2024年主管檢驗(yàn)技師考試臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)血液學(xué)檢驗(yàn)講義第4章血細(xì)胞化學(xué)染色的臨床應(yīng)用

血細(xì)胞化學(xué)染色的臨床應(yīng)用要點(diǎn)1：

過(guò)氧化酶染色（POX）

（1）原理

血細(xì)胞內(nèi)的過(guò)氧化酶分解H2O2，釋出初生態(tài)氧，使無(wú)色聯(lián)苯胺氧化成藍(lán)色聯(lián)苯胺，後者深入變成棕黑色化合物，從容于胞質(zhì)內(nèi)。

（2）成果判斷

陽(yáng)性成果為胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黑色顆粒。①（－），無(wú)顆粒。②（±），顆粒細(xì)小、彌散分布。③（＋），顆粒較粗、局灶分布。④（＋＋），顆粒粗大、密集、分布較廣，占胞質(zhì)的1/2～2/3。⑤（＋＋＋），顆粒粗大、成團(tuán)塊，幾乎充斥胞質(zhì)。⑥（＋＋＋＋），顆粒成團(tuán)塊狀，充斥胞質(zhì)，并覆蓋胞核。

（3）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)

1）粒細(xì)胞系統(tǒng)：原始粒細(xì)胞大多呈陰性反應(yīng)，有的可出現(xiàn)少許藍(lán)黑色顆粒。自早幼粒細(xì)胞至成熟中性粒細(xì)胞均呈陽(yáng)性反應(yīng)，隨細(xì)胞的成熟，陽(yáng)性反應(yīng)的程度逐漸增強(qiáng)。中性分葉核粒細(xì)胞為強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)，嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)性反應(yīng)的程度最強(qiáng)，其陽(yáng)性顆粒比中性粒細(xì)胞粗大，有折光性，嗜堿性粒細(xì)胞呈陰性反應(yīng)。

2）單核細(xì)胞系統(tǒng)：原始單核細(xì)胞呈陰性反應(yīng)，幼單核細(xì)胞和單核細(xì)胞呈弱陽(yáng)性反應(yīng)，陽(yáng)性顆粒少而細(xì)小，彌散分布，有的也可呈陰性反應(yīng)。

3）其他細(xì)胞：淋巴細(xì)胞、巨核細(xì)胞、血小板、幼紅細(xì)胞、漿細(xì)胞和組織細(xì)胞均呈陰性反應(yīng)。有的吞噬細(xì)胞可呈陽(yáng)性反應(yīng)。

過(guò)氧化酶染色（POX）模式圖

（4）臨床意義

1）協(xié)助鑒別急性白血病的類型：

①急性粒細(xì)胞白血病時(shí)，白血病性原始粒細(xì)胞可呈陽(yáng)性反應(yīng)，陽(yáng)性顆粒壹般較多，較粗大，常呈局限性分布；急性淋巴細(xì)胞白血病時(shí)，原始淋巴細(xì)胞和幼淋巴細(xì)胞均呈陰性反應(yīng)；急性單核細(xì)胞白血病時(shí)，白血病性原始單核細(xì)胞呈陰性反應(yīng)，有時(shí)雖少數(shù)可呈弱陽(yáng)性反應(yīng)，但陽(yáng)性顆粒少而細(xì)小，常彌散分布。

②小型原始粒細(xì)胞和原始淋巴細(xì)胞不易區(qū)別，假如小型原始細(xì)胞呈過(guò)氧化物酶陽(yáng)性反應(yīng)，可確定為小型原始粒細(xì)胞。

③急性早幼粒細(xì)胞白血病有時(shí)須與急性單核細(xì)胞白血病鑒別，假如白血病細(xì)胞呈過(guò)氧化物酶強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)，應(yīng)確定為急性早幼粒細(xì)胞白血病。

④急性單核細(xì)胞白血病有時(shí)須與組織細(xì)胞白血病或惡性組織細(xì)胞病鑒別，異常組織細(xì)胞的過(guò)氧化物酶呈陰性反應(yīng)，而白血病性幼單核細(xì)胞和單核細(xì)胞呈弱陽(yáng)性反應(yīng)。

2）成熟中性粒細(xì)胞過(guò)氧化物酶活性的變化：

①活性增高：可見于再生障礙性貧血、感染（尤其是化膿菌感染）、急性淋巴細(xì)胞白血病和慢性淋巴細(xì)胞白血病。

②活性減低：可見于急性粒細(xì)胞白血病、慢性粒細(xì)胞白血病、急性單核細(xì)胞白血病、骨髓增生異常綜合征、放射病及退化性中性粒細(xì)胞。

過(guò)碘酸-雪夫反應(yīng)（糖原染色、PAS）

（1）原理

過(guò)碘酸是氧化劑，使含乙二醇的多糖類物質(zhì)氧化，形成雙醛基。醛基與雪夫試劑中的無(wú)色品紅結(jié)合，形成紫紅色化合物，附著在具有多糖類的胞質(zhì)中。紅色的深淺與細(xì)胞內(nèi)能反應(yīng)的乙二醇基的量成正比。

