冬蟲夏草菌絲提取物降低二甲基亞硝胺大鼠肝硬化門靜脈高壓效應(yīng)的組織學(xué)基礎(chǔ)

1/1冬蟲夏草菌絲提取物降低二甲基亞硝胺大鼠肝硬化門靜脈高壓效應(yīng)的組織學(xué)基礎(chǔ)冬蟲夏草菌絲提取物降低二甲基亞硝胺大鼠肝硬化門靜脈高壓效應(yīng)的組織學(xué)基礎(chǔ)作者：

王憲波,劉平,唐志鵬,李風(fēng)華,劉成海,胡義揚,徐列明【摘要】目的：

探討冬蟲夏草菌絲提取物（Cordycepsmyceliaextract,CME）對二甲基亞硝胺（dimethylnitrosamine，DMN）大鼠肝硬化門靜脈高壓的防治效應(yīng)及其作用機制。

方法：

50只Wistar大鼠采用10g/kgDMN腹腔注射持續(xù)4周的方法制備大鼠肝硬化模型，并取15只大鼠作為正常對照組。

造模即日起CME預(yù)防組大鼠(n=15)予0.74g/(kgd)CME灌胃(按冬蟲夏草菌絲生藥質(zhì)量計算)，1次/d，預(yù)防用藥持續(xù)4周；CME治療組大鼠(n=10)于造模成功后開始給藥，用藥4周。

分別于造模后3d、2周、4周和造膜終止后2周、4周進行動態(tài)效應(yīng)觀察，腸系膜前靜脈分支插管法檢測門靜脈壓力（pressureofportalvein，Ppv）；放射免疫法測定血清透明質(zhì)酸（hyaluronicacid，HA）含量，免疫組織化學(xué)法檢測肝竇壁CD44、第Ⅷ因子相關(guān)抗原血管假性血友病因子（vonWillebrandfactor,vWF）、平滑肌肌動蛋白（alphasmoothmuscleactin,SMA）、層黏連蛋白（laminin,LM）、Ⅳ型膠原（collagentypeⅣ,ColⅣ）和Ⅰ型膠原（collagentypeⅠ,ColⅠ）表達。

結(jié)果：

預(yù)防用藥4周后，與模型組比較，CME組大鼠門靜脈管徑顯著縮小，門靜脈壓力顯著降低（Plt;0.05），血清HA含量顯著下降（Plt;0.05），vWF、SMA、ColⅣ、LM、ColⅠ染色減弱（Plt;0.05），CD44染色增強（Plt;0.05）。

治療用藥2周時，與模型組比較，CME組大鼠門靜脈直徑顯著縮小，門靜脈壓力顯著降低（Plt;0.05），血清HA含量顯著下降（Plt;0.05）。

治療用藥4周時CME組大鼠門靜脈管徑與門靜脈壓力恢復(fù)至同期正常對照組大鼠水平。

治療用藥2、4周時，與模型組比較，CME組大鼠肝竇壁CD44染色面積增加（Plt;0.05），LM、SMA、vWF和ColⅠ染色減弱（Plt;0.05），肝竇壁ColⅣ染色無顯著變化。

