綿羊的人工授精技術(shù)

綿羊的人工授精技術(shù)一、人工授精的意義人工授精是借助器械，用人為的方法把公羊的精液采出來，經(jīng)過檢查和處理，再用器械輸入發(fā)情母羊的生殖器官內(nèi)，使母羊受孕的一種先進(jìn)配種技術(shù)。多年來的實(shí)踐證明，人工授精有很多優(yōu)點(diǎn)，主要有以下幾點(diǎn)：（1）可以充分利用優(yōu)良種公羊，擴(kuò)大交配母羊數(shù)，加速綿羊改良工作。（2）可以提高母羊的受胎率，降低不孕率。（3）可以節(jié)省購買和飼養(yǎng)大量種公羊的費(fèi)用。（4）可以防止由公、母羊直接交配而傳染的疾病。（5）克服公母羊所處地域相距過遠(yuǎn)的困難。（6）用超低溫可以長期保存精液，經(jīng)過幾十年后仍然可以繁殖后代。二、人工授精技術(shù)1、準(zhǔn)備工作（１）器械、用具的清洗和消毒凡是供采精、輸精及與精液接觸的一切器械、用具，都要做到清潔、干燥、消毒，存放在清潔的廚柜或搪瓷盤里用消毒過的紗布蓋好。新購入的用具、器械，應(yīng)仔細(xì)擦去上面的油質(zhì)和積垢。器械、用具的清洗，用2～3％的碳酸鈉溶液。清洗工具用試管刷、毛刷或?qū)⒓啿肌⒚撝抻描囎訆A住或纏在玻璃棒上。清洗假陰道時(shí)，注意不要使凡士林和污垢存留在內(nèi)胎橡皮皺折內(nèi)。所有器械、用具洗凈后，用清潔的溫開水沖洗數(shù)次，并用清潔的布擦干或晾干待用。經(jīng)過清洗的器械、用具,可根據(jù)其性質(zhì)分別用煮沸，酒精擦洗、火焰燒烤等方法進(jìn)行消毒。假陰道先用65％的精棉球擦洗（連續(xù)使用時(shí)，可用96％的酒精），稍停再用１％氯化鈉棉球擦洗數(shù)次，直至酒精氣味完全消失為止。集精杯、輸精器、吸管、玻璃棒以及存放稀釋液和氯化鈉溶液等玻璃器皿，可根據(jù)情況用65%的酒精擦洗或煮沸消毒。如用酒精擦洗，應(yīng)再用1%氯化鈉溶液沖洗數(shù)次，直至酒精氣味完全消失為止。如煮沸消毒，應(yīng)先浸入溫水中，然后煮沸15～20分種，取出后除去水滴使其自然干燥。煮沸消毒要用“軟水”或燒開后的“硬水”。有條件的地方，最好以“蒸”代“煮”，用“土”辦法進(jìn)行蒸氣消毒。金屬開膣器、鑷子等金屬器皿，可用65%的酒精擦洗或在無煙火焰（酒精燈等）上燒烤消毒。凡士林應(yīng)每天連瓶隔水煮沸消毒20分鐘，瓶蓋下墊濾紙，瓶底墊脫脂棉或紗布，防止煮沸時(shí)破裂。用酒精消毒時(shí)，其順序最好是先消毒輸精器，然后依次集精杯，假陰道、開膣器。凡是和精液直接接觸的器械、用具，使用前要用1%的氯化鈉溶液沖洗數(shù)次。人工授精用的各種布巾、工作服等要經(jīng)常洗滌，保持清潔。紗布、毛巾可用蒸氣或煮沸法進(jìn)行消毒。（2）各種藥液及棉球的配制65%酒精的配制：市售酒精濃度一般為96%，人工授精需要的為65%，通常配制65%酒精的方法，是將96%酒精68毫升加入蒸餾水或?yàn)V過的冷開水32毫升，即成65%的酒精100毫升。各種不同濃度酒精的配制，可用下列公式計(jì)算：[需配酒精濃度（%）×需酒精量]/原酒精濃度（%）=應(yīng)用原酒精量。需配酒精量－應(yīng)用原酒精量=應(yīng)加入的水量。例如用96%的酒精配制100毫升65%的酒精時(shí)即為：（65×100）/96=67.7(四舍五入后為68)100－67.7=32.3(四舍五入后為32)。1%氯化鈉溶液的配制：在100毫升蒸餾水中加入純凈氯化鈉1克，溶解后用濾紙過濾。