（2）成果判斷

陽(yáng)性成果為胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)紅色顆粒、塊狀或呈彌漫狀紅色。①（－），胞質(zhì)無(wú)色，無(wú)顆粒。②（＋），胞質(zhì)淡紅色或有少許紅色顆粒，壹般＜10個(gè)顆粒。③（＋＋），胞質(zhì)紅色或有10個(gè)以上紅色顆粒。④（＋＋＋），胞質(zhì)呈暗紅色或有粗大紅色顆粒，可出現(xiàn)紅色塊狀。⑤（＋＋＋＋），胞質(zhì)呈紫紅色或有粗大紅色塊狀。

過(guò)碘酸-雪夫反應(yīng)（糖原染色、PAS）模式圖

（3）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)

1）粒細(xì)胞系統(tǒng)：原始粒細(xì)胞為陰性反應(yīng)；自早幼粒細(xì)胞至中性分葉核粒細(xì)胞均呈陽(yáng)性反應(yīng)，并隨細(xì)胞的成熟，陽(yáng)性反應(yīng)的程度逐漸增強(qiáng)；嗜酸性粒細(xì)胞的顆粒自身不著色，而顆粒之間的胞漿呈紅色；嗜堿性粒細(xì)胞為陽(yáng)性反應(yīng)，陽(yáng)性反應(yīng)物質(zhì)為大小不壹的紫紅色顆粒。

2）紅細(xì)胞系統(tǒng)：幼紅細(xì)胞和紅細(xì)胞均呈陰性反應(yīng)。

3）單核細(xì)胞系統(tǒng)：原始單核細(xì)胞為陰性反應(yīng)，幼單核細(xì)胞為（＋）陽(yáng)性反應(yīng)，單核細(xì)胞為（＋）～（＋＋）陽(yáng)性反應(yīng)。有時(shí)在胞質(zhì)的邊緣處陽(yáng)性反應(yīng)顆粒較粗大。

4）淋巴細(xì)胞：大多數(shù)淋巴細(xì)胞為陰性反應(yīng)，少數(shù)淋巴細(xì)胞可呈（＋）陽(yáng)性反應(yīng)。

5）巨核細(xì)胞和血小板：巨核細(xì)胞為陽(yáng)性反應(yīng)，陽(yáng)性反應(yīng)物質(zhì)為紅色顆粒狀，有時(shí)為紅色塊狀。血小板為陽(yáng)性反應(yīng)，陽(yáng)性反應(yīng)物質(zhì)為細(xì)顆粒狀，有時(shí)為紅色小塊狀。

6）其他細(xì)胞：漿細(xì)胞壹般為陰性反應(yīng)，少數(shù)可呈陽(yáng)性反應(yīng)，陽(yáng)性反應(yīng)物質(zhì)為紅色細(xì)胞顆粒狀。巨噬細(xì)胞可呈陽(yáng)性反應(yīng)，陽(yáng)性反應(yīng)物質(zhì)為紅色細(xì)顆粒狀。

（4）臨床意義

1）紅細(xì)胞系統(tǒng)：

①紅血病或紅白血病時(shí)幼紅細(xì)胞可呈陽(yáng)性反應(yīng)，有時(shí)陽(yáng)性反應(yīng)幼紅細(xì)胞的比例增高，陽(yáng)性反應(yīng)的程度也很強(qiáng)，有時(shí)紅細(xì)胞也呈陽(yáng)性反應(yīng)。

②缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血（又稱地中海貧血）以及骨髓增生異常綜合征時(shí)幼紅細(xì)胞可呈陽(yáng)性反應(yīng)，有時(shí)陽(yáng)性反應(yīng)幼紅細(xì)胞的比例也較高。有時(shí)紅細(xì)胞也可呈陽(yáng)性反應(yīng)。

③巨幼細(xì)胞性貧血、溶血性貧血、再生障礙性貧血和白血病等疾病時(shí)，幼紅細(xì)胞為陰性反應(yīng)，有時(shí)僅個(gè)別幼紅細(xì)胞呈陽(yáng)性反應(yīng)。

