相關(guān)；d.脫氧核糖核酸酶：金黃色葡萄球菌產(chǎn)生脫氧核糖核酸酶能耐受高溫，可用來作為依據(jù)判定金黃色葡萄球菌；e.腸毒素：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生數(shù)種引發(fā)急性胃腸炎蛋白質(zhì)性腸毒素，分為A、B、C、D、E及F五種血清型。腸毒素可耐受100°C煮沸30分鐘而不被破壞。它引發(fā)食物中毒癥狀是嘔吐和腹瀉。另外，金黃色葡萄球菌還產(chǎn)生溶表皮素、明膠酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。

二、金黃色葡萄球菌生物學特征

經(jīng)典金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8μm左右，顯微鏡下呈單個、成雙和排列成葡萄串狀。金黃色葡萄球菌屬于葡萄球菌屬，無芽胞、鞭毛，大多數(shù)無莢膜，革蘭氏染色陽性衰老、死亡和被白細胞吞噬后菌體革蘭染色呈陰性。金黃色葡萄球菌營養(yǎng)要求不高，在一般培養(yǎng)基上生長良好，需氧或兼性厭氧，最適生長溫度35~37℃、最適生長pH7.4~7.6。

金黃色葡萄球菌有高度耐鹽性，可在10-15%NaCl肉湯中生長。可分解葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅反應(yīng)陽性，VP反應(yīng)弱陽性。很多菌株可分解精氨酸，水解尿素，還原硝酸鹽，液化明膠。

金黃色葡萄球菌含有較強抵御力，對磺胺類藥品敏感性低，但對青霉素、紅霉素等高度敏感。

三、金黃色葡萄球菌檢測和診療

1.標本采集采自不一樣感染部位多種標本，包含血液、腦脊液、穿刺液；痰液、膿液、創(chuàng)傷分泌物、尿液、糞便和嘔吐物等。

2.直接涂片鏡檢直接涂片檢驗在正常情況下呈無菌狀態(tài)體液標本如血液、腦脊液、穿刺液等，若有檢出革蘭氏陽性，顯微鏡下呈葡萄狀排列、無芽胞、莢膜，直徑0.5-1μm球菌。即含相關(guān)鍵臨床價值。

3.分離培養(yǎng)能夠選擇一般營養(yǎng)瓊脂平板、血平板和高鹽甘露醇平板，血平板用葡萄糖肉湯增菌培養(yǎng)基。該菌在一般肉湯中呈均勻快速混濁生長；若接種于瓊脂平板上35℃過夜后可形成直徑約2~3mm厚菌落、濕潤有光澤、呈金黃色不透明圓形凸起。若接種于血平板，菌落周圍可形成顯著透明β—溶血環(huán)。在高甘露醇平板上金黃色葡萄球菌生成淡橙黃色菌落，以此可和其它凝固酶陰性葡萄球菌相判別。

4.判別試驗

（1）血漿凝固酶試驗：血漿凝固酶是金黃色葡萄球菌所產(chǎn)生，和其致病力相關(guān)一個侵襲性酶，其作用是使血漿中纖維蛋白在菌體表面沉積和凝固以阻礙吞噬細胞吞噬。血漿凝固酶分為結(jié)合型和游離型。前者結(jié)合在細菌細胞壁上，能直接作用于血漿中纖維蛋白原，使之轉(zhuǎn)化為纖維蛋白，圍繞菌體而形成凝塊。而游離型血漿凝固酶則在產(chǎn)生后被分泌到菌體外，不能直接作用于纖維蛋白原，但能夠激活血漿凝血酶原，使之轉(zhuǎn)化成凝血酶，后者再作用于纖維蛋白原使其轉(zhuǎn)化為纖維蛋白。具體測量方法也所以分為玻片法和試管法兩種。

玻片法:將待試菌落乳化于玻片上鹽水中，經(jīng)10~20S證實無自凝后，用接種環(huán)取人或兔血漿一環(huán)，和乳化菌液混合，出現(xiàn)凝集者為陽性，另設(shè)生理鹽水為陰性對照。

試管法:吸收0.5mL兔血漿和0.5mL金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯二十四小時培養(yǎng)物充足混勻，置37℃培養(yǎng)，每隔半小時觀察一次，連續(xù)觀察6小時，出現(xiàn)凝固，立即小試管傾斜或倒置時，內(nèi)容物不流動，判為陽性。

（2）耐熱核酸酶試驗：將二十四小時肉湯培養(yǎng)物沸水浴處理15min，用接種環(huán)劃線刺種于甲苯胺蘭-DNA平板，35℃培養(yǎng)二十四小時，在刺種線周圍出現(xiàn)淡粉色者為陽性。本試驗金黃色葡萄球菌為陽性。

（3）甘露醇發(fā)酵試驗金黃色葡萄球菌可發(fā)酵甘露醇。

（4）Staphaurex膠乳凝集試驗是判定金黃色葡萄球菌一個快速、簡便商品化直接凝集試驗。其基礎(chǔ)原理是在紙片上滴加包被有纖維蛋白原和IgG抗體聚苯乙烯膠乳，然后用接種環(huán)挑取待判定菌株新鮮培養(yǎng)物加入混勻，若出現(xiàn)凝集塊現(xiàn)象即為陽性。

5.生化判定如上述，注意和其它凝固酶陽性葡萄球菌判別關(guān)鍵點：PYR（吡咯烷酮-β-萘基酰胺試驗陰性；VP試驗陽性；鳥氨酸脫羧酶試驗陰性。

6.免疫學方法用酶聯(lián)免疫吸附試驗和對流免疫電泳方法可檢測金葡菌磷壁酸抗體。

7.分子生物學方法包含PFGE脈沖場凝膠電泳和酶切圖譜分析等。

四、金黃色葡萄球菌防治及生物安全防護

一、細菌防治

金黃色葡萄球菌控制關(guān)鍵包含：

1）預(yù)防金黃色葡萄球菌污染食品，預(yù)防帶菌人群對多種食物污染：定時對生產(chǎn)加工人員進行健康檢驗，患局部化膿性感染（如疥瘡、手指化膿等）、上呼吸道感染（如鼻竇炎、化膿性肺炎、口腔疾病等）人員要臨時停止其工作或調(diào)換崗位。預(yù)防金黃色葡萄球菌對奶及其制品污染：如牛奶廠要定時檢驗?zāi)膛Ｈ榉?，不能擠用患化膿性乳腺炎牛奶；奶擠出后，要快速冷至-10℃以下，以防毒素生成、細菌繁殖。奶制品要以消毒牛奶為原料，注意低溫保留。對肉制品加工廠，患局部化膿感染禽、畜尸體應(yīng)除去病變部位，經(jīng)高溫或其它合適方法處理后進行加工生產(chǎn)。

2）預(yù)防金黃色葡萄球菌腸毒素生成應(yīng)在低溫和通風良好條件下貯藏食物，以防腸毒素形成；在氣溫高春夏季，食物置冷藏或通風陰涼地方也不應(yīng)超出6小時，而且食用前要根本加熱。

3）無菌方法(如檢驗病人前后根本洗手和消毒適用器械)至關(guān)關(guān)鍵。已被感染病人應(yīng)和其它易感病人隔離,患有活動性葡萄球菌感染,即使是局部性感染(如癤)醫(yī)護人員,在其感染治愈前不得接觸病人或器械。無癥狀鼻腔帶菌者,除非所帶菌株十分危險或被懷疑為暴發(fā)流行傳染源,通常無須隔離。

診療包含膿腫引流,抗生素(重癥病人需腸外給藥)和全身支持療法。培養(yǎng)標本應(yīng)在開始診療前或更換抗生素之前獲取?？股剡x擇和劑量取決于感染部位,疾病嚴重程度和細菌對藥品敏感性。

醫(yī)院取得葡萄球菌和大多數(shù)小區(qū)取得菌株,通常對青霉素G,氨芐青霉素和抗假單胞菌青霉素有耐藥性。大多數(shù)菌株對耐青霉素酶青霉素(甲氧苯青霉素,苯甲異噁唑青霉素,乙氧萘青霉素,鄰氯青霉素,雙氯青霉素),頭孢菌素(頭孢菌素Ⅰ,頭孢唑啉,頭孢菌素Ⅳ,頭孢拉定,頭孢羥唑,頭孢西丁和第三代頭孢菌素),卡巴培南類(亞胺培南,美羅匹寧),慶大霉素,萬古霉素,替考拉寧,林可霉素和氯林可霉素,是敏感。

即使頭孢菌素和萬古霉素全部有效,但通常首選一個耐青霉素酶青霉素。很多葡萄球菌菌株對紅霉素,四環(huán)素類藥品,氨基糖苷類,桿菌肽和氯霉素也敏感,但因有愈加好更安全藥可用,故極少使用氯霉素和桿菌肽。

現(xiàn)在耐甲氧苯青霉素金黃色葡萄球菌(MRSA)菌株日益增多，這種細菌雖可從小區(qū)取得感染病人中分離得到,但多數(shù)是從感染靜脈吸毒者和重癥監(jiān)護室病人中分離取得。MRSA菌株通常對耐β-內(nèi)酰胺酶青霉素,頭孢菌素和卡巴培南類有耐藥性。這些細菌對氨基糖苷類和大環(huán)內(nèi)酯類(紅霉素,克拉霉素,阿齊霉素,林可霉素和氯林可霉素)耐藥性也很普遍。

即使亞胺培南-西拉司丁或喹諾酮類對一些MRSA感染是有效,但靜脈注射萬古霉素為首選。腎功效正常成人通用劑量是每6小時靜脈注射500mg或每12小時靜滴注1000mg,最少在1小時內(nèi)滴完。腎功效受損時,劑量應(yīng)依據(jù)血清中藥品濃度加以調(diào)整,療程視感染部位及病人反應(yīng)而定,但通常為2~4周。一些嚴重或有并發(fā)癥感染,可能需要靜脈給藥診療6~8周,然后再口服診療1個月或更長時間。