每天現(xiàn)用現(xiàn)配。2～3%碳酸鈉溶液的配制：在1000毫升溫水中加入碳酸鈉20～30克。棉球的制作：用脫脂棉做成直徑2～3厘米大的圓球。放在有蓋的玻璃器皿、廣口瓶或搪瓷杯中，分別用65%酒精、96%酒精和1%氯化鈉溶液浸泡備用。酒精棉球和氯化鈉棉球取用時(shí)要用專用鑷子，不能混用。配制好的藥液，要貼上標(biāo)簽，以免用錯(cuò)。2、采精采精的具體步驟如下：1）準(zhǔn)備假陰道：①檢查假陰道外殼有無裂縫，兩頭邊緣是否光滑，內(nèi)胎有無氣孔，長短是否合適，活塞是否靈活，有無漏水漏氣情況等。將假陰道內(nèi)胎均勻地套在外殼里，粗糙面向外，裝好的內(nèi)胎要求舒展平衡，表面平滑，沒有歪扭不正、皺褶過多的現(xiàn)象。②清洗、消毒假陰道：將消毒好的集精杯插入假陰道一端的內(nèi)層，深入2～3厘米。氣溫低于18℃時(shí)，可使用雙層集精杯，③在夾層里注入溫水，使集精杯內(nèi)保持25～30℃。向假陰道的夾層中灌注50～55℃的溫水156～180毫升。灌水時(shí)宜用漏斗，防止水溢出進(jìn)入假陰道內(nèi)。④用消毒過的玻璃棒取消毒凡士林，涂在假陰道內(nèi)胎上，使之潤滑。由外向里均勻地涂上一層，不宜太多，深度不要超過假陰道長度的二分之一，以免凡士林流入集精杯內(nèi)。用嘴自活塞處吹入空氣，以增加內(nèi)胎的壓力，使之松緊適度。一般內(nèi)胎呈三角形時(shí)即說明壓力適。⑤采精前用消毒過的溫度計(jì)檢查假陰道內(nèi)溫度是否適宜。要求采精時(shí)的溫度不低于38℃，不高于42℃。調(diào)教種公羊時(shí)，最好使其習(xí)慣于較低的采精溫度。假陰道的溫度、壓力和潤滑，對(duì)采精能否成功，影響很大，采精前應(yīng)仔細(xì)檢查。假陰道準(zhǔn)備妥當(dāng)后，把事先準(zhǔn)備好的母羊牽到采精架上。將公羊的陰莖包皮周圍用濕毛巾或紗布擦拭干凈。2）準(zhǔn)備好臺(tái)羊：采精前應(yīng)該準(zhǔn)備好健康無病的母羊或假母羊，做為引誘公羊射精的對(duì)象。對(duì)沒有射精習(xí)慣的種公羊，要使用發(fā)情母羊。3）采精方法：采精人蹲在母羊右側(cè)后方，右手橫握假陰道，活塞向下，中指和食指壓住集精杯，用其他手指和手掌握緊假陰道，有集精杯的一端向上，使假陰道和地面呈35～40度的角度。當(dāng)公羊爬跨母羊伸出陰莖時(shí)，采精人以敏捷的動(dòng)作，右手穩(wěn)當(dāng)?shù)貙⒓訇幍劳葡蚰秆蛲尾颗c公羊陰莖相平行，左手輕輕托住陰莖包皮，細(xì)心迅速地將陰莖導(dǎo)入假陰道內(nèi)。當(dāng)公羊用力聳身向前時(shí)，已完成射精。隨著公羊自母羊身上跳下時(shí)，采精人順著公羊的動(dòng)作，將假陰道慢慢向后移動(dòng)，輕輕取下，立即倒轉(zhuǎn)豎立，有集精杯的一端向下，打開活塞，放出空氣，謹(jǐn)慎地取下集精杯，蓋好杯蓋，送到精液處理間檢查。集精杯取出后，立即放出假陰道夾層里的水，依次清洗、消毒備用。假陰道內(nèi)胎，最好用一次拆卸一次。在連續(xù)使用的情況下，也可以用幾次拆卸一次，但時(shí)間不宜過長，以免影響內(nèi)胎彈力的恢復(fù)和清潔衛(wèi)生。采情時(shí)要精神集中，動(dòng)作迅速，沉著而敏捷。采精時(shí)注意不要使手指、手臂或假陰道的邊緣碰到公羊陰莖露出的部分，更不能用手去捉握陰莖外露部分，也不能用假陰道向陰莖上硬套。當(dāng)公羊陰莖插入假陰道后，不要將假陰道向公羊腹部推送。