2）白細(xì)胞系統(tǒng)：急性淋巴細(xì)胞白血病時(shí)白血病性原始淋巴細(xì)胞的陽(yáng)性反應(yīng)物質(zhì)為紅色粗顆粒狀或紅色塊狀，底色不紅；急性粒細(xì)胞白血病時(shí)，白血病性原始粒細(xì)胞的陽(yáng)性反應(yīng)物質(zhì)呈均勻分布的紅色細(xì)顆粒狀或呈均勻紅色；急性單核細(xì)胞白血病時(shí)，白血病性原始單核細(xì)胞的陽(yáng)性反應(yīng)物質(zhì)呈紅色細(xì)顆粒狀，彌散分布，有時(shí)在胞漿的邊緣處顆粒較粗大。

3）其他細(xì)胞：①協(xié)助鑒別不經(jīng)典巨核細(xì)胞和霍奇金細(xì)胞或Reed-Sternberg細(xì)胞，前者呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)，後者呈弱陽(yáng)性或陰性反應(yīng)。②協(xié)助鑒別戈謝細(xì)胞和尼曼-匹克細(xì)胞，前者呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)，後者是弱陽(yáng)性反應(yīng)，且空泡中心為陰性反應(yīng)。③協(xié)助鑒別白血病細(xì)胞和腺癌骨髓轉(zhuǎn)移的腺癌細(xì)胞，後者呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)，陽(yáng)性反應(yīng)物質(zhì)為紅色細(xì)顆粒狀或粗顆粒狀，有時(shí)呈紅色塊狀。

要點(diǎn)2：

堿性磷酸酶染色（NAP）

（1）原理（偶氮偶聯(lián)法）

血細(xì)胞內(nèi)的堿性磷酸酶在pH9.4～9.6的條件下將基質(zhì)液中的α-磷酸萘酚鈉水解，產(chǎn)生α-萘酚與重氮鹽偶聯(lián)形成不溶性灰黑色沉淀，定位于酶活性所在之處。

（2）成果判斷

陽(yáng)性成果為胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)灰褐色至深黑色顆粒狀或片狀沉淀①（－），灰褐色沉淀，為0分。②（＋），胞質(zhì)出現(xiàn)灰褐色沉淀，為1分。③（＋＋），胞質(zhì)深褐色沉淀，為2分。④（＋＋＋），胞質(zhì)中已基本充斥棕黑色顆粒狀沉淀，但密度較低，為3分。⑤（＋＋＋＋），胞質(zhì)全被深黑色團(tuán)塊沉淀所充斥，密度高，甚至遮蓋胞核，為4分。

堿性磷酸酶染色（NAP）模式圖

（3）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)

1）堿性磷酸酶重要存在于成熟中性粒細(xì)胞，除巨噬細(xì)胞可呈陽(yáng)性反應(yīng)外，其他血細(xì)胞均呈陰性反應(yīng)。

2）成熟中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶（NAP）積分值的計(jì)算：在油鏡下，計(jì)數(shù)100個(gè)成熟中性粒細(xì)胞（包括中性分葉核粒細(xì)胞和中性桿狀核粒細(xì)胞）。分別記錄其分級(jí)狀況，所有陽(yáng)性反應(yīng)的細(xì)胞之和即為陽(yáng)性率，將所有陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)胞均以“＋”級(jí)表達(dá)後，計(jì)算其總積分值。

例：某患者計(jì)數(shù)100個(gè)成熟中性粒細(xì)胞，其成果如下表：反應(yīng)程度個(gè)數(shù)（個(gè)）積分（分）－100＋2020＋＋4080＋＋＋2060＋＋＋＋1040100200陽(yáng)性率為90%，積分值為200（4）參照值：成熟中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶（NAP）的積分值為30～130。由于各試驗(yàn)室的試驗(yàn)條件不壹樣，正常值也有差異，應(yīng)建立本試驗(yàn)室的正常值。這裏的正常值僅供參照。

（5）臨床意義

1）生理變化：①年齡變化：新生兒NAP活性增高，後來(lái)下降。小朋友期各年齡大體相似，成年期較小朋友期活性減低，老年期更低。②應(yīng)激狀態(tài)下的變化：緊張、恐驚、劇烈運(yùn)動(dòng)等NAP活性可增高。③月經(jīng)周期中的變化：經(jīng)前期增高，行經(jīng)後減少，經(jīng)後期恢復(fù)。④妊娠期的變化：妊娠2～3個(gè)月的NAP積分值輕度增高，後來(lái)逐月增高，分娩時(shí)達(dá)高峰，產(chǎn)後則恢復(fù)正常。

2）病理性變化：

①感染：細(xì)菌性感染時(shí)NAP積分值增高。在細(xì)菌性感染中球菌性感染較桿菌性感染為高；在球菌性感染中，急性較慢性為高。病毒性感染時(shí)，NAP積分值壹般無(wú)明顯變化。因此本染色法有時(shí)可協(xié)助鑒別細(xì)菌性感染和病毒性感染。