可用于替換萬古霉素診療MRSA感染藥品有：TMP-SMZ,成人劑量為TMP10~15mg/(kg.d)加SMZ50~75mg/(kg.d),分劑口服或腸外給藥,每次間隔8小時或12小時,連續(xù)2~4周；利福平(600mg/d)口服或腸外給藥；腸外給亞胺培南-西拉司丁(500mg每6小時1次)或美羅匹寧(0.5~1.0g每8小時1次。但利福平不要單獨應(yīng)用,因為細菌很易產(chǎn)生抗藥性。在診療異物相關(guān)性MRSA感染或漿膜腔MRSA感染時,利福平和氨基糖苷類是有用輔助藥品。鄰氯青霉素,雙氯青霉素,TMP-SMZ,環(huán)丙沙星及局部用莫匹羅星(mupirocin)可用于診療MRSA帶菌狀態(tài),但MRSA對這些藥品可產(chǎn)生抗藥性?？谷f古霉素腸球菌(VRE)菌株流行日益增加,這種菌株在試驗室中可將引發(fā)抗萬古霉素基因轉(zhuǎn)為凝固酶陽性金黃色葡萄球菌菌株,而在感染病人中則轉(zhuǎn)變?yōu)槟堂戈幮云咸亚蚓蛛x株?？墒沁@些葡萄球菌很輕易對診療這類感染其它藥品產(chǎn)生抗藥性。桿菌肽,若有話,可試用于診療抗萬古霉素葡萄球菌感染。對這些病人應(yīng)嚴格隔離,以防她們細菌傳輸。

二、細菌生物安全防護

依據(jù)《病原微生物生物試驗室生物安全管理條例》中相關(guān)要求，人間傳輸微生物名目（待頒布）金黃色葡萄球菌屬于三類，BSL-2。相關(guān)防護事宜包含：

（1）操作要求

1、試驗時，未經(jīng)試驗室主任同意，限制或嚴禁進入試驗室。

2、不許在工作區(qū)域飲食、吸煙、清洗隱型眼鏡和化妝。食物應(yīng)存放在工作區(qū)域以外專用櫥柜或冰箱中。

3、全部操作過程應(yīng)盡可能細心，避免產(chǎn)生和濺出氣溶膠。

4、對于污染銳器，必需時刻保持高度警惕，包含針、注射器、玻片、加樣器等。

5、注射和吸收感染材料時，只能使用針頭固定注射器或一次性注射器（即注射器和針頭是一體）。用過一次性針頭必需彎曲、切斷、破碎、重新套上針頭套、從一次性注射器上去掉，或在丟棄前進行人工處理，要不將之小心放入不會被刺穿、用于搜集廢棄銳器容器中。非一次性銳器必需放置在堅壁容器中，轉(zhuǎn)移至處理區(qū)消毒，最好高壓殺菌。

6、打壞器皿不能直接用手處理，必需用其它工具處理，如刷子和簸箕、夾子或鑷子。盛污染針頭、銳器、碎玻璃容器在倒掉前，應(yīng)按攝影關(guān)要求進行消毒。

7、全部培養(yǎng)物、儲存物及其它要求廢物在釋放前，均應(yīng)使用可行消毒方法進行消毒，如高壓滅菌。轉(zhuǎn)移到就近試驗室消毒物料應(yīng)置于耐用、防漏容器內(nèi)，密封運出試驗室。離開該系統(tǒng)進行消毒物料，在轉(zhuǎn)移前應(yīng)包裝，其包裝應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)。

8、濺出或偶然事件中，顯著暴露于傳染源時，要立即向試驗室主任匯報。進行合適醫(yī)學評定、觀察、診療，保留書面統(tǒng)計。

9、按日常程序、在相關(guān)傳染源工作結(jié)束后、尤其是傳染源濺出或灑出后、或受到其它傳染源污染后，試驗室設(shè)備和工作臺面應(yīng)該使用有效消毒劑消毒。污染設(shè)備在送去修理、維護前，要按攝影關(guān)要求消毒；在離開設(shè)施轉(zhuǎn)移前，要按攝影關(guān)要求打包運輸。

（2）安全設(shè)備

1、正確使用和保養(yǎng)生物安全柜、最好是二級生物安全柜、或其它適宜人員防護設(shè)施、或物理遏制裝置。

2、確定可能形成傳染性氣溶膠或濺出物試驗過程，包含離心、研磨、勻漿、猛烈震蕩或混勻、超聲波破裂、開啟裝有傳染源容器、采集感染標本等。

3、包含高濃度或大致積傳染源時，若選擇密封轉(zhuǎn)頭或帶安全罩離心機，若轉(zhuǎn)頭或安全罩僅在生物安全柜中打開，則可在開放試驗室內(nèi)離心。

4、當必需在生物安全柜外處理標本時，需采取面部保護方法（跟鏡、口罩、面罩、或其它防濺裝置），以免傳染源或其它有害物濺或灑到面上。

5、在試驗室內(nèi)，必需使用專用防護性外衣、大褂、罩衫或制服。人員到非試驗室區(qū)域時，防護服必需留在試驗室內(nèi)。防護服能夠在試驗室內(nèi)處理，也能夠在洗衣房中洗滌，但不能帶回家中。

6、可能接觸潛在傳染源、被污染表面或設(shè)備時，要戴手套。一次性手套不用清洗、不能反復(fù)使用，不能用于接觸“潔凈”表面（鍵盤、電話等），也不應(yīng)該戴著到試驗室外。要備有帶滑石粉乳膠手套。脫掉手套后，要洗手。\o"評分0"淋病奈瑟菌生物危害評定匯報

一、淋病奈瑟菌傳輸和致病

淋病奈瑟菌又稱淋球菌，是淋病病原菌，人類是本菌唯一天然宿主和傳染源。淋病是淋菌性尿道炎簡稱，是由淋球菌引發(fā)泌尿生殖系統(tǒng)化膿性炎性疾病，它是人類很古老，也是目前世界范圍內(nèi)流行很廣泛一個性傳輸疾病。

淋病患者是關(guān)鍵傳染源，有癥狀或無癥狀患者均可經(jīng)過性接觸傳輸，其中輕癥或無癥狀淋病患者是關(guān)鍵傳染源。其傳輸路徑關(guān)鍵包含性交傳染，還可經(jīng)過非性接觸傳輸，如經(jīng)過接觸患者分泌物污染用具（衣褲、床上用具、毛巾、浴盆、馬桶等）間接感染；孕婦淋病患者當羊膜破裂，可繼發(fā)羊膜腔內(nèi)及胎兒感染；新生兒經(jīng)過患淋病母體產(chǎn)道時常可引發(fā)淋菌性眼炎；另外尚可經(jīng)過醫(yī)護人員手和器具引發(fā)醫(yī)源性感染。

本病最初多侵犯尿道、宮頸內(nèi)膜，繼而可波及前列腺、精囊、副睪、子宮內(nèi)膜及輸卵管。有時肛門、直腸、咽粘膜、眼結(jié)膜也可受染。尚可經(jīng)血行播散引發(fā)菌血癥、關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎及腦膜炎，可引發(fā)死亡或不育、不孕、失明及尿道狹窄等后果。因為本病潛伏期短、傳染性強、后果嚴重，所以它是中國目前關(guān)鍵防治性病之一。

二、淋病奈瑟菌生物學特征

淋病奈瑟菌屬奈瑟菌屬，鏡下呈腎形，常成雙排列，鄰近面扁平或稍凹，像兩瓣黃豆對在一起，大小0.6μm×0.8μm。革蘭氏染色陰性，呈粉紅色，美藍染色呈藍色。急性炎癥期細菌多在患者分泌物少部分中性粒細胞胞漿中，慢性期則多在細胞外，且有些可呈單個球形或四聯(lián)狀。人工培養(yǎng)后形態(tài)亦常呈球形、單個、成雙或四聯(lián)排列。

淋球菌適于潮濕（相對溫度80％～85％）、溫暖（35.5℃～36.5℃）、中性偏堿（pH7.2～7.6）、含5％～10％二氧化碳條件下生長。最怕干燥，在完全干燥環(huán)境下只能存活1～2小時，對溫度改變敏感，超出38℃或低于30℃則不能生長，在培養(yǎng)基上室溫放置1～2天即可死亡，在39℃存活13小時，42℃存活15分鐘，50℃存活5分鐘。如在不完全干燥衣褲、被褥、毛巾、玩具上則可存活18～二十四小時。通常消毒劑輕易將它殺滅，在1:4000硝酸銀溶液中7分鐘死亡，1％石炭酸溶液中3分鐘內(nèi)死亡。

淋球菌較為嬌嫩，酶系統(tǒng)不完整，初代培養(yǎng)一般培養(yǎng)基不易成功，需在含有動物蛋白培養(yǎng)基上，且含有二氧化碳條件下才能生長。淋球菌在血瓊脂培養(yǎng)基孵育二十四小時后，可形成直徑0.5～1mm圓形稍隆起，濕潤光滑，半透明，邊緣呈花瓣狀，有粘性露滴狀菌。

淋球菌生化反應(yīng)不發(fā)達，只分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不分解麥芽糖及蔗糖。藉助上述生化特征亦可和腦膜炎球菌及其它奈瑟菌相判別。淋球菌能產(chǎn)生氧化酶和過氧化氫酶，在診療上有一定意義。

三、淋病奈瑟菌試驗室檢驗及其診療

細菌試驗室檢驗及其它檢驗

（1）涂片檢驗：取患者尿道分泌物或?qū)m頸分泌物，作革蘭氏染色，在多形核白細胞內(nèi)找到革蘭氏陰性雙球菌。涂片對有大量膿性分泌物單純淋菌性前尿道炎患者，此法陽性率在90%左右，能夠初步診療。女性宮頸分泌物中雜菌多，敏感性和特異性較差，陽性率僅為50-60%，且有假陽性，所以世界衛(wèi)生組織推薦用培養(yǎng)法檢驗女病人。慢性淋病因為分泌物中淋球菌較少，陽性率低，所以要取前列腺按摩液，以提升檢出率。

咽部涂片發(fā)覺革蘭氏陰性雙球菌不能診療淋病，因為其它奈瑟菌屬在咽部是正常菌群。另外對癥狀不經(jīng)典涂片陽性應(yīng)作深入檢驗。

（2）培養(yǎng)檢驗：淋球菌培養(yǎng)是診療關(guān)鍵佐證，培養(yǎng)法對癥狀很輕或無癥狀男性、女性病人全部是較敏感方法，只要培養(yǎng)陽性就可確診，在基因診療問世以前，培養(yǎng)是世界衛(wèi)生組織推薦篩選淋病唯一方法。