結(jié)論：

CME對DMN致大鼠肝硬化門靜脈高壓具有良好的干預(yù)和治療作用。

CME抗肝竇壁損傷、保護肝竇內(nèi)皮細胞、抑制肝星狀細胞活化，抑制肝竇毛細血管化形成與促進其逆轉(zhuǎn)是其效應(yīng)的組織學(xué)基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】冬蟲夏草菌絲提取物;門靜脈高壓;肝硬化;肝竇內(nèi)皮細胞;大鼠Objective:TostudytheeffectsofCordycepsmyceliaextract(CME)onportalhypertensioninratswithdimethylnitrosamine(DMN)inducedlivercirrhosisandprobeintothemechanismoftheaction.Methods:AratmodeloflivercirrhosiswasinducedbyperitonealinjectionofDMN(atadoseof10g/kg,onceaday,3consecutivedaysperweek)for4weeks.Other15ratswereassignedintonormalcontrolgroup.TheratsinCMEpreventedgroupwereadministratedCME0.74g/(kgd),onceaday,simultaneouslywithDMNtreatmentandkepton4weekadministrating,andtheratsinCMEtreatedgroupwereadministratedafterthemodelwasestablished.After3day,2and4weekDMNinjectionand2,4weekaftertheratlivergotcirrhosis,thepressureofportalvein(Ppv)wasdirectlymeasuredbyintubationviatributaryofvenamesentericaanterior.Theserumhyaluronicacid(HA)contentwasmeasuredbyradioimmunoassay.TheexpressionsofCD44,vonWillebrandfactor(vWF),laminin(LM),alphasmoothmuscleactin(SMA),typeⅠcollagen(ColⅠ)andtypeⅣcollagen(ColⅣ)proteinsinthehepaticsinusoidalwallswereexaminedbyimmunohistochemistry.Results:Thecaliberofportalvein(Cpv)andPpvintheCEMgroup(after4weekprevention)weresignificantlydecreasedascomparedwiththoseintheuntreatedgroupatthesamepointoftime(Plt;0.05),alsoincludingserumHAcontent(Plt;0.05),andvWF,ColⅠ,ColⅣ,LM,SMApositivestaining(Plt;0.05);however,CD44positivestainingwereincreasedintheCEMgroup(Plt;0.05).TheCpv,PpvandserumHAcontentweresignificantlydecreasedafter2weekCMEtreatmentascomparedwiththoseintheuntreatedgroup(Plt;0.05).After4weekCMEtreatment,theCpvandPpvintheCEMgroupwererecoveredtothenormallevel.After2and4weekCMEtreatment,vWF,ColⅠ,LMandSMApositivestainingsweredecreased(Plt;0.05),andCD44positivestainingwasincreased(Plt;0.05)intheCMEgroupascomparedwiththoseintheuntreatedgroupatthesamepointoftime,buttherewerenomarkedchangesfoundinColⅣstaining.Conclusion:CMEplaysagoodroleinpreventingandtreatingtheportalhypertensioninratswithDMNinducedlivercirrhosis.Thehistologicalbasesoftheeffectsaretotreatliversinusoidalendothelialcellinjury,inhibithepaticstellatecellactivation,inhibitandreversehepaticsinusoida1capillarization.Keywords:Cordycepsmyceliaextract;portalhypertension;livercirrhosis;liversinusoidalendothelialcells;rat門靜脈高壓是肝硬化常見的病理表現(xiàn)，也是影響肝硬化患者預(yù)后的重要因素，積極尋找治療肝硬化門靜脈高壓的藥物和方法具有重要的醫(yī)學(xué)價值和社會意義。

二甲基亞硝胺（dimethylnitrosamine,DMN)誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化動物模型具有類似人類肝纖維化和肝硬化的病理特征，常用于肝纖維化和肝硬化門靜脈高壓的發(fā)病機制研究和藥物干預(yù)研究［15］。

冬蟲夏草菌絲（Cordycepsmycelia）具有抗肝纖維化作用［6］，但尚未見到有關(guān)其治療肝硬化門靜脈高壓的研究報道。

本研究旨在探討冬蟲夏草菌絲提取物（Cordycepsmyceliaextract,CME）對DMN大鼠門靜脈高壓的干預(yù)和治療作用，并對其作用機制進行探討，以期為臨床應(yīng)用提供研究基礎(chǔ)。

1材料與方法1.1實驗材料1.1.1實驗動物65只Wistar雄性大鼠，清潔級，體質(zhì)量（15010）g，中國科學(xué)院上海實驗動物中心提供。

1.1.2主要試劑和儀器DMN，東京化成工業(yè)株式會社產(chǎn)品；冬蟲夏草菌絲，江西國藥責(zé)任有限公司產(chǎn)品。

透明質(zhì)酸（hyaluronicacid，HA）檢測試劑盒，上海海軍醫(yī)學(xué)研究所產(chǎn)品；兔抗人CD44多克隆抗體，武漢博士德生物公司產(chǎn)品；兔抗人第Ⅷ因子相關(guān)抗原血管假性血友病因子（vonWillebrandfactor,vWF）多克隆即用型抗體，DAKO公司產(chǎn)品，上海中達醫(yī)學(xué)應(yīng)用研究所提供；兔抗鼠層黏連蛋白（laminin，LM）多克隆抗體，SIGMA公司產(chǎn)品；鼠抗人平滑肌肌動蛋白（smoothmuscleactin,SMA）單克隆抗體，DAKO公司產(chǎn)品；兔抗鼠Ⅰ型膠原(collagentypeⅠ，ColⅠ)、Ⅳ型膠原(collagentypeⅣ,ColⅣ)抗血清，復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院病理教研室產(chǎn)品，工作濃度1∶100。

