干擾實驗資料

1.干擾實驗1.1干擾物對檢測結(jié)果的影響1.1.1干擾物的干擾效果

檢測方法的總分析誤差有3個主要來源：不精密度、方法特異性偏差、樣品特異性偏差。方法學評價時通常只考慮前2者，樣品特異性偏差常被認為與特定樣品有關(guān)，不屬于方法學的計量特征。但如果一種檢測方法本身易受某種干擾物質(zhì)的影響，則干擾物即可引起系統(tǒng)誤差也可引起偶然誤差。

當采用特異性更好的方法做為比對方法時，特定病人群體樣品中某中干擾物的平均濃度可引起系統(tǒng)偏差，而偏離平均偏差的個體差異則成為總偶然誤差的成份。某些方法中隨機干擾效果超過不精密度成為偶然誤差的主要來源。

對于個體病人，干擾物的干擾效果可隨樣品中干擾物濃度的不同發(fā)生變化，這可被誤認為是病人病情的改變。干擾物對檢測結(jié)果的影響可通過一些方法進行補償或修正，使干擾效果在特定病人群體中減小。對于常見的內(nèi)源性干擾物（如膽紅素、血紅蛋白、脂類等），可通過樣品前處理、樣品空白、血清基質(zhì)校準或數(shù)學修正等方法減少干擾效果。1.1.2干擾效果機制干擾物對分析過程的影響機制有：——化學效應：干擾物通過與試劑競爭或抑制指示反應改變反應結(jié)果，也可通過絡(luò)合或沉淀作用改變分析物的形式?！锢硇焊蓴_物可具有與被測量相近的性質(zhì)，如熒光、顏色、光散射、洗脫位置或檢測時的電極反應等。——基質(zhì)效應：干擾物可改變樣品基質(zhì)的物理特性，如粘度、表面張力、濁度或離子強度等，從而改變被測量濃度?！敢种谱饔茫焊蓴_物可與金屬激活因子形成螯合物、與催化位點結(jié)合、氧化必需巰基基團而改變被測量或試劑中酶的活性?！獧z測方法的非特異性：干擾物以與被測量同樣的方式參與反應。盡管非特異性與干擾有所不同，但對實驗結(jié)果的效果的相同的。如：酮酸在堿性苦味酸法測肌酐時發(fā)生反應，吲哚硫酸鹽在重氮法測膽紅素時發(fā)生反應，免疫化學中的交叉反應等?！娜〈悍撬苄晕镔|(zhì)（蛋白、脂類等）可通過取代液體血漿量影響活性測量。但如測定的是血漿水中被測量的濃度，則不存在水的取代效應。1.2干擾標準及被測量與干擾物實驗濃度的確定1.2.1建立被評價方法的干擾標準

因干擾所致的允許誤差標準與實驗結(jié)果的臨床應用有關(guān)，可通過總允許誤差進行推斷。總允許誤差(TEa)包含方法學偏差、不精密度及干擾成份，是對檢測方法的準確性要求。對于已明確提出準確性要求的分析物，可從總允許誤差中減去方法學偏差、不精密度及相應生物學變異，剩余殘差即為干擾成份。對于無明確準確性要求的分析物，可采用下述方法確定總允許誤差。a)

根據(jù)生物學變異確定總允許誤差：不同被測量均有其固有的個體內(nèi)（CVI）及個體間生物學變異（CVG），現(xiàn)被廣泛接受的觀點是檢測方法的理想質(zhì)量指標為結(jié)果偏倚，總允許誤差。對因方法學或技術(shù)能力無法滿足上述要求的分析項目，可使用最低質(zhì)量規(guī)范。據(jù)生物學變異導出的常見生化檢驗項目質(zhì)量規(guī)范見附錄A。b)

通過臨床實踐得出總允許誤差：基于大量臨床和實驗室經(jīng)驗，經(jīng)過廣泛討論，由專業(yè)學會、組織或個人在專業(yè)建議或指南中提出的準確性指標。c)