現(xiàn)在國外推薦選擇培養(yǎng)基有改良Thayer-Martin（TM）培養(yǎng)基和NewYorkCity（NYC）培養(yǎng)基。中國采取巧克力瓊脂或血瓊脂培養(yǎng)基，均含有抗生素，可選擇地抑制很多其它細菌生長。在36℃，70%濕度，含5%-10%CO2（燭缸）環(huán)境中培養(yǎng)，24-48小時觀察結(jié)果。培養(yǎng)后還需進行菌落形態(tài)，革蘭氏染色，氧化酶試驗和糖發(fā)酵試驗等判定。培養(yǎng)陽性率男性80%-95%，女性80-90%。培養(yǎng)后需依據(jù)菌落形態(tài)、革蘭染色、氧化酶試驗和糖發(fā)酵試驗做出判定。培養(yǎng)陽性率男性為80％～95％，女性為80％～90％。

（3）抗原檢測

1．固相酶免疫試驗（EIA）：可用來檢測臨床標本中淋球菌抗原，在流行率很高地域而又不能作培養(yǎng)或標本需長時間遠送時使用，能夠在婦女人群中用來診療淋球菌感染。

2．直接免疫熒光試驗：經(jīng)過檢測淋球菌外膜蛋白I單克隆抗體作直接免疫熒光試驗。但現(xiàn)在在男女二性標本敏感不高，特異性差，加之試驗人員判定水平，故該試驗尚不能推薦用來診療淋球菌感染。

（4）基因診療

1．淋球菌基因探針診療:淋球菌基因探針診療，所用探針有：質(zhì)粒DNA探針，染色體基因探針和rRNA基因探針。

2、淋球菌基因擴增檢測PCR技術(shù)和連接酶鏈反應(yīng)出現(xiàn)深入提升了檢測淋球菌靈敏性，它含有快速、靈敏、特異、簡便優(yōu)點，能夠直接檢測臨床標本中極微量病原體。

（5）藥敏試驗對培養(yǎng)陽性者可深入用紙片擴散法做藥敏試驗，或用瓊脂平皿稀釋法測定藥品最小抑菌濃度（MIC），和用紙片酸度定量法檢測β－內(nèi)酰胺酶（使用WhatmanI號濾紙PP-NG菌株能使其顏色由藍變黃，陽性為PPNG，陰性為N-PPNG），以確定淋球菌對抗生素敏感性，合理選擇用藥。

四、淋病預(yù)防

淋病奈瑟菌預(yù)防關(guān)鍵點以下：

1.避免婚外性行為。

2.在性生活中提倡使用避孕套等理化屏障，以預(yù)防淋球菌感染。

3.預(yù)防性使用抗生素可降低感染危險，可應(yīng)用于已知和淋病患者有性接觸者。

4.按淋病診療方案對病人進行合理診療，根本消亡傳染源。

5.對性伴侶應(yīng)進行檢驗和診療。

6.患者宜注意個人衛(wèi)生和隔離，不和家人、小孩（尤其女孩）同床、共浴。

7.實施對新生兒硝酸銀溶液或紅霉素溶液預(yù)防滴眼要求，預(yù)防新生兒淋病性眼炎發(fā)生。

8.病人需經(jīng)根本治愈后，方可結(jié)婚、生育和安排工作。

五、淋病奈瑟菌生物安全防護

依據(jù)《病原微生物生物試驗室生物安全管理條例》中相關(guān)要求，人間傳輸微生物名目（待頒布）霍亂弧菌屬于三類，BSL-2。相關(guān)防護事宜包含：

（1）操作要求

1、試驗時，未經(jīng)試驗室主任同意，限制或嚴禁進入試驗室。

2、不許在工作區(qū)域飲食、吸煙、清洗隱型眼鏡和化妝。食物應(yīng)存放在工作區(qū)域以外專用櫥柜或冰箱中。

3、對于污染銳器，必需時刻保持高度警惕，包含針、注射器、玻片、加樣器等。

4、注射和吸收感染材料時，只能使用針頭固定注射器或一次性注射器（即注射器和針頭是一體）。用過一次性針頭必需彎曲、切斷、破碎、重新套上針頭套、從一次性注射器上去掉，或在丟棄前進行人工處理，要不將之小心放入不會被刺穿、用于搜集廢棄銳器容器中。非一次性銳器必需放置在堅壁容器中，轉(zhuǎn)移至處理區(qū)消毒，最好高壓殺菌。

5、打壞器皿不能直接用手處理，必需用其它工具處理，如刷子和簸箕、夾子或鑷子。盛污染針頭、銳器、碎玻璃容器在倒掉前，應(yīng)按攝影關(guān)要求進行消毒。

6、全部培養(yǎng)物、儲存物及其它要求廢物在釋放前，均應(yīng)使用可行消毒方法進行消毒，如高壓滅菌。轉(zhuǎn)移到就近試驗室消毒物料應(yīng)置于耐用、防漏容器內(nèi)，密封運出試驗室。離開該系統(tǒng)進行消毒物料，在轉(zhuǎn)移前應(yīng)包裝，其包裝應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)。

7、濺出或偶然事件中，顯著暴露于傳染源時，要立即向試驗室主任匯報。進行合適醫(yī)學評定、觀察、診療，保留書面統(tǒng)計。

8、按日常程序、在相關(guān)傳染源工作結(jié)束后、尤其是傳染源濺出或灑出后、或受到其它傳染源污染后，試驗室設(shè)備和工作臺面應(yīng)該使用有效消毒劑消毒。污染設(shè)備在送去修理、維護前，要按攝影關(guān)要求消毒；在離開設(shè)施轉(zhuǎn)移前，要按攝影關(guān)要求打包運輸。

（2）安全設(shè)備

1、正確使用和保養(yǎng)生物安全柜、最好是二級生物安全柜、或其它適宜人員防護設(shè)施、或物理遏制裝置。

2、確定可能形成傳染性濺出物試驗過程，包含離心、研磨、勻漿、猛烈震蕩或混勻、超聲波破裂、開啟裝有傳染源容器、采集感染標本等。

3、包含高濃度或大致積傳染源時，若選擇密封轉(zhuǎn)頭或帶安全罩離心機，若轉(zhuǎn)頭或安全罩僅在生物安全柜中打開，則可在開放試驗室內(nèi)離心。

4、當必需在生物安全柜外處理標本時，需采取面部保護方法（跟鏡、口罩、面罩、或其它防濺裝置），以免傳染源或其它有害物濺或灑到面上。

5、在試驗室內(nèi)，必需使用專用防護性外衣、大褂、罩衫或制服。人員到非試驗室區(qū)域時，防護服必需留在試驗室內(nèi)。防護服能夠在試驗室內(nèi)處理，也能夠在洗衣房中洗滌，但不能帶回家中。

6、可能接觸潛在傳染源、被污染表面或設(shè)備時，要戴手套。一次性手套不用清洗、不能反復(fù)使用，不能用于接觸“潔凈”表面（鍵盤、電話等），也不應(yīng)該戴著到試驗室外。要備有帶滑石粉乳膠手套。脫掉手套后，要洗手。\o"評分0"結(jié)核桿菌生物危害評定匯報一、結(jié)核桿菌傳輸和致病

結(jié)核桿菌通常指結(jié)核分枝桿菌和牛分枝桿菌，其中結(jié)核分枝桿菌（Mycobacteriumtuberculosis）是引發(fā)人類結(jié)核病關(guān)鍵病原體。

結(jié)核分枝桿菌關(guān)鍵傳染路徑是經(jīng)呼吸道傳輸，由排菌肺結(jié)核病人在咳嗽、噴嚏或大聲說話時隨呼吸道分泌物排出到空氣中，或排菌肺結(jié)核病人隨地吐痰經(jīng)過再生氣溶膠(塵埃)，攜帶結(jié)核桿菌，飛揚在空氣中，被健康人吸入后發(fā)生感染和發(fā)病，所以排菌肺結(jié)核患者(尤其是痰涂片陽性未經(jīng)診療者)是結(jié)核病關(guān)鍵傳染源。通常結(jié)核病患者痰中結(jié)核桿菌越多，傳輸危險性越大。患者排出飛沫在1-10微米者，在空氣中漂浮時間長，傳染性越大。患者病變和癥狀越嚴重，傳染性也越大。周圍人群和患者接觸越親密者，受感染機會越多。和患者同處于空氣不流通室內(nèi)親密接觸者，受感染可能性增大。

未受結(jié)核感染人是結(jié)核病易感人群，因為結(jié)核病是人畜共患病，哺乳類動物如牛、鹿、猴、豬、貓、狗等也全部能夠患結(jié)核病。

感染結(jié)核桿菌后，終生全部有可能發(fā)病，發(fā)病時間因人而異，通常2個月～20年才發(fā)病。經(jīng)典肺結(jié)核起病緩慢，病程較長，有低熱、倦怠、食欲不振、咳嗽及少許咯血。但多數(shù)患者病灶輕微，無顯著癥狀。（1）癥狀①全身癥狀表現(xiàn)為午后低熱、乏力、食欲不振、消瘦、盜汗等。②呼吸系統(tǒng)癥狀通常為干咳或帶少許黏液痰；繼發(fā)感染時，痰呈粘液膿性。約1/3患者有不一樣程度咯血，咯血后常有低熱。大咯血時可發(fā)生失血性休克，偶因血塊阻塞大氣道引發(fā)窒息。病灶炎癥累及壁層胸膜時，對應(yīng)胸壁有刺痛，通常多不猛烈，隨呼吸及咳嗽而加重。若并發(fā)氣胸或大量胸腔積液，呼吸困難癥狀尤為嚴重。（2）體征早期病灶小或在肺組織深部，多無異常體征。若病變范圍較大，患側(cè)肺部呼吸運動減弱，叩診呈濁音，聽診時呼吸音減低，或為支氣管肺泡呼吸音。因肺結(jié)核好發(fā)于肺上葉尖后段及下葉背段，故鎖骨上下、肩胛區(qū)叩診略濁，咳嗽后偶可聞及濕啰音，對診療有參考意義。肺部病變發(fā)生廣泛纖維化或胸膜粘連增厚時，患側(cè)胸廓常呈下陷、肋間隙變窄、氣管移位和叩濁，對側(cè)可有代償性肺氣腫征。