PowerLab生理數(shù)據(jù)處理和分析系統(tǒng)，澳大利亞ADI公司產(chǎn)品；HPIAS1000高清晰度彩色病理圖文分析系統(tǒng)，武漢同濟醫(yī)科大學(xué)千屏影像工程公司產(chǎn)品。

1.2實驗方法1.2.1冬蟲夏草菌絲提取物的制備冬蟲夏草菌絲用70%乙醇回流提取6次，3h/次，合并回流提取液，回收乙醇；流浸膏加水混勻，用石油醚反復(fù)萃取至萃取液顏色變?yōu)榈厣厥帐兔?；提取物濃縮干燥至粉末狀。

由中國科學(xué)院上海藥物研究所制備。

1.2.2模型制備和分組Wistar大鼠65只，飼養(yǎng)于清潔級動物房。

其中50只大鼠用于肝硬化模型制備，以DMN10g/kg劑量作腹腔內(nèi)注射，1次/d，每周連續(xù)3d、共4周［7］。

15只正常大鼠給予等劑量生理鹽水腹腔注射，設(shè)為正常對照組。

自造模之日起，從造模大鼠中采用隨機數(shù)字表方法隨機取15只大鼠給予CME干預(yù)，設(shè)為CME預(yù)防組，按冬蟲夏草菌絲原藥材0.74g/kg（冬蟲夏草菌絲原藥材臨床成人用量6g/d，按65kg體質(zhì)量成人的8倍量計算）灌胃，1次/d；于給藥后3d、2周、4周3個觀察點分別取模型組與CME預(yù)防組大鼠各5只以及正常對照大鼠3只，對門靜脈壓力及其相關(guān)生化、肝組織學(xué)指標作動態(tài)觀察。

造模4周后大鼠肝硬化模型形成，20只大鼠隨機分為模型組和CME治療組。

CME治療組大鼠給予CME灌胃，0.74g/kg，1次/d，共4周；正常對照組大鼠給予與藥物等量的生理鹽水灌胃。

于給藥后2周和4周，分別取模型組與CME組5只，同期正常對照組大鼠3只，檢測門靜脈壓力后，經(jīng)下腔靜脈采血并獲取肝組織。

1.2.3觀察指標1.2.3.1門靜脈直徑及壓力的測定大鼠用2%戊巴比妥鈉（2ml/kg體質(zhì)量）腹腔注射麻醉后，仰臥位固定，打開腹腔，暴露門靜脈主干，用游標卡尺測量距肝門0.5cm處的門靜脈直徑；于腸系膜前靜脈右側(cè)靠近門靜脈處分離出一回腸腸系膜靜脈分支，結(jié)扎其遠端，然后用血管剪剪開一適宜缺口，將PE100導(dǎo)管自缺口插入后，沿腸系膜前靜脈上行，通過脾靜脈至門靜脈主干，固定導(dǎo)管并接通壓力換能器，經(jīng)PowerLab生理數(shù)據(jù)處理和分析系統(tǒng)獲得門靜脈壓力數(shù)據(jù)。

1.2.3.2血清透明質(zhì)酸含量測定血清透明質(zhì)酸測定采用放射免疫法，具體操作按試劑盒說明書進行。

1.2.3.3CD44、vWF、SMA、LM、ColⅣ和Col表達測定免疫組化染色法檢測CD44、vWF、SMA、LM、ColⅣ和ColⅠ表達。

取肝臟組織，石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水，0.3%H2O2甲醇，室溫10min，沸水浴20min，0.1%胰蛋白酶37℃消化30min，加入第一抗體，4℃過夜，加入兔抗人第二抗體，37℃30min，二氨基聯(lián)苯胺顯色5min，水洗、烘干、封片。