②血液病：慢性粒細(xì)胞白血病的NAP積分值明顯減低，常為“0”，緩和時(shí)NAP積分值上升到正常。類白血病反應(yīng)時(shí)的NAP積分值明顯增高，中性桿狀核粒細(xì)胞的堿性磷酸酶活性增強(qiáng)，甚至中性晚幼粒細(xì)胞也呈陽(yáng)性反應(yīng)。因此本法常用來(lái)鑒別慢粒和類白血病反應(yīng)及觀測(cè)慢粒療效的指標(biāo)之壹。

急性粒細(xì)胞白血病時(shí)NAP積分值減低，急性淋巴細(xì)胞白血病時(shí)NAP積分值壹般增高，因此本法可作為鑒別急粒和急淋的措施之壹；急性單核細(xì)胞白血病時(shí)NAP積分值壹般減低，有時(shí)可正常；粒細(xì)胞白血病合并細(xì)菌性感染時(shí)NAP積分值可增高，但不如單純細(xì)菌性感染增高的明顯；再生障礙性貧血的NAP積分值增高，當(dāng)病情好轉(zhuǎn)時(shí)，NAP積分值可下降，完全緩和時(shí)NAP活性可恢復(fù)到正常，因此本法對(duì)再障的診斷、療效觀測(cè)和估計(jì)病情均有壹定意義。

陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿的NAP積分值減低，因此本法可作為鑒別陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿和再生障礙性貧血的措施之壹；紅細(xì)胞增多癥的NAP積分值升高，而繼發(fā)性紅細(xì)胞增多癥的NAP積分值無(wú)明顯變化。因此本法可用來(lái)鑒別真性紅細(xì)胞增多癥和繼發(fā)性紅細(xì)胞增多癥；骨髓增生異常綜合征的NAP積分值減低。

③其他：紅白血病的NAP積分值減低，慢性淋巴細(xì)胞白血病、骨髓纖維化、原發(fā)性血小板增多癥和紅血病等疾病的NAP積分值可增高；NAP積分值減低，也可見于鐮形細(xì)胞性貧血、嚴(yán)重嗜酸粒細(xì)胞增多癥、家族性低磷酸酶血癥。

3）其他：應(yīng)用腎上腺皮質(zhì)激素、雌激素和ACTH後NAP積分值增高。

要點(diǎn)3：

酯酶染色

酯酶存在于不壹樣的白細(xì)胞中，根據(jù)不壹樣的底物顯示酶的活性，可將酯酶提成三種，包括萘酚-AS-D氯乙酸酯酶、α-乙酸萘酚酯酶和α-丁酸萘酚酯酶。萘酚-AS-D氯乙酸酯酶為粒系細(xì)胞所特有，又稱特異性酯酶染色。α-乙酸萘酚酯酶可存在于多種細(xì)胞，故又稱非特異性酯酶染色。α-丁酸萘酚酯酶重要存在于單核系細(xì)胞中，又稱單核細(xì)胞酯酶。三種酯酶染色對(duì)不壹樣細(xì)胞的識(shí)別和急性白血病的診斷與鑒別有壹定意義。

氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色（AS-D-NCE）

（1）原理

血細(xì)胞內(nèi)的氯乙酸AS-D萘酚酯酶將基質(zhì)液中的氯乙酸AS-D萘酚水解，產(chǎn)生萘酚AS-D，進(jìn)而與基質(zhì)液中的堅(jiān)牢藍(lán)GBC偶聯(lián)，形成不溶性紅色沉淀，定位于胞質(zhì)內(nèi)。屬于特異性酯酶染色。

（2）成果判斷

陽(yáng)性成果為胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)紅色沉淀：①（－）胞質(zhì)無(wú)色。②（＋）胞質(zhì)呈淡紅色。③（＋＋）鮮紅色沉淀充斥胞質(zhì)。④（＋＋＋）深紅色沉淀充斥胞質(zhì)。

（3）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)

1）粒細(xì)胞系統(tǒng)：原粒細(xì)胞為陰性反應(yīng)或陽(yáng)性反應(yīng)，自早幼粒細(xì)胞至成熟中性粒細(xì)胞均為陽(yáng)性反應(yīng)，酶活性并不隨細(xì)胞的成熟而增強(qiáng)。嗜酸性粒細(xì)胞為陰性反應(yīng)或弱陽(yáng)性反應(yīng)，嗜堿性粒細(xì)胞為陽(yáng)性反應(yīng)。

2）其他血細(xì)胞單核細(xì)胞為陰性反應(yīng)，個(gè)別可呈弱陽(yáng)性反應(yīng)。淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、幼紅細(xì)胞和血小板均呈陰性反應(yīng)。