據(jù)分析變異確定總允許誤差：干擾標準也可從總的長期分析不精密度中得出。如果干擾物所引起的誤差小于一個標準差，則可認為被評價干擾物的作用不大可能影響臨床決定，因此不認為這種物質(zhì)是干擾物。但考慮到現(xiàn)有的檢測系統(tǒng)常具有極佳的精密度，用這種方法決定干擾標準可能使很多物質(zhì)的干擾效果放大。d)基于法規(guī)和室間質(zhì)量評價的質(zhì)量規(guī)范：總允許誤差也可以從有關(guān)實驗室質(zhì)量管理的法規(guī)中得到。如CLIA’88法規(guī)文件中提供的常見檢測項目的質(zhì)量規(guī)范。常見生化檢驗項目的CLIA’88質(zhì)量規(guī)范見附錄A。1.2.2被測量實驗濃度的確定

通常選取被測量的2個醫(yī)學決定水平作為干擾實驗時的被測量濃度，也可根據(jù)臨床需要選用參考范圍的高限或低限或病理濃度。附錄B中列出了常見被測量的建議實驗濃度。1.2.3可能引起干擾作用的物質(zhì)清單

干擾實驗開始前應根據(jù)被評價方法的檢測原理和預期用途列出可能引起干擾效果的物質(zhì)清單。常見的可能產(chǎn)生干擾作用的物質(zhì)有：——樣本中的異常物質(zhì)：溶血、黃疸、脂血?！幬铮撼Ｒ娞幏脚c非處方藥，接受某項目檢測的特定病人群體中常用的藥物?！x物：在特定病人群體中可能出現(xiàn)的異常生化代謝物與藥物代謝物?！獦悠诽砑觿┘霸跇悠凡杉c處理過程中可與之接觸的物質(zhì)：抗凝劑（肝素、EDTA、檸檬酸鹽、草酸鹽等）與防腐劑（NaF、HCl、碘醋酸鹽等），血清分離膠，樣品采集容器及膠塞、導管、導管沖冼液、皮膚消毒劑、手部清潔劑、玻璃清洗液、手套粉末等?！墨I中提及的對與被評價方法類似的其他方法有干擾作用的物質(zhì)?！嬍常嚎Х纫?、β-胡蘿卜素、罌粟籽等。1.2.4干擾物的實驗濃度

進行干擾實驗時干擾物的濃度可根據(jù)表1中的原則確定，常見可能內(nèi)源性干擾物的建議實驗濃度見附錄C，藥物干擾物的建議實驗濃度請參見有關(guān)文獻。

表1干擾物的實驗濃度確定原則可能干擾物樣品類型干擾物實驗濃度藥物與代謝物血清、血漿與全血至少三倍于治療藥物濃度或最高預期濃度尿液至少三倍于24小時尿清除率內(nèi)源性干擾物血清、血漿與全血目標病人群體中預期最高濃度抗凝劑與防腐劑血清、血漿與全血五倍于添加濃度尿液五倍于24小時尿清除率樣品采集與處理設(shè)備血清、血漿、全血、尿液樣品與設(shè)備接觸24小時，樣品體積應與實際使用相同，需注意防止樣品蒸發(fā)與不穩(wěn)定分析物的丟失，同時應準備一份與實驗樣本相同的對比樣本，此樣本除了不與實驗設(shè)備接觸外其余處理過程均與實驗樣本相同。

1.3對實驗操作人員的要求

實驗操作人員應熟悉被評價檢測系統(tǒng)的性能，熟練掌握操作流程，明確樣品的正確處理方法，在確保儀器狀態(tài)正常的情況下采用適當?shù)男Ｕ穼x器進行校準。1.4對檢測系統(tǒng)的要求1.4.1儀器

儀器性能應滿足干擾實驗的要求。精密度應與廠家參數(shù)相一致，也可根據(jù)相應衛(wèi)生行業(yè)標準進行精密度評估。方法學偏差應通過回收實驗或方法學比較實驗（參見相應衛(wèi)生行業(yè)標準）確定，恒定偏差不會影響干擾實驗結(jié)果，但比例性偏差卻可能造成對干擾實驗結(jié)果的錯誤判斷。儀器檢測時不應存在明顯的攜帶污染。在實驗開始前，分析系統(tǒng)應表現(xiàn)出穩(wěn)定的運行狀態(tài)。實驗期內(nèi)應據(jù)統(tǒng)計學質(zhì)控程序?qū)\行狀態(tài)進行監(jiān)測。

