長沙健路醫(yī)學檢驗所有限公司-九項遺傳性耳聾基因檢測試劑性能驗證報告(全血修改)

長沙健路醫(yī)學檢驗所有限公司九項遺傳性耳聾基因檢測試劑性能驗證報告目錄驗證目的驗證內(nèi)容和方法對象內(nèi)容與方法設(shè)備實驗要求操作程序驗證結(jié)果陽性符合率陰性符合率空白驗證檢測重復(fù)性檢測靈敏度結(jié)果說明驗證結(jié)論

驗證目的本實驗室計劃使用北京博奧生物集團有限公司晶芯?九項遺傳性耳聾基因檢測試劑盒（微陣列芯片法）[國食藥監(jiān)械（準）字2013第3401518號]開展相關(guān)檢測項目，根據(jù)《ISO15189：醫(yī)學實驗室-質(zhì)量和能力的專用要求》，為保證實驗室按照廠家所提供的試劑盒或檢測系統(tǒng)說明書使用時，能復(fù)現(xiàn)生產(chǎn)廠家所宣稱的檢測性能，按照實驗室質(zhì)量管理計劃，對生產(chǎn)廠家提供的試劑盒和檢測系統(tǒng)進行了性能驗證，報告如下。驗證內(nèi)容與方法對象晶芯?九項遺傳性耳聾基因檢測試劑盒（微陣列芯片法）基因組DNA提取試劑盒為北京康為世紀有限公司血液基因組非柱式提取試劑盒（CW0544）樣本：人全血，適用抗凝劑為EDTA或枸櫞酸鈉等，不得以肝素抗凝。不分病種、檢測目的、性別、年齡。質(zhì)控品：該試劑盒中均包含正常野生型質(zhì)控品，同時實驗室提供4個已知突變的陽性質(zhì)控品，以保證結(jié)果的準確可靠。內(nèi)容與方法根據(jù)產(chǎn)品說明書標示的性能指標，驗證以下內(nèi)容：陽性符合率：已經(jīng)測序確定為特定突變的核酸4（4例，每種類型突變一例）例，由本實驗室使用待評價試劑盒進行測試，結(jié)果應(yīng)與已知結(jié)果一致，陽性符合率應(yīng)達到100%。陰性符合率：已經(jīng)測序確定為野生型的核酸2（2例，正常人）例，由本實驗室使用待評價試劑盒進行測試，結(jié)果應(yīng)與已知結(jié)果一致，陽性符合率應(yīng)達到100%。空白驗證：用實驗室常用滅菌純水代替樣本，由本實驗室使用待評價基因檢測試劑盒進行1次測試，結(jié)果應(yīng)均為未檢出。檢測重復(fù)性：取已知結(jié)果樣本2（2例，涵蓋已知陽性一例，陰性一例）份，未知結(jié)果樣本2（2例，正常人標本）份，由本實驗室使用待評價基因檢測試劑盒分別進行3次測試，3次檢測結(jié)果應(yīng)一致。檢測靈敏度：測量試劑盒中自帶核酸濃度，由本實驗室使用待評價基因檢測試劑盒進行3次測試，結(jié)果應(yīng)正確。設(shè)備臺式高速離心機恒溫金屬浴渦旋振蕩器分光光度計PCR擴增儀水浴鍋晶芯?SlideWasher24芯片洗干儀晶芯?LuxScan10K-B微陣列芯片掃描儀實驗要求實驗室要求：嚴格按照臨檢中心要求進行分區(qū)，保證實驗的規(guī)范操作和結(jié)果的準確可靠。實驗室設(shè)備：各項性能指標應(yīng)在參考范圍之內(nèi)，經(jīng)工程師調(diào)試安裝后方可進行常規(guī)實驗操作。實驗操作人員：應(yīng)熟悉方法原理與操作，能對樣本進行正確處理，并按流程順利進行DNA抽提、PCR擴增、芯片雜交、洗片與掃描操作。實驗前，本實驗室需按照待評價產(chǎn)品說明書要求建立實驗檢測條件，并通過陽性對照和陰性對照試驗。嚴格按照試劑盒說明書要求保存產(chǎn)品及全血樣本。操作程序檢測流程：全血標本編號標記→檢測前準備→提取DNA→PCR擴增→芯片雜交→洗片與掃描→輸出結(jié)果。檢測步驟嚴格按照相關(guān)標準操作規(guī)程。

