1-2ANA檢測策略課件

抗核抗體（ANA）實驗室檢測策略1-2ANA檢測策略抗核抗體檢測策略多特異性檢測如：間接免疫熒光法1. 初篩實驗結(jié)果單特異性檢測如：ELISA,Immunoblot2. 確認(rèn)/分型實驗1-2ANA檢測策略美國風(fēng)濕學(xué)會(ACR)立場聲明HEp-2細(xì)胞包含大約100至150種自身抗原

其它初篩方法僅具有少量自身抗原(8-10)…大約35%SLE患者和IFT-ANA陽性患者在其它初篩實驗中為陰性結(jié)果…建議：?IFT-ANA仍然為ANA檢測的金標(biāo)準(zhǔn)!?醫(yī)院或商業(yè)診斷所應(yīng)用其它ANA檢測方法時，必須要求為臨床大夫提供足夠的數(shù)據(jù)證明其它ANA檢測方法與IFT比較具有同樣或更高的敏感度和特異性.?實驗室在ANA報告當(dāng)中必須注明ANA檢測方法.EUROIMMUN1-2ANA檢測策略ANA篩查:

間接免疫熒光法(IFT)

抗原譜完整(細(xì)胞核、細(xì)胞漿)

檢測ANA的金標(biāo)準(zhǔn)，具有很高的敏感性和特異性

基質(zhì)組合:HEp-2細(xì)胞+靈長類肝1-2ANA檢測策略HEp-2細(xì)胞+靈長類肝- 確認(rèn)IIF的熒光模型，如

-肌動蛋白

-核糖體P蛋白- 區(qū)分IIF的熒光模型，如： -著絲點

核點

-SS-A/-B

Sm/RNPKu- 還可獲得其它結(jié)果，如： -ANCA

-肌內(nèi)膜/谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶1-2ANA檢測策略確認(rèn)IIF的熒光模型

HEp-2細(xì)胞靈長類肝肌動蛋白核糖體P蛋白1-2ANA檢測策略區(qū)分IIF的熒光模型

HEp-2細(xì)胞靈長類肝著絲點核點1-2ANA檢測策略

區(qū)分IIF的熒光模型

HEp-2細(xì)胞靈長類肝著絲點和核點1-2ANA檢測策略區(qū)分IIF的熒光模型

HEp-2細(xì)胞相似的顆粒型–很難區(qū)分Sm/RNPSS-A/SS-BKu1-2ANA檢測策略區(qū)分IIF的熒光模型

靈長類肝區(qū)分熒光模型–容易區(qū)分Sm/RNPSS-A/SS-BKu1-2ANA檢測策略區(qū)分IIF的熒光模型

Sm/RNPSS-A/SS-BKu靈長類肝HEp-2細(xì)胞1-2ANA檢測策略靈長類肝:結(jié)果肌內(nèi)膜pANCAEUROIMMUN1-2ANA檢測策略ANA檢測：分型實驗

ELISA:

- 單特異ELISA：適合大批量標(biāo)本的檢測

- ENA譜：各種高純抗原的組合

歐蒙斑點法/歐蒙印跡法:

-ENA譜：各種高純抗原的組合

免疫印跡法:

-適合用于區(qū)分一些特殊抗體(如RNP：70K,A,C)

-適合檢測針對目前還不能純化的抗原的抗體(如Ku)1-2ANA檢測策略ELISA:ENA譜1-2ANA檢測策略歐蒙斑點法:ENA譜1-2ANA檢測策略歐蒙印跡法:ENA譜1-2ANA檢測策略免疫印跡法：

HEp-2細(xì)胞抗原提取物1-2ANA檢測策略歐蒙推薦的ANA稀釋方案1-2ANA檢測策略歐蒙ANA—IIF稀釋方案歐蒙ANA間接免疫熒光法檢測系統(tǒng)的起始稀釋度為1:100。即該檢測系統(tǒng)的正常參考范圍為1:100。梯度稀釋時的稀釋因子為1:3.2。推薦每個標(biāo)本至少平行做兩個稀釋度：1:100和1:1000。由于不同廠家ANA檢測系統(tǒng)的起始稀釋度和稀釋因子不同，因而不同廠家的ANA滴度結(jié)果不能直接進(jìn)行比較。1-2ANA檢測策略歐蒙實驗室ANAIIF的研究結(jié)果起始稀釋度1:100時：正常人血清中ANA95％以上為陰性，ANA陽性的抗體滴度明顯低于風(fēng)濕性疾病患者。多數(shù)風(fēng)濕性疾病患者血清中ANA滴度大于1:100， 但大于1:32000以上的抗體滴度也較少見。例數(shù)抗體滴度1:100風(fēng)濕性疾病患者15000份正常人1:10000EUROIMMUN1-2ANA檢測策略歐蒙實驗室推薦的ANA稀釋方案起始稀釋度：1:1001:1,000

