TGXAS-金線蓮共生萌發(fā)繁育技術(shù)規(guī)程編制說明

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《金線蓮共生萌發(fā)繁育技術(shù)規(guī)程》（征求意見稿）編制說明一、項(xiàng)目來源根據(jù)《廣西標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)關(guān)于下達(dá)2022年第五十二批團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)制修定項(xiàng)目計(jì)劃的通知》（桂標(biāo)協(xié)〔2022〕117號(hào)）精神，由廣西壯族自治區(qū)中國科學(xué)院廣西植物研究所提出，廣西壯族自治區(qū)中國科學(xué)院廣西植物研究所、桂林保林生物技術(shù)有限公司、廣西正能農(nóng)林健康產(chǎn)業(yè)有限公司共同起草的團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《金線蓮共生萌發(fā)繁育技術(shù)規(guī)程》（項(xiàng)目編號(hào)2022-5201）。二、項(xiàng)目背景及目的意義金線蓮（Anoectochilusroxburghii）為蘭科開唇蘭屬珍貴藥用和觀賞植物，在我國主要分布于云南、廣西、福建、廣東、浙江和江西等省區(qū)。作為我國傳統(tǒng)的珍貴藥材，金線蓮素有“神藥”、“金草”、“藥王”、“烏人參”等美稱，可全草入藥，對(duì)急慢性肝炎、糖尿病、高血脂等多種重大疾病均有療效。以金線蓮為主要原料的中成藥，如復(fù)方金線蓮膠囊、金線蓮噴霧劑等，已在臨床上用于相關(guān)疾病的治療。金線蓮除用作中藥材外，還大量用于鮮食、煲湯和制茶等保健養(yǎng)生方面。近年來隨著人們生活水平提高，更加注重健康養(yǎng)生，加之金線蓮對(duì)許多現(xiàn)代慢性病有很好的治療效果，且無毒副作用，可長期服用，導(dǎo)致市場需求量急劇增加，具有非常好的產(chǎn)業(yè)化開發(fā)前景。近十年來，福建、浙江、廣西、云南、江西、貴州江蘇、湖北、安徽等10余個(gè)省區(qū)逐漸開展了大規(guī)模的金線蓮人工繁育和栽培。據(jù)2014年的初步統(tǒng)計(jì)，中國大陸地區(qū)可年產(chǎn)金線蓮鮮品2500t，年產(chǎn)值達(dá)30億元。然而，隨著金線蓮產(chǎn)業(yè)規(guī)模的逐步擴(kuò)大，產(chǎn)業(yè)化開發(fā)進(jìn)入了瓶頸期，主要表現(xiàn)在缺少優(yōu)質(zhì)種苗的高效繁育技術(shù)，人工種植難度大。主要原因就是因?yàn)樘m科植物都有著天然的菌根共生關(guān)系，其種子萌發(fā)完全依賴真菌提供營養(yǎng)，成年階段在利用光合作用獲取C素和其它營養(yǎng)的同時(shí)，也還從共生真菌獲得C、P、N等養(yǎng)分來促進(jìn)自身生長發(fā)育。共生真菌能夠通過提高礦質(zhì)營養(yǎng)和有機(jī)營養(yǎng)吸收，增加對(duì)生物和非生物逆境的抗性來影響蘭科植物的生長和健康。金線蓮是典型地生型蘭科植物，其繁殖和生長尤其依賴于菌根真菌。但目前生產(chǎn)上都是通過非共生萌發(fā)繁育途徑（無菌播種組培快繁）來進(jìn)行種苗繁殖，由于缺少與有益真菌共生，種苗生產(chǎn)周期長、成本高，組培苗還存在煉苗移栽困難、抗逆性弱、病害多、生長緩慢甚至難以種活等諸多問題。金線蓮無菌組培苗對(duì)移栽基質(zhì)和環(huán)境條件要求極高，若管理稍有不善，將有30~50%的種苗死亡，即使移栽能夠成活，其成活期限常常不足6個(gè)月，這給規(guī)?；N植帶來極大的困擾，嚴(yán)重阻礙了金線蓮產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。針對(duì)金線蓮產(chǎn)業(yè)中的以上技術(shù)問題，本標(biāo)準(zhǔn)以金線蓮與真菌密切共生特性為切入點(diǎn)，從共生萌發(fā)的角度建立高效繁育技術(shù)體系，生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)菌根化種苗并進(jìn)行推廣應(yīng)用，以促進(jìn)金線蓮種苗繁育的高效與規(guī)范化生產(chǎn)。申報(bào)單位與參與單位依托科研技術(shù)成果，近年來搭建“產(chǎn)學(xué)研”平臺(tái)，應(yīng)用“新品種、新技術(shù)+企業(yè)+基地+農(nóng)戶”推廣模式，以點(diǎn)帶面，已在桂林市雁山區(qū)、靈川縣、龍勝縣和賀州市八步區(qū)等地，開展了金線蓮的高效種苗繁育和林下生態(tài)種植等一系列綠色增效技術(shù)與示范推廣，與當(dāng)?shù)卣块T、林場和企業(yè)一起推動(dòng)特色產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，建立有良好的合作關(guān)系。