（4）臨床意義

鑒別急性白血病的類型。急性粒細(xì)胞白血病時(shí)，白血病性原始粒細(xì)胞可出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)；急性單核細(xì)胞白血病及急性淋巴細(xì)胞白血病時(shí)，白血病細(xì)胞均呈陰性反應(yīng)；急性粒-單核細(xì)胞白血病時(shí)，部分白血病細(xì)胞可呈陽(yáng)性反應(yīng)（原粒和早幼粒）。有些白血病細(xì)胞呈陰性反應(yīng)（原始單核和幼單核細(xì)胞）。

α-醋酸萘酚酯酶染色（α-NAE）

（1）原理

血細(xì)胞內(nèi)的α-醋酸萘酚酯酶（α-NAE）將基質(zhì)液中的α-醋酸萘酚水解，產(chǎn)生α-萘酚，萘酚再與堅(jiān)牢藍(lán)B偶聯(lián)，形成不溶性灰黑色或棕黑色沉淀，定位于胞質(zhì)內(nèi)。屬于非特異性醋酸染色。

（2）成果判斷

染色陽(yáng)性成果為胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黑色顆粒沉淀。

α-醋酸萘酚酯酶染色（α-NAE）模式圖

（3）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)

1）單核細(xì)胞系統(tǒng)：原始單核細(xì)胞為陰性反應(yīng)或弱陽(yáng)性反應(yīng)；幼單核細(xì)胞和單核細(xì)胞為陽(yáng)性反應(yīng)，這種反應(yīng)可被氯化鈉克制。

2）粒細(xì)胞系統(tǒng)：各期粒細(xì)胞為陰性反應(yīng)，有時(shí)少數(shù)粒細(xì)胞可呈弱陽(yáng)性反應(yīng)，此反應(yīng)不被氟化鈉克制。

3）巨核細(xì)胞和血小板為陽(yáng)性反應(yīng)。

4）其他血細(xì)胞：幼紅細(xì)胞和淋巴細(xì)胞壹般為陰性反應(yīng)，有時(shí)少數(shù)細(xì)胞也可是弱陽(yáng)性反應(yīng)，此反應(yīng)不被氯化鈉克制；漿細(xì)胞為陰性反應(yīng)。

（4）臨床意義

1）協(xié)助鑒別急性白血病的類型：?jiǎn)魏思?xì)胞白血病時(shí)，白血病原始單核細(xì)胞可呈陽(yáng)性反應(yīng)，幼單核細(xì)胞和單核細(xì)胞大多呈陽(yáng)性反應(yīng)，此反應(yīng)能被氟化鈉克制，克制率在50%以上；急性粒細(xì)胞白血病時(shí)，白血病原始粒細(xì)胞為陰性反應(yīng)，有時(shí)個(gè)別白血病原始粒細(xì)胞可呈陽(yáng)性反應(yīng)，但此反應(yīng)不被氟化鈉克制。

急性淋巴細(xì)胞白血病時(shí)，白血病原始淋巴細(xì)胞為陰性反應(yīng)，有時(shí)原始淋巴細(xì)胞可出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)，重要見于T細(xì)胞型急淋；急性粒-單核細(xì)胞白血病時(shí)，部分原始白血病細(xì)胞呈陽(yáng)性反應(yīng)，并能被氟化鈉克制，這些白血病細(xì)胞也許是單核細(xì)胞系細(xì)胞，部分白血病細(xì)胞呈陰性反應(yīng)，也許是粒細(xì)胞系細(xì)胞。

2）紅血病和紅白血?。寒惓Ｓ准t細(xì)胞可呈陽(yáng)性反應(yīng)。

3）巨幼細(xì)胞貧血：巨幼細(xì)胞也可呈陽(yáng)性反應(yīng)。

醋酸AS-D萘酚酯酶染色（AS-D-NAE）和氟化鈉克制試驗(yàn)

（1）原理

血細(xì)胞內(nèi)的醋酸AS-D萘酚酯酶與重氮鹽偶聯(lián)，形成不溶性藍(lán)色沉淀，定位于胞質(zhì)內(nèi)。氟化鈉克制試驗(yàn)是以相似措施制備2份基質(zhì)液，其中壹份加入適量氯化鈉，另壹份不加氯化鈉作對(duì)照。將已固定的2張相似標(biāo)本的涂片混入這2種不壹樣基質(zhì)液中，分別作醋酸AS-D萘酚酯酶染色。屬于非特異性酯酶染色。

用油鏡觀測(cè)計(jì)數(shù)100或200個(gè)被檢細(xì)胞，分別計(jì)算出克制前和克制後的陽(yáng)性率和陽(yáng)性積分，按下述公式計(jì)算出克制率。