二、結(jié)核桿菌生物學特征

從分類學上看結(jié)核桿菌屬于裂殖菌綱、放線菌目、分枝桿菌科、分枝桿菌屬。

結(jié)核分枝桿菌正常經(jīng)典形態(tài)是直或稍彎曲、兩端鈍圓桿菌，菌體長1-4納米，寬0.3-0.6納米，無芽胞、無莢膜、無鞭毛，生長發(fā)育期間有分枝生長傾向。鏡下常呈單個散在或呈“人、V、T、Y”形排列，菌體多時細菌扭集一起呈繩索狀、束狀或叢狀。另外結(jié)核桿菌菌體還含有多形態(tài)特征，受不良生長條件影響可分別表現(xiàn)為桿菌型(基礎(chǔ)形態(tài))、濾過型、顆粒型和球菌型(L型)4種不一樣類型。

分枝桿菌生長緩慢，在人工培養(yǎng)基內(nèi)繁殖一代約需15-20小時，通常需2-4周或更長時間始見菌落生長，甚至有極少數(shù)生長極為緩慢者需8周以上才開始有菌落生長。它為專性需氧菌，生長溫度范圍是35-40℃，pH5.5-7.2。培養(yǎng)營養(yǎng)要求較高且特殊，培養(yǎng)基需含雞蛋、血清、氨基酸、甘油等營養(yǎng)豐富復(fù)雜有機物及少許無機鹽類。而且結(jié)核桿菌伴隨環(huán)境改變易發(fā)生菌落形態(tài)、毒力、L型及藥品耐藥性變異，如在人工培養(yǎng)基上反復(fù)連續(xù)傳代，可產(chǎn)生變異而致毒力降低，

三、結(jié)核桿菌檢測和診療

（1）細菌試驗室檢驗及其它檢驗

①結(jié)核菌檢驗是確診肺結(jié)核最特異性方法，痰中找到結(jié)核菌為確診肺結(jié)核關(guān)鍵依據(jù)。涂片抗酸染色鏡檢快速簡便。在中國非經(jīng)典分枝桿菌尚屬少見，故抗酸桿菌陽性，肺結(jié)核診療基礎(chǔ)即可成立。痰菌陽性表明其病灶是開放性，含有傳染性。培養(yǎng)法更為正確，尚可作藥品敏感試驗和菌型判定。但結(jié)核菌生長緩慢，培養(yǎng)較為費時，但正確可靠，特異性高。若涂片陰性或診療有疑問時，培養(yǎng)尤其關(guān)鍵；而且，培養(yǎng)后可做藥品敏感性測定，指導臨床用藥。PCR技術(shù)檢測結(jié)核菌DNA快速、簡便，并可判定菌型，不足之處是可能出現(xiàn)假陽性或假陰性。

②影像學檢驗胸部X線檢驗?zāi)軌虬l(fā)覺肺內(nèi)病變部位、范圍、有沒有空洞或空洞大小、洞壁厚薄等。X線對各類結(jié)核病透過分不一樣，經(jīng)過X線檢驗?zāi)艽笾鹿懒拷Y(jié)核病

灶病理性質(zhì)，并能早期發(fā)覺肺結(jié)核，和判定病情發(fā)展及診療效果，有利于決定診療方案。肺結(jié)核常見X線表現(xiàn)包含：纖維鈣化硬結(jié)病灶、浸潤性病灶和干酪樣病灶等。胸部CT檢驗對于發(fā)覺微小或隱蔽性病變，了解病變范圍及病變判別等方面全部有幫助。

③結(jié)核菌素試驗是診療結(jié)核感染參考指標。使用變應(yīng)原有舊結(jié)核菌素（oldtuberculin,OT）和結(jié)核菌素純化蛋白衍化物（purifiedproteinderivative,PPD），現(xiàn)臨床多用PPD。皮內(nèi)注射0.1ml（5IU），硬結(jié)平均直徑≥5mm為陽性反應(yīng)。結(jié)核菌素試驗有利于判定有沒有結(jié)核菌感染。若呈強陽性反應(yīng)，常表示為活動性結(jié)核病。結(jié)核菌素試驗陽性反應(yīng)僅表示曾有結(jié)核感染，并不一定現(xiàn)在患病。結(jié)核菌素試驗陰性反應(yīng)除表示沒有結(jié)核菌感染外，尚需考慮以下情況：結(jié)核菌在感染4～8周后才建立充足變態(tài)反應(yīng)，在這之前，結(jié)核菌素試驗可呈陰性；應(yīng)用糖皮質(zhì)激素等免疫抑制劑，或營養(yǎng)不良、麻疹、百日咳等患者，結(jié)核菌素反應(yīng)亦可臨時消失。

④其它檢驗結(jié)核病患者血像通常無改變，嚴重病例常有繼發(fā)性貧血，急性粟粒型肺結(jié)核時白細胞總數(shù)減低或出現(xiàn)類白血病反應(yīng)。血沉增快常見于活動性肺結(jié)核。用ELISA法檢測患者血清中特異性抗體，可對無痰或痰菌陰性者和肺外結(jié)核診療提供參考。纖支鏡檢驗對于發(fā)覺氣管內(nèi)膜結(jié)核、了解有沒有腫瘤、吸收分泌物、解除阻塞或作病原菌及脫落細胞檢驗，和取活組織作病理檢驗等，全部相關(guān)鍵診療價值。淺

表淋巴結(jié)活檢，有利于結(jié)核判別診療。

（2）診療和判別診療

痰結(jié)核菌檢驗不僅是診療肺結(jié)核關(guān)鍵依據(jù)，亦是考評療效、隨訪病情關(guān)鍵指標。X線檢驗是診療肺結(jié)核必需手段，對早期診療、確定病變部位、范圍、性質(zhì)、了解其演變及選擇診療等均含相關(guān)鍵價值。在臨床診療中，中國現(xiàn)用分類法包含四部分，即肺結(jié)核類型、病變范圍及空洞部位、痰菌檢驗、活動性及轉(zhuǎn)歸。肺結(jié)核分為五型：Ⅰ型為原發(fā)型肺結(jié)核；Ⅱ型為血行播散型肺結(jié)核；Ⅲ型為浸潤型肺結(jié)核；Ⅳ型為慢性纖維空洞型肺結(jié)核；Ⅴ型為結(jié)核性胸膜炎。還應(yīng)注意將結(jié)核病和肺癌、肺炎、支氣管擴張、慢性支氣管哮喘和其它發(fā)燒性疾病如傷寒、敗血癥、白血病、縱隔淋巴瘤及結(jié)節(jié)病等進行判別。

四、結(jié)核桿菌防治及生物安全防護

細菌防治

依據(jù)《中國傳染病防治法》和《試驗室生物安全通用要求》中相關(guān)要求，結(jié)核病屬于乙類傳染病，根據(jù)乙類傳染病進行預(yù)防控制。

在結(jié)核病預(yù)防方面要針對傳染源、傳輸路徑、易感人群三個步驟，采取以管理和控制傳染源為主綜合性防治方法，努力做到“早發(fā)覺、早匯報、早診療”，以利于控制和管理傳染源。臨床上肺結(jié)核化學診療標準是早期、規(guī)律、全程、適量、聯(lián)合。整個診療方案分強化和鞏固兩個階段。中國結(jié)核病防治計劃指南要求采取統(tǒng)一標準化學診療方案。

表1國家防癆計劃結(jié)核病化療方案

療程

化療方案

6個月

2RHZ/4RH

2ERHZ/4RH或4R2H2

2SRHZ/4RH或4R2H2

8個月

2SRHZ/6TH或6EH

2SRHZ/6S2H2Z2

R代表利福平，H代表異煙肼，Z代表吡嗪酰胺，E代表乙胺丁醇，S代表鏈霉素，

T代表丙硫異煙胺。下標數(shù)字表示每日用藥次數(shù)；其它數(shù)字表示用藥月數(shù)，斜線前數(shù)字表示前2個月，斜線后字表示后多個月。

對復(fù)治病例，通常可用以下多個方案：①2S(E)RHZ/4RH(E)，督促化療，確保規(guī)律用藥。②初治規(guī)則診療失敗患者，可用2S3H3Z3E3/6H3R3E3；③慢性排菌者可用敏感一線藥和二線藥聯(lián)用，應(yīng)嚴密觀察藥品不良反應(yīng)，療程以6～12個月為宜。

對毒性癥狀嚴重者，可加用糖皮質(zhì)激素，以減輕炎癥及過敏反應(yīng)，促進滲液吸收，降低纖維組織形成及胸膜粘連。對咯血患者，應(yīng)對癥診療，包含休息、止咳、鎮(zhèn)靜和應(yīng)用止血藥如安絡(luò)血等。

五、細菌試驗室安全防護

依據(jù)《病原微生物生物試驗室生物安全管理條例》中相關(guān)要求，人間傳輸微生物名目（待頒布）結(jié)核桿菌屬于二類，BSL-3。WHO將結(jié)核桿菌生物危害等級定為Ⅲ級。全部參與結(jié)核桿菌防治和研究試驗室和試驗室人員全部必需遵守《結(jié)核病試驗室生物安全管理條例》和《結(jié)核病診療試驗室檢驗規(guī)程》。

（1）安全防護

大多數(shù)試驗室取得性結(jié)核病是因為處理感染者標本引發(fā)——可從痰、尿、組織、大便和其它體液標本中分離到結(jié)核桿菌。處理標本或培養(yǎng)物時產(chǎn)生氣溶膠是試驗室取得性結(jié)核病最關(guān)鍵危險原因，也可經(jīng)過損傷皮膚接觸感染。

所以首先應(yīng)樹立全程防護觀念，全方面加強從事結(jié)核桿菌科研、檢測、試劑和疫苗生產(chǎn)機構(gòu)生物安全管理。嚴格限定有資質(zhì)開展研究試驗室和研究者。建立健全傳染病病原管理組織；制訂和完善傳染病試驗室生物安全技術(shù)操作規(guī)范；加強可能暴露于結(jié)核桿菌或潛在感染性材料相關(guān)業(yè)務(wù)人員生物安全知識培訓和風險