干擾物高實驗濃度樣品制備方法參見中實驗樣品的制備，其干擾物終濃度可參見附錄C。干擾物低濃度樣品的制備參見中對照樣品的制備，其干擾物終濃度為臨床標本中此干擾物的平均濃度，?？珊雎詾榱恪嶒灅悠废盗械闹苽?/p>

將中干擾物高實驗濃度樣品與低實驗濃度樣品定量混合，可得到干擾物濃度介于兩樣品之間的一系列實驗樣品。確定線性劑量相關(guān)關(guān)系時需要5個濃度水平。具體制備方法見表5。

表5干擾物不同濃度系列樣品的制備系列樣品號高實驗濃度樣品用量ml低實驗濃度樣品用量ml101022.57.535.05.047.52.551001.6.2測定重復次數(shù)

與干擾篩查實驗一樣，評價干擾物劑量效應時也需排除方法精密度對結(jié)果的影響，通常每個水平重復測定3次即可滿足要求。1.6.3測定步驟1)

將實驗系列樣品每份分裝3支。2)

所有樣品一次檢測完成。將樣品按干擾物濃度從低到高的順序命名為樣品1、2、3、4、5，則檢測順序為第一組測定按升序（12345），第二組測定按降序（54321），第三組為升序。3)

也可按隨機數(shù)表為樣品進行分組，決定檢測順序。4)

記錄檢測結(jié)果，格式可參照附表E。1.6.4數(shù)據(jù)處理與分析

計算最低干擾物濃度樣品的測定均值，用5個水平樣品的每個測定值減去此均值得出不同濃度干擾物的干擾效果。以干擾效果為Y值，干擾物濃度為X值，繪出干擾物劑量相關(guān)曲線。根據(jù)曲線趨勢進行數(shù)據(jù)分析。線性相關(guān)

如曲線為近似直線，可用最小二乘法分析，數(shù)學模型為：

式中：Yij

——

第i個樣品第j次重復測定時的干擾效果值。Xij

——

第i個樣品的干擾物濃度。a

——

截距。b

——

斜率。Eij

——

第i個樣品第j次重復測定時實測值與預測值的差。

a)

計算線性回歸方程的相關(guān)參數(shù)：通過回歸分析，可得到Y(jié)i與Xi間的數(shù)學關(guān)系式及相關(guān)參數(shù)，其中斜率b的計算公式為：

式中：X

--全部樣品的干擾物濃度均值。Y

--全部樣品的干擾效果均值。

其余字母項代表內(nèi)容見式（7）。

截距a的計算公式為：

式中：字母項代表內(nèi)容見式（8）。

回歸方程的估標準誤計算公式為：

式中：

P(Xij)--樣品中干擾物濃度為xij時由回歸方程得出的y預測值i

----樣品數(shù)，此處為5。j

----每份樣品的重復測定次數(shù)，此處為3。其余字母項代表內(nèi)容見式（7）。

回歸方程斜率b的標準誤sb計算公式為：

式中：字母項代表內(nèi)容見式（7）、（8）、（10）。

b)

對斜率b進行統(tǒng)計學檢驗：對回歸方程的斜率b進行t檢驗。設(shè)總體回歸系數(shù)為β，假設(shè)檢驗為H0：β=0，H1：β≠0。計算統(tǒng)計量t：

式中：β---總體回歸系數(shù)，此處為0。b---回歸方程的斜率。sb

---回歸方程斜率b的標準誤。

由t值表查出t(0.05,i.j-2)，如

，表明p<0.05，否定H0，接受H1，斜率b有統(tǒng)計學意義，直線回歸方程成立。如

，表明p>0.05，否定H1，接受H0，直線回歸方程不成立。對于非線性相關(guān)結(jié)果，可參照進一步處理。c)