PBS（pH7.4）作空白對照染色。

圖像定量分析：

每組各取3只大鼠肝臟免疫組化染色切片，在每張組織片隨機選擇5個不同視野，在200倍光學(xué)顯微鏡下，測定標準測量窗口（一個視野）中肝竇壁陽性區(qū)域的面積比。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料數(shù)據(jù)用xs表示，進行單因素方差分析，并用LSDt檢驗進行兩兩比較；門靜脈壓力與各指標的相關(guān)分析用直線回歸模型Regression進行相關(guān)性檢驗。

檢驗水準為=0.05。

2結(jié)果2.1門靜脈直徑和門靜脈壓力變化與同期正常對照組比較，DMN造模2周后，模型組大鼠門靜脈直徑有增寬趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05）；4周和終止造模后2周（6周）后顯著增寬（Plt;0.05）；8周后大鼠肝門靜脈直徑仍比正常對照寬，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05）。

模型組大鼠門靜脈壓力在造模2周后顯著高于同期正常對照組（Plt;0.05），4周時門靜脈壓力達峰值；與4周時的模型組比較，終止造模后2周（6周后），門靜脈壓力降低（Plt;0.05），但仍顯著高于同期正常對照組(Plt;0.05)，終止造模后4周（8周）后仍高于同期正常對照組大鼠，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(Pgt;0.05)。

與同期模型組比較，CME干預(yù)用藥2周時門靜脈直徑與門靜脈壓力差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05）；干預(yù)用藥4周時門靜脈直徑顯著縮小、門靜脈壓力顯著降低（Plt;0.05）。

治療用藥2周時門靜脈直徑顯著減小、門靜脈壓力顯著降低（Plt;0.05）；治療用藥4周時門靜脈直徑與門靜脈壓力有所縮小或降低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05）。

與正常對照組比較，CME預(yù)防用藥2周時門靜脈直徑增寬（Plt;0.05），而2周和4周時門靜脈壓力均高于正常對照組（Plt;0.05）；CME治療2周和4周時與正常對照組比較，門靜脈直徑和門靜脈壓力差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05）。

見表1和表2。

表1各組大鼠門靜脈直徑的變化表2各組大鼠門靜脈壓力的變化2.2血清HA含量變化DMN造模3d后與正常對照組比較，模型組和CME組大鼠血清HA含量急劇增高（Plt;0.05）。

造模2周后較3d時下降（Plt;0.05），4周時再次增高至3d時水平；終止造模因素后2周（第6周）較4周時顯著下降（Plt;0.05），第8周時進一步下降（Plt;0.05）；與同期模型組比較，CME預(yù)防用藥2周時，大鼠血清HA含量有所降低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），預(yù)防用藥4周時顯著下降（Plt;0.05）；治療用藥2周時下降更明顯（Plt;0.05），治療用藥4周時降至正常對照組大鼠的水平，但與同期模型對照組之間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

與正常對照組比較，CME預(yù)防用藥3d、4周和治療用藥2周時，大鼠血清HA水平仍顯著增高（Plt;0.05）。

見表3。

表3各組大鼠血清HA含量變化2.3肝竇壁CD44、vWF、SMA、ColⅠ、ColⅣ及LM變化2.3.1肝竇壁CD44變化與正常對照組大鼠相比，DMN造模3d、2周、4周和終止造膜后第2周（6周）、第4周（8周）后大鼠肝竇壁CD44表達顯著減少（Plt;0.05）。

與同期模型組比較，CME組大鼠肝竇壁CD44表達于CME預(yù)防用藥3d時差異無統(tǒng)計學(xué)意義；但預(yù)防用藥2周和4周以及治療用藥2周和4周時其陽性染色均顯著增強（Plt;0.05）。

CME預(yù)防用藥3d、2周、4周和治療用藥2周、4周時大鼠肝竇壁CD44表達仍明顯弱于正常對照組（Plt;0.05）。

見圖1。

2.3.2肝竇壁vWF變化與正常對照組大鼠比較，DMN造模3d、2周、4周后肝竇壁vWF表達顯著增加，4周時達峰值，終止造模后漸趨減輕，但6周、8周時肝竇壁vWF表達仍顯著異常（Plt;0.05）。