和意識教育；切實落實各項管理制度，預(yù)防和控制試驗室等渠道造成結(jié)核桿菌感染和傳輸；加強部門間溝通和合作，加強對高暴露試驗室工作人員監(jiān)測工作，并確保她們能立即被發(fā)覺和診療。當進行大量活菌試驗時，全部操作應(yīng)在BSL-3級試驗室生物安全柜中進行。為預(yù)防試驗過程產(chǎn)生氣溶膠造成試驗室感染，全部操作

應(yīng)使用三級生物安全防護。

在具體操作過程中包含標本留取、運輸、處理和廢物處理等程序全部應(yīng)預(yù)防感染性氣溶膠產(chǎn)生。病人留取標本應(yīng)在獨立房間，應(yīng)定時作好房間消毒，保持通風。標本應(yīng)留取在封閉器皿內(nèi)送檢。檢驗人員應(yīng)穿戴防護服、口罩、手套等防護裝備，嚴格遵守試驗操作規(guī)程，試驗室空氣、試驗臺面應(yīng)定時消毒。痰、尿標本找抗酸桿菌，應(yīng)先高壓滅菌后，再涂片染色。尤其是痰標本進行涂片制作時，在打開標本容器、涂片、加熱固定時輕易產(chǎn)生氣溶膠，為預(yù)防試驗過程中產(chǎn)生氣溶膠

造成試驗室感染，全部操作應(yīng)在二級生物安全柜中進行，并使用二級生物安全防護。痰標本培養(yǎng)時，在標本進行前處理高速振蕩混合和離心、培養(yǎng)液或上清液傾倒、轉(zhuǎn)移和接種等操作過程有產(chǎn)生氣溶膠和意外濺灑可能，為預(yù)防試驗過程中產(chǎn)生氣溶膠等造成試驗室感染，全部操作應(yīng)在二級生物安全柜中進行，并使用二級生物安全防護。藥品敏感性測定時，在磨菌、滴加菌液、接種培養(yǎng)物、燒灼接種環(huán)等操作過程有產(chǎn)生氣溶膠和意外濺灑可能，試驗者有可能直接大劑量暴露細菌。所以該項操作一定在BSL-3級試驗室完成，且最好試驗室內(nèi)要有負壓。而且操作者著二級生物防護用具。

（2）意外事故處理

結(jié)核桿菌滅活方法有化學和物理方法。試驗過程中：

1)如標本或標本前消化處理液被打翻污染操作臺或地面，應(yīng)以吸滿75%已乙醇溶液衛(wèi)生紙覆蓋污染區(qū)，15分鐘以后衛(wèi)生紙方可移去；

2)如污染物濺落到身體表面，或有割傷、刺傷、燒傷、燙傷等情況發(fā)生，應(yīng)立即停止試驗工作進行緊急處理：更換被污染試驗服裝，皮膚表面用消毒液清洗，傷口以碘酒及酒精消毒，眼睛用無菌生理鹽水沖洗；

3)假如發(fā)生菌液溢出、帶菌培養(yǎng)管破碎等，造成中、小面積污染?？捎帽任廴久娣e大25%以上紗布覆蓋污染區(qū)域，邊緣用脫脂棉圍住，向紗布傾倒5%苯酚溶液或75%乙醇溶液，浸泡2小時以上(其間適量添加溶液預(yù)防干燥)，再經(jīng)紫外燈近距離(1米內(nèi))照射2小時以上；被污染器械、容器等立即浸泡于75%乙醇溶液中2小時以上，試驗完成后再進行高壓消毒處理；

4)假如發(fā)生氣溶膠污染或大面積污染，應(yīng)立即停止試驗并關(guān)閉試驗室，對試驗區(qū)域和試驗室進行紫外燈照射消毒過夜；第二天對污染區(qū)域進行二十四小時封閉空氣熏蒸消毒(乙醛消毒法：5ml乙醛+2g高錳酸鉀/平方米空間)，直接被污染區(qū)域可參考第3)條進行處理。

（3）試驗室人員防護

從事結(jié)核桿菌檢測、研究試驗室工作人員必需在身體情況良好情況下，才能進入試驗室工作，出現(xiàn)下列情況，不能進入：身體出現(xiàn)開放性損傷；患發(fā)燒性疾??；感冒、上呼吸道感染、或其它造成抵御力下降情況；妊娠、已經(jīng)在試驗室控制區(qū)域內(nèi)連續(xù)工作4h以上，或其它原因造成疲憊狀態(tài)。

從事結(jié)核桿菌檢測工作人員可間隔數(shù)年接種卡介苗一次。若操作者或其所在試驗室工作人員在此期間出現(xiàn)和被操作病原微生物造成疾病類似癥狀或體征時，比如發(fā)燒、盜汗、咳嗽、咳痰、咯血或痰中帶血等癥狀，則應(yīng)被視為可能發(fā)生試驗室感染。應(yīng)立即匯報試驗室責任人，采取早發(fā)覺、早匯報、早診療以控制管理傳染源為主綜合性防治方法。\o"評分0"蠟樣芽胞桿菌生物危害評定匯報一、細菌傳輸和致病

蠟樣芽胞桿菌在自然界分布廣泛，常存在于土壤、灰塵和污水中，植物和很多生熟食品中常見。已從多個食品中分離出該菌，包含肉、乳制品、蔬菜、魚、土豆、糊、醬油、布丁、炒米飯和多種甜點等。在美國，炒米飯是引發(fā)蠟樣芽胞桿菌嘔吐型食物中毒關(guān)鍵原因；在歐洲大全部由甜點、肉餅、色拉和奶、肉類食品引發(fā)；在中國則關(guān)鍵和受污染米飯或淀粉類制品相關(guān)。

1950年Hauge在對挪威奧斯陸某醫(yī)院職員和病員進食甜食后引發(fā)食物中毒研究中，首次明確指出蠟樣芽胞桿菌致病作用。蠟樣芽胞桿菌作為一個食源性疾病報導較多，在多種食品中檢出率也較高，如1982年犬飼等對日本名古屋所采1641份食品樣品中，有193份檢出了該菌、陽性率為11.8%；1984年中國相關(guān)單位對南京市所采211份食品樣品中，有81份檢出了該菌，陽性率為38.4%。

蠟樣芽胞桿菌食物中毒通常以夏秋季（6-10月）最高。引發(fā)中毒食品常于食前因為保留溫度不妥，放置時間較長或食品經(jīng)加熱而殘余芽胞以生長繁殖條件，所以造成中毒。中毒發(fā)病率較高，通常為60-100%。但也有在可疑食品中找不到蠟樣芽胞桿菌而引發(fā)食物中毒情況，通常認為是因為蠟桿芽胞桿菌產(chǎn)生熱穩(wěn)定毒素所致。

當攝入食品其蠟樣芽胞桿菌數(shù)量達>106/克時?？稍斐墒澄镏卸?。蠟樣芽胞桿菌食物中毒在臨床上可分為嘔吐型和腹瀉型兩類。嘔吐型潛伏期為0.5-6小時，中毒癥狀以惡心、嘔吐為主，偶而有腹痙攣或腹瀉等癥狀，病程不超出二十四小時，這種類型癥狀類似于由金黃色葡萄球菌引發(fā)食物中毒。腹瀉型潛伏期為6-15小時，癥狀以水瀉、腹痙攣、腹痛為主，有時會有惡心等癥狀，病程約二十四小時，這種

類型癥狀類似于產(chǎn)氣莢膜梭菌引發(fā)食物中毒。嚴重者還可造成敗血癥。

蠟樣芽胞桿菌引發(fā)食物中毒是因為該菌可產(chǎn)生腸毒素。它產(chǎn)生兩種性質(zhì)不一樣代謝物，引發(fā)腹瀉型綜合癥是一個大分子量蛋白；而引發(fā)嘔吐型綜合癥被認為是一個小分子量、熱穩(wěn)定多肽。致嘔吐型綜合癥腸毒素至今還未提純，致腹瀉型綜合癥腸毒素已提純，其純化腸毒素分子量為55-6.0×103。致腹瀉腸毒素能使小白鼠致死。

二、細菌生物學特征

蠟樣芽胞桿菌分類為芽胞桿菌屬第I群，該群有22個種。依據(jù)營養(yǎng)型菌細胞寬度分為兩類，蠟樣芽胞桿菌、蕈狀芽胞桿菌、蘇云金芽胞桿菌、炭疽芽胞桿菌和巨大芽胞桿菌屬“大細胞菌種”。

蠟樣芽胞桿菌為革蘭氏陽性大桿菌，大小為1-1.3×3-5μm，需氧或兼性需氧，生長6h即可形成原形芽胞，芽胞在菌體中心或次末端不突出菌體，菌體兩端較平整，多數(shù)呈鏈狀排列，和炭疽桿菌相同。引發(fā)食物中毒菌株多為周鞭毛，有動力無莢膜。它生長溫度為25-37℃，最好溫度30-35℃。在肉湯中生長混濁有菌膜或壁環(huán)，振搖易乳化。在一般瓊脂上生成菌落較大，直徑3-10mm，灰白色、不透明，表面粗糙似毛玻璃狀或融蠟狀，邊緣常呈擴展狀故而得名。偶有產(chǎn)生黃綠色色素，在血瓊脂平板上呈草綠色溶血。在甘露醇、卵黃多粘菌素（MYP）平板上，呈伊紅粉色菌落。能分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、水楊素等，VP試驗陽性，可液化明膠，卵磷脂酶陽性，但數(shù)次傳代后，其生化特征?？筛淖儭?/p>

另外蠟桿芽胞桿菌耐熱，其食物中毒菌株中游離芽胞能耐受100℃30分鐘，而干熱滅菌需120℃60分鐘才能殺死。本菌對氯霉素、紅霉素和慶大霉素敏感，對青霉素、磺胺類和呋喃類耐藥。

三、細菌試驗室檢驗及其它檢驗

1.標本搜集

采集可疑食物或搜集糞便和嘔吐物進行直接涂片染色鏡檢和其它操作。

2.活菌計數(shù)

