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國家市場監(jiān)督管理總局中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會I1下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T19495.1轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測通用要求和定義GB/T19495.2轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測實驗室技術(shù)要求GB/T19495.3轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測核酸提取純化方法GB/T19495.7轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測抽樣和制樣方法編碼乙酰輔酶A羧化酶的基因。編碼真核生物18S核糖體RNA的基因。編碼玄參花葉病毒的35S啟動子的基因。蓿J101與J163品系中。源自AgrobacteriumCP4菌株,用于編碼莽草酸途徑中的關(guān)鍵酶的基因,存在于轉(zhuǎn)基因苜蓿J101與J163品系中。2上游引物ACC-F:5'-GATCAGTGAACTTCGCAAAG下游引物ACC-R:5'-CAACGAC下游引物18S-R:5'-CGTGTCAGGAT探針18S-P:5'-TGCGCGCCTGCTGCCTTCCT-3'探針J101-P:5'-ACTGAAGGCGGGAAACGACAATCT-3'探針J163-P:5'-TGAAGTGTTCGGTGGGAAACGACA-3'3上游引物KK179-F:5'-AGGACCTGCAGAAGCTA-3'下游引物KK179-R:5'-CTAGGCTAAAGTAAGATATCGAAGA-3'探針KK179-P:5'-TCAGATTGTCGTTTCCCGCCTTCA-3′上游引物FMV35S-F:5'-TGACAGCCCACTCACTAA-3'下游引物FMV35S-R:5'-CAATCTGGAATGCTGCTAAATC-3′上游引物CTP2-F:5'-GAAATCCAGTCAACGCAAATC-3'下游引物CTP2-R:5'-CATCCCACTCTTCTTCAATCC-3'探針CTP2-P:5'-ATCGGTTTCTCTGAAGACGCAGCA-3'上游引物EPSPS-F:5'-CAGCATCCACGAGCTTATC-3'下游引物EPSPS-R:5'-GGAAACAGAAGACATGACCTTA-3′探針EPSPS-P:5'-ACGTCATCCCACTCTTCTTCAATCCC-3′上游引物E9-F:5'-GTACCATTTGTTGTGCTTGTAA-3'下游引物E9-R:5'-GGACCATATCATTCATTAACTCTTC-3'上游引物Pal2-F:5'-GCATCGTTACCACCCTTTAT-3'下游引物Pal2-R:5'-GTAGTGCGTAATGTGGTGAA-3'探針Pal2-P:5'-ACCAGACACCAACGCTCCAGATTT-3'上游引物TNOS-F:5'-ATCGTTCAAACATTTGGCA-3'下游引物TNOS-R:5'-ATTGCGGGACTCTAATCATA-3′探針TNOS-P:5'-CATCGCAAGACCGGCAACAGG-3'7.1抽樣4的純度和濃度:DNA純度以O(shè)D?6o/OD??0比值表示a)陽性對照:為對應(yīng)的轉(zhuǎn)基因植物樣品品系或含有相應(yīng)外源基因的轉(zhuǎn)基因植物樣品基因組終濃度1下游引物1DNA模板2 注1:實時熒光PCR預(yù)混液中包含有PCR擴增酶、擴增緩沖液以及dNTP等組分,可選擇單獨的PCR擴增酶以及相應(yīng)的擴增緩沖液、dNTP等反應(yīng)組分進(jìn)行試驗,以上組分的添加量按照產(chǎn)品說明書使用。注2:反應(yīng)體系中的各組分可根據(jù)不同最終反應(yīng)體系進(jìn)行區(qū)分,但是需保持所有組分終濃度一致。實時熒光PCR反應(yīng)參數(shù)為:50℃/2min;95℃/10min;95℃/15s,60℃/60s,40個循環(huán)。56見表A.1。品系名稱外源基因啟動子結(jié)構(gòu)基因FMV35S啟動子基因CP4-EPSPS基因、CTP2基因E9基因FMV35S啟動子基因CP4-EPSPS基因、CTP2基因E9基因—GTACTGATCTTGTGTCATAGTTTCAAACACTGATAGTTTAAACTGAAGGCGGGAAACGACAATCTGATCCCCATCAAGCTTCTGCAGGTCCTGCTCGAGTGGAAGCTAATTCTCAGTGCCGGGACAAGGTCATCCAAACTGAAGTGTTCGGTGGGAAACGACATCAAGCTTCTGCAGGTCCTGCTCGAGTGGAAGCTAATTCTCAGTCCAA.2.3轉(zhuǎn)基因苜蓿KK179轉(zhuǎn)化事件特異性目標(biāo)序列(來自US20140259227)AGGACCTGCAGAAGCTAGCTTGATGGGGATCAGATTGTCGTTTCCCGCCTTCAAAACCTGACAGCCCACTCACTAATGCGTATGACGAACGCAGTGACGACCACAAAAGAATTAGCGAAATCCAGTCAACGCAAATCTCCCTTATCGGTTTCTCGAGCTTATCCGATTTCGTCGTCGTGGGGATTGAAGAAGAGTGGGATGCAGCATCCACGAGCTTATCCGATTTCGTCGTCGTGGGGATTGACGTTAATTGGCTCTGAGCTTCGTCCTCTTGTACCATTTGTTGTGCTTGTAATTTACTGTGTTTTTTATTCGGTTTTGTGAAATGGAAATGGATGGAGAAGAGTTAATGAATGATATGGTCCGCATCGTTACCACCCTTTATACCCACCTACCCCTAACACTCTCCGTTATATATAACCCCTTCATGAACAAGGCTAATCATTCACCACATTAATTGCGGGACTCTAATCATAAAAACCCATCTCATAAATAACGTCATGAATTATTACATGCTTAACGTAATTCAACAGAAATTATATGATAATCATCG
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