NQO1基因多態(tài)性與食管癌易感性的病例對照研究-0

1/1NQO1基因多態(tài)性與食管癌易感性的病例對照研究NQO1基因多態(tài)性與食管癌易感性的病例對照研究NQO1基因多態(tài)性與食管癌易感性的病例對照研究作者：

周艷麗，陳華芳，史習(xí)舜，周紫荊，李國梁，潘培川，陳子龍，吳清波【摘要】［目的］研究NQO1基因多態(tài)性與食管癌易感性的關(guān)系。

［方法］采用1：

2配對的病例對照研究，運(yùn)用PCR,RFLP技術(shù)檢測NQO1基因C609T多態(tài)性。

［結(jié)果］NQO1609CC、CT和TT各基因型在病例組中的頻度分別為％、％和%，在對照組分別為％、％和％，兩組間的分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

攜帶NQO1609TT基因型的個體患食管癌的風(fēng)險高于崾攜帶609CC或609CT基因型者。

蟯吃蔥蒜與NQO1基因型TT之間存在次嶄相乘模型的交互作用(OR=，95％CI=～)；飲燙茶與NQO1TT危險基庖因型之間存在次相乘模型的交互作用(O梆R=，95％CI=～)。

［結(jié)論］NQO1609TT基因型是食管癌的危險因素之一；609TT基因型食管癌發(fā)生風(fēng)臆險的作用有明顯的放大效應(yīng)。

【關(guān)鍵詞】食管腫瘤病例對照研究NQO1基因э多態(tài)性交互作用ACase,cont幻rolStudyonthePolym巽orphismsofNQO1andS┾usceptibilityofEso斛phagealCancerAbs納tract:［Purpose］Toi＆nvestigatetherelatニionshipbetweengene玨ticpolymorphismofNQO1andsusceptibili味tytoesophagealcanc梆er.［Methods］Thisin暉vestigationwascond賤uctedby1∶2matchedc整ase,controlstudy,a晗ndtheC609TpolymorphismingeneNQO1wasd琥eterminedwithPCR,R黜FLPtechnique.［Resu齊lts］Thefrequencies硫ofNQO1609CC,CTandTTgenotypeinesophag臆ealcancergroupwere意%,%and%respectivel附y(tǒng),while%,%and%inco瞠ntrolgroup,respect子ively.Thedistribut汞ionwasstatisticall脫ysignificantdiffer菽encebetweenbothgro挹ups.Individualscar吶ryingNQO1609TTgeno╋typehadasignifican洮tincreasedriskfore猓sophagealcancer(ad驕justedOR=,95%CI:～)comparedtothosewith609CCor609CTgenot肋ype.Therewerethein駭teractionofsubmultiplicitymodelbetwe籮enalliumvegetables租consumptionandNQO1欺TTgenotype(OR=,95％駁CI:～),andbetweenover,hotteadrinkinga郢ndNQO1gene(OR=,95％扔CI:～).［Conclusions潷］NQO1609TTgenotypeisoneoftherisksfor鬏esophagealcancer.T部heNQO1609TTgenotyp兕ehassignificantamplificationeffecton孬theriskofesophagea饞lcancer.Keywords:徜esophagealneoplasm疾s;case,controlstud褶y;NQO1genepolymorpюhisms;interaction代嵬謝酶基因多態(tài)性是不同個體代謝酶活性差⑽異的主要原因，從而影響個體患癌的易感衢性。

依賴還原型輔酶Ⅰ/Ⅱ：

醌氧化還原酶(NQO1)又稱D,硫辛酰胺脫氫酶墨，催化醌類及其衍生物發(fā)生還原反應(yīng)轉(zhuǎn)化碘為氫醌，為人體內(nèi)一種重要的Ⅱ相反應(yīng)酶伴。

而醌是一類在自然界中廣泛存在的有毒┝化合物，能誘發(fā)哺乳動物細(xì)胞癌變和壞死欣。

研究發(fā)現(xiàn)NQO1存在多態(tài)性，即C6煢09T，這個變異使酶活性顯著降低。

我們以福建省食管癌高發(fā)區(qū)安溪縣為研究現(xiàn)閥場，在進(jìn)行環(huán)境因素調(diào)查研究的同時，對昝NQO1基因多態(tài)性與食管癌的關(guān)系進(jìn)行莠了探討，并結(jié)合安溪高發(fā)區(qū)的環(huán)境危險因頎素對基因與環(huán)境的交互作用進(jìn)行了初步分析。