無菌操作稱取樣品50g放入滅菌攪拌缸內(nèi)。加Butterfield磷酸鹽緩沖稀釋液450mL，以高速（18.000-21.000rpm）均質(zhì)2min。用上述1:10稀釋液，連續(xù)稀釋供蠟樣芽胞桿菌計數(shù)。移取10mL均質(zhì)樣液（1:10稀釋）加到90mL空白液中，從10-2到10-6制備一系列稀釋液，充足混勻，并繼續(xù)稀釋直到10-6為止。取樣品各個稀釋液（包含1:10）0.1mL接種2只MYP（甘露醇一卵黃多粘菌素瓊脂）平板，用滅菌玻璃棒在每只平板表面涂布均勻。將平板置30℃培養(yǎng)二十四小時，并檢驗菌落周圍有沉淀圈者，表示產(chǎn)生卵磷脂酶。蠟樣芽胞桿菌菌落通常是粉紅色，伴隨培養(yǎng)時間延長則更顯著。假如上述反應(yīng)不清楚，應(yīng)將平板再培養(yǎng)二十四小時后計數(shù)，從MYP平板上挑取經(jīng)典菌落5個或更多，移種到營養(yǎng)瓊脂斜面上供蠟樣芽胞桿菌證實試驗用。

3.MPN技術(shù)被推薦用于食品中低于10個/g蠟樣芽胞桿菌檢驗。一些不適適用平板計數(shù)法脫水淀粉類食品也可用此法檢驗。在胰酪胨大豆多粘菌素肉湯中接種3管MPN系列，10-1、10-2、10-3稀釋液各接種1mL于3管。將培養(yǎng)管置30℃培養(yǎng)48±2小時，檢驗生長密集、經(jīng)典蠟樣芽胞桿菌。將陽性管培養(yǎng)物劃線接種于MYP平板，于30℃培養(yǎng)24-48小時。以下步驟同2。

4.分離培養(yǎng)

將可疑食物置無菌乳缽中，加適量生理鹽水研磨后，劃線接種于一般瓊脂平板或血瓊脂平板，若為嘔吐物可直接劃線接種于上述平板，于37℃培養(yǎng)，

5.若有類似蠟樣芽胞桿菌菌落出現(xiàn)再深入分離純化和進行生化反應(yīng)。

6.蠟樣芽胞桿菌證實試驗

蠟樣芽胞桿菌分離物應(yīng)符合下述條件：1)革蘭氏陽性產(chǎn)芽胞大桿菌，其芽胞不突出體外；2）在MYP瓊脂上產(chǎn)生卵磷脂酶而不發(fā)酵甘露醇；3）厭氧培養(yǎng)生長，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸；4）還原硝酸鹽；5）VP陽性；6）分介L-酪氨酸；7）在含0.001%溶菌酶培養(yǎng)基中能生長。

7.蠟樣芽胞桿菌群判別試驗要判別經(jīng)典蠟樣芽胞桿菌和蠟樣芽胞桿菌群其它種還需深入進行下述試驗：1）動力試驗；2）根狀生長試驗；3）溶菌活性試驗；4）蛋白質(zhì)毒素結(jié)晶試驗：蠟樣芽胞桿菌有動力、強溶血、不形成根狀菌落，或不產(chǎn)生蛋白質(zhì)毒素結(jié)晶。而且蠟樣芽胞桿菌在4℃、pH4.3、鹽濃度18%條件下仍能存活或生長。經(jīng)過高溫殺菌或合適冷藏能夠控制蠟樣芽胞桿菌增殖。

8.血清學分型、噬菌體分型。

四、細菌防治

蠟樣芽胞桿菌所引發(fā)食物中毒多因食品在食用前保留溫度較高（20℃以上）和放置時間較長，故對中毒預(yù)防包含：因為蠟樣芽胞桿菌在15℃以下不繁殖，剩飯、剩菜應(yīng)放在低溫保留。該菌污染食品通常無腐敗變質(zhì)異味，不易被發(fā)覺。所以，剩飯、剩菜在食用前一定要再加熱。注意食品貯藏和個人衛(wèi)生，預(yù)防塵土、昆蟲及其它不潔物污染食品。

若一旦發(fā)生了中毒，則立即停止食用可疑污染食品，多飲水。通常不需要使用抗生素診療。腹瀉較重者可到醫(yī)院就診。

五、細菌生物安全防護

依據(jù)《病原微生物生物試驗室生物安全管理條例》中相關(guān)要求，人間傳輸微生物名目（待頒布）蠟樣芽胞桿菌屬于三類，BSL-2。

（1）操作要求

1、試驗時，未經(jīng)試驗室主任同意，限制或嚴禁進入試驗室。

2、不許在工作區(qū)域飲食、吸煙、清洗隱型眼鏡和化妝。食物應(yīng)存放在工作區(qū)域以外專用櫥柜或冰箱中。

3、全部操作過程應(yīng)盡可能細心，避免產(chǎn)生和濺出氣溶膠。

4、對于污染銳器，必需時刻保持高度警惕，包含針、注射器、玻片、加樣器等。

5、注射和吸收感染材料時，只能使用針頭固定注射器或一次性注射器（即注射器和針頭是一體）。用過一次性針頭必需彎曲、切斷、破碎、重新套上針頭套、從一次性注射器上去掉，或在丟棄前進行人工處理，要不將之小心放入不會被刺穿、用于搜集廢棄銳器容器中。非一次性銳器必需放置在堅壁容器中，轉(zhuǎn)移至處理區(qū)消毒，最好高壓殺菌。

6、打壞器皿不能直接用手處理，必需用其它工具處理，如刷子和簸箕、夾子或鑷子。盛污染針頭、銳器、碎玻璃容器在倒掉前，應(yīng)按攝影關(guān)要求進行消毒。

7、全部培養(yǎng)物、儲存物及其它要求廢物在釋放前，均應(yīng)使用可行消毒方法進行消毒，如高壓滅菌。轉(zhuǎn)移到就近試驗室消毒物料應(yīng)置于耐用、防漏容器內(nèi)，密封運出試驗室。離開該系統(tǒng)進行消毒物料，在轉(zhuǎn)移前應(yīng)包裝，其包裝應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)。

8、濺出或偶然事件中，顯著暴露于傳染源時，要立即向試驗室主任匯報。進行合適醫(yī)學評定、觀察、診療，保留書面統(tǒng)計。

9、按日常程序、在相關(guān)傳染源工作結(jié)束后、尤其是傳染源濺出或灑出后、或受到其它傳染源污染后，試驗室設(shè)備和工作臺面應(yīng)該使用有效消毒劑消毒。污染設(shè)備在送去修理、維護前，要按攝影關(guān)要求消毒；在離開設(shè)施轉(zhuǎn)移前，要按攝影關(guān)要求打包運輸。

（2）安全設(shè)備

1、正確使用和保養(yǎng)生物安全柜、最好是二級生物安全柜、或其它適宜人員防護設(shè)施、或物理遏制裝置。

2、確定可能形成傳染性氣溶膠或濺出物試驗過程，包含離心、研磨、勻漿、猛烈震蕩或混勻、超聲波破裂、開啟裝有傳染源容器、采集感染標本等。

3、包含高濃度或大致積傳染源時，若選擇密封轉(zhuǎn)頭或帶安全罩離心機，若轉(zhuǎn)頭或安全罩僅在生物安全柜中打開，則可在開放試驗室內(nèi)離心。

4、當必需在生物安全柜外處理標本時，需采取面部保護方法（跟鏡、口罩、面罩、或其它防濺裝置），以免傳染源或其它有害物濺或灑到面上。

5、在試驗室內(nèi)，必需使用專用防護性外衣、大褂、罩衫或制服。人員到非試驗室區(qū)域時，防護服必需留在試驗室內(nèi)。防護服能夠在試驗室內(nèi)處理，也能夠在洗衣房中洗滌，但不能帶回家中。

6、可能接觸潛在傳染源、被污染表面或設(shè)備時，要戴手套。一次性手套不用清洗、不能反復(fù)使用，不能用于接觸“潔凈”表面（鍵盤、電話等），也不應(yīng)該戴著到試驗室外。要備有帶滑石粉乳膠手套。脫掉手套后，要洗手。

\o"評分0"假結(jié)核棒狀桿菌生物危害評定匯報一、細菌傳輸和致病

假結(jié)核棒狀桿菌廣泛分布于自然界水和土壤中，是一個條件致病菌。關(guān)鍵引發(fā)家畜（羊、馬）慢性淋巴淋巴管炎，偶然也會引發(fā)人淋巴結(jié)炎、肺炎等疾病。

二、細菌生物學特征

假結(jié)核棒狀桿菌屬于棒狀桿菌屬，是一個兼性厭氧，沒有芽胞、沒有莢膜，抗酸陰性革蘭陽性桿菌。細菌末端膨大呈棒狀，菌體有時成單或成雙。有時菌體染色不均勻呈柵欄狀排列。它沒有動力，但觸酶呈陽性、尿素陽性。

所使用培養(yǎng)基包含血和亞碲酸鉀，比如Hoyle亞碲酸鹽培養(yǎng)基是一個很好選擇性判別培養(yǎng)基。假結(jié)核棒狀桿菌能夠在血平板上產(chǎn)生輕微溶血。

三、細菌試驗室檢驗及其它檢驗

1.鏡下形態(tài)

革蘭染色呈革蘭陽性桿菌、多型性、錐形或棒狀細菌末端略有彎曲。

菌體單個或成雙，時常呈“v”型。有些菌體染色微弱或不均勻，呈珠狀。

2.分離培養(yǎng)

血平板－皮膚拭子培養(yǎng)：5-10％CO2

35-37℃

40-48h；

喉拭子培養(yǎng)：厭氧，35-37℃16-24h；菌落周圍有微小B溶血環(huán)；

Hoyle亞碲酸鹽培養(yǎng)基：35-37℃16-48h：灰色/黑色,很干燥透明菌落。

3.生化試驗：硝酸鹽陰性；尿素陽性；

4.PCR是一個快速試驗，能夠在接收到菌株后3-4小時內(nèi)完成檢測。

5.毒素確診試驗還要結(jié)合毒素表型試驗。

6.假如初步試驗結(jié)果提醒有假結(jié)核棒狀桿菌，需要結(jié)合臨床癥狀考慮結(jié)果。

四、細菌生物安全防護

依據(jù)《病原微生物生物試驗室生物安全管理條例》中相關(guān)要求，人間傳輸

微生物名目（待頒布）假結(jié)核棒狀桿菌屬于三類，BSL-2。

試驗室在處理過程中可能會產(chǎn)生氣溶膠，所以懷疑假結(jié)核棒狀桿菌菌株必需在生物安全柜內(nèi)處理。對于尿素試驗認為使用尿素斜面比使用尿素液體培養(yǎng)基安全。在運輸時還應(yīng)該遵守郵政局危險品運輸手冊，假如以上初步試驗提醒該菌株是假結(jié)核棒狀桿菌,需立即通知上級相關(guān)單位,并依據(jù)試驗室安全手冊進行隔離。。

