病毒清除工藝驗(yàn)證探討及ICH Q5A R2解讀

病毒清除工藝驗(yàn)證探討及ICHQ5A(R2)解讀徐明明生物安全檢測(cè)中心負(fù)責(zé)人北京義翹神州科技股份有限公司義翹神州目錄生物制品病毒安全性控制1病毒清除驗(yàn)證2ICHQ5A(R2)新增內(nèi)容解讀3問(wèn)題解析4義翹神州生物制品病毒安全性控制01義翹神州適用范圍：以微生物或人/動(dòng)物源的細(xì)胞、組織和體液等為起始原材料，其制備過(guò)程或制劑中可能添加人或動(dòng)物來(lái)源的原材料或輔料。起始原材料、輔料潛在的病毒污染是影響產(chǎn)品安全性的關(guān)鍵因素。生物制品病毒安全性控制義翹神州主要法規(guī)義翹神州《中國(guó)藥典》2020年版三部生物制品病毒安全性控制二（四）《來(lái)源于人或動(dòng)物細(xì)胞系生物技術(shù)產(chǎn)品的病毒安全性評(píng)價(jià)》ICHQ5A（R1）《生物組織提取制品和真核細(xì)胞表達(dá)制品的病毒安全性評(píng)價(jià)技術(shù)審評(píng)一般原則》【S】GPH3-1（2005）USFDAPointstoConsiderintheManufacturingandTestingofMonoclonalAntibodyProductsforHumanUse,1997USFDAPointstoConsiderintheCharacterizationofCellLinesUsedtoProduceBiologicals,1993EMEA/CHMP/BWP/398498,2005,2008GuidelineonvirussafetyevaluationofbiotechnologicalinvestigationalmedicinalproductsEMEA/CHMP/BWP/268/95,1996Noteforguidanceonvirusvalidationstudiesthedesign,contributionandinterpretationofstudiesvalidatingtheinactivationandremovalofviruses……一般原則風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估分類要點(diǎn)周期管理全程控制人血液制品動(dòng)物來(lái)源制品疫苗重組治療性生物制品基因治療產(chǎn)品人血漿來(lái)源風(fēng)險(xiǎn)控制病毒清除能力起始原料風(fēng)險(xiǎn)控制病毒清除能力病毒污染來(lái)源控制病毒污染來(lái)源控制病毒清除能力病毒污染來(lái)源控制生物制品病毒安全性控制義翹神州來(lái)源控制1、起始原料2、原材料輔料病毒清除工藝驗(yàn)證1、一般要求2、檢測(cè)方法3、病毒清除效果的評(píng)估4、統(tǒng)計(jì)分析5、工藝變更對(duì)病毒清除的影響生產(chǎn)過(guò)程控制1、產(chǎn)品生產(chǎn)工藝2、特定病毒清除工藝步驟產(chǎn)品病毒污染的檢測(cè)1、病毒污染檢測(cè)設(shè)置的原則2、病毒污染檢測(cè)方法的選擇具體要求生物制品病毒安全性控制義翹神州分類評(píng)價(jià)：CaseA：未發(fā)現(xiàn)有病毒、病毒樣顆粒CaseB：只有嚙齒類動(dòng)物逆轉(zhuǎn)錄病毒CaseC：含有已知的但對(duì)人無(wú)感染的病毒CaseD：含有已知的人致病原CaseE：含有未知的病毒，可能對(duì)人有致病性ICHQ5A(R1)-病毒安全性評(píng)價(jià)義翹神州病毒清除驗(yàn)證02義翹神州病毒清除驗(yàn)證----何時(shí)做？工藝研發(fā)階段（Optional）新藥臨床申請(qǐng)（IND）（Compulsory）上市許可申請(qǐng)（BLA）（Compulsory）上市后產(chǎn)品補(bǔ)充驗(yàn)證（Optional）義翹神州病毒清除驗(yàn)證----如何做？除病毒過(guò)濾低pH孵育層析病毒加到樣品細(xì)胞檢測(cè)qPCR檢測(cè)添加病毒總量殘余病毒總量計(jì)算病毒清除下降因子義翹神州病毒清除驗(yàn)證-----指示病毒ICHQ5A（R1）相關(guān)病毒、特異性“模型”病毒、非特異性“模型”病毒需要對(duì)清除已知病毒的工藝做出評(píng)價(jià)；同時(shí)用非模型病毒評(píng)價(jià)該工藝的耐用性嚙齒類動(dòng)物細(xì)胞系一般含有逆轉(zhuǎn)錄病毒顆?；蚰孓D(zhuǎn)錄病毒樣顆粒，生產(chǎn)工藝應(yīng)該能夠去除滅活逆轉(zhuǎn)錄病毒，可用鼠白血病病毒進(jìn)行驗(yàn)證FDA選擇合適的一種或多種病毒。使用已知或懷疑會(huì)污染細(xì)胞系的病毒，也可選擇相似的模型病毒當(dāng)一種病毒不能為該過(guò)程的充分性提供足夠的證明，需要使用一種以上的病毒EMEA相關(guān)病毒、模型病毒首先盡可能選擇最可能污染產(chǎn)品的相似的病毒進(jìn)行驗(yàn)證。其次，盡可能代表各種物理化學(xué)性質(zhì)，以便全面驗(yàn)證系統(tǒng)去除病毒的能力中國(guó)《一般原則》2005：一個(gè)典型的驗(yàn)證研究所選擇的病毒，至少應(yīng)包括單鏈和雙鏈的RNA及DNA、脂包膜和非脂包膜、強(qiáng)和弱抵抗力、大和小顆粒等病毒《中國(guó)藥典》2020：相關(guān)病毒、特異性“模型”病毒、非特異性“模型”病毒，按順序選擇義翹神州病毒清除驗(yàn)證-----指示病毒義翹神州病毒清除驗(yàn)證-----工藝---縮小模型ICHQ5A（R1）應(yīng)對(duì)縮小生產(chǎn)規(guī)模的有效性加以證實(shí)。如色譜純化工藝，選擇的色譜設(shè)備，柱床型號(hào)、線性流速、流速/柱床高度比、緩沖液、凝膠型號(hào)、PH、溫度、蛋白濃度、鹽及產(chǎn)品應(yīng)代表生產(chǎn)工藝水平。