假陰道要固定好，防止搖擺不定，影響采精。當(dāng)公羊接近母羊準(zhǔn)備爬跨時(shí)，用手輕撥頭部，不讓它馬上爬跨，擋幾次之后，公羊性欲更加旺盛，射精充分，采精量多。如果公羊經(jīng)過一、兩次爬跨，陰莖也插入假陰道里，但不射精，這時(shí)要檢查假陰道的溫度、壓力、潤滑程度是否適當(dāng)，根據(jù)具體情況進(jìn)行調(diào)節(jié)。3、精液品質(zhì)的檢查采出的精液，應(yīng)該立即進(jìn)行品質(zhì)檢查，分肉眼檢查和顯微鏡檢查。肉眼檢查：用肉眼觀察射精量、精液的色澤、氣味和精子的活動(dòng)狀況。1)射精量：射精量因采精方法、品種、年齡、個(gè)體營養(yǎng)狀況、采精頻率及采精技術(shù)水平而有差異。綿羊每次射精量為0.5～2.5毫升，山羊每次射精量為0.5～1.5毫升。2）顏色：正常的精液為乳白色。如精液呈淺灰色或淺青色，是精子少的特征；深黃色表示精液內(nèi)混有尿液；粉紅色或淡紅色表示有新的損傷而混有血液；紅褐色表示在生殖道中有深的舊損傷；有膿液混入時(shí)，精液里淡綠色；精液囊發(fā)炎時(shí)，精液中可發(fā)現(xiàn)絮狀物。凡是顏色異常的精液均不得用于輸精。3）氣味：正常精液微有腥味，若精液中可嗅到尿味或膿腥味時(shí)，則不得用于輸精。4）云霧狀：用肉眼觀察采集的公羊精液，可以看到由于精子活動(dòng)所引起的翻騰滾動(dòng)、極似云霧的狀態(tài)。精子的密度越大、活力越強(qiáng)者，則其云霧狀越明顯。因此，根據(jù)云霧狀表現(xiàn)的明顯與否，可以判斷精子活力的強(qiáng)弱和精子密度的大小。顯微鏡檢查：顯微鏡檢查是在外觀檢查（肉眼檢查）的基礎(chǔ)上，對(duì)精子的密度和活力作進(jìn)一步檢查。精液的檢查，通常使用200～600倍顯微鏡，用吸管或玻璃棒取一小滴精液，滴在載玻片中央，輕輕蓋上蓋玻片，使精液均勻地在載玻片上形成一薄層，放在顯微鏡下檢查。蓋蓋玻片時(shí)注意不要發(fā)生氣泡。為了防止顯微鏡頭壓碎蓋玻片，可先將鏡頭慢慢降低到幾乎接觸蓋玻片的地方，然后扭轉(zhuǎn)顯微鏡小螺旋，慢慢升高到看清楚為止。檢查精子活力時(shí)，在精液中加入一滴1％的氯化鈉溶液，稀釋后用顯微鏡檢查。精液的處理，應(yīng)在18～25℃室溫下進(jìn)行。檢查精液用的載玻片、蓋玻片、玻璃棒、吸管等，事先要洗凈擦干（不要使用肥皂）。密度的評(píng)定：精子濃度（密度）精子濃度指單位容積（1毫升）所含有的精子數(shù)目。濃度檢查的目的，是為確定稀釋倍數(shù)和輸精量提供依據(jù)。精子濃度檢查主要采用顯微鏡計(jì)數(shù)法。一般分為稠密、中等、稀薄三個(gè)等級(jí)，以“密”，“中”、“稀”表示。“密”：在顯微鏡視野中布滿密集的精子，彼此間沒有空隙，難于看出單個(gè)精子的活動(dòng)情況?！爸小保壕又g有相當(dāng)于1～2個(gè)精子長度的空隙，能清楚地看到單個(gè)精子的活動(dòng)情況?！跋　保簝H能看到少數(shù)精子分散于各處，精子間空隙很大。如視野內(nèi)無精子存在，用“無”表示。以上是生產(chǎn)實(shí)踐中通常采用的評(píng)定精子密度的方法，如要計(jì)算一個(gè)單位容量精液中精子的數(shù)量，可采用“精子計(jì)數(shù)法”，用“血球計(jì)數(shù)器”測定?；盍Φ脑u(píng)定：精子活力是評(píng)定精液品質(zhì)優(yōu)劣的重要指標(biāo)，一般對(duì)采精后、稀釋后、冷凍精液解凍后的精液應(yīng)分別進(jìn)行活力檢查。