克制率（%）＝（克制前陽(yáng)性率－克制後陽(yáng)性率或陽(yáng)性積分）/克制前陽(yáng)性率或陽(yáng)性積分×100

所謂克制是指氟化鈉試驗(yàn)的克制率不小于50%。

（2）成果判斷

染色陽(yáng)性成果為胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黑色顆粒沉淀：①（－），無(wú)顆粒沉淀，為0分。②（±），顆粒少許、稀疏，為0.5分。③（＋），胞質(zhì)內(nèi)1/2區(qū)域出現(xiàn)顆粒沉淀，為1分。④（＋＋），胞質(zhì)內(nèi)3/4區(qū)域出現(xiàn)顆粒沉淀，為2分。⑤（＋＋＋），胞質(zhì)內(nèi)充斥顆粒沉淀，為3分。⑥（＋＋＋＋），胞質(zhì)內(nèi)充斥濃密的顆粒沉淀，為4分。

（3）正常血細(xì)胞的染色

1）粒細(xì)胞系統(tǒng)：原粒細(xì)胞為陰性反應(yīng)或陽(yáng)性反應(yīng)，自早幼粒細(xì)胞至成熟中性粒細(xì)胞均為陽(yáng)性反應(yīng)，壹般為（＋）～（＋＋），此反應(yīng)不被氟化鈉克制。

2）單核細(xì)胞系統(tǒng)：原始單核細(xì)胞為陰性反應(yīng)或陽(yáng)性反應(yīng)，幼單核細(xì)胞和單核細(xì)胞均為陽(yáng)性反應(yīng)，壹般為（＋＋）～（＋＋＋），此反應(yīng)能被氟化鈉克制。

3）淋巴細(xì)胞：淋巴細(xì)胞呈弱陽(yáng)性反應(yīng)，此反應(yīng)不被氟化鈉克制。

4）紅細(xì)胞系統(tǒng)：初期幼紅細(xì)胞可呈陽(yáng)性反應(yīng)，隨細(xì)胞的成熟陽(yáng)性反應(yīng)程度逐漸減弱，此反應(yīng)不被氟化鈉克制。

5）巨核細(xì)胞和血小板：為陽(yáng)性反應(yīng)。

（4）臨床意義

協(xié)助鑒別急性白血病的類型。急性粒細(xì)胞白血病時(shí)，白血病原始粒細(xì)胞可呈陽(yáng)性反應(yīng)，此反應(yīng)不被氯化鈉克制。急性單核細(xì)胞白血病時(shí)，白血病原始單核細(xì)胞可呈陽(yáng)性反應(yīng)，幼單核細(xì)胞和單核細(xì)胞為陽(yáng)性反應(yīng)，此反應(yīng)被氯化鈉克制。急性粒-單核細(xì)胞白血病時(shí)，部分白血病細(xì)胞的陽(yáng)性反應(yīng)可被氟化鈉克制，部分陽(yáng)性反應(yīng)不被氯化鈉克制。

堿性α-丁酸萘酚酯酶染色（α-NBE）

（1）原理

血細(xì)胞內(nèi)的α-丁酸萘酚酯酶（α-NBE）在pH堿性的條件下水解基質(zhì)液中的α-丁酸萘酚，釋放出α-萘酚，後者與基質(zhì)液中的重氮鹽偶聯(lián)形成不溶性的有色沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)酶所在的部位。本試驗(yàn)常用的重氮鹽為堅(jiān)牢紫醬GBC，形成的有色沉淀為紅色。α-NBE重要存在于單核細(xì)胞中，其陽(yáng)性產(chǎn)物能被氟化鈉克制，而其他細(xì)胞系列的陽(yáng)性產(chǎn)物不能被氟化鈉克制。屬于單核細(xì)胞酯酶染色。

（2）成果判斷

陽(yáng)性成果為胞質(zhì)中出現(xiàn)藍(lán)色顆粒。

（3）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)

1）粒細(xì)胞系統(tǒng)：各期粒細(xì)胞均呈陰性。

2）單核細(xì)胞系統(tǒng)：分化差的原單細(xì)胞呈陰性，分化好的原單細(xì)胞呈陽(yáng)性，幼稚及成熟的單核細(xì)胞呈陽(yáng)性，陽(yáng)性反應(yīng)能被氟化鈉克制。