要求對(duì)工藝參數(shù)做出評(píng)價(jià)FDA應(yīng)準(zhǔn)確反應(yīng)實(shí)際工藝，柱床大小、流速、流速/柱床高度比、緩沖液、緩沖液類型、PH、蛋白濃度、鹽及產(chǎn)品濃度應(yīng)代表生產(chǎn)工藝水平。EMEA縮小工藝模型與實(shí)際生產(chǎn)工藝的可比性是縮小工藝模型對(duì)生產(chǎn)工藝病毒評(píng)價(jià)結(jié)果可接受的前提條件。通過(guò)比較工藝參數(shù)如PH，溫度，蛋白濃度，其它成分，反應(yīng)時(shí)間，柱床高度，線性流速等，對(duì)縮小工藝模型進(jìn)行論證。中國(guó)應(yīng)對(duì)縮小生產(chǎn)規(guī)模的有效性加以證實(shí)。如色譜純化工藝，選擇的色譜設(shè)備，柱床高度、線性流速、流速/柱床高度比、緩沖液、凝膠型號(hào)、PH、溫度、蛋白濃度、鹽及產(chǎn)品應(yīng)代表生產(chǎn)工藝水平。雖然有些偏差是不可避免的，但應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能產(chǎn)生的影響給予合理的解釋。義翹神州病毒清除驗(yàn)證-----工藝---互補(bǔ)機(jī)制ICHQ5A（R1）可采用將幾種互補(bǔ)分離過(guò)程結(jié)合的方法或?qū)⒉《緶缁钆c分離相結(jié)合的方法均能達(dá)到有效清除病毒的目的FDA不同步驟的病毒下降因子是獨(dú)立的，應(yīng)具有不同的作用機(jī)制，從而使病毒逃脫一個(gè)步驟，同時(shí)逃脫另一個(gè)步驟的可能性不高。當(dāng)已知傳染性病毒經(jīng)常出現(xiàn)在未經(jīng)純化的產(chǎn)品中時(shí)，建議病毒清除工藝中至少含有一個(gè)病毒滅活步驟。EMEA驗(yàn)證一個(gè)以上的的病毒清除工藝步驟是可取的，至少應(yīng)評(píng)估兩個(gè)正交步驟，正交步驟被定義為不同機(jī)制的病毒清除步驟。中國(guó)《一般原則》2005：生物組織提取制品應(yīng)包含兩種從機(jī)制上能夠互補(bǔ)的有效工藝步驟，至少一個(gè)處理步驟應(yīng)該具有針對(duì)非脂包膜病毒去除和/或滅活效應(yīng)，對(duì)于真核細(xì)胞表達(dá)應(yīng)至少包括一個(gè)有效工藝步驟，并能夠有效去除和/或滅活非脂包膜病毒。義翹神州病毒清除驗(yàn)證-----工藝---使用后填料及清潔ICHQ5A（R1）分離柱重復(fù)使用，應(yīng)該在多次使用后提供病毒去除穩(wěn)定性的數(shù)據(jù)支持?？赏ㄟ^(guò)提供證據(jù)證實(shí)色譜柱經(jīng)過(guò)清洗和再生過(guò)程確實(shí)將病毒滅活或消除。FDA應(yīng)考慮隨著時(shí)間的推移，色譜柱在重復(fù)使用后清除病毒的能力可能會(huì)有所不同。EMEA在重新使用該系統(tǒng)前應(yīng)該確保工藝系統(tǒng)內(nèi)潛在病毒殘留已經(jīng)被充分去除，例如通過(guò)對(duì)柱子的消毒等。中國(guó)應(yīng)考慮反復(fù)使用的新層析柱與反復(fù)使用的舊柱對(duì)比去除病毒效果的差別義翹神州病毒清除驗(yàn)證-----檢測(cè)方法---定量分析ICHQ5A（R1）感染性定量分析應(yīng)該具有足夠的敏感性和重復(fù)性，具有足夠的重復(fù)實(shí)驗(yàn)確保結(jié)果具有充分的統(tǒng)計(jì)學(xué)可信度。