抗體滴度：1:1001:1,000

1:3201:3,200 1:10,000

報告結(jié)果抗體濃度范圍：（＋）＋＋

＋＋＋＋ ＋＋＋＋EUROIMMUN1-2ANA檢測策略原因1:高滴度抗體在低稀釋倍數(shù)時可能被非特異性反應(yīng)遮蓋抗Yo抗體(猴小腦)1:101:100抗表皮基底膜抗體(喉舌)1:101:100AMA(鼠腎)1:1001:1000pANCA(人中性粒細(xì)胞)1:11:10推薦一個標(biāo)本平行作兩個稀釋度

1:100和1:1000(1)1-2ANA檢測策略原因2：在低稀釋倍數(shù)時多種自身抗體可能相互掩蓋1:10001:1000ANA核均質(zhì)型和著絲點型1:1001:100ANA核均質(zhì)型和核仁型推薦一個標(biāo)本平行作兩個稀釋度

1:100和1:1000(2)1-2ANA檢測策略推薦一個標(biāo)本平行作兩個稀釋度

1:100和1:1000(3)兩個滴度平行檢測：1:100和1:1,000，通過一次實驗，就可估計抗體的滴度1:1,000ANA均質(zhì)型（滴度1:10,000）1:1001:1,000ANA均質(zhì)型（滴度1:1,000）1:1001-2ANA檢測策略推薦一個標(biāo)本平行作兩個稀釋度

1:100和1:1000(4)各稀釋度的反應(yīng)性抗體滴度及強度臨床意義1:1001:1000弱＋—1:100（＋）可疑陽性。強＋—1:320＋弱陽性，提示可能存在相關(guān)疾病。強＋弱＋1:1000＋＋中等陽性，提示可能存在相關(guān)疾病強＋＋1:3200＋＋＋強陽性，高度提示存在相關(guān)疾病強＋強＋1:10000＋＋＋＋極強的陽性，高度提示存在相關(guān)疾病。1-2ANA檢測策略ANA結(jié)果報告及注意事項1-2ANA檢測策略ANA結(jié)果報告報告ANA結(jié)果時，應(yīng)包括如下幾個方面： -定性結(jié)果：陰性或陽性。

-熒光模型：看到的所有模型均應(yīng)報告。

-每種熒光模型的滴度。-建議：如下一步的確認(rèn)實驗等。-所用檢測系統(tǒng)的參考范圍。

1-2ANA檢測策略ANA結(jié)果報告舉例1:1000核均質(zhì)型：1:100核仁型：1:10001:100結(jié)果報告核均質(zhì)型：1:100著絲點：1:10001-2ANA檢測策略ANA檢測的注意事項（1）ANA的滴度結(jié)果非常重要 -所用檢測系統(tǒng)的起始稀釋度（正常參考范圍）只是一個統(tǒng)計值，如果以此為臨界值，部分正常人也可出現(xiàn)陽性（5-10%），在年齡大于60歲的老年人中，陽性率更高，但滴度較低。

-ANA滴度越高，與自身免疫性疾病的相關(guān)性就越大。1-2ANA檢測策略ANA檢測的注意事項（2）ANA的熒光模型 -熒光模型與相應(yīng)靶抗原在細(xì)胞內(nèi)的分布相關(guān)，可初步提供自身抗體針對的靶抗原信息，并可為下一步的確認(rèn)實驗提供指導(dǎo)作用。

-還可根據(jù)熒光模型結(jié)果判斷確認(rèn)實驗結(jié)果的有效性，以排除非特異性反應(yīng)。1-2ANA檢測策略ANA檢測的注意事項（3）ANA檢測流行病學(xué)資料的積累 -目前，IIF檢測ANA時，有很多熒光模型相對應(yīng)的靶抗原尚不清楚，尤其是這些熒光模型的臨床意義不明確，但隨著人們對自身免疫病及其相關(guān)自身抗體研究的深入，越來越多的以前認(rèn)為沒有臨床意義的抗體成為新的研究焦點。-對臨床意義和靶抗原不明確的熒光模型也應(yīng)向臨床報告，以引起