3）淋巴細(xì)胞系統(tǒng)：外周血的T淋巴細(xì)胞、非T非B淋巴細(xì)胞可呈陽(yáng)性，B淋巴細(xì)胞呈陰性。

4）其他細(xì)胞：巨核細(xì)胞、幼紅細(xì)胞、漿細(xì)胞呈陰性或弱陽(yáng)性；組織細(xì)胞也可呈陽(yáng)性，但不被氟化鈉克制。

（4）臨床意義

與α-NAE（醋酸萘酚酯酶）染色的臨床意義相似，敏感性不如α-NAE，而特異性較α-NAE高，是急性白血病常用的細(xì)胞化學(xué)染色。

1）輔助鑒別急性白血病細(xì)胞類型：

①急性單核細(xì)胞白血?。?jiǎn)魏讼导?xì)胞大多數(shù)呈陽(yáng)性，陽(yáng)性反應(yīng)能被氟化鈉克制；

②急性粒細(xì)胞白血?。涸＜?xì)胞壹般呈陰性；

③急性早幼粒細(xì)胞白血?。涸缬琢＜?xì)胞常呈陰性；

④急性粒單細(xì)胞白血?。翰糠职籽〖?xì)胞陽(yáng)性，部分白血病細(xì)胞陰性；

⑤急性淋巴細(xì)胞白血?。涸技坝字闪馨图?xì)胞壹般呈陰性。

2）急性單核細(xì)胞白血病有時(shí)須與惡性組織細(xì)胞病相鑒別，異常組織細(xì)胞也可呈陽(yáng)性，但陽(yáng)性反應(yīng)不能被氟化鈉克制。

酸性磷酸酶染色（ACP）

（1）原理

血細(xì)胞內(nèi)的酸性磷酸酶在酸性條件下，將基質(zhì)中的磷酸萘酚AS-BI水解，釋放萘酚AS-BI，萘酚AS-BI與六偶氮付品紅偶聯(lián)，形成不溶性紅色沉淀，定位于胞質(zhì)內(nèi)，假如血細(xì)胞的胞質(zhì)呈紅色為陽(yáng)性反應(yīng)，無(wú)紅色為陰性反應(yīng)。

抗酒石酸酸性磷酸酶染色是用相似措施制備2份基質(zhì)液，壹份再加入適量L-酒石酸，另壹份不加L-酒石酸。取兩張相似標(biāo)本的涂片，分別用這2種不壹樣基質(zhì)液作酸性磷酸酶染色。假如血細(xì)胞內(nèi)的酸性磷酸酶耐L-酒石酸克制的都呈陽(yáng)性反應(yīng)。假如不耐L-酒石酸克制的，不加L-酒石酸的呈陽(yáng)性反應(yīng)，而加L-酒石酸的呈陰性反應(yīng)。

（2）成果判斷

陽(yáng)性成果為胞質(zhì)中出現(xiàn)鮮紅色顆粒沉淀：

①（－），胞質(zhì)無(wú)色。

②（＋），胞質(zhì)出現(xiàn)淡紅色顆粒。

③（＋＋），胞質(zhì)充斥鮮紅色顆粒。

④（＋＋＋），胞質(zhì)充斥深紅色顆粒。

（3）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)

粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨核細(xì)胞、血小板、漿細(xì)胞、巨噬細(xì)胞呈陽(yáng)性。

（4）臨床意義

1）協(xié)助鑒別戈謝細(xì)胞和尼曼-匹克細(xì)胞，前者酸性磷酸酶染色為陽(yáng)性反應(yīng)，後者為陰性。

2）協(xié)助診斷多毛細(xì)胞白血病，多毛細(xì)胞白血病時(shí)多毛細(xì)胞的酸性磷酸酶染色為陽(yáng)性反應(yīng)，此酶耐L-酒石酸的克制作用。淋巴肉瘤細(xì)胞和慢性淋巴細(xì)胞白血病的淋巴細(xì)胞，酸性磷酸酶染色也呈陽(yáng)性反應(yīng)，但此酸可被L-酒石酸克制。

3）協(xié)助鑒別T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞，T淋巴細(xì)胞呈陽(yáng)性反應(yīng)，而B淋巴細(xì)胞為陰性反應(yīng)。

要點(diǎn)4：

鐵染色

（1）原理

細(xì)胞外含鐵血黃素和幼紅細(xì)胞內(nèi)的鐵與酸性亞鐵氰化鉀發(fā)生普魯士藍(lán)反應(yīng)，形成藍(lán)色的亞鐵氰化鐵沉淀，定位于含鐵的部位。

（2）正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)

1）細(xì)胞外鐵：觀測(cè)骨髓小粒中的鐵，呈彌散藍(lán)色、顆粒狀、小珠狀或塊狀。根據(jù)骨髓小粒中鐵的存在方式及量將細(xì)胞外鐵分為（－）、（＋）、（＋＋）、（＋＋＋）、（＋＋＋＋）。