如有正當(dāng)理由，可使用與感染性無(wú)關(guān)的定量分析。內(nèi)部變異的95%可信限一般應(yīng)該在均值的+0.5log10。FDA用來(lái)定量病毒滴度的感染性分析方法應(yīng)該是靈敏的、可重復(fù)的。應(yīng)保證足夠的樣品量，盡可能檢測(cè)到病毒。檢測(cè)變異性應(yīng)在感染性分析中確定，并使用置信區(qū)間。內(nèi)部變異的95%可信區(qū)間，并應(yīng)該在均值的+0.5log10。EMEA感染性定量分析應(yīng)該遵循GLP的要求，這些方法應(yīng)該具有足夠的敏感性和重復(fù)性，具有足夠的重復(fù)實(shí)驗(yàn)確保結(jié)果具有充分的統(tǒng)計(jì)學(xué)可信度。PCR檢測(cè)方法只能用于病毒去除檢測(cè)，不能評(píng)價(jià)病毒滅活效果。用于病毒檢測(cè)的分析方法的適用性應(yīng)得到驗(yàn)證。中國(guó)應(yīng)盡可能選擇靈敏度高的病毒檢測(cè)方法，以確保對(duì)滅活效果的準(zhǔn)確判定。用于病毒清除研究的檢測(cè)方法應(yīng)經(jīng)評(píng)估，評(píng)估包括靈敏度、特異性、重復(fù)性、緩沖液/基質(zhì)對(duì)病毒感染力的干擾、可能影響選用指示病毒對(duì)細(xì)胞感染能力的產(chǎn)品及緩沖液的細(xì)胞毒性分析等。常用病毒檢測(cè)方法可采用病毒含量或滴度檢查（包括蝕斑形成試驗(yàn)和細(xì)胞病變法）或定量病毒核酸檢測(cè)相關(guān)技術(shù)。義翹神州蝕斑形成試驗(yàn)優(yōu)點(diǎn)：能夠記錄出病毒粒子數(shù)量，結(jié)果準(zhǔn)確。缺點(diǎn)：對(duì)操作要求高，通量較小。TCID50qPCR優(yōu)點(diǎn)：實(shí)驗(yàn)操作方便，利用統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果準(zhǔn)確。缺點(diǎn)：不能計(jì)出準(zhǔn)確病毒數(shù)量?jī)?yōu)點(diǎn)：通量大，速度快，可操作性強(qiáng)，結(jié)果準(zhǔn)確。缺點(diǎn)：對(duì)儀器要求高，需要有完善的方法學(xué)驗(yàn)證，可能檢測(cè)到非病毒粒子的核酸。病毒檢測(cè)方法病毒清除驗(yàn)證-----檢測(cè)方法義翹神州病毒清除驗(yàn)證-----檢測(cè)方法---檢測(cè)影響評(píng)估ICHQ5A（R1）應(yīng)分別單獨(dú)評(píng)價(jià)緩沖液和制品在病毒滴度檢測(cè)方法中的毒性和干擾作用。FDA應(yīng)單獨(dú)評(píng)估緩沖液和樣品在病毒滴度檢測(cè)方法中的毒性和干擾。EMEA樣品對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響包括樣品毒性影響，應(yīng)該記錄樣品的檢測(cè)限度。中國(guó)《一般原則》2005：應(yīng)分別單獨(dú)評(píng)價(jià)緩沖液和制品在病毒滴度檢測(cè)方法中的毒性和干擾作用?！吨袊?guó)藥典》2020：應(yīng)評(píng)估緩沖液和產(chǎn)品自身對(duì)指示病毒的毒性作用或?qū)Σ《镜味葯z測(cè)方法的干擾作用義翹神州病毒清除驗(yàn)證-----檢測(cè)方法---病毒假性衰減評(píng)估ICHQ5A（R1）應(yīng)進(jìn)行平行對(duì)照分析研究，以評(píng)估樣品是否因稀釋、濃縮、過(guò)濾、儲(chǔ)存等原因使病毒失去感染性。