志賀氏菌屬生物危害評定匯報一、細菌傳輸和致病志賀菌屬是關(guān)鍵腸道病原菌之一，也是引發(fā)人類細菌性痢疾病原體。本屬細菌分布于全世界,是炎癥性痢疾經(jīng)典病原菌,很多地域5%~10%腹瀉性疾病是由該菌屬所致。弗氏志賀菌和宋內(nèi)志賀菌比鮑氏志賀菌和毒力尤其強痢疾志賀菌分布更廣。美國猶她州全部臨床試驗室工作者志賀菌病年發(fā)病率為0.7/1000，而臨床微生物學工作者年發(fā)病率為5.4/1000。在英國臨床試驗室，沙門菌病和志賀菌病年發(fā)病率分別為0.137/1000和0.322/1000，大多數(shù)感染者為微生物學工作者。感染者和恢復(fù)期帶菌者排泄物是傳染源,經(jīng)糞-口路徑直接傳輸,經(jīng)污染食物或物體可間接傳輸。蒼蠅可作為機械性媒介,水源性傳輸不常見。衛(wèi)生條件差擁擠人群中最易發(fā)生流行,流行區(qū)幼兒志賀菌病尤其常見,而成人得病較輕?；謴?fù)期和亞臨床帶菌者是關(guān)鍵傳染源,但真正長久帶菌者罕見。感染極少或不誘導產(chǎn)生免疫性,所以同一菌種再感染是可能。志賀菌可穿入低位腸段粘膜,引發(fā)粘液分泌,充血,白細胞浸潤,水腫,并常有表淺粘膜潰瘍。志賀菌感染相關(guān)水瀉由內(nèi)毒素介導所致,因這種內(nèi)毒素可引發(fā)腸道分泌增多。由志賀菌感染所造成癥狀包含：（1）急性細菌性痢疾經(jīng)潛伏期1~4日,幼兒起病忽然,表現(xiàn)為發(fā)燒,煩躁不安,嗜睡,厭食,惡心或嘔吐,腹瀉,腹痛和腹脹和里急后重。3日內(nèi)大便中出現(xiàn)血液,膿液和粘液.大便次數(shù)可增加到≥20次/d,體重下降和失水嚴重。若不診療,患兒可在12日內(nèi)死亡；若患兒存活,則在第2周急性癥狀消退.成人可表現(xiàn)為無發(fā)燒非血性,非粘液性腹瀉,極少有或完全沒有里急后重.但其最初癥狀可為發(fā)作性腹絞痛,急于排便,起初排出成形大便并在排便后可緩解腹痛.以后反復(fù)發(fā)作,而且日趨嚴重和頻繁.腹瀉變得顯著,系軟便或含有粘液,膿及常有血液水瀉。嚴重里急后重可造成直腸脫垂和大便失禁。成人患病常可自愈：輕者4~8日,重者3~6周。伴有循環(huán)虛脫顯著脫水和電解質(zhì)喪失及死亡關(guān)鍵發(fā)生于＜2歲嬰兒和衰弱成人；（2）慢性細菌性痢疾關(guān)鍵是因急性菌痢診療不根本，造成反復(fù)發(fā)作遷延不愈，病程超出兩個月以上者；若是有病史、無癥狀，結(jié)腸鏡檢或糞便培養(yǎng)陽性者稱為隱匿型菌痢，在流行病學上亦含相關(guān)鍵意義；（3）攜帶者是指恢復(fù)期帶菌、慢性帶菌者和健康帶菌者三種類型，尤其是健康帶菌者是關(guān)鍵傳染源。除此以外，還可發(fā)生繼發(fā)性細菌感染,尤其是衰弱和脫水病人。嚴重粘膜潰瘍可引發(fā)顯著急性失血.其它并發(fā)癥雖不多見,但可有中毒性神經(jīng)炎,關(guān)節(jié)炎,心肌炎和罕見腸穿孔。小兒志賀菌病可并發(fā)溶血性尿毒癥綜合征。本病不會變成慢性,也不會成為潰瘍性結(jié)腸炎病因?qū)W原因。但有HLA-B27基因型病人在志賀菌病后常常比較輕易發(fā)生關(guān)節(jié)炎或顯著Reiter綜合征。二、細菌生物學特征志賀菌（Shigella）隸屬于腸桿菌科，分為A,B,C,D4個亞群——A群痢疾志賀菌、B群福氏志賀菌、C群鮑特志賀菌和D群宋內(nèi)志賀菌，而各亞群又可分多種血清決定型。它們均為革蘭氏陰性桿菌，菌體短小、無芽胞無鞭毛，有菌毛，在胞質(zhì)中存在著大小兩種質(zhì)粒，和該菌侵襲性和耐藥性相關(guān)。志賀菌為兼性厭氧菌，對理化原因抵御力較弱，對酸敏感，在1%石炭酸中15~30min可被殺死，所以運輸時必需采取含有緩沖劑培養(yǎng)基。它們最適生長溫度為37℃，pH為7.2~7.4，對營養(yǎng)要求不高，可在一般培養(yǎng)基上生長。在腸道培養(yǎng)基上可形成不發(fā)酵乳糖無色半透明菌落，而宋內(nèi)志賀菌還常形成粗糙型菌落，也所以可發(fā)生S-R變異。志賀菌屬沒有H抗原，但有O抗原和部分菌種K抗原。O抗原可耐熱，100℃60min不被破壞，它是分類依據(jù)，含有群特異性和型特異性兩種抗原。正是依據(jù)O抗原不一樣和生化反應(yīng)結(jié)果將志賀菌分成了4個血清群和32個血清型；而K抗原存在于A群和C群全部菌型和B群種部分菌種中，不耐熱，對分類無意義，但它存在將阻斷O抗原和對應(yīng)抗血清凝集作用，故可先以100℃60min破壞之。志賀菌致病原因關(guān)鍵有：1.菌毛侵襲作用；2.內(nèi)毒素：各群志賀菌全部能形成強烈內(nèi)毒素，其作用機制包含：破壞腸粘膜上皮,造成粘膜下層炎癥,并有毛細血管血栓形成,以致壞死,脫落,形成潰瘍,出現(xiàn)粘液膿血便；使腸壁通透性增高,促進毒素吸收,引發(fā)一系列毒血癥癥狀,如發(fā)燒,神志障礙,甚至中毒性休克；作用于腸壁植物神經(jīng),使腸蠕動失調(diào)并痙攣,尤以直腸括約肌受累顯著,所以發(fā)生腹痛,腹瀉,里急后重等癥狀；3.外毒素：A群志賀菌Ⅰ型和Ⅱ型能產(chǎn)生志賀外毒素(ST),ST能引發(fā)Vero細胞病變,故也稱Vero毒素(VT)。ST組成是由1個A及5個B亞單位組成.B亞單位是毒素和靶細胞表面糖脂受體結(jié)合單位;A亞單位鏈為毒性部分能抑制蛋白質(zhì)合成。ST含有細胞毒素,腸毒素和神經(jīng)毒素3種生物學活性：腸毒素性，此毒素有類似E.coli和霍亂腸毒素作用能引發(fā)腹瀉和嘔吐；細胞毒性，它能夠阻止小腸上皮細胞對糖和氨基酸吸收；神經(jīng)毒性，在痢疾志賀菌引發(fā)重癥感染者可作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng),造成昏迷或腦膜炎；ST在體外還可加重對血管內(nèi)皮細胞損傷。ST和內(nèi)毒素連續(xù)存在聯(lián)合作用可能和志賀菌感染溶血性尿毒綜合征等并發(fā)癥相關(guān)。二、細菌試驗室檢驗及其它檢驗關(guān)鍵依據(jù)暴露史、臨床特征和試驗室檢驗診療。急性期有發(fā)燒、腹痛、腹瀉、里急后重及黏液膿血便，左下腹顯著壓痛。糞便鏡檢有多數(shù)白細胞或膿細胞及紅細胞即可診療。確診則依靠于糞便培養(yǎng)出痢疾桿菌。1.血常規(guī)急性期白細胞總數(shù)輕至中度增高，多在（10~20）×109/L，中性粒細胞亦增高。2.直腸鏡檢驗可見粘膜表面彌漫性充血并有大量小潰瘍?？捎檬米訌臐兲幦〔淖魍科瑱z驗或培養(yǎng)。這些拭子及大便標本均應(yīng)立即鏡檢及培養(yǎng)，標本接種于腸道桿菌選擇培養(yǎng)基或判別培養(yǎng)基上,常見S-S培養(yǎng)基.37℃3.糞便檢驗外觀多為黏液膿血便，無糞質(zhì)。鏡檢有大量膿細胞或白細胞及紅細胞，如有巨噬細胞有利于診療。糞便培養(yǎng)病原學檢驗有利于確診，同時可做藥品敏感試驗以指導臨床合理選擇抗菌藥品診療。糞便免疫學檢驗和細菌培養(yǎng)比較含有早期快速診療優(yōu)點，但因為糞便中抗原成份復(fù)雜，易出現(xiàn)假陽性，故現(xiàn)在臨床上還未廣泛應(yīng)用。4.濕片或經(jīng)甲基藍或賴特染色涂片可見大片白細胞,這點可判別細菌性和阿米巴痢疾(因阿米巴可破壞白細胞)。5.毒力試驗Senery毒力試驗：將受試菌37℃6.免疫染色法將糞便和志賀菌抗血清混勻,在顯微鏡觀察有沒有凝集現(xiàn)象。7.免疫熒光菌球檢驗法在含有熒光素標識志賀菌屬免疫血清液體培養(yǎng)基中接種標本,培育4-8h后發(fā)覺帶有熒光菌球為陽性。8.協(xié)同凝集試驗用含有SPA葡萄球菌標識志賀菌屬抗體,測定病人糞便中或增菌培養(yǎng)液中細菌及其可溶性抗原。9.PCR法檢測志賀菌核酸，快速、敏感，可提升45%志賀菌標本檢出率，現(xiàn)在還未廣泛應(yīng)用。10.此病還應(yīng)和急性阿米巴痢疾、細菌性胃腸型食物中毒、其它病原菌引發(fā)腸道感染、急性壞死性出血性腸炎及腸套疊相判別。