1材料與方法研究對象病例琥組為XX年11月至XX年8月間，經(jīng)安焦溪縣醫(yī)院內(nèi)窺鏡及病理診斷確診為食管癌┞的新發(fā)病例，剔除年齡＞75歲及體質(zhì)虛忸弱者。

對照組按1∶2配對，選擇與病例居住同一鄉(xiāng)村、無血緣關(guān)系、同民族、同性別、年齡相差3歲以內(nèi)的同期同院的逍非腫瘤患者為對照。

病例和對照均為安溪〔縣居民，并為當(dāng)?shù)爻Ｗ艨?20年以上睞)。

調(diào)查方法及內(nèi)容采用統(tǒng)一編制的徘調(diào)查表，由經(jīng)過培訓(xùn)考核合格的調(diào)查員直鷸接詢問每名研究對象后填寫。

調(diào)查內(nèi)容主氓要有：

一般情況、日常生活行為習(xí)慣、飲崤食習(xí)慣、飲食結(jié)構(gòu)、居住史、家庭消費(fèi)情暫況，消化系統(tǒng)疾病史及食管癌家族史等。

NQO1基因多態(tài)性的檢測運(yùn)用聚合酶哐鏈反應(yīng)限制性片段長度多態(tài)性技術(shù)檢測鞍研究對象的NQO1C609T基因型。

茫標(biāo)本收集及DNA提取抽取各研究對鬩象外周血5ml，置于一次性生化采血管鎂中，離心分層，分裝上層血清和下層血凝吊塊，置于低溫冰箱保存。

采用常規(guī)高鹽沉淀法提取基因組DNA[1]。

PCR冒擴(kuò)增[2](1)引物序列為：

Pri逍merF：

5,AAGCCCAGAC斕CAACTTCT,3，Primer傘R：

5,GCGTTTCTTCCATCCTTC,3，由上海博亞生物技術(shù)蔥有限公司合成。

(2)PCR擴(kuò)增反應(yīng)體檐系：

反應(yīng)總體積為25l，其中含10徙PCRbufferl，mmol/LMgCl2，200mol/LdNИTPs，引物F、R各mol/L，TaqDNA聚合酶，基因組DNA80n賁g~100ng。

(3)PCR循環(huán)參數(shù)：

95℃預(yù)變性5min，然后94℃變轢性30s、56℃復(fù)性30s、72℃延哀伸45s，35個循環(huán)后，72℃延伸10min。

HinfⅠ酶切反應(yīng)酶切┯體系為20l，包括：

10buff弒er2l，HinfⅠ內(nèi)切酶l，超純水l，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物10l。

酶纘切反應(yīng)條件為：

37℃水浴6h。

酶切產(chǎn)笙物用2％瓊脂糖凝膠、電壓90V電泳1h。

NQO1基因型的判斷：

酶切片段僅195bp者為純合野生基因型CC；措195bp、119bp和76bp者為寡雜合基因型CT；119bp和76bp∷者為純合突變基因型TT。

統(tǒng)計分析方寇法全部數(shù)據(jù)采用軟件建立數(shù)據(jù)庫。

運(yùn)用2檢驗(yàn)比較NQO1基因頻率的Har而dy,WEinberg遺傳平衡檢驗(yàn)，轢NQO1C609T基因在病例組和對照診組分布的特點(diǎn)和差異。

運(yùn)用叉生分析的原鋝理觀察NQO1C609T基因型、環(huán)境喳因素、遺傳因素之間的交互作用。

參照文晶獻(xiàn)[3]的方法評價交互作用：

多因素L銘ogistic回歸模型中包括單獨(dú)遺傳因素、單獨(dú)環(huán)境因素和兩因素共同組成變燉量的效應(yīng)，g、e和eg分別為三湖者的回歸系數(shù)，也即ORg、ORe和O剩Reg的自然對數(shù)。

交互作用系數(shù)＝焰eg/e，＞1，表示遺傳因素對環(huán)縞境暴露效應(yīng)有放大作用；＜1，表示遺曜傳因素對環(huán)境暴露效應(yīng)有減弱作用；＝1，則兩者沒有交互作用。

當(dāng)OReg＝熄OReORg為交互作用的相乘模型；苒OReg＞OReORg為交互作用的的超相乘模型；OReg＜OReOR趺g為交互作用的次相乘模型；OReg＝觸ORe＋ORg-1時，則為相加模型。

ボ2結(jié)果病例組和對照組一般特征的偈描述本次研究按1∶2配對，共有96降對完成了問卷調(diào)查和實(shí)驗(yàn)室檢測，其中男锨性58對，女性38對，性別比為∶1。