FDA研究應(yīng)包括與實(shí)驗(yàn)條件平行進(jìn)行的對(duì)照，以評(píng)估實(shí)驗(yàn)操作（稀釋、濃縮、過(guò)濾、儲(chǔ)存等）引起的病毒滅活。EMEA如果可能，模型樣本中加入病毒后直接進(jìn)行滴度測(cè)定，而不應(yīng)該進(jìn)行進(jìn)一步的操作，例如超速離心、層析或儲(chǔ)存。驗(yàn)證工作應(yīng)包括平行對(duì)照分析，以評(píng)估由于滴定前樣品稀釋或儲(chǔ)存等原因造成的病毒感染性喪失。中國(guó)《一般原則》2005：應(yīng)設(shè)立充分的平行對(duì)照試驗(yàn)，說(shuō)明試驗(yàn)本身及樣本制備過(guò)程，提供相關(guān)的試驗(yàn)資料，以排除由于樣本的透析、稀釋、濃縮、過(guò)濾及貯藏可能對(duì)去除/滅活驗(yàn)證效果的影響?！吨袊?guó)藥典》2020：樣品應(yīng)盡快并盡可能直接進(jìn)行病毒滴定，如果做進(jìn)一步處理，或不同時(shí)間取出的樣品要放置一段時(shí)間一同檢測(cè)，應(yīng)設(shè)立平行對(duì)照。義翹神州如何評(píng)估？1.具有相同作用機(jī)制的兩個(gè)步驟的下降因子不能相加，例如：低pH作用2.＜1log10的下降因子，不能計(jì)入總的清除效果中3.未純化的原料中對(duì)逆轉(zhuǎn)錄病毒進(jìn)行檢查，可用電鏡法，檢測(cè)下限是1×106/mL4.整個(gè)純化工藝病毒清除下降因子應(yīng)遠(yuǎn)大于最終產(chǎn)品單次使用劑量的起始材料中存在的假定病毒量。大于的數(shù)量取決于所關(guān)注的病毒和產(chǎn)品的預(yù)期用途病毒清除驗(yàn)證-----病毒安全性評(píng)估義翹神州病毒清除驗(yàn)證-----病毒安全性評(píng)估計(jì)算舉例：收獲液檢測(cè)的病毒量=106/mL每劑量使用的收獲液體積=10mL每劑量可能含有的病毒=106/mL*10mL=107小鼠白血病病毒清除下降因子總和≥1011評(píng)估=107/1011=10-4每一萬(wàn)份劑量中少于1個(gè)病毒義翹神州ICHQ5A(R2)解讀03義翹神州ICHQ5A(R2)目前進(jìn)程目前為評(píng)議討論階段（Step3），預(yù)計(jì)在2023年底或2024年初進(jìn)入實(shí)施階段主要新增內(nèi)容>新產(chǎn)品類型的涵蓋——病毒載體及衍生產(chǎn)品>新檢測(cè)技術(shù)的使用——NAT和NGS>新制造工藝的應(yīng)用——連續(xù)流生產(chǎn)>已有數(shù)據(jù)/經(jīng)驗(yàn)的使用——先驗(yàn)知識(shí)/平臺(tái)驗(yàn)證義翹神州ICHQ5A(R2)-新產(chǎn)品類型基因工程病毒載體和病毒載體衍生產(chǎn)品瞬轉(zhuǎn)/穩(wěn)轉(zhuǎn)/重組病毒感染產(chǎn)生病毒載體病毒載體衍生的重組蛋白（eg.VLP）AAV基因治療載體潛在的病毒污染來(lái)源>細(xì)胞系：污染、潛在/持續(xù)感染病毒或內(nèi)源性病毒>原料/試劑造成的偶然病毒污染>操作人員和環(huán)境（存儲(chǔ)和處理）的污染>病毒和病毒載體誘導(dǎo)特定基因的表達(dá)造成的污染（包括輔助病毒）義翹神州病毒清除驗(yàn)證需求