計算干擾物濃度對測定結(jié)果干擾效應的95%置信區(qū)間：某一確定干擾物濃度對測定結(jié)果干擾效應的雙側(cè)95%置信區(qū)間的計算公式：

式中：

---樣品中干擾物濃度為xi時由回歸方程得出的y預測值t0.025,(i.j-2)

---自由度為i*j-2，此處為13，t分布的第2.5%概率密度值。xi

---第i個樣品的干擾物濃度，此處與xij相同。其余字母項代表內(nèi)容見式（7）、（8）、（10）。

d)

結(jié)果分析：

回歸方程的斜率b表示干擾物每個濃度單位所造成的干擾效果，斜率為正表明干擾物引起正向干擾，反之為負向干擾。截距a表示對內(nèi)源性干擾物濃度的修正。干擾物任意濃度下對測定結(jié)果的影響程度可由回歸方程得出。非線性相關(guān)

如干擾劑量效應曲線為非線性，可采用非線性回歸分析得出相應的最佳擬合曲線與數(shù)學模型，置信區(qū)間可用適當?shù)姆蔷€性回歸分析程序計算。具體計算方法較為復雜，建議采用統(tǒng)計學軟件，如SPSS、SAS等進行計算。根據(jù)得出的最佳數(shù)學模型可推斷出在評價范圍內(nèi)任意干擾物濃度所引起的干擾效應值。2干擾實驗報告干擾實驗報告中應包括以下主要內(nèi)容：a)

被評價檢測系統(tǒng)的名稱、品牌、型號，所用試劑、校準品、質(zhì)控品的生產(chǎn)廠家、批號b)

被測量的名稱c)

被評價干擾物化學名稱或通用名稱d)

干擾評價方案依據(jù)e)

干擾實驗中使用的樣品類型及被測量濃度與干擾物濃度f)

表述干擾效果的相關(guān)數(shù)據(jù)或方程g)

在描述干擾效果時，可用以下方式：·

列出干擾物質(zhì)的特定濃度，高于此濃度可引起超過干擾標準的偏差·

列出干擾物質(zhì)的特定濃度，低于此濃度未觀察到具臨床意義的干擾h)

當定量信息無法得到或引用參考文獻中的相關(guān)內(nèi)容時，須將可能干擾物質(zhì)及其對被評價方法不具干擾性的信息以方法特異性說明的方式進行總結(jié)說明。

附錄A

（資料性附錄）

附錄A常見生化項目質(zhì)量指標

基于生物學變異的質(zhì)量規(guī)范CLIA’88中的質(zhì)量規(guī)范分析項目允許CV%允許的偏倚（%）允許總誤差（Tea，%）允許變異允許的偏倚允許總誤差期望最低ALT12.27%10.0%20%AST65.47%10.0%20%AMY4.87.815.723.510.0%15.0%30%LDH14.26.67%10.0%20%CK11.411.530.345.510.0%15.0%30%GGT6.910.822.233.3ALP3.26.411.717.510.0%15.0%30%TP5.23.33%5.0%10%ALB5.83.33%5.0%10%T-BIL12.81031.146.6D-BIL18.414.244.566.8UA4.34.811.917.95.67%8.5%17%UREA6.25.515.723.50.33mg/dl或4.5%1mg/dl或4.5%2mg/dl或9%CREA10.40.1mg/dl或5%0.15mg/dl或7.5%0.3mg/dl或15%GLU11.82mg/dl或3.3%3mg/dl或5%6mg/dl或10%T-C34.1913.63.33%5.0%10%TG10.510.728428.33%12.5%25%LDL-C4.26.813.620.4HDL-C16.610.0%15.0%30%ApoA13.6ApoB3.5611.617.5K8.70.17mol/L0.2mmol/L0.5mmol/LNa1.30.13mmol/L2mmol/L4mmol/LCl2.21.67%2.5%5%Ca0.33mg/dl0.5mmol/L1.0mg/dlMg7.28.33%12.5%25%P15.3

