實(shí)驗(yàn)四PCR基因擴(kuò)增資料講解

實(shí)驗(yàn)四PCR基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^本實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)PCR反應(yīng)的基本原理與實(shí)驗(yàn)技術(shù)。實(shí)驗(yàn)原理聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerasechainreaction,PCR)，是一種在體外快速擴(kuò)增特定基因或DNA序列的方法，故又稱為基因的體外擴(kuò)增法。在待擴(kuò)增的DNA片斷兩側(cè)和與其兩側(cè)互補(bǔ)的兩個(gè)寡核苷酸引物，經(jīng)變性、退火和延伸若干個(gè)循環(huán)后，DNA擴(kuò)增2n倍。PCR技術(shù)的原理1.變性：在加熱或堿性條件下可使DNA雙螺旋的氫鍵斷裂，形成單鏈DNA，稱之為變性。2.退火：是模板與引物的復(fù)性。引物是與模板某區(qū)序列互補(bǔ)的一小段DNA片段。3.延伸：從結(jié)合在特定DNA模板上的引物為出發(fā)點(diǎn)，將四種脫氧核苷酸以堿基配對(duì)形式按5’→3’的方向沿著模板順序合成新的DNA鏈。溫度（℃）時(shí)間（min）94726094℃變性（1min）60℃退火（1min）72℃延伸（1.5min）循環(huán)1循環(huán)2循環(huán)3PCR反應(yīng)的溫度循環(huán)周期PCR反應(yīng)的每一個(gè)溫度循環(huán)周期都是由DNA變性、引物退火和反應(yīng)延伸三個(gè)步驟完成的。圖中設(shè)定的反應(yīng)參數(shù)是94℃變性1min，60℃退火1min，72℃延伸1.5min。如此周而復(fù)始，重復(fù)進(jìn)行，直至擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量滿足實(shí)驗(yàn)需求為止。一般PCR反應(yīng)條件實(shí)驗(yàn)儀器電泳儀瓊脂糖凝膠電泳槽PCR儀凝膠成像系統(tǒng)移液器實(shí)驗(yàn)材料1、DNA模板2、4種dNTP3、引物1、引物24、Taq酶5、瓊脂糖6、DNA相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)物7、吸頭、50ulPCR管試劑10×PCR緩沖液(含Mg2＋)4×dNTP(每種1mmol)Tag酶1U/ulDNA模板引物1:5`-

GGGGAATTCATGGTGAGCAAGGGC-3`引物2:5`-GACCTGCAGGCATGCAAGCTTGGC-3`

引物溶液濃度10pmol/ul實(shí)驗(yàn)步驟1在0.5mlRCR管內(nèi)配置20ul反應(yīng)體系：

CK(ul)1#(ul)模板01引物10.40.4引物20.40.410×PCRBuffer22Taq酶0.50.5dNTPs0.40.4ddH2O14.315.3Total2020PCR反應(yīng)程序(1)94℃變性5min，(2)94℃變性1min，(3)52℃退火1min，(4)72℃延伸1min。(5)重復(fù)(2)-(4)30次（6）72℃延伸1min。實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求：1、寫出本實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、原理?、實(shí)驗(yàn)器材及實(shí)驗(yàn)