根據(jù)具體產(chǎn)品評(píng)估病毒安全性風(fēng)險(xiǎn)

使用有代表性的縮小模型使用代表性的外源病毒、內(nèi)源性病毒和相關(guān)輔助病毒（若可能）的指示病毒根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估確定可接受的病毒下降因子數(shù)量ICHQ5A(R2)-病毒載體及衍生產(chǎn)品輔助病毒HEK293瞬轉(zhuǎn)病毒清除研究指示病毒驗(yàn)證無(wú)要求病毒清除研究義翹神州臨床前早期階段：PPQ：病毒清除的局限性由于載體類產(chǎn)品本身的特性，病毒清除工藝的應(yīng)用可能受到一定局限，如除病毒過(guò)濾，應(yīng)結(jié)合實(shí)際與風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估病毒的安全性關(guān)注于原材料和試劑以及生產(chǎn)過(guò)程的檢測(cè)和控制使用表征良好的細(xì)胞庫(kù)和病毒種子避免使用源自人類和動(dòng)物的原材料（血清、胰酶等）細(xì)胞培養(yǎng)基或培養(yǎng)基補(bǔ)充劑的處理（輻照、高溫、過(guò)濾等作為降低病毒風(fēng)險(xiǎn)的補(bǔ)充措施）封閉操作，避免環(huán)境和人員的污染等ICHQ5A(R2)-病毒載體及衍生產(chǎn)品義翹神州ICHQ5A(R2)-病毒載體及衍生產(chǎn)品病毒載體類產(chǎn)品--桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)指示病毒選擇：Bac、VSV若使用含有內(nèi)源性病毒的昆蟲細(xì)胞（如含有彈狀病毒的Sf9細(xì)胞）生產(chǎn)病毒載體產(chǎn)品，需要研究下游工藝清除彈狀病毒的能力，結(jié)合風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，證明整個(gè)生產(chǎn)工藝能充分去除彈狀病毒，保證產(chǎn)品的安全。病毒載體類產(chǎn)品--輔助病毒HSV相關(guān)產(chǎn)品的指示病毒選擇：HSV、ADV（HEK293）、MuLv（BHK-21）ADV相關(guān)產(chǎn)品的指示病毒選擇：ADV義翹神州ICHQ5A(R2)-新檢測(cè)技術(shù)的使用分子生物學(xué)方法：核酸擴(kuò)增技術(shù)（NAT）：可用于補(bǔ)充細(xì)胞培養(yǎng)檢測(cè)法，檢測(cè)特異性病毒下一代測(cè)序（NGS）