驗證結(jié)果陽性符合率：結(jié)果見下表。操作者徐圳，何婕審核者石堅操作日期2017年8月17日審核日期2017年8月18日樣本號測序結(jié)果本實驗室檢測結(jié)果（基因型）1235delC雜合突變235delC雜合突變2538C>T雜合突變538C>T雜合突變3299_300delAT雜合突變299_300delAT雜合突變42168A>G雜合突變2168A>G雜合突變陽性樣本號1原始數(shù)據(jù)顯示：陽性樣本號2原始數(shù)據(jù)顯示：陽性樣本號3原始數(shù)據(jù)顯示：陽性樣本號4原始數(shù)據(jù)顯示：本實驗室4個樣本分別檢測1次，結(jié)果與測序完全一致，陽性符合率100%。陰性符合率：結(jié)果見下表。操作者徐圳，何婕審核者石堅操作日期2017年8月17日審核日期2017年8月18日樣本號測序結(jié)果本實驗室檢測結(jié)果（基因型）5試劑盒范圍內(nèi)的九個位點均野生試劑盒范圍內(nèi)的九個位點均野生6試劑盒范圍內(nèi)的九個位點均野生試劑盒范圍內(nèi)的九個位點均野生陰性樣本號5原始數(shù)據(jù)顯示：陰性樣本號6原始數(shù)據(jù)顯示：本實驗室2個樣本分別分別檢測1次，結(jié)果與測序完全一致，陰性符合率100%?？瞻讓φ眨航Y(jié)果見下表操作者徐圳，何婕審核者石堅操作日期2017年8月17日審核日期2017年8月18日樣本號本實驗室檢測結(jié)果（基因型）NC只有QC、PC、MC質(zhì)控探針信號空白對照樣本原始數(shù)據(jù)顯示：本實驗室1個空白檢測1次，結(jié)果與理論結(jié)果完全一致，。檢測重復(fù)性：結(jié)果見下表。操作者徐圳，何婕審核者石堅操作日期2017年8月17日審核日期2017年8月18日樣本號本實驗室檢測結(jié)果（基因型）1235delC雜合突變5試劑盒范圍內(nèi)的九個位點均野生7試劑盒范圍內(nèi)的九個位點均野生8試劑盒范圍內(nèi)的九個位點均野生陽性樣本1重復(fù)性第一次原始數(shù)據(jù)顯示：陽性樣本1重復(fù)性第二次原始數(shù)據(jù)顯示：陽性樣本1重復(fù)性第三次原始數(shù)據(jù)顯示：本實驗檢測結(jié)果重復(fù)3次結(jié)果完全一致，重復(fù)率100%。檢測靈敏度：結(jié)果見下表。操作者徐圳，何婕審核者石堅操作日期2017年8月17日審核日期2017年8月18日樣本號本實驗室檢測結(jié)果（基因型）試劑盒自帶核酸稀釋（80ng/ul）試劑盒范圍內(nèi)的九個位點均野生試劑盒自帶核酸稀釋（40ng/ul）試劑盒范圍內(nèi)的九個位點均野生試劑盒自帶核酸稀釋（20ng/ul）試劑盒范圍內(nèi)的九個位點均野生樣本濃度為80ng/ul樣本原始數(shù)據(jù)顯示：樣本濃度為40ng/ul樣本原始數(shù)據(jù)顯示：樣本濃度為20ng/ul樣本原始數(shù)據(jù)顯示：本實驗檢測結(jié)果分別檢測1次結(jié)果完全一致。檢測結(jié)果說明本試劑盒用于檢測人全血基因組DNA中與遺傳性耳聾相關(guān)的9個突變位點，檢測結(jié)果可以輔助臨床診斷，也可用于流行病學調(diào)查及產(chǎn)前篩查、新生兒篩查等領(lǐng)域，試劑盒檢測指標如下表：表1試劑盒檢測指標基因名稱突變位點突變位點描述GJB23535delG176176del16235235delC299299delATSLC26A4IVS7-2IVS7-2A>G21682168A>G線粒體12SrRNA15551555A>G14941494C>TGJB3538538C>TGJB2基因編碼縫隙連接蛋白26，縫隙連接蛋白調(diào)控細胞間的離子交換，耳蝸毛細胞中高表達。GJB2基因突變相關(guān)的耳聾為隱性遺傳方式，當發(fā)生純合突變時，影響離子通道正常功能，患者出生即表現(xiàn)出耳聾癥狀，此突變導(dǎo)致的耳聾預(yù)示良好的人工耳蝸移植效果。SLC26A4基因編碼pendrin蛋白，pendrin蛋白屬于離子轉(zhuǎn)運體家族，調(diào)節(jié)細胞膜離子轉(zhuǎn)運。SLC26A4基因突變相關(guān)的耳聾為隱性遺傳方式，當發(fā)生純合突變時，患者腦部抗壓力變化能力降低，患感冒、頭部受打擊時，聽力急劇下降。此突變個體應(yīng)避免顱壓增大和使用耳毒性藥物，建議使用改善微循環(huán)藥物和神經(jīng)營養(yǎng)藥治療。12SrRNA基因編碼產(chǎn)物結(jié)構(gòu)類似細菌16S核糖體RNA，該基因突變攜帶者使用氨基糖苷類藥物會引起耳蝸的ATP合成障礙，導(dǎo)致重度耳聾的發(fā)生，因此檢出此類突變的個體應(yīng)終身慎用氨基糖苷類抗生素藥物。同時，由于該基