與同期模型組比較，預(yù)防用藥3d時大鼠肝竇壁vWF染色無顯著差異，預(yù)防用藥2周、4周以及治療用藥2周、4周時vWF陽性染色均顯著減弱（Plt;0.05）。

CME預(yù)防用藥3d、2周、4周和治療用藥2周、4周時大鼠肝竇壁vWF表達仍明顯強于正常對照組（Plt;0.05）。

見圖2。

2.3.3肝竇壁SMA變化與正常對照組大鼠比較，DMN造模3d、2周、4周后肝竇壁SMA表達顯著增加，4周時達峰值，終止造模后漸趨減輕，但6周、8周時肝竇壁SMA表達仍顯著異常（Plt;0.05）。

與同期模型組比較，3d時預(yù)防組肝竇壁SMA染色無明顯差異，預(yù)防用藥2周、4周以及治療用藥2周、4周時肝竇壁SMA陽性染色均顯著減弱（Plt;0.05）。

CME預(yù)防用藥3d、2周、4周和治療用藥2周、4周時大鼠肝竇壁vWF表達仍明顯強于正常對照組（Plt;0.05）。

見圖3。

2.3.4肝竇壁LM變化與正常對照組大鼠比較，DMN造模3d、2周、4周后肝竇壁LM表達顯著增加，4周時達峰值，終止造模后漸趨減輕，但6周、8周時肝竇壁LM表達仍顯著異常（Plt;0.05）。

與同期模型組比較，3d時預(yù)防組肝竇壁LM染色無明顯差異，預(yù)防用藥2周、4周以及治療用藥2周、4周時肝竇壁LM陽性染色均顯著減弱（Plt;0.05）。

CME預(yù)防用藥3d、2周、4周和治療用藥2周、4周時大鼠肝竇壁LM表達仍明顯強于正常對照組（Plt;0.05）。

見圖4。

圖3各組大鼠肝竇壁SMA表達的變化2.3.5肝竇壁ColⅠ變化與正常對照組大鼠比較，DMN造模3d、2周、4周后肝竇壁ColⅠ表達顯著增加，4周時達峰值，終止造模后漸趨減輕，但6周、8周時肝竇壁ColⅠ表達仍顯著異常（Plt;0.05）。

與同期模型組比較，3d時預(yù)防組肝竇壁ColⅠ染色無明顯差異，預(yù)防用藥2周、4周以及治療用藥2周、4周時肝竇壁ColⅠ陽性染色均顯著減弱（Plt;0.05）。

CME預(yù)防用藥2周、4周和治療用藥2周、4周時大鼠肝竇壁ColⅠ表達仍明顯強于正常對照組（Plt;0.05）。

見圖5。

2.3.6肝竇壁ColⅣ變化與正常對照組大鼠相比，肝竇壁ColⅣ則在DMN造模3d、2周均顯著減少，4周、6周時顯著增加（Plt;0.05）。

與同期模型組比較，CME預(yù)防用藥3d時預(yù)防組肝竇壁ColⅣ染色增強（Plt;0.05），2周時兩組無明顯差異，預(yù)防用藥4周時肝竇壁ColⅣ染色顯著弱于模型對照組（Plt;0.05）；治療用藥2周、4周時與同期模型對照組間均無顯著性差異（P＞0.05）。

CME預(yù)防用藥3d、2周時肝竇壁ColⅣ表達弱于正常對照組大鼠（Plt;0.05），CME治療用藥2周時肝竇壁ColⅣ表達較正常對照組大鼠增強（Plt;0.05），而預(yù)防用藥4周和治療用藥4周時兩組之間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

見圖6。

2.4門靜脈壓力與觀測指標的相關(guān)性以各指標動態(tài)觀察時間點的均值作相關(guān)分析，其結(jié)果顯示，門靜脈壓力與門靜脈直徑呈正相關(guān)，r=0.809（Plt;0.05）；門靜脈壓力與肝竇壁SMA、LM、vWF及HA含量呈正相關(guān)，r值分別為0.921、0.901、0.893和0.827（Plt;0.05）；門靜脈壓力與肝竇壁CD44和ColⅠ、ColⅣ無關(guān)，r值分別為－0.626、0.385、0.405（P＞0.05）。