附錄B

（資料性附錄）

附錄B常見被測量的建議實驗濃度

分析物分子量實驗濃度低值實驗濃度高值濃度單位SI單位濃度單位SI單位對乙酰氨基酚151.1633μmol/L5μg/mL199μmol/L30μg/mL丙酮58.080.34mmol/L2mg/dL3.4mmol/L20mg/dL白蛋白

66000

35g/L3.5g/dL50g/L5g/dL醛固酮360.440.2nmol/L8ng/dL1.1nmol/L40ng/dL甲胎蛋白

66000

300ng/L30ng/dL150μg/L150ng/mL氨17.0310μmol/L14μg/dL80μmol/L112μg/dL載脂蛋白A1

28000

0.8g/L80mg/dL1.8g/L180mg/dL載脂蛋白B

549000

0.6g/L60mg/dL1.3g/L130mg/dL結(jié)合膽紅素584.673.4μmol/L0.2mg/dL86μmol/L5mg/dL未結(jié)合膽紅素584.6717μmol/L1mg/dL257μmol/L15mg/dLC反應蛋白

114000

0.01g/L1mg/dL0.04g/L4mg/dL離子鈣40.081mmol/L4mg/dL2mmol/L8mg/dL總鈣40.082mmol/L8mg/dL3mmol/L12mg/dL卡巴咪嗪236.2612.7μmol/L3μg/mL50.8μmol/L12μg/mL氯35.590mmol/L90mEq/L110mmol/L110mEq/LHDL膽固醇386.660.9mmol/L35mg/dL1.8mmol/L70mg/dL總膽固醇386.663.88mmol/L150mg/dL6.47mmol/L250mg/dL總CO244.0120mmol/L20mEq/L35mmol/L35mEq/L皮質(zhì)醇362.47138nmol/L5μg/dL828nmol/L30μg/dL肌酐113.12133μmol/L1.5mg/dL442μmol/L5mg/dL地高辛780.920.5nmol/L0.4ng/mL2.6nmol/L2ng/mL腎上腺素183.21218pmol/L40pg/mL546pmol/L100pg/mL雌三醇288.39139nmol/L40ng/mL1040nmol/L300ng/mL乙醇46.072.17mmol/L10mg/dL21.7mmol/L100mg/dL鐵蛋白

474000

45pmol/L20ng/mL449pmol/L200ng/mL葉酸441.411nmol/L5ng/mL34nmol/L15ng/mL附錄B常見被測量的建議實驗濃度（續(xù)表1）分析物分子量實驗濃度低值實驗濃度高值濃度單位SI單位濃度單位SI單位鐵55.847.2μmol/L40μg/dL26.9μmol/L150μg/dL鐵結(jié)合力

NA

44.8μmol/L250μg/dL80.6μmol/L450μg/dL乳酸鹽（乳酸）90.080.7mmol/L6.3mg/dL2.6mmol/L23.4mg/dL鉛207.191.21μmol/L25μg/dL4.83μmol/L100μg/dL鋰6.9390.2mmol/L0.14mg/dL1.5mmol/L1mg/dL鎂24.311.6mmol/L3.9mg/dL2.6mmol/L6.3mg/dL去甲腎上腺素169.180.65nmol/L110pg/mL4.14nmol/L700pg/mL苯巴比妥232.24215mol/L5μg/mL1722mol/L40μg/mL苯丙氨酸165.1961μmol/L1mg/dL1211μmol/L20mg/dL苯妥英252.2812μmoI/L3μg/mL79μmoI/L20μg/mL無機磷30.970.8mmol/L2.5mg/dL2.1mmol/L6.5mg/dL鉀39.13mmol/L3mEq/L5mmol/L5mEq/L前白蛋白

30000

100g/L10mg/dL400g/L40mg/dL普里米酮218.2614mol/L3μg/mL55mol/L12μg/mL普魯卡因酰胺235.3317mol/L4μg/mL42mol/L10μg/mL孕酮314.473.2nmol/L1ng/mL64nmol/L20ng/mL總血清蛋白