用已消毒的干凈玻璃棒取出原精液一滴，或用生理鹽水稀釋過的精液一滴，滴在擦洗干凈的干燥載玻片上，并蓋上干凈的蓋玻片，然后在400～600倍的顯微鏡下觀察。觀察時(shí)室溫不得低于18℃。根據(jù)直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)的精子所占比例來評(píng)定精子活率。在顯微鏡下觀察，可以看到精子有三種運(yùn)動(dòng)方式：前進(jìn)運(yùn)動(dòng)：精子的運(yùn)動(dòng)呈直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)；回旋運(yùn)動(dòng)：精子雖也運(yùn)動(dòng)，但繞小圈子回旋轉(zhuǎn)動(dòng)，圈子的直徑很小，不到一個(gè)精子的長度；擺動(dòng)式運(yùn)動(dòng)：精子不變其位置，而在原地不斷擺動(dòng)，并不前進(jìn)。除以上三種運(yùn)動(dòng)方式之外，往往還可以看到?jīng)]有任何運(yùn)動(dòng)的精子，呈靜止?fàn)顟B(tài)。前進(jìn)運(yùn)動(dòng)的精子才是具有受精能力的精子。因此，根據(jù)在顯微鏡下所能觀察到的前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子占視野內(nèi)總精子數(shù)的百分率來評(píng)定精子活率。過去多采用五級(jí)評(píng)分：如果全部精子做直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)，評(píng)為五級(jí)；大約有80%的精子做直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)，評(píng)為四級(jí)；60%左右的精子做直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)，評(píng)為三級(jí)；40%左右的精子做直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)，評(píng)為二級(jí)；20%左右的精子做直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)，評(píng)為一級(jí)?，F(xiàn)在大多直接采用百分率來評(píng)定精子活率，如活率為80%，即表示精液中直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)的精子數(shù)占總精子數(shù)的80%。如果精子僅作擺動(dòng)運(yùn)動(dòng)而不前進(jìn)，以“擺”表示，精子全不活動(dòng)，以“死”表示。公羊的精液，經(jīng)過密度和活力檢查，必須評(píng)為“密—五”、“密一四”或“中—五”、“中—四”的方能做輸精用。4、精液的稀釋在輸精、保存和運(yùn)輸之前，對(duì)精液要進(jìn)行稀釋，主要是為了增加精液量，擴(kuò)大母羊授精數(shù)；延長體外精子存活時(shí)間和增強(qiáng)精子活力。稀釋液應(yīng)具備的條件是：對(duì)精子的生存有利無害；能供給精子營養(yǎng)；具有與精液相等的滲透壓，有緩沖酸堿度的作用；容易配制，成本低。