細(xì)胞外鐵染色真實(shí)圖

2）細(xì)胞內(nèi)鐵：觀測(cè)100個(gè)中幼紅細(xì)胞和晚幼紅細(xì)胞計(jì)算出鐵粒幼紅細(xì)胞的比例。鐵粒幼紅細(xì)胞是指胞質(zhì)中出現(xiàn)藍(lán)色鐵顆粒的幼紅細(xì)胞，根據(jù)藍(lán)色鐵顆粒多少、粗細(xì)分為Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型及環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞。環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞是指幼紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)藍(lán)色在5顆以上，圍繞核周1/3以上者。成熟紅細(xì)胞中出現(xiàn)鐵顆粒稱為鐵粒紅細(xì)胞。

環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞（細(xì)胞內(nèi)鐵染色）

（3）參照值

1）細(xì)胞外鐵：（＋）～（＋＋），大多為（＋＋）。

2）鐵粒幼細(xì)胞：12%～44%

由于各試驗(yàn)室的試驗(yàn)條件不壹樣，正常值也有差異，應(yīng)建立本試驗(yàn)室的正常值。

（4）臨床意義

1）缺鐵性貧血時(shí)，骨髓細(xì)胞外鐵明顯減低，甚至消失；鐵粒幼細(xì)胞的百分率減低。經(jīng)有效鐵劑治療後，細(xì)胞外鐵增多；因此鐵染色可作為診斷缺鐵性貧血及指導(dǎo)鐵劑治療的重要措施。

2）鐵粒幼細(xì)胞貧血時(shí)，出現(xiàn)較多環(huán)鐵粒幼細(xì)胞，鐵粒幼細(xì)胞也增多，其所含鐵顆粒的數(shù)目也較多，顆粒也粗大，有時(shí)還可見鐵粒紅細(xì)胞。因此本染色可作為診斷鐵粒幼細(xì)胞性貧血的重要措施。

3）骨髓增生異常綜合征時(shí)鐵粒幼細(xì)胞的比例可增高，其所含鐵顆粒的數(shù)目可增多，環(huán)鐵粒幼細(xì)胞常見。在鐵粒幼細(xì)胞難治性貧血，環(huán)鐵粒幼細(xì)胞在15%以上。

4）非缺鐵性貧血如溶血性貧血、營(yíng)養(yǎng)性巨幼細(xì)胞貧血、再生障礙性貧血和白血病，細(xì)胞外鐵正?；蛟龈?，鐵粒幼細(xì)胞正常或增高。

5）感染、肝硬化、慢性腎炎及尿毒癥、血色病及多次輸血後，骨髓細(xì)胞外鐵增長(zhǎng)。

三種常用細(xì)胞化學(xué)染色在鑒別急性白血病類型中應(yīng)用

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化學(xué)染色急粒白血病急單白血病急淋白血病

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POX分化差的原始細(xì)胞（－）～（＋）（－）

（－）～（＋）

分化好的原始細(xì)胞

（＋）～（＋＋＋）

PAS（－）或（＋）（－）或（＋）彌漫性（＋）成塊或顆

彌漫性淡紅色淡紅色或顆粒狀粒狀

α-NAE（－）-（＋）（＋）其活性（－）

氟化鈉克制不敏感被氟化鈉克制

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過(guò)氧化酶染色判斷為4＋陽(yáng)性的原則是

A.顆粒粗大、密集、分布較廣，占胞質(zhì)的1/2～2/3

B.顆粒較粗、局灶分布

C.顆粒成團(tuán)塊狀，充斥胞質(zhì)，并覆蓋胞核

D.顆粒細(xì)小、彌散分布

E.無(wú)顆粒[答疑編號(hào)]

【對(duì)的答案】C

【答案解析】POX染色原理是血細(xì)胞內(nèi)的過(guò)氧化酶分解H2O2，釋出初生態(tài)氧，使無(wú)色聯(lián)苯胺氧化成藍(lán)色聯(lián)苯胺，後者深入變成棕黑色化合物，從容于胞質(zhì)內(nèi)。成果判斷：陽(yáng)性成果為胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黑色顆粒。①（壹），無(wú)顆粒。②（±），顆粒細(xì)小、彌散分布。③（＋），顆粒較粗、局灶分布。④（＋＋），顆粒粗大、密集、分布較廣，占胞質(zhì)的1/2～2/3。⑤（＋＋＋），顆粒粗大、成團(tuán)塊，幾乎充斥胞質(zhì)。⑥（＋＋＋＋），顆粒成團(tuán)塊狀，充斥胞質(zhì)，并覆蓋胞核。

過(guò)碘酸-雪夫反應(yīng)化學(xué)染色中復(fù)染所用試劑是

A.中性紅

B.甲基綠

C.蘇木精

D.剛果紅

E.沙黃[答疑編號(hào)]

【對(duì)的答案】B

【答案解析】細(xì)胞化學(xué)染色過(guò)程