：可用于替代細(xì)胞庫(kù)的體內(nèi)檢測(cè)和體外檢測(cè)，檢測(cè)特異/廣譜病毒義翹神州ICHQ5A(R2)-連續(xù)流生產(chǎn)批生產(chǎn)多個(gè)不連續(xù)步驟中間產(chǎn)品保存著重于生產(chǎn)結(jié)束后產(chǎn)品檢驗(yàn)連續(xù)流生產(chǎn)生產(chǎn)過(guò)程中的部分或全部單元操作的連續(xù)生產(chǎn)生產(chǎn)部分無(wú)生產(chǎn)工藝停頓著重于在線或旁線檢測(cè)義翹神州ICHQ5A(R2)-連續(xù)流生產(chǎn)病毒潛在污染源的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估起始物料/原材料（污染）延長(zhǎng)細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間（內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒累積）操作單元間連接的潛在風(fēng)險(xiǎn)（緩沖罐或混合罐，緩解質(zhì)量流速差異或物料不均勻性）制訂合適的病毒污染的監(jiān)控和采樣策略（考慮不合格物料/產(chǎn)品的處置）病毒清除驗(yàn)證的考慮因素輸入物料的屬性波動(dòng)流速、時(shí)間干擾或暫停負(fù)載能力多柱循環(huán)義翹神州驗(yàn)證策略1：等同于批生產(chǎn)進(jìn)行驗(yàn)證>重復(fù)的層析單元（重復(fù)子批）若流速、載量、過(guò)載、清潔等目標(biāo)參數(shù)可等同于批生產(chǎn)，可使用批生產(chǎn)的縮小模型進(jìn)行驗(yàn)證>連續(xù)的多個(gè)層析單元多個(gè)相連的層析單元（如CEX+AEX）作為整體進(jìn)行驗(yàn)證，若挑戰(zhàn)物料的載量等同于批生產(chǎn)，可使用批生產(chǎn)的縮小模型進(jìn)行驗(yàn)證驗(yàn)證策略2：使用連續(xù)流層析縮小模型驗(yàn)證美國(guó)CDER實(shí)驗(yàn)室報(bào)道，開發(fā)了連續(xù)層析縮小模型，以循環(huán)模式可在多個(gè)層析柱連續(xù)進(jìn)行捕獲，同時(shí)考慮了可能會(huì)影響病毒安全性的過(guò)載、額外的色譜柱以及額外的流路和閥門等。ICHQ5A(R2)-連續(xù)流生產(chǎn)-層析義翹神州ICHQ5A(R2)-連續(xù)流生產(chǎn)-VF驗(yàn)證策略1：等同于批生產(chǎn)進(jìn)行驗(yàn)證等同于批生產(chǎn)縮小模型進(jìn)行驗(yàn)證，但應(yīng)考慮過(guò)程控制如濾器更換、使用后完整性測(cè)試、及濾器故障時(shí)物料的轉(zhuǎn)移等驗(yàn)證策略2：使用連續(xù)流納濾縮小模型驗(yàn)證美國(guó)CDER實(shí)驗(yàn)室報(bào)道，開發(fā)了兩種連續(xù)納濾縮小模型可持續(xù)數(shù)天的納濾縮小模型，可以更好的模擬連續(xù)流工藝中納濾處理時(shí)間和/或體積延長(zhǎng)能施加動(dòng)態(tài)負(fù)載的納濾縮小模型，蛋白質(zhì)濃度、緩沖液電導(dǎo)率和病毒濃度可動(dòng)態(tài)變化義翹神州低pH和S/D滅活等同于批生產(chǎn)縮小模型進(jìn)行驗(yàn)證，但應(yīng)考慮連續(xù)流滅活中參數(shù)的波動(dòng)，如pH、S/D濃度、均一性和混合、溫度、時(shí)間其他考慮：規(guī)模的影響，如停留時(shí)間和分布ICHQ5A(R2)-連續(xù)流生產(chǎn)-滅活義翹神州外部先驗(yàn)知識(shí)的應(yīng)用層面>特定工藝病毒清除的能力>病毒清除工藝的機(jī)制>最壞情況下的病毒清除驗(yàn)證特定產(chǎn)品公開的病毒清除驗(yàn)證先驗(yàn)知識(shí)的應(yīng)用>不同產(chǎn)品或中間品的可比性>不同產(chǎn)品制造商工藝的可比性>新產(chǎn)品成分對(duì)病毒清除無(wú)影響>仔細(xì)評(píng)估并尋求內(nèi)部經(jīng)驗(yàn)支持ICHQ5A(R2)-先驗(yàn)知識(shí)內(nèi)部知識(shí)開發(fā)和生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)外部知識(shí)科學(xué)和技術(shù)出版物既定科學(xué)原理化學(xué)、物理和工程原理義翹神州蛋白A親和層析先驗(yàn)知識(shí)——新舊填料的影響層析柱經(jīng)一段時(shí)間使用后，病毒清除能力會(huì)發(fā)生變化，應(yīng)指明填料的使用周期；對(duì)于蛋白A親和層析，舊填料的病毒清除效率不受影響或略有提高，可作為先驗(yàn)知識(shí)減少對(duì)蛋白A親和層析舊填料的病毒清除驗(yàn)證；其他類型層析，關(guān)于新舊填料的影響也可能適用先驗(yàn)知識(shí)，但應(yīng)提供內(nèi)部經(jīng)驗(yàn)和詳細(xì)數(shù)據(jù)等充分證明，則使用先驗(yàn)知識(shí)或可替代舊填料的病毒清除驗(yàn)證。層析柱的清洗和再生層析柱殘留病毒應(yīng)充分消滅或去除，經(jīng)過(guò)清洗和再生過(guò)程可滅活或去除病毒；類似的，若某類樣品的某種類型層析清洗和再生過(guò)程的病毒清除內(nèi)部經(jīng)驗(yàn)和詳細(xì)數(shù)據(jù)可充分證明，則使用先驗(yàn)知識(shí)或可替代清潔過(guò)程的病毒清除驗(yàn)證。ICHQ5A(R2)-先驗(yàn)知識(shí)義翹神州先驗(yàn)知識(shí)的應(yīng)用——平臺(tái)驗(yàn)證通過(guò)其他產(chǎn)品的相關(guān)先驗(yàn)知識(shí)為新的類似（工藝）產(chǎn)品給出預(yù)計(jì)病毒清除下降情況需考慮的因素

