《鐵皮石斛干細(xì)胞室內(nèi)培育生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程（征求意見稿）》

江蘇省市場監(jiān)督管理局發(fā)布IICS65.020.20B31DB32—2022TechnicalregulationoftheindoorcultivationofstemcellsfromDendrobiumoficinale 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 13.1鐵皮石斛干細(xì)胞室內(nèi)培育 4生產(chǎn)條件 5種源干細(xì)胞獲取、篩選與增殖 15.1培養(yǎng)基配制 15.2種源干細(xì)胞獲取 15.3種源干細(xì)胞篩選純化 25.4種源干細(xì)胞增殖 26培育生產(chǎn) 26.1培養(yǎng)基配制 26.2培育操作 27規(guī)?；a(chǎn) 2 29采收 210質(zhì)量等級劃分 311包裝、運(yùn)輸、儲存 311.1包裝 311.2運(yùn)輸 311.3貯存 3本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院提出。本文件由江蘇省園藝標(biāo)準(zhǔn)化委員會歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，蘇州普朗特爾皮膚細(xì)胞科技有限公司，西交利物浦大學(xué)，蘇州珀立科技服務(wù)有限公司，思格（蘇州）生物科技有限公司，蘇州工業(yè)園區(qū)服務(wù)外包職業(yè)學(xué)院。本標(biāo)準(zhǔn)起草人：陳小龍、張杰、吳紅升、余向陽、宋立曉、周燕群、王牧、任寶永、李毅、覃鴻妮。鐵皮石斛干細(xì)胞室內(nèi)培育生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了鐵皮石斛干細(xì)胞室內(nèi)培育的術(shù)語和定義、生產(chǎn)條件、種源干細(xì)胞獲取、篩選與增殖、培育生產(chǎn)、規(guī)模化生產(chǎn)、日常管理、采收、質(zhì)量等級劃分、包裝、運(yùn)輸及貯存。本標(biāo)準(zhǔn)適用于鐵皮石斛干細(xì)胞室內(nèi)培育生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期引用文件，僅所注日期版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改單）適用于本文件。GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1鐵皮石斛干細(xì)胞室內(nèi)培育（TheindoorcultivationofstemcellsofDendrobiumofficinale）從鐵皮石斛莖尖部分離體培養(yǎng)植物愈傷組織，經(jīng)穩(wěn)定培育，得到鐵皮石斛植物干細(xì)胞，再通過進(jìn)一步擴(kuò)增培育成的穩(wěn)定迅速增殖鐵皮石斛干細(xì)胞培育技術(shù)。4生產(chǎn)條件室內(nèi)環(huán)境為十萬級以上潔凈度的潔凈間。保持室溫25oC~28oC。均勻柔和人工光，光照強(qiáng)度為2000Lux，種源培育與增殖階段為完全黑暗，種源生產(chǎn)階段光暗周期8h：16h?？諝庀鄬穸?0%~70%。生產(chǎn)用水和過濾水應(yīng)分別符合GB5749和GB/T6682的規(guī)定。5種源干細(xì)胞獲取、篩選與增殖5.1培養(yǎng)基配制采用1/2MS培養(yǎng)基+2mg/LNAA+0.5mg/L6-BA+20g/L蔗糖+7.5g/L瓊脂固體培養(yǎng)基進(jìn)行種源干細(xì)胞誘導(dǎo)固體培養(yǎng)。采用1/2MS培養(yǎng)基+1mg/L6-BA+20g/L蔗糖+7.5g/L瓊脂固體培養(yǎng)基進(jìn)行種源干細(xì)胞增殖固體培養(yǎng)。5.2種源干細(xì)胞獲取將成熟鐵皮石斛莖尖組織從莖段上分離后，切成細(xì)小的組織塊，加入固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在完全黑暗條件下培養(yǎng)2周~4周，獲得愈傷組織細(xì)胞。在相同固體培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件下增殖愈傷組織細(xì)胞。5.3種源干細(xì)胞篩選純化愈傷組織細(xì)胞增殖后，每10d將死亡的、褐化和玻璃化的愈傷組織清理出培養(yǎng)體系，篩選留存淡黃色或淺綠色、生長茁壯、均一的種源干細(xì)胞進(jìn)一步培育。5.4種源干細(xì)胞增殖按照鮮重0.2g~0.3g/cm2接種量，將種源干細(xì)胞轉(zhuǎn)接至500mL玻璃瓶中進(jìn)行固體培養(yǎng)。培養(yǎng)過程中，每21~28天更換新培養(yǎng)基，培養(yǎng)周期為50d~55d。6培育生產(chǎn)6.1培養(yǎng)基配制采用1/2MS培養(yǎng)基+1mg/L6-BA+20g/L蔗糖+7.5g/L瓊脂固體培養(yǎng)基+10g/L馬鈴薯提取物進(jìn)行種源干細(xì)胞培育生產(chǎn)。6.2培育操作按0.4g/L~0.5g/L接種量，將種源干細(xì)胞轉(zhuǎn)接至1L玻璃瓶中。在培養(yǎng)過程中，每20~25天更換新培養(yǎng)基，培養(yǎng)周期為50d~55d。待干細(xì)胞生長總重量至加入重量的10倍時(shí)，采收或留做干細(xì)胞增殖的種源細(xì)胞。7規(guī)模化生產(chǎn)按0.4g/L~0.5g/L接種量，將采收的種源干細(xì)胞轉(zhuǎn)接至2L~3L的固體培養(yǎng)瓶中，如發(fā)現(xiàn)褐化、玻璃化組織，及時(shí)清除出培養(yǎng)體系。其它按本標(biāo)準(zhǔn)第6章的規(guī)定執(zhí)行。一旦發(fā)現(xiàn)細(xì)菌或真菌的污染，立即將污染品移出培育生產(chǎn)間并進(jìn)行濕熱高溫滅菌。9采收采收時(shí)剔除褐化的干細(xì)胞團(tuán)，選取顏色，生長狀態(tài)和生長速率穩(wěn)定的干細(xì)胞組織，作為鐵皮石斛種源干細(xì)胞，用于后續(xù)的誘導(dǎo)和育苗。10質(zhì)量等級劃分鐵皮石斛干細(xì)胞質(zhì)量等級劃分要求見表1。表1鐵皮石斛干細(xì)胞質(zhì)量等級劃分要求等級要求特級形態(tài)規(guī)則，干細(xì)胞成團(tuán)性好，直徑大于8mm，干細(xì)胞顆粒均勻，淡黃色或淡綠一級形態(tài)基本規(guī)則，干細(xì)胞成團(tuán)性較好，直徑3mm~6mm，干細(xì)胞偶見黃褐色斑點(diǎn)，淡黃色或淡綠色。二級形態(tài)差別較大，直徑2mm~8mm，干細(xì)胞團(tuán)中混有褐色部分，淡黃色或淡綠色。11包裝、運(yùn)輸、儲存11.1包裝分