CD11a+CD18ELISA試劑盒說明書

第第頁人淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原1（LFA—1/CD11a+CD18）ELISA試劑盒說明書產(chǎn)品名稱：人淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原1（LFA1/CD11a+CD18）ELISA試劑盒規(guī)格：48T/96T有效期：6個(gè)月保管條件：28℃本試劑僅供研究使用試驗(yàn)原理：LFA1/CD11a+CD18試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）.已知LFA1/CD11a+CD18濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將LFA1/CD11a+CD18和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中LFA1/CD11a+CD18的活性濃度呈比例關(guān)系。試劑盒內(nèi)容及其配制試劑盒成份（28℃保管）96孔配置48孔配置配制96/48份酶標(biāo)板1塊板（96T）半塊板（48T）即用型塑料膜板蓋1塊半塊即用型標(biāo)準(zhǔn)品：400ng/ml1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按說明書進(jìn)行稀稀空白對(duì)照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型生物素標(biāo)記的LFA1/CD11a+CD18抗體1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型親和鏈酶素HRP1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型洗滌緩沖液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按說明書進(jìn)行稀釋底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型停止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型自備料子1．蒸餾水。2．加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。3．振蕩器及磁力攪拌器等。安全性1．躲避直接接觸停止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。2．試驗(yàn)中不要吃喝、吸煙或使用化妝品。3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。試劑盒操作注意事項(xiàng)1．試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不行保管。2．試驗(yàn)中不用的板條應(yīng)趕忙放回包裝袋中，密封保管，以免變質(zhì)。3．不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。4．使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取停止液和底物A、B液時(shí)，躲避使用帶金屬部分的加樣器。5．使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。6．洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。7．底物A應(yīng)揮發(fā)，躲避長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，躲避長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。躲避用手接觸，有毒。試驗(yàn)完成后應(yīng)趕忙讀取OD值。8．加入試劑的次序應(yīng)*，以保證全部反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。9．依照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及次序進(jìn)行溫育操作。樣品收集、處理及保管方法1、血清操作過程中躲避任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞快速小心地分別。2、血漿EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、細(xì)胞上清液1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、保管假如樣品不趕忙使用，應(yīng)將其分成小部分70℃保管，躲避反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。假如血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。人淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原1（LFA1/CD11a+CD18）ELISA試劑盒試劑的準(zhǔn)備1．標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在試驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備，不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行：400ng/ml（6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。200ng/ml（5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ng/ml（4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ng/ml（3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液25ng/ml（2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液12.5ng/ml（1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液0ng/ml（空白對(duì)照）原始濃度不用稀釋直接加入50ul。2．洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。操作步驟1．使用前，將全部試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。2．依據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決議所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品依據(jù)自身的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。3．加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。趕忙加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。4．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。假如用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)加添一次。5．每孔加入80ul的親和鏈酶素HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。6．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。假如用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)加添一次。7．每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。躲避光照。8．取出酶標(biāo)板，快速加入50ul停止液，加入停止液后應(yīng)趕忙測(cè)定結(jié)果。9．在450nm波優(yōu)點(diǎn)測(cè)定各孔的OD值。性能1.靈敏度：zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990.2.特異性：不與人其它細(xì)胞因子反應(yīng)。3.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。4.局限性：6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，依據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到精準(zhǔn)明確的結(jié)果。結(jié)果推斷與分析1、儀器值：于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的O