尤其是，本標(biāo)準(zhǔn)申報(bào)團(tuán)隊(duì)通過多年的研究與探索，已掌握了蘭科植物與真菌共生萌發(fā)及繁殖的方法和技術(shù)手段，總結(jié)出金線蓮共生萌發(fā)繁育技術(shù)體系，將該項(xiàng)技術(shù)應(yīng)用在生產(chǎn)實(shí)踐中，實(shí)現(xiàn)了金線蓮種苗的規(guī)?；采劝l(fā)繁殖，該項(xiàng)研究技術(shù)成果處于國內(nèi)領(lǐng)先地位。實(shí)踐證明，基于與真菌共生萌發(fā)繁育的菌根化種苗相較于非共生萌發(fā)繁育的無菌組培苗具有顯著優(yōu)勢(shì)，繁殖周期更短，移栽成活率更高，抗逆性、抗病能力更強(qiáng)，菌根化種苗可正常種植2~3年甚至更久。該項(xiàng)技術(shù)的示范與推廣應(yīng)用，將有效解決當(dāng)前金線蓮種苗規(guī)?；庇头N植困難的問題，推動(dòng)金線蓮藥材產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。目前，國內(nèi)制定有金線蓮非共生萌發(fā)繁殖和栽培的地方標(biāo)準(zhǔn)，但這些地方標(biāo)準(zhǔn)都不是針對(duì)廣西區(qū)內(nèi)的，也未見有金線蓮共生萌發(fā)繁育技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)。因此，制定團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《金線蓮共生萌發(fā)繁育技術(shù)規(guī)程》，對(duì)規(guī)范金線蓮種子與真菌共生萌發(fā)繁殖技術(shù)，保障金線蓮產(chǎn)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化和可持續(xù)發(fā)展有重要意義。三、項(xiàng)目編制過程（一）成立標(biāo)準(zhǔn)編制工作組廣西團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《金線蓮共生萌發(fā)繁育技術(shù)規(guī)程》項(xiàng)目任務(wù)下達(dá)后，廣西壯族自治區(qū)中國科學(xué)院廣西植物研究所、桂林保林生物技術(shù)有限公司、廣西正能農(nóng)林健康產(chǎn)業(yè)有限公司聯(lián)合成立了標(biāo)準(zhǔn)編制工作組，由廣西壯族自治區(qū)中國科學(xué)院廣西植物研究所制定了起草編寫方案與進(jìn)度安排，明確任務(wù)職責(zé)，確定工作技術(shù)路線，開展標(biāo)準(zhǔn)研制工作。編制工作組下設(shè)三個(gè)組，分別是資料收集組、草案編寫組、標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施組。資料收集組負(fù)責(zé)國內(nèi)外與提金線蓮共生萌發(fā)繁育有關(guān)的文獻(xiàn)資料的查詢、收集和整理工作，對(duì)金線蓮共生萌發(fā)繁育的措施和技術(shù)研究成果進(jìn)行系統(tǒng)總結(jié)，查閱目前科學(xué)界對(duì)金線蓮共生萌發(fā)繁育的措施和技術(shù)的研究進(jìn)展。草案編寫組負(fù)責(zé)起草標(biāo)準(zhǔn)草案、征求意見稿和標(biāo)準(zhǔn)編制說明、送審稿及編制說明的編寫工作，包括后期召開征求意見會(huì)、網(wǎng)上征求意見，以及標(biāo)準(zhǔn)的不斷修改和完善。標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施組負(fù)責(zé)廣西團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《金線蓮共生萌發(fā)繁育技術(shù)規(guī)程》發(fā)布后，組織相關(guān)單位、企業(yè)和農(nóng)民開展標(biāo)準(zhǔn)宣貫培訓(xùn)會(huì)，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行詳細(xì)解讀，讓相關(guān)的工作人員了解標(biāo)準(zhǔn)，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)《金線蓮共生萌發(fā)繁育技術(shù)規(guī)程》進(jìn)行操作，保證金線蓮共生萌發(fā)繁育的產(chǎn)量和質(zhì)量，并對(duì)標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施情況進(jìn)行總結(jié)分析，不斷對(duì)該團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)提出修正意見。