3討論肝硬化是門靜脈高壓最常見的原因。

傳統(tǒng)上認為肝硬化時，纖維化和再生結(jié)節(jié)壓迫血管，導(dǎo)致血管扭曲，從而使肝竇和終末門靜脈阻力增加。

但近年來研究認為，許多潛在性的可逆性因素起主要作用，包括肝竇壁細胞的收縮性，血管活性物質(zhì)（如內(nèi)皮素、一氧化氮）的產(chǎn)生及影響內(nèi)臟小動脈的各種全身性神經(jīng)體液因子等，肝細胞腫脹也促成門靜脈高壓。

其中肝竇的血流障礙在肝硬化門靜脈高壓形成中的作用越來越受到重視［811］。

早期形成門靜脈壓增高是DMN肝硬化大鼠模型的一個重要特征［12］。

本文實驗結(jié)果顯示，在采用DMN腹腔注射3次的2周后門靜脈壓力即顯著增高，造模4周后的門靜脈壓力均值為同期正常對照組大鼠的2.2倍，其門靜脈管徑呈同步增大；在終止DMN刺激后隨著時間的推移而趨向逆轉(zhuǎn)，終止DMN刺激2周后仍顯著高于同期正常對照組大鼠，第8周的均值較同期正常對照組大鼠增高28％。

表明DMN所致的慢性肝損傷大鼠門靜脈壓增高先于肝硬化的形成，終止造模因素刺激后門靜脈壓的緩解快于肝纖維化的消解。

提示肝纖維結(jié)締組織沉積并不是DMN肝硬化門靜脈壓增高的關(guān)鍵因素，肝竇壁的破壞及其結(jié)構(gòu)的改變可能是重要原因之一。

肝竇主要由肝竇內(nèi)皮細胞（sinusoidalendothelialcells,SECs）組成，SECs遠側(cè)胞漿部分有發(fā)達的窗孔，其窗孔無隔膜，細胞膜表面有高度敏感和特異性透明質(zhì)酸受體CD44［13］，這與血管內(nèi)皮細胞表達特異性標志物vWF呈鮮明的差別［14］。

內(nèi)皮下無基底膜存在，但分布有特殊構(gòu)型的ColⅣ及少量的LM，在面向肝細胞一側(cè)Disse腔中附著有肝星狀細胞（hepaticstellatecells,HSCs）。

肝竇這一獨特生態(tài)環(huán)境及結(jié)構(gòu)是保證血液和肝細胞間正常物質(zhì)交換以及保持門靜脈壓較為穩(wěn)定的組織學(xué)基礎(chǔ)。

免疫組化觀察結(jié)果顯示，在造模3d后，肝竇壁CD44、ColⅣ表達顯著減少，vWF、SMA及LM表達顯著增加，血清HA含量急劇增高；其中ColⅣ表達顯著減少與血清HA含量的急劇增高充分顯示出肝竇壁損傷是DMN肝損傷的早期事件，此后，除ColⅣ表現(xiàn)為2周前減少、4周增加外，其他指標均隨著給予DMN造模時間的推進而呈進行性減少或增加，在終止造模因素刺激后則有所緩解。

表明DMN的毒性作用可破壞正常的肝竇壁結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致肝竇內(nèi)皮細胞向血管內(nèi)皮細胞的轉(zhuǎn)化，由于SECs表達的CD44減少，使SECs清除循環(huán)中HA的功能降低，導(dǎo)致血清HA水平升高，HA濃度高低是評價SECs功能的重要指標［5,13,15］。

SMA既是肝星狀細胞活化標志，也是反映肝星狀細胞收縮力的的指標。

活化的肝星狀細胞分泌Ⅳ型膠原和Ⅰ型膠原以及LM等細胞外基質(zhì)，由于SMA表達量增加而收縮力也增強，促使肝竇直徑變窄，以致肝竇血流阻力增加，進而引起門靜脈壓力的增高［9,10］。

動態(tài)觀察模型大鼠各時間點門靜脈壓力與各指標的相關(guān)性分析結(jié)果充分顯示出肝竇壁病變在門靜脈高壓形成中的作用（門靜脈壓力與肝竇壁SMA、LM、vWF、血清HA含量等均呈顯著的正相關(guān)關(guān)系，r值依次為0.921、0.901、0.893與0.827）。