常用的稀釋液有以下幾種：（1）0.9％氯化鈉（生理鹽水）稀釋液：氯化鈉（化學(xué)純）0.9克，蒸餾水100毫升。以上稀釋液稀釋倍數(shù)一般以1：1～2比較適宜，這種稀釋液通常不做保存和運(yùn)輸精液使用。（2）葡萄糖、卵黃稀釋液：無水葡萄糖3克，檸檬酸鈉1.4克，新鮮卵黃20毫升，蒸餾水100毫升。配制這種稀釋液，先將葡萄糖、檸檬酸鈉溶解于蒸溜水，經(jīng)過過濾、消毒（煮沸）后，再加入卵黃。使用時(shí)一般按1：3倍稀釋。（3）牛奶和羊奶稀釋液：新鮮牛奶或羊奶用數(shù)層紗布過濾，煮沸消毒10～15分鐘，冷卻至室溫，除去奶皮或用長針頭注射器從奶皮下面吸取所需要的奶量，一般按1：2～4倍稀釋。這種稀釋液容易配制，使用方便、效果良好。精液采取后應(yīng)盡快稀釋，稀釋液必須是新鮮的，其溫度和精液溫度保持一致，在20～25℃室溫和無菌條件下進(jìn)行操作。稀釋液應(yīng)沿著集精杯壁緩緩注入，用細(xì)玻璃棒輕輕攪勻。稀釋精液時(shí)，要注意防止精子受到?jīng)_擊、溫度驟變和其他有害因素的影響。精液稀釋的倍數(shù)，根據(jù)精子密度決定。通常只有經(jīng)過顯微鏡檢查評(píng)為“密—五”或“密—四”的精液才能稀釋，原則上稀釋后每次輸精量（0.1毫升）保證有效精子數(shù)7500萬以上即可。密度不高的精液不進(jìn)行稀釋。稀釋后的精液，輸精前應(yīng)再次進(jìn)行品質(zhì)檢查。5、輸精輸精是人工授精操作最后一個(gè)環(huán)節(jié)，掌握好母羊發(fā)情排卵的時(shí)機(jī)，采用正確的方法把精液輸送到母羊生殖道的適當(dāng)位置。1）適宜的輸精時(shí)間：輸精要適時(shí)，也就是要選擇最容易受胎的時(shí)刻進(jìn)行輸精。要做到這一點(diǎn)，必須掌握好排卵的時(shí)間，卵子排出后具有受胎能力的時(shí)間，精子運(yùn)動(dòng)速度和存活時(shí)間等規(guī)律。母羊發(fā)情持續(xù)期一般為30小時(shí)左右，最理想的輸精時(shí)間在排卵前不久，過早過遲都不適宜。但在實(shí)際工作中，由于發(fā)情開始時(shí)間常常不好掌握，發(fā)現(xiàn)發(fā)情不等于開始發(fā)情，確切掌握排卵時(shí)間比較困難，因此就要結(jié)合上述原理，根據(jù)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)來決定輸精時(shí)間。通常，綿、山羊在發(fā)情開始后10～36小時(shí)內(nèi)輸精為宜。一般根據(jù)試情制度，早晚各輸一次。次日仍然發(fā)情的母羊，應(yīng)該進(jìn)行第三次輸精。2）輸精量：每一只母羊的輸精量，根據(jù)精液品質(zhì)、稀釋倍數(shù)等決定。在一般情況下，如用原精液輸精，其輸精量每只母羊?yàn)?.05～0.1毫升。如使用１：1的稀釋精液，用量為0.1～0.2毫升。如使稀釋2～3倍的稀釋精液，用量為0.1～0.3毫升。不論原精液或稀釋后的精液，要求每次輸入精液中的有效精子（呈前進(jìn)運(yùn)動(dòng)的）數(shù)，以不少于5000～１0000個(gè)（平均7500個(gè)）為適宜。3）輸精部位：母羊的輸精部位應(yīng)該在子宮頸口，子宮頸口一般位于陰道的后上方，但個(gè)體間很不一致，偏向左右兩側(cè)的羊往往較多，但由于子宮頸細(xì)長，管腔內(nèi)有５～６個(gè)橫向皺褶，因此需要仔細(xì)操作，才能達(dá)到較深部位（０.