NA

60g/L6g/dL80g/L8g/dL奎尼丁324.426.2μmol/L2μg/mL15μmol/L5μg/mL水楊酸鹽138.120.14mmol/L2mg/dL1.45mmol/L20mg/dL鈉22.99130mmol/L130mEq/L150mmol/L150mEq/L睪酮288.431.7nmol/L50ng/dL10.4nmol/L300ng/dL茶堿180.1733.3μmol/L6μg/mL111μmol/L20μg/mL轉(zhuǎn)鐵蛋白

77000

2g/L200mg/dL4g/L400mg/dL總甘油三酯

NA

1.7mmol/L150mg/dL5.6mmol/L500mg/dL酪氨酸181.19221μmol/L4mg/dL1104μmol/L20mg/dL尿素

60.06(Urea)28.01(UreaN)

3mmol/L9mg/dL7mmol/L40mg/dL尿酸168.110.2mmol/L3mg/dL0.5mmol/L9mg/dL丙戊酸144.2135mol/L5μg/mL693mol/L100μg/mL維生素B121355.42148pmol/L200pg/mL740pmol/L1000pg/mL

附錄B常見被測量的建議實驗濃度（續(xù)表2）

分析物分子量實驗濃度低值實驗濃度高值濃度單位SI單位濃度單位SI單位人絨毛膜促性腺激素（hCG）367005IU/L5mlU/mL50IU/L50mlU/mL黃體生成素（LH）300005IU/L5mlU/mL110IU/L110mlU/mL卵泡刺激素（FSH）300005IU/L5mIU/mL40IU/L40mIU/mLN-乙酰普魯卡胺(NAPA)277.3718mol/L5μg/mL108mol/L30μg/mL促甲狀腺素（TSH）280000.3mIU/L0.3μIU/mL8mIU/L8μIU/mL游離甲狀腺素（FT4）776.8713pmol/L1ng/dL32.5pmol/L2.5ng/dL游離三碘甲腺原氨酸（FT3）650.983.9pmol/L250pg/dL10.8pmol/L700pg/dL葡萄糖180.164.4mmol/L80mg/dL6.7mmol/L120mg/dL血紅蛋白

16114

100g/L10g/dL200g/L20g/dL

附錄C

（資料性附錄）

附錄C常見內(nèi)源性干擾物的建議實驗濃度干擾物分子量參考區(qū)間1病理值2建議實驗濃度3乙酰乙酸102

<0.1mmol/L

2mmol/L

2.0mmol/L

丙酮58

0.05–0.34mmol/L12mmol/L

12mmol/L氨80

11–32μmolN/L

107μmolN/L

107μmolN/LL-抗壞血酸176

23–85μmol/L

<11μmol/L

170μmol/L

>114μmol/L

β-胡羅卜素537

0.19–1.58μmol/L

3.7–11.2μmol/L

3.7μmol/L

碳酸氫鹽84

21–28mmol/L

10–45mmol/L

35mmol/L

膽汁酸

390–513

0–10μmol/L

30μmol/L

結(jié)合膽紅素

778–971

0–3.4μmol/L(adult)

513μmol/L

342μmol/L

未結(jié)合膽紅素585

5–21μmol/L(adult)

684μmol/L

342μmol/L

總鈣40

1.90–2.55mmol/L

5.0mmol/L

5.0mmol/L

鵝脫氧膽酸392

0–1.61μmol/L

2.5μmol/L

30μmol/L

氯35

98–107mmol/L

85–160mmol/L

120mmol/L

膽固醇387

2.95–5.2mmol/L4

13mmol/L

13mmol/L

膽酸4080.07–0.91μmol/L2.67μmol/L肌酐113

53–115μmol/L

115μmol/L

442μmol/L總游離脂肪酸

0–0.92mmol/L

2.76mmol/L

果糖180

56–333μmol/L

1000μmol/L

半乳糖180

<0.28mmol/L

0.84mmol/L

D-葡萄糖180

4.1–5.9mmol/L

1.7–55mmol/L

55mmol/L

還原型谷胱甘肽

613/307

0.79–1.