三、細菌防治首先是防治：1早期發(fā)覺,早期隔離和早期根本診療病人外,查出帶菌者2切斷傳染路徑,操作食品前應(yīng)根本洗手。臟衣和床單應(yīng)放在帶蓋桶內(nèi)用肥皂水浸泡然后再煮沸消毒。房屋應(yīng)使用蚊帳紗和屏障。對病人和帶菌者應(yīng)采取對應(yīng)隔離方法(尤其是對糞便隔離)。另外還包含加強水源管理及食品衛(wèi)生監(jiān)督等3口服菌苗預(yù)防有鏈霉素依靠(Sd)株及口服重組活菌苗。Sd株口服后,因腸道無鏈霉素它不生長也不立即死亡,而產(chǎn)生SIgA,但只對同型菌再感染有保護作用,故使用此菌苗時應(yīng)考慮到當?shù)爻Ｒ娏餍芯?。重組活菌苗由多個型別(或種型)免疫原組成,含有廣譜保護作用,已開始生產(chǎn)在診療方面：1.補液療法腹瀉常引發(fā)等張性脫水(鹽和水丟失相等)并伴有代謝性酸中毒和顯著失鉀.脫水造成口渴使病人過多飲水又可引發(fā)低張性改變。無腹瀉痢疾不會造成過多失水尤其是氣候炎熱地域嬰兒,經(jīng)過出汗和呼吸失水再加上嚴重腹瀉,可造成高張性脫水。過早地應(yīng)用高滲性液體(牛奶,鼻飼、自制電解質(zhì)混合液)可引發(fā)高張性損害,包含抽搐。2.抗生素在決定應(yīng)用抗生素時,應(yīng)考慮到疾病嚴重程度,病人年紀、衛(wèi)生情況,深入傳輸可能性和造成細菌耐抗生素可能性等原因。另外,早期用合適可吸收抗菌藥品診療,可顯著減輕癥狀和降低志賀菌排出：對兒童,TMP-SMX中TMP成份4mg/kg每12小時1次為首選方案；對成人,用雙倍加強片(TMP320mg)每12小時1次。成人還可用諾氟沙星400mg口服每日2次或環(huán)丙沙星500mg口服每日2次。很多志賀菌株可能對氨芐青霉素和四環(huán)素耐藥。3.其它診療熱水袋有利于緩解腹部不適,用可被吸收且起減輕刺激作用甲基纖維素制劑對腹瀉和里急后重起不到任何緩解作用.抗膽堿能藥品和樟腦阿片酊應(yīng)盡可能不用,因為它們可引發(fā)腸道郁滯,延長發(fā)燒期,并使大便連續(xù)排菌。四、細菌生物安全防護依據(jù)《病原微生物生物試驗室生物安全管理條例》中相關(guān)要求，人間傳輸微生物名目（待頒布）志賀菌屬于三類、BSL-2。相關(guān)防護事宜包含：（1）操作要求1、試驗時，未經(jīng)試驗室主任同意，限制或嚴禁進入試驗室。2、不許在工作區(qū)域飲食、吸煙、清洗隱型眼鏡和化妝。食物應(yīng)存放在工作區(qū)域以外專用櫥柜或冰箱中。3、全部操作過程應(yīng)盡可能細心，避免產(chǎn)生和濺出氣溶膠。4、對于污染銳器，必需時刻保持高度警惕，包含針、注射器、玻片、加樣器等。5、注射和吸收感染材料時，只能使用針頭固定注射器或一次性注射器（即注射器和針頭是一體）。用過一次性針頭必需彎曲、切斷、破碎、重新套上針頭套、從一次性注射器上去掉，或在丟棄前進行人工處理，要不將之小心放入不會被刺穿、用于搜集廢棄銳器容器中。非一次性銳器必需放置在堅壁容器中，轉(zhuǎn)移至處理區(qū)消毒，最好高壓殺菌。6、打壞器皿不能直接用手處理，必需用其它工具處理，如刷子和簸箕、夾子或鑷子。盛污染針頭、銳器、碎玻璃容器在倒掉前，應(yīng)按攝影關(guān)要求進行消毒。7、全部培養(yǎng)物、儲存物及其它要求廢物在釋放前，均應(yīng)使用可行消毒方法進行消毒，如高壓滅菌。轉(zhuǎn)移到就近試驗室消毒物料應(yīng)置于耐用、防漏容器內(nèi)，密封運出試驗室。離開該系統(tǒng)進行消毒物料，在轉(zhuǎn)移前應(yīng)包裝，其包裝應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)。8、濺出或偶然事件中，顯著暴露于傳染源時，要立即向試驗室主任匯報。進行合適醫(yī)學評定、觀察、診療，保留書面統(tǒng)計。9、按日常程序、在相關(guān)傳染源工作結(jié)束后、尤其是傳染源濺出或灑出后、或受到其它傳染源污染后，試驗室設(shè)備和工作臺面應(yīng)該使用有效消毒劑消毒。污染設(shè)備在送去修理、維護前，要按攝影關(guān)要求消毒；在離開設(shè)施轉(zhuǎn)移前，要按攝影關(guān)要求打包運輸。（2）安全設(shè)備1、正確使用和保養(yǎng)生物安全柜、最好是二級生物安全柜、或其它適宜人員防護設(shè)施、或物理遏制裝置。2、確定可能形成傳染性氣溶膠或濺出物試驗過程，包含離心、研磨、勻漿、猛烈震蕩或混勻、超聲波破裂、開啟裝有傳染源容器、采集感染標本等。3、包含高濃度或大致積傳染源時，若選擇密封轉(zhuǎn)頭或帶安全罩離心機，若轉(zhuǎn)頭或安全罩僅在生物安全柜中打開，則可在開放試驗室內(nèi)離心。4、當必需在生物安全柜外處理標本時，需采取面部保護方法（跟鏡、口罩、面罩、或其它防濺裝置），以免傳染源或其它有害物濺或灑到面上。5、在試驗室內(nèi)，必需使用專用防護性外衣、大褂、罩衫或制服。人員到非試驗室區(qū)域時，防護服必需留在試驗室內(nèi)。防護服能夠在試驗室內(nèi)處理，也能夠在洗衣房中洗滌，但不能帶回家中。6、可能接觸潛在傳染源、被污染表面或設(shè)備時，要戴手套。一次性手套不用清洗、不能反復(fù)使用，不能用于接觸“潔凈”表面（鍵盤、電話等），也不應(yīng)該戴著到試驗室外。要備有帶滑石粉乳膠手套。脫掉手套后，要洗手。陰溝腸桿菌生物危害評定匯報一、細菌傳輸和致病陰溝腸桿菌廣泛分布于環(huán)境中，土壤、水、污水、腐爛蔬菜和乳制品亦可發(fā)覺，在陰溝污水中含量可高達10７/g。它是存在于人和動物腸道內(nèi)條件致病菌，易致泌尿道和呼吸道感染，它也可發(fā)生傷口感染、菌血癥和敗血癥，尤其易發(fā)于下列危險原因患者：如長久住院（尤其是在ICU）、患嚴重疾病、長久應(yīng)用廣譜抗生素、進行侵襲性操作、應(yīng)用放療或化療及免疫抵制劑等患者。據(jù)報道：在重癥監(jiān)護病房（ICU）革蘭陰性菌感染中，腸桿菌屬細菌感染僅次于銅綠假單胞菌，居第二位。二、細菌生物學特征陰溝腸桿菌屬于腸桿菌科腸桿菌屬，為革蘭氏陰性粗短桿菌，有周身鞭毛、無芽胞，兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高，在一般培養(yǎng)基上能夠形成大而濕潤粘液狀菌落。在血瓊脂平板上不溶血，在腸道選擇性培養(yǎng)基上可發(fā)酵乳糖形成紅色菌落。三、細菌試驗室檢驗及其它檢驗1.標本采集采自不一樣感染部位多種標本如糞便、血液、尿液等；2.染色鏡檢為革蘭氏陰性粗短桿菌3.分離培養(yǎng)可選擇血平板、MAC、EMB等；4.生化判定是關(guān)鍵判定依據(jù)。IMViC試驗呈――＋＋；動力和鳥氨酸脫羧酶試驗均為陽性——此能夠和IMViC試驗同為――＋＋肺炎克雷伯菌相區(qū)分；在同屬菌種之間：陰溝腸桿菌對賴氨酸/精氨酸/鳥氨酸反應(yīng)為―＋＋。四、細菌防治因為陰溝腸桿菌為條件致病菌，所以要加強院內(nèi)感染監(jiān)測，對于久病，尤其是合并致免疫功效低下基礎(chǔ)病患者，應(yīng)規(guī)范操作，尤其是侵襲性操作患者，應(yīng)重視該菌培養(yǎng)，鑒于該菌耐藥性較高，臨床應(yīng)首選喹諾酮類和氨基糖甙類抗菌藥盡可能降低青霉素類及一、二代頭孢抗生素應(yīng)用，對重癥患者可選擇亞胺培南。同時應(yīng)重視避免或縮短侵入性操作，加強消毒隔離，降低耐藥菌株產(chǎn)生和擴散。五、細菌生物安全防護依據(jù)《病原微生物生物試驗室生物安全管理條例》中相關(guān)要求，人間傳輸微生物名目（待頒布）陰溝腸桿菌屬于三類，BSL-2。在試驗室操作上對于有高風險人員，如免疫缺點者，要嚴格限制進入。對于針頭和銳器要有警示，要用專門存放銳器容器盛裝。在個人防護上，要求穿隔離衣，出試驗室時應(yīng)將隔離衣脫下；在可能接觸病原時要戴一次性使用手套，但不要戴手套接觸清潔表面（如電話等），脫去手套后要洗手；在BSC外面進行操作時，要進行面部保護，如套口罩、眼罩、面罩等。要有泡手消毒缸和洗眼臺，還要有高壓消毒器。小腸結(jié)腸炎耶爾森菌生物危害評定匯報一、細菌傳輸和致病小腸結(jié)腸炎耶爾