（二）收集整理文獻(xiàn)資料標(biāo)準(zhǔn)編制工作組查閱了國內(nèi)與金線蓮繁育相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)文件，發(fā)現(xiàn)與金線蓮相關(guān)的現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)全部為地方標(biāo)準(zhǔn)，共有9件。分別如下：DB3307/T116-2020金線蓮林下栽培技術(shù)規(guī)程DB3308/T031-2016金線蓮組培苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)規(guī)程DB33/T2289-2020金線蓮生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范DB44/T2182-2019金線蓮林下栽培技術(shù)規(guī)程DB51/T2408-2017金線蓮無性繁育技術(shù)規(guī)程DB52/T919-2014金線蓮規(guī)范化生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程DB35/T1388-2013地理標(biāo)志產(chǎn)品永安金線蓮DB35/T1254-2012金線蓮培育技術(shù)規(guī)程DB45/T648-2009藥用植物金線蓮種質(zhì)資源描述及數(shù)據(jù)規(guī)范以上與金線蓮繁育相關(guān)的地方標(biāo)準(zhǔn)有5件，但都不是針對(duì)廣西區(qū)的，也未見有金線蓮共生萌發(fā)繁育技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)。（三）研討確定標(biāo)準(zhǔn)主體內(nèi)容標(biāo)準(zhǔn)編制工作組在對(duì)收集的資料進(jìn)行整理研究之后，標(biāo)準(zhǔn)編制工作組召開了標(biāo)準(zhǔn)編制會(huì)議，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)的整體框架結(jié)構(gòu)進(jìn)行了研究，并對(duì)標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)鍵性內(nèi)容進(jìn)行了初步探討。經(jīng)過研究，標(biāo)準(zhǔn)的主體內(nèi)容確定為金線蓮共生菌劑的制備、人工授粉獲得種子、共生萌發(fā)繁殖、種苗的栽培管理。（四）調(diào)研、形成征求意見稿2022年5月-12月，標(biāo)準(zhǔn)起草工作小組進(jìn)行了廣泛實(shí)地調(diào)研工作，查閱了大量的國內(nèi)外文獻(xiàn)資料，對(duì)金線蓮共生萌發(fā)繁育的研究成果進(jìn)行系統(tǒng)總結(jié)。形成了標(biāo)準(zhǔn)的基本構(gòu)架，對(duì)主要內(nèi)容進(jìn)行了討論并對(duì)項(xiàng)目的工作進(jìn)行了部署和安排。并在前期工作的基礎(chǔ)之上，通過理清邏輯脈絡(luò)，整合已有的參考資料中有關(guān)提金線蓮共生萌發(fā)繁育技術(shù)要點(diǎn)，并結(jié)合當(dāng)前廣西金線蓮共種苗繁育與栽培實(shí)際需要，按照簡化、統(tǒng)一等原則編制完成廣西團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《金線蓮共生萌發(fā)繁育技術(shù)規(guī)程》（草案）。2023年1月-12月，向廣西區(qū)內(nèi)涉及領(lǐng)域的部門及相關(guān)專家征求廣西團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《金線蓮共生萌發(fā)繁育技術(shù)規(guī)程》（草案）意見。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)要點(diǎn)框架技術(shù)內(nèi)容，再次修改標(biāo)準(zhǔn)草案，形成廣西團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《金線蓮共生萌發(fā)繁育技術(shù)規(guī)程》（征求意見稿）及（征求意見稿）編制說明（第一次）。2024年1月-12月，對(duì)廣西團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《金線蓮共生萌發(fā)繁育技術(shù)規(guī)程》（征求意見稿）存在的問題進(jìn)行收集，起草組成員討論解決，最終形成廣西團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《金線蓮共生萌發(fā)繁育技術(shù)規(guī)程》（征求意見稿）及（征求意見稿）編制說明（第二次）。