在DMN造模的同時，持續(xù)給模型大鼠CME干預(yù)，2周時門靜脈壓略有下降，4周時較同期模型組顯著降低；在4周造模成型并終止DMN刺激后投予CME治療，用藥2周時門靜脈壓力與門靜脈管徑顯著低于6周模型對照大鼠，用藥4周時門靜脈壓與門靜脈管徑已回復(fù)至同期正常大鼠的水平。

顯示出CME具有良好的降低DMN大鼠門靜脈壓增高的效應(yīng)。

結(jié)合肝組織學(xué)及血清HA含量的變化結(jié)果可以看出，CME干預(yù)用藥3d時可以顯著抑制肝竇壁Ⅳ型膠原的降解，2周時肝竇壁CD44陽性染色顯著增加，vWF和SMA陽性染色顯著減少，LM和ColⅠ沉積減少；4周時包括血清HA含量在內(nèi)的所有觀測指標與同期模型對照組相比，均顯著改善；對于已造模成型的DMN大鼠肝硬化，治療用藥2周后，上述各指標除ColⅣ外，較同期模型對照組均有顯著改善，治療用藥4周時，肝竇壁CD44染色顯著增加，SMA陽性染色及LM和ColⅠ沉積均顯著減少。

此動態(tài)觀察結(jié)果充分顯示出CME保護肝竇壁、抗肝竇壁損傷以及促進損傷肝竇壁修復(fù)的綜合作用，可以認為這是CME干預(yù)治療二甲基亞硝胺大鼠肝硬化門靜脈高壓效應(yīng)的組織學(xué)基礎(chǔ)。

【參考文獻】1ShimamotoT,MoriY,TakagiH,etal.ExperimentalstudiesonmorphologicalchangesofmicrocirculationofDMNinducedlivercirrhosisafternormothermicischemiawithchargecoupleddevicemicroscope.JGastroenterolHepatol.2003;18(9):10711075.2SakamotoM,UenoT,NakamuraT,etal.Improvementofportalhypertensionandhepaticbloodflowincirrhoticratsbyoestrogen.EurJClinInvest.2005;35(3):220225.3WangXB,LiuP,TangZP,etal.Roleofinjuryandphenotypeshiftofliversinusoidalendothelialcellsinthedevelopmentofportalhypertensionofcirrhosisinrats.ZhongguoBingLiShengLiZaZhi.2005;21(9):18111816.ChinesewithabstractinEnglish.王憲波,劉平,唐志鵬,等.肝竇內(nèi)皮細胞損傷和表型改變在大鼠肝硬化門脈高壓發(fā)生中的作用.中國病理生理雜志.2005;21(9):18111816.4WangXB,LiuP,TangZP,etal.Roleofhepaticstellatecellsactivationindevelopmentofportalhypertensionofdimethylnitrosamineinducedlivercirrhosisinrats.ZhongguoZhongXiYiJieHeXiaoHuaZaZhi.2005;13(4):211214.ChinesewithabstractinEnglish.王憲波,劉平,唐志鵬,等.肝星狀細胞活化在大鼠肝硬化門脈高壓形成中的作用.中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志.2005;13(4):211214.5WangXB,LiuP,TangZP,etal.Studyonthemechanismsofdevelopmentofsinusoidalcapillarization.ZhonghuaXiaoHuaZaZhi.2004;24(5):289292.ChinesewithabstractinEnglish.王憲波,劉平,唐志鵬,等.肝竇毛細血管化的形成機制研究.中華消化雜志.2004;24(5):289292.6LiFH,LiuP,XiongWG,etal.EffectsofCordycepssinensisondimethylnitrosamineinducedliverfibrosisinrats.ZhongXiYiJieHeXueBao.2006;4(5):514517.ChinesewithabstractinEnglish.李風(fēng)華,劉平,熊衛(wèi)國,等.冬蟲夏草菌絲對二甲基亞硝胺誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化的作用.中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報.2006;4(5):514517.7CasuA,CanepaM,NanniG.PerisinusoidalstellatecellsorItocellsandtheirroleinhepaticfibrosis.Pathologica.