５～1厘米）輸精的目的。４）輸精方法：將待配母羊牽到輸精室內(nèi)的輸精架上固定好，將其外陰部和周圍擦洗干凈并消毒，保定人員用手掀起羊尾巴，輸精人蹲（或坐）在配種架后面的坑里，左手握開膣器，右手持輸精器，將開膣器保持合攏狀態(tài)，慢慢插入母羊陰道，輕輕扭轉(zhuǎn)，適度張開。先檢查陰道內(nèi)有無疾病和發(fā)情情況，再慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)開膣器，尋找子宮頸口，找到后將開膣器固定適當(dāng)位置，將輸精器從開膣器中間慢慢插入子宮口０.５～１厘米處，用拇指輕輕壓輸精器活塞，注入定量精液。然后慢慢取出輸精器，把開窒器稍加合攏（半開半閉）取出，將母羊打好記號(hào)，放回羊圈。也可采取倒立、陰道底部輸精法，即由保定人員用雙手握緊母羊兩后腿飛節(jié)處，將羊倒提起來，用雙腿夾住羊的軀體進(jìn)行固定，然后由輸精員進(jìn)行輸精。子宮頸口一般位于陰道的后上方，但個(gè)體間很不一致，偏向左右兩側(cè)的羊往往較多，要耐心尋找，一般子宮頸口附近粘液較多，陰道粘膜顏色也較深，仔細(xì)觀察，不難找到。每輸完一只母羊，將開膣器清洗擦干后，用酒精火焰消毒，然后在1％氯化鈉溶液中蘸一下，即可供下一只羊使用。輸精器在連續(xù)使用的情況下，每用完一次，可用較干的65％的酒精棉球，將輸精器尖端表面沿著向尖端的方向擦拭消毒（注意不要向相反的方向擦拭，防止酒精從尖端管口流入輸精器內(nèi)），然后用1％的氯化鈉棉球擦拭數(shù)次，再輸另一只母羊。輸精器內(nèi)精液用完后，重新清洗、消毒，方可繼續(xù)吸取精液。當(dāng)注入精液時(shí)，如感到精液排出不暢通，可檢查輸精器尖端是否在子宮頸口內(nèi)，如確實(shí)插入子宮頸口，可稍許轉(zhuǎn)動(dòng)一下輸精器或稍向外拉出一些，即可順利注入。當(dāng)輸精器插入子宮頸口內(nèi)，如發(fā)現(xiàn)母羊有拱背情況，可用手輕壓其腰部，以緩和緊張，防止精液倒流。處女羊或其他因陰道狹窄，開膣器不能插進(jìn)，看不見子宮頸口的羊，可采用陰道輸精。由于陰道輸精精液損失較大，所以輸精量要增加一倍至數(shù)倍。輸精器的溫度，應(yīng)保持與精液的溫度相等。使用保存、運(yùn)輸?shù)木簳r(shí)，應(yīng)逐漸加溫，輸精室應(yīng)保持18～25℃的溫度。一個(gè)工作日的工作結(jié)束后，器械、用具依次清洗消毒，注意不要使輸精器活塞部分殘留精液，要洗干凈。最后填寫好各種記錄表格和工作日記。5）輸精記錄：種公羊采精記錄：主要記載采精日期和時(shí)間、射精量、精子活率、顏色、密度、精液稀釋倍數(shù)、輸精母羊號(hào)。母羊輸精記錄：主要記載輸精母羊號(hào)、年齡、輸精日期、精液類型、配公羊號(hào)、精液稀釋倍數(shù)。6）鮮精人工授精注意事項(xiàng)①認(rèn)真做好發(fā)情、輸精及公羊配種的有關(guān)記錄。②禁止閑雜人員圍觀采精室、輸精室，隨便進(jìn)入工作室。③工作人員嚴(yán)肅認(rèn)真，踏踏實(shí)實(shí)地完成各環(huán)節(jié)任務(wù)，禁止大聲喧鬧，更不要隨便開玩笑。④工作室內(nèi)決不允許吸煙及吃帶刺激性食物（蔥、蒜、酒等）后入內(nèi)。⑤愛護(hù)公母羊，不能粗暴對(duì)待。⑥根據(jù)當(dāng)日發(fā)情母羊多少，決定是否稀釋精液。⑦實(shí)現(xiàn)無菌操作，消毒過的器具，不可污染。