應(yīng)為相同的平臺(tái)技術(shù)，不同的產(chǎn)品

工藝的病毒清除機(jī)制應(yīng)充分了解

工藝不同參數(shù)對(duì)病毒清除可能的影響

病毒與產(chǎn)品間可能的相互作用及對(duì)病毒清除的影響

緩沖液/介質(zhì)等變化對(duì)病毒清除的影響

病毒清除工藝前的產(chǎn)品/中間品的處理應(yīng)類似

考慮已有病毒清除先驗(yàn)知識(shí)的局限性義翹神州ICHQ5A(R2)-平臺(tái)驗(yàn)證ICHQ5A(R2)-平臺(tái)驗(yàn)證平臺(tái)驗(yàn)證示例>洗滌劑滅活高影響：洗滌劑濃度、處理時(shí)間、溫度、預(yù)過(guò)濾如≥15℃、≥0.5%TritonX-100對(duì)澄清HCCF進(jìn)行≥60min的處理，可有效滅活多種細(xì)胞培養(yǎng)衍生產(chǎn)品X-MuLv>通過(guò)平臺(tái)驗(yàn)證方式或可代替試驗(yàn)方式，證明新產(chǎn)品對(duì)應(yīng)的工藝為有效的病毒滅活工藝義翹神州ICHQ5A(R2)-平臺(tái)驗(yàn)證平臺(tái)驗(yàn)證示例>低pH孵育高影響：pH、孵育時(shí)間、溫度、緩沖液成分如pH≤3.6、≥15℃、≤500mmol/LNaCl濃度下，≥30分鐘的低pH處理可有效滅活X-MuLv>通過(guò)平臺(tái)驗(yàn)證方式或可代替試驗(yàn)方式，證明新產(chǎn)品對(duì)應(yīng)的工藝為有效的病毒滅活工藝義翹神州ICHQ5A(R2)-平臺(tái)驗(yàn)證平臺(tái)驗(yàn)證示例>除病毒過(guò)濾高影響：產(chǎn)品/緩沖液的通量、壓力

根據(jù)基于粒徑的去除機(jī)理,使用細(xì)小病毒過(guò)濾的先驗(yàn)知識(shí)，可以估計(jì)更大尺寸病毒的過(guò)濾效果

若使用其他產(chǎn)品的細(xì)小病毒過(guò)濾的先驗(yàn)知識(shí)，應(yīng)至少使用細(xì)小病毒進(jìn)行一次新產(chǎn)品的除病毒過(guò)濾實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證

壓力中斷、產(chǎn)品/緩沖液通量對(duì)病毒清除的影響應(yīng)充分了解

考慮過(guò)濾膜種類和技術(shù)的迭代在特定參數(shù)范圍下對(duì)病毒清除的效果和穩(wěn)健性義翹神州問(wèn)題解析04義翹神州Q2：指示病毒如何選擇？A2：a.優(yōu)先選擇表格中用過(guò)的病毒；b.只對(duì)有效果的工藝進(jìn)行；c.根據(jù)產(chǎn)品性質(zhì)，選擇最適合的病毒；d.模式病毒，并不強(qiáng)制使用。病毒清除工藝驗(yàn)證問(wèn)題解析Q1：方案如何確定？A1：滅活+層析+納濾

滅活：低pH、表面活性劑、乙醇、強(qiáng)堿

層析：去除效果好的一步，效果不好的兩步；IND階段只做關(guān)鍵病毒，BLA階段全做。

納濾：能加則加義翹神州Q4：樣品滿足什么條件？A4：a.驗(yàn)證工藝的待上樣樣品（過(guò)程樣），不能只是收獲液；b.GMP生產(chǎn)條件下；c.規(guī)模盡量與生產(chǎn)規(guī)模接近。Q5：是否需要委托方或工程師參與層析？A5：優(yōu)先客戶參與層析步驟，以免細(xì)節(jié)不到位或遇到問(wèn)題不能及時(shí)處理。優(yōu)先納濾廠家工程師參與，經(jīng)驗(yàn)豐富，及時(shí)處理問(wèn)題。病毒清除工藝驗(yàn)證問(wèn)題解析Q3：驗(yàn)證批次？A3：一批重復(fù)兩次。Q6：驗(yàn)證周期多久，是否需要排隊(duì)？A6：IND最快2個(gè)月。義翹目前可不用排期。義翹神州義翹資質(zhì)義翹神州北京病毒清除檢測(cè)中心蘇州病毒清除檢測(cè)中心蘇州病毒清除檢測(cè)中心專門提供病毒安全性評(píng)價(jià)服務(wù)，已預(yù)申請(qǐng)CNAS和CMA等資質(zhì)，同時(shí)實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)格遵循GLP和GMP規(guī)范進(jìn)行管理。

?

體系認(rèn)證：預(yù)申請(qǐng)CNAS、CMA

?

產(chǎn)能：同時(shí)開展10個(gè)項(xiàng)目

?

實(shí)驗(yàn)室：生物二級(jí)+負(fù)壓條件北京病毒清除檢測(cè)中心擁有一支專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)，憑借極其豐富