葛食管癌病例組和對照組在性別、年齡、經(jīng)毋濟(jì)狀況及文化程度等方面的分布差異無統(tǒng)檢計學(xué)意義，但職業(yè)分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義，與對照組相比，食管癌患者以農(nóng)民為主漶，文盲所占比重較高。

NQO1基因型天頻率及遺傳平衡檢驗(yàn)對病例組和對照組NQO1C609T基因型頻率進(jìn)行了H字ardy,WEInberg遺傳平衡檢鱈驗(yàn)，兩組的基因型頻率觀察值與期望值之菅間差異無統(tǒng)計學(xué)意義，表明病例組和對照眉組的NQO1基因型頻率均符合Hard肅y,Weinberg遺傳平衡定律，樣咯本具有群體代表性。

食管癌病例組和對┏照組NQO1基因型分布及等位基因頻率奏見表2、3、4。

NQO1609CC、CT和TT各基因型在病例組中的分布分別為％、％和%，在對照組中的分布分別傍為％、％和％，表明NQO1各基因型在剝病例組和對照組的分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義蒈。

與609CC和609CT基因型相比罌，609TT基因型與食管癌的發(fā)生有顯始著性關(guān)聯(lián)，在年齡、性別和住址等因素調(diào)霽整后OR＝，95％CI=～。

病例組與對照組609T等位基因頻率分別為％和埂％，兩組間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

NQO1基因多態(tài)性與各危險因素的交互作用蕨的分析分別分析NQO1609CC、起CT、TT基因型及危險基因型TT與食善管癌發(fā)生相關(guān)危險因素的交互作用。

經(jīng)年齡、性別、居住地、經(jīng)濟(jì)狀況及文化程度祀等因素調(diào)整后，僅發(fā)現(xiàn)TT基因型與不吃措蔥蒜之間存在交互作用。

未發(fā)現(xiàn)NQO1并基因多態(tài)性與飲酒、高鹽飲食、食用紅薯鵬干、食管癌家族史及食用新鮮蔬菜之間存在交互作用。

與食用蔥蒜史之間交互作瑞用分析結(jié)果顯示，在TT基因型存在時，不吃蔥蒜者患食管癌的風(fēng)險增大，OR值化為，而吃蔥蒜者OR值降至，TT基因型與不吃蔥蒜存在次相乘模型的交互作用。

灼飲烏龍茶與食管癌的關(guān)系本次研究發(fā)現(xiàn)飲燙茶的人群較飲溫茶或涼茶的人群更胛易患食管癌，而且茶葉質(zhì)量越好患食管癌的風(fēng)險越低。

交互作用分析中發(fā)現(xiàn)喝燙茶嗉與NQO1基因多態(tài)性及食管癌家族史之陽間存在顯著的交互作用，結(jié)果見表6、7蟮。

表6顯示，單獨(dú)暴露于飲燙茶的估計麓相對危險性O(shè)Re為，當(dāng)同時攜帶NQO槌1TT危險基因型時，其OReg值升至斤，增加了暴露于飲燙茶的危險效應(yīng)，兩者凇的交互作用符合次相乘模型。

而食管癌家族史與飲燙茶之間的交互作用為超相乘效酴應(yīng)，同時暴露于食管癌家族史和飲燙茶者發(fā)生食管癌的風(fēng)險明顯高于單獨(dú)暴露于食晃管癌家族史者或飲燙茶者。

3討論NQO1，即NAD(P)H：

醌氧化還原卒酶，是體內(nèi)一種重要的Ⅱ相反應(yīng)酶。

NQ鰣O1以NAD(P)H為受體，可將NA注DH或NADPH的電子傳遞給醌類及其蓖衍生物，發(fā)生雙電子還原反應(yīng)，生成低毒席的氫醌類化合物，其催化特性在于無單電魍子還原產(chǎn)物半醌及自由基等氧化產(chǎn)物形成肝，避免了對細(xì)胞的損傷，降低具有致癌性砍和致畸性的醌類化合物的危害[4]。

N抓QO1與其他Ⅰ、Ⅱ相代謝酶一起構(gòu)成了體內(nèi)對外源致癌物質(zhì)的代謝網(wǎng)絡(luò)，在機(jī)體孱的解毒代謝中發(fā)揮著重要作用。

在正常粳人群中,該酶的活性存在差異。

20世紀(jì)卵90年代初期，有研究發(fā)現(xiàn)NQO1基因彩cDNA609位點(diǎn)上存在C/T間單核罔苷酸多態(tài)性，可能改變了酶的二級結(jié)構(gòu)，使酶的活性降低，增加了氧自由基的生成啻[5，6]。

純合野生基因型CC具有完全的NQO1酶活性,雜合基因型CT的旁酶活性較純合野生型降低3倍，純合突變櫚基因型TT的酶活性則完全喪失[7，8泮]。

因此，NQO1缺陷可降低細(xì)胞解毒澧致癌物的能力，從而影響細(xì)胞代謝途徑，臻增加致癌物負(fù)荷并能導(dǎo)致某些易感個體惡摯性變。

由于NQO1在醌類化合物的解毒勺過程中起著很重要的作用，所以它的基因嬡多態(tài)性日益受到人們的重視。

經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)瞽NQO1多態(tài)性與大腸癌[9]、肺癌[鉬10]、白血病[11，12]等有顯著顢相關(guān)性。

目前關(guān)于NQO1多態(tài)性與食杏管癌關(guān)系的研究并不多，我們采用匹配的毯病例對照研究，以福建省食管癌高發(fā)區(qū)之絎一安溪縣為現(xiàn)場，分析了NQO1基因多酶態(tài)性與當(dāng)?shù)厥彻馨┮赘行缘年P(guān)系，研究發(fā)忤現(xiàn)NQO1基因多態(tài)性與食管癌的遺傳易略感性有關(guān)。

因?yàn)閿y帶純合突變基因型TT騶者完全喪失NQO1酶活性，故我們進(jìn)一睡步分析比較了病例組和對照組TT基因型啾的分布差異，結(jié)果表明，攜帶純合突變基騰因型TT的個體發(fā)生食管癌的危險性比攜帶野生型基因型CC和雜合突變基因型C菏T的個體高倍，提示具有純合突變基因型祈TT的個體可能是當(dāng)?shù)匕l(fā)生食管癌的高危人群。

ZhangJ等[13]研究顯示蝶NOQ1C609T基因型分布在高加索彬人和中國人群中具有顯著差異，攜帶TT祛基因型者比攜帶CC、CT基因型的個體軎發(fā)生食管癌的危險性分別增高倍和倍，與鏢本次研究結(jié)果相似。

交互作用分析結(jié)果裥表明：

不吃蔥蒜與NQO1TT基因型之間的交互作用符合次相乘模型，這與蔥蒜氘其中所含化合物對機(jī)體氧化還原代謝酶系苯的誘導(dǎo)作用有關(guān)。

本次研究未發(fā)現(xiàn)食管癌啁家族史與NQO1基因之間存在交互作用裕，但是在同時暴露于食管癌家族史和TT躦危險基因型發(fā)生食管癌的風(fēng)險會高于單獨(dú)詆暴露于這兩個危險因素者。

而Zhang僻J等研究發(fā)現(xiàn)，在中國人群中，暴露于上消化道腫瘤家族史者會增加發(fā)生食管癌的風(fēng)險[13]，提示攜帶NQO1純合突た變基因型造成的NQO1酶活性的缺乏可ⅴ能為家族中上消化道腫瘤聚集的遺傳機(jī)制阜之一。

這些結(jié)果均進(jìn)一步說明了食管癌的鄯發(fā)生是環(huán)境因素和遺傳因素相互作用的結(jié)拖果。

目前已有大量的研究資料表明飲茶餃對食管癌具有保護(hù)作用，這主要與茶葉中含有的茶多酚、茶色素、L,茶氨酸有關(guān)，這些物質(zhì)具有抗氧化作用，可以清除體妞內(nèi)的氧自由基，抑制生物大分子DNA、費(fèi)蛋白質(zhì)等的氧化損傷[14]。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果銓發(fā)現(xiàn)無論是綠茶還是紅茶都可在甲基芐基片亞硝胺(NMBzA)和甲基烷基亞硝胺攏(MANA)的動物模型中減少鼠的腫瘤抓發(fā)生[15]。

本次研究發(fā)現(xiàn)飲用質(zhì)量好泖的烏龍茶是食管癌的保護(hù)因素，而飲燙茶邐是食管癌的危險因素，這可能與安溪縣是瑩烏龍茶的主要產(chǎn)地，當(dāng)?shù)鼐用耧嫴璎F(xiàn)象比苒較普遍，但是不同經(jīng)濟(jì)水平的人群飲用茶蝽葉的質(zhì)量不同，而茶葉質(zhì)量越好，其含有苫的有效成分較一般茶葉多，而含有較少的肄有害物質(zhì)，從而降低食管癌的發(fā)病風(fēng)險。

氡飲燙茶在當(dāng)?shù)厥蔷用耧嫴璧囊粋€普遍習(xí)慣籠，已有實(shí)驗(yàn)證實(shí)70℃以上燙食對食管黏扒膜上皮細(xì)胞的增殖周期會產(chǎn)生嚴(yán)重影響，并且為細(xì)胞在有害代謝產(chǎn)物作用下產(chǎn)生癌霧變創(chuàng)造了有利條件[16]。

這也是國內(nèi)酐外大量流行病學(xué)研究結(jié)果一致證實(shí)了熱刺蕨激是食管癌發(fā)病因素之一的依據(jù)。

因此不皂良的飲茶習(xí)慣可以降低飲茶的保護(hù)作用，Ⅺ這是致癌或抗癌因素的混雜與交互作用的結(jié)果。

飲茶習(xí)慣與基因、遺傳因素的交鈹互作用分析顯示：

飲燙茶與NQO1TT危險基因型之間存在次相乘效應(yīng)的交互作祭用，而食管癌家族史與飲燙茶之間的交互作用為超相乘效應(yīng)，同時暴露于食管癌家驃族史和飲燙茶者發(fā)生食管癌的風(fēng)險明顯高昧于單獨(dú)暴露于食管癌家族史或飲燙茶者。

綜上所述，NQO1基因C609T多態(tài)蕎性可能是安溪縣食管癌高發(fā)的危險因素之舶一，TT基因型是食管癌的危險基因型，鍬其與多種環(huán)境因素之間存在交互作用，從⒕而增強(qiáng)或減弱了它對食管癌的危險效應(yīng)。

暖在人群防治食管癌過程中，應(yīng)考慮到易感堋基因與環(huán)境因素的交互作用，綜合分析多期種代謝酶之間的協(xié)同作用，從而有針對性嘮地進(jìn)行行為干預(yù)和化學(xué)預(yù)防，以降低食管れ癌的發(fā)病風(fēng)險。

【參考文獻(xiàn)】[1髟]SalazarLA,HirataM犒H,CavalliSA,etproc描edureforDNAisolationfromfreshandcryo勒preservedclottedhu聳manbloodusefulincl婊inicalmoleculartes執(zhí)ting[J].ClinChem,1纖998,44(8Pt1):1748-1750.[2]林月好,盧錫林,邵☆明,等.NQO1基因多態(tài)性與肺癌遺傳鹱易感性[J].癌癥,2000,19(徇5):450-452.[3]沈靖,碎王潤田,徐希平.代謝酶基因多態(tài)性與環(huán)般境暴露交互作用的分析方法及其應(yīng)用[J僖].中華流行病學(xué)雜志,2001,22(1):61-64.[4]Dink々ova,KostovaAT,Tala舊layevidencethatqui瘰nonereductasetype1劾(DTdiaphorase)prot橛ectscellsagainstth否etoxicityofelectroшphilesandreactivef羌o(jì)rmsofoxygen[J].FrЁeeRadicBiolMed,200歸0,29(3-4):231-240.[5]TraverRD,Horiko挽shiT,DanenbergKD,e九t(P)H:quinoneoxido禾reductasegeneexpressioninhumancolonc瘤arcinomacells:char柬acterizationofamut覿ationwhichmodulate茅sDT,diaphoraseacti篤vityandmitomycinse泐nsitivity[J].Cance唳rRes,1992,52(4):79錫7-802.[6]TraverRD心,SiegelD,BeallHD,e雉tofapolymorphismin惑NAD(P)H:quinoneoxi媛doreductase(DT,dia梆phorase)[J].BrJCanよcer,1997,75(1):69-姻75.[7]SiegelD,Anw絨arA,WinskiSL,etpol畀yubiquitinationand澡proteasomaldegrada僉tionofamutantformo彩fNAD(P)H:quinoneox鰩idoreductase1[J].M招olPharmacol,2001,5灃9(2):263-268.[8]MヤoranJL,SiegelD,Rosиspotentialmechanis醮munderlyingtheincreasedsusceptibilit氯yofindividualswith賄apolymorphisminNAD剛(P)H:quinoneoxidoreductase1(NQO1)tob數(shù)enzenetoxicity[J].實(shí)ProcNatlAcadSciUSA,1999,96(14):8150-螵8155.[9]vanderLog條tEM,BergevoetSM,Ro忤elofsHM,etofepoxid紈ehydrolase,NAD(P)H:quinoneoxidoreduc漢tase,cytochromeP45及02E1oralcoholdehydＩrogenasegenotypesiмnsusceptibilitytoc虐olorectalcancer[J]績.MutatRes,XX,593(1驟-2):39-49.[10]LawsonKA,WoodsonK,Vir郁tamoJ,etal.Associa座tionoftheNAD(P)H:q濺uinoneoxidoreducta猊se(NQO1)609C,Tpol格ymorphismwithlungc栲ancerriskamongmale