病原生物學(xué)-教程-第四章-消毒與滅菌

第四章

消毒與滅菌病原生物學(xué)學(xué)習(xí)目標(biāo)掌握：消毒、滅菌、抑菌、防腐和無菌的概念，掌握干熱、濕熱、干烤、高壓蒸汽滅菌法，殺滅芽孢所需要的溫度和時(shí)間，紫外線殺菌機(jī)制。熟悉：濕熱滅菌法的作用機(jī)制；冷凍真空干燥法的意義。熟悉化學(xué)消毒劑的殺菌機(jī)制。了解：常用化學(xué)消毒劑的種類、作用及影響因素。第一節(jié)

消毒滅菌的常用術(shù)語1.滅菌

殺滅物體上所有微生物的方法。滅菌比消毒要求高，包括殺滅細(xì)菌芽胞、病毒和霉菌在內(nèi)的全部病原微生物和非病原微生物。經(jīng)過滅菌的物品稱“無菌物品”。凡需要進(jìn)入人體內(nèi)部，包括進(jìn)入血液、組織、體腔的醫(yī)用器材，如手術(shù)器械、注射用具、一切置于人體腔的引流管等，都要求絕對(duì)無菌。在實(shí)驗(yàn)室里，培養(yǎng)基和相關(guān)的試劑、器材也需要滅菌。第一節(jié)

消毒滅菌的常用術(shù)語2.消毒

殺死物體上或環(huán)境中的病原微生物，并不一定能殺死細(xì)菌芽胞或非病原微生物的方法。用以消毒的藥品稱為消毒劑。一般消毒劑在常用的濃度下，只對(duì)細(xì)菌的繁殖體有效，對(duì)細(xì)菌芽胞無效。第一節(jié)

消毒滅菌的常用術(shù)語3.抑菌

抑制人體內(nèi)部或外部細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的方法。常用的抑菌劑為各種抗生素，可在體內(nèi)抑制細(xì)菌的繁殖，或在體外用于抑菌試驗(yàn)以檢測(cè)細(xì)菌對(duì)抗生素的敏感性。第一節(jié)

消毒滅菌的常用術(shù)語4.防腐

在體外防止或抑制細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的方法。用以防腐的藥品稱為防腐劑。防腐時(shí)細(xì)菌一般不死亡。常用的有醇類、碘伏、氯已定等，某些化學(xué)藥品在高濃度時(shí)為消毒劑，低濃度時(shí)常為防腐劑。第一節(jié)

消毒滅菌的常用術(shù)語5.無菌

不存在任何活菌的意思，多是滅菌的結(jié)果。防止細(xì)菌進(jìn)入人體或其他物品的操作技術(shù)，稱為無菌操作。例如進(jìn)行外科手術(shù)時(shí)，需要防止細(xì)菌進(jìn)入創(chuàng)口。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中要注意防止污染和感染。無菌并不只是指沒有活的細(xì)菌，還包括沒有活的病毒、真菌等微生物。第一節(jié)

消毒滅菌的常用術(shù)語6.清潔

指能減少微生物附著在無機(jī)物體表面的數(shù)量的方法，達(dá)到人類可以接受的水平，以滿足公眾健康需要。7.凈化

指能顯著減少或破壞一定空間中微生物數(shù)量和生物活性的方法。第二節(jié)

消毒滅菌的方法一、物理消毒滅菌法用于消毒滅菌的物理學(xué)方法主要有熱力、紫外線、電離輻射、濾過除菌等。此外，超聲波、干燥、冷凍也能殺菌抑菌。第二節(jié)

消毒滅菌的方法（一）熱力滅菌法的種類及其應(yīng)用高溫對(duì)細(xì)菌具有明顯的致死作用，因此最常用于消毒和滅菌。多數(shù)無芽胞細(xì)菌經(jīng)55℃～60℃作用30～60分鐘后死亡。濕熱80℃經(jīng)5～10分鐘可殺死所有細(xì)菌繁殖體和真菌。但細(xì)菌芽孢對(duì)高溫有很強(qiáng)的抵抗力，如炭疽芽孢桿菌的芽孢，可耐受5～10分鐘煮沸，肉毒梭菌的芽孢則需要煮沸3～5小時(shí)才死亡。第二節(jié)

消毒滅菌的方法常用的熱力滅菌法有干熱滅菌法和濕熱滅菌法兩類。在同一溫度下，濕熱的殺菌效果比干熱好。是因?yàn)椋孩贊駸岜雀蔁岽┩噶?qiáng)，可使被滅菌的物體內(nèi)受熱均勻；②濕熱中細(xì)菌易吸收水分使蛋白質(zhì)凝固變性；③濕熱的蒸汽接觸被滅物品時(shí)由氣態(tài)變?yōu)橐簯B(tài)可放出潛熱，能迅速提高被滅菌物體的溫度。第二節(jié)

消毒滅菌的方法1、干熱滅菌法

干熱的滅菌作用是通過脫水、干燥和大分子變性。一般細(xì)菌繁殖體在干燥狀態(tài)下，80℃～100℃經(jīng)1小時(shí)可被殺死。芽孢則需要更高溫度才死亡。（1）焚燒法（2）燒灼法（3）干烤法（4）紅外線第二節(jié)

消毒滅菌的方法（1）焚燒法：直接點(diǎn)燃或在焚燒爐內(nèi)焚燒，是一種徹底的滅菌法，僅適用于病理性廢棄物或動(dòng)物尸體等。（2）燒灼法：直接用火焰滅菌，適用于微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的接種環(huán)、試管口、瓶口等。第二節(jié)

消毒滅菌的方法（3）干烤法：利用干烤箱滅菌，通常加熱至160℃～170℃經(jīng)2小時(shí)，可殺死芽胞，達(dá)到滅菌目的。適用于耐高溫的玻璃器皿、金屬器械、陶瓷等。有的物品只能用干熱滅菌,如滑石粉。（4）紅外線：是一種0.77～1000

m波長(zhǎng)的電磁波，尤以1～10

m波長(zhǎng)的熱效應(yīng)最強(qiáng)。紅外線的滅菌作用與干熱相似，殺菌所需溫度和時(shí)間亦同于干烤。此法多用于醫(yī)療器械的滅菌。第二節(jié)

消毒滅菌的方法2、濕熱滅菌法是最常用的滅菌方法。（1）巴氏消毒法（2）煮沸法（3）高壓蒸汽滅菌法（4）流通蒸汽消毒法第二節(jié)

消毒滅菌的方法（1）巴氏消毒法：用較低溫度殺滅液體中的病原菌或特定微生物，而不影響被消毒物品的營(yíng)養(yǎng)成分及香味的消毒方法。方法有兩種：一種是加熱至61.1℃～62.8℃30分鐘；另一種是71.7℃經(jīng)15～30秒，主要用于殺死酒類、牛奶及乳制品中的病原微生物。此法由巴斯德創(chuàng)建，目前廣泛采用后一種方法。第二節(jié)

消毒滅菌的方法（2）煮沸法：水溫100℃經(jīng)5分鐘可殺死一般細(xì)菌的繁殖體。細(xì)菌芽胞需煮沸1～2小時(shí)以上才被殺滅，主要用于消毒食具，污染的器械、刀、剪等。水中加入2%碳酸氫鈉，既可提高沸點(diǎn)達(dá)105℃，促進(jìn)細(xì)菌芽孢的殺滅，又可防止金屬器皿生銹。第二節(jié)

消毒滅菌的方法（3）高壓蒸汽滅菌法：是最有效、最常用的首選滅菌法。使用高壓蒸汽滅菌器，通常在103.4kPa（l.05kg/cm2）的蒸汽壓力下，容器內(nèi)溫度可達(dá)121.3℃，維持15～30分鐘，可殺死所有微生物，包括細(xì)菌的芽胞。耐高溫，耐高壓，不怕濕的物品，均可用此法滅菌，如手術(shù)器械、敷料，手術(shù)衣帽、生理鹽水、普通培養(yǎng)基等。但上述溫度尚不足以滅活朊粒。第二節(jié)

消毒滅菌的方法（4）流通蒸汽消毒法:利用蒸籠或阿諾蒸鍋進(jìn)行消毒。水蒸氣溫度不超過100℃，經(jīng)15～30分鐘可殺死細(xì)菌繁殖體，如果把流通蒸汽消毒過的物品放置37℃孵箱過夜，使殘存的芽孢發(fā)育成繁殖體，次日再經(jīng)流通蒸汽蒸一次，如此重復(fù)3次，可達(dá)到滅菌的效果，稱為間歇蒸汽滅菌法常用于不耐高溫的含糖、牛奶等的培養(yǎng)基的滅菌。若有些物質(zhì)不耐100℃，則可將溫度降低至75～80℃，每次加熱時(shí)間延長(zhǎng)至30～60分鐘，次數(shù)增加至3次以上，也可達(dá)到滅菌目的。第二節(jié)

消毒滅菌的方法（二）輻射殺菌法1、日光與紫外線：日曬是有效地殺菌方法，日光的殺菌作用主要靠紫外線。紫外線波長(zhǎng)240～300nm，其中以265～266nm波長(zhǎng)的紫外線殺菌作用最強(qiáng)，這與DNA的吸收光譜范圍一致。紫外線穿透力極弱，不能透過普通玻璃、紙片、塵埃、水蒸氣等，故只能用于物體表面及空氣的消毒，常用于手術(shù)室、傳染病房、無菌室及超凈工作臺(tái)的消毒。殺菌波長(zhǎng)的紫外線對(duì)人體皮膚、眼睛有損傷作用，使用時(shí)應(yīng)注意防護(hù)。第二節(jié)

消毒滅菌的方法2、電離輻射：主要包括β射線和

射線等，電離射線具有較高的能量，在劑量足夠時(shí)，對(duì)各種細(xì)菌均有致死作用。其機(jī)制在于干擾DNA合成、破壞細(xì)胞膜、引起酶系統(tǒng)紊亂及水分子經(jīng)輻射后產(chǎn)生游離基和新分子，如過氧化氫等。電離輻射常用于大量一次性醫(yī)用不耐熱的塑料制品的消毒，也可用于飲料食品、藥品和生物制品的消毒，而不會(huì)破壞其營(yíng)養(yǎng)成分。第二節(jié)

消毒滅菌的方法3、微波：微波是波長(zhǎng)1～1000mm的電磁波，可穿透玻璃、塑料薄膜與陶瓷等物質(zhì)，但不能穿透金屬表面。常用于非金屬器械、藥杯、食品、檢驗(yàn)室用品等的消毒。微波主要靠熱效應(yīng)發(fā)揮作用，這種熱效應(yīng)必須在有一定含水量的條件下才能顯示出來，在干燥條件下，即使再延長(zhǎng)消毒時(shí)間也不能達(dá)到有效滅菌。第二節(jié)

消毒滅菌的方法（三）濾過除菌法濾過除菌法是用物理阻留的方法將液體或空氣中的細(xì)菌、真菌除去，以達(dá)到無菌的目的。但不能除去病毒、支原體、衣原體等微生物。第二節(jié)

消毒滅菌的方法液體除菌所用的器具稱濾菌器，濾菌器含有微細(xì)小孔，只允許液體通過，而大于孔徑的細(xì)菌、真菌等顆粒不能通過。目前常用的有薄膜濾菌器，由硝酸纖維素膜制成，根據(jù)孔徑大小分為多種規(guī)格，用于除菌的濾膜孔徑在0.45

m以下。此外還有玻璃濾菌器、石棉濾菌器等，其除菌的效能與濾菌器濾孔的大小，濾器電荷等因素有關(guān)，適用于血清、抗毒素、抗生素、藥液等不耐高溫的物質(zhì)除菌。第二節(jié)

消毒滅菌的方法空氣除菌采用生物潔凈技術(shù)，通過初、中、高三級(jí)高效分子空氣過濾器，除掉空氣中0.5～5

m的塵埃微粒，并采用合理的氣流方式來達(dá)到空氣潔凈的目的?，F(xiàn)代醫(yī)院的手術(shù)室，燒傷病房以及無菌制劑室，已逐步采用高效濾菌器以除去空氣中直徑大于0.3

m的微粒，從而保持室內(nèi)的無菌環(huán)境。第二節(jié)

消毒滅菌的方法（四）干燥和低溫抑菌法1、干燥：有些細(xì)菌的繁殖體在空氣干燥時(shí)易死亡。例如腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、霍亂弧菌等。但有些細(xì)菌的抗干燥能力較強(qiáng)，如結(jié)核分枝桿菌在干痰中數(shù)月不死。細(xì)菌芽孢的抵抗力更強(qiáng)，如炭疽芽孢桿菌的芽孢耐干燥20余年。干燥法常用于保存食品，濃鹽或糖漬食品可使細(xì)菌體內(nèi)水分溢出，造成生理性干燥，使細(xì)菌的生命活動(dòng)停止，從而防止食物變質(zhì)。第二節(jié)

消毒滅菌的方法2、低溫：低溫狀態(tài)下細(xì)菌新陳代謝減慢，當(dāng)溫度回升至適宜范圍又可恢復(fù)繁殖，故低溫是保存菌種的好方法。目前最好的保存菌種方法是冷凍真空干燥法，它在低溫狀態(tài)下真空抽盡水分，可保存微生物數(shù)年至數(shù)十年。第二節(jié)

消毒滅菌的方法二、化學(xué)消毒滅菌法（一）消毒劑化學(xué)消毒滅菌法是使用化學(xué)消毒劑。（二）防腐劑某些低濃度的消毒劑可用做防腐劑。（三）化學(xué)療劑用于治療由微生物等所引起疾病的化學(xué)藥物稱為化學(xué)療劑。第二節(jié)

消毒滅菌的方法（一）消毒劑消毒劑種類很多，許多化學(xué)藥物能影響細(xì)菌的化學(xué)組成和生理活動(dòng)，從而發(fā)揮防腐、消毒甚至滅菌作用。其殺菌機(jī)制有三點(diǎn)：①使菌體蛋白質(zhì)變性或凝固，如高濃度的重金屬鹽，高濃度的酚類、醛、醇、酸堿類等；②干擾細(xì)菌的酶系統(tǒng)和重要代謝環(huán)節(jié)，如氧化劑及低濃度的重金屬鹽類；③損傷細(xì)菌的細(xì)胞壁或細(xì)胞膜，影響細(xì)菌的化學(xué)組成、物理結(jié)構(gòu)和生理活動(dòng)，如低濃度的酚類，表面活性劑，脂溶劑等。第二節(jié)

消毒滅菌的方法化學(xué)消毒劑對(duì)細(xì)菌和人體細(xì)胞都有毒性作用，只能外用或用于環(huán)境的消毒?；瘜W(xué)消毒劑的應(yīng)用要適度、適量而且消毒時(shí)間不能過長(zhǎng)。要注意消毒劑對(duì)人類的毒副作用、對(duì)環(huán)境的污染作用和對(duì)物體的腐蝕作用，應(yīng)用消毒劑要既達(dá)到消毒的目的，又不造成對(duì)環(huán)境的污染和對(duì)人類健康的損害。第二節(jié)

消毒滅菌的方法第二節(jié)

消毒滅菌的方法第二節(jié)

消毒滅菌的方法第二節(jié)

消毒滅菌的方法消毒滅菌的效果受環(huán)境、微生物種類、消毒劑本身和使用的方法等多種因素的影響。不同微生物對(duì)不同化學(xué)消毒劑的敏感性不同，微生物對(duì)消毒劑的敏感性高低排序大致如下：真菌、細(xì)菌繁殖體、有包膜病毒、無包膜病毒、分枝桿菌、細(xì)菌芽胞。同一消毒劑對(duì)不同微生物的殺菌效果不同。例如一般消毒劑對(duì)結(jié)核分枝桿菌的作用要比對(duì)其他細(xì)菌繁殖體的作用差；70%乙醇可殺死一般細(xì)菌繁殖體，但不能殺滅細(xì)菌的芽胞。必須根據(jù)消毒對(duì)象選擇合適的消毒劑。此外，微生物的數(shù)量越大，所需消毒的時(shí)間就越長(zhǎng)。第二節(jié)

消毒滅菌的方法（二）防腐劑在生物制品中，如疫苗、類毒素等常加入防腐劑，以防止雜菌生長(zhǎng)。常用防腐劑有0.01%硫柳汞，0.5%石碳酸和0.1%～0.2%甲醛等。（三）化學(xué)療劑其特點(diǎn)是能選擇性地干擾病原體新陳代謝的某些環(huán)節(jié)，導(dǎo)致病原體死亡，一般對(duì)人體的毒性很小或無毒性，可內(nèi)服或注射，常用的化學(xué)療劑有磺胺類藥、呋喃類藥、異煙肼等。第三節(jié)

影響消毒滅菌效果的因素一、消毒劑的性質(zhì)、濃度和作用時(shí)間二、細(xì)菌的種類、數(shù)量與狀態(tài)三、環(huán)境因素的影響第三節(jié)

影響消毒滅菌效果的因素一、消毒劑的性質(zhì)、濃度和作用時(shí)間各種消毒劑的理化性質(zhì)不同，對(duì)微生物的作用大小也有差異。一般消毒劑濃度越大，作用時(shí)間越長(zhǎng)，消毒效果也愈強(qiáng)，醇類例外，70%乙醇或50%～80%異丙醇的消毒效果最好，過高濃度的醇類使菌體蛋白質(zhì)迅速脫水凝固，影響了醇類繼續(xù)向內(nèi)部滲入，降低了殺菌效果。第三節(jié)

影響消毒滅菌效果的因素二、細(xì)菌的種類、數(shù)量與狀態(tài)不同的細(xì)菌對(duì)消毒劑抵抗力不同：細(xì)菌的芽孢比繁殖體抵抗力強(qiáng)；有莢膜的細(xì)菌抵抗力強(qiáng)；幼齡菌比老齡菌對(duì)消毒劑敏感；