四、標(biāo)準(zhǔn)制定原則1、實(shí)用性原則本文件是在充分收集相關(guān)資料和文獻(xiàn)，調(diào)研分析金線蓮種苗繁育和栽培現(xiàn)狀，在現(xiàn)有國家、行業(yè)和地方標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)的金線蓮共生萌發(fā)繁育技術(shù)技術(shù)要求的基礎(chǔ)上，結(jié)合廣西壯族自治區(qū)中國科學(xué)院廣西植物研究所、桂林保林生物技術(shù)有限公司、廣西正能農(nóng)林健康產(chǎn)業(yè)有限公司三家單位多年的實(shí)驗(yàn)研究數(shù)據(jù)和示范應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)而總結(jié)起草的。符合當(dāng)前金線蓮行業(yè)發(fā)展需求，有利于行業(yè)的高質(zhì)量可持續(xù)長遠(yuǎn)發(fā)展，具有較強(qiáng)的實(shí)用性和可操作性。2、協(xié)調(diào)性原則本文件編寫過程中注意了與金線蓮共生萌發(fā)繁育技術(shù)相關(guān)的法律法規(guī)的協(xié)調(diào)問題，在內(nèi)容上與現(xiàn)行法律法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)協(xié)調(diào)一致。3、規(guī)范性原則本文件嚴(yán)格按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的要求和規(guī)定編寫本標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)容，保證標(biāo)準(zhǔn)的編寫質(zhì)量。4、前瞻性原則本文件在兼顧當(dāng)前金線蓮種苗繁育與栽培現(xiàn)實(shí)情況的同時(shí)，還考慮到了農(nóng)業(yè)快速發(fā)展的趨勢(shì)和需要，在標(biāo)準(zhǔn)中體現(xiàn)了個(gè)別特色性、前瞻性和先進(jìn)性條款，作為對(duì)金線蓮產(chǎn)業(yè)高質(zhì)量發(fā)展的指導(dǎo)。五、標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容及依據(jù)來源團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《金線蓮共生萌發(fā)繁育技術(shù)規(guī)程》主要章節(jié)內(nèi)容包括：1范圍，2規(guī)范性引用文件，3術(shù)語和定義，4菌劑的制備，5人工授粉，6共生萌發(fā)繁殖方法，7種苗的栽培管理。依據(jù)來源：項(xiàng)目申報(bào)團(tuán)隊(duì)一直承擔(dān)實(shí)施“廣西蘭花良種培育中心”（桂科農(nóng)字[2012]143號(hào)）自治區(qū)平臺(tái)建設(shè)工作，并且先后主持完成了多項(xiàng)關(guān)于金線蓮繁育的科技項(xiàng)目，獲得多項(xiàng)研究成果，相關(guān)項(xiàng)目見下表1：表1團(tuán)隊(duì)完成的金線蓮種苗繁育相關(guān)科研項(xiàng)目信息項(xiàng)目類別名稱與編號(hào)實(shí)施年限廣西科技計(jì)劃蘭科名貴植物金線蓮良種選育與工廠化繁育示范（桂科攻1598006-3-10）2015.6-2018.5廣西科技計(jì)劃廣西重要蘭科資源植物保護(hù)與繁育技術(shù)研究（桂科攻10100012-5）2010.1-2012.12桂林市科技計(jì)劃廣西特色藥材資源可持續(xù)利用良種選育及種源藥源基地建立-珍稀中草藥金線蓮種苗基地建設(shè)與示范(2016010305-4)2016.9-2017.12廣西自然基金金線蓮繁育中光環(huán)境機(jī)理與調(diào)控研究（2014GXNSFBA118089）2015.1-2017.12廣西林業(yè)科技廣西林下藥材繁育研究及基地建設(shè)（桂林科字[2011]第07號(hào)）2011.1-2013.12廣西喀斯特植物保育與恢復(fù)生態(tài)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室平臺(tái)項(xiàng)目珍稀植物與蘭科植物離體保育中心（19-A-04-04）2019.1-2021.12（一）通過這些項(xiàng)目的研究，完成了金線蓮菌根真菌的分離與篩選，獲得對(duì)金線蓮種子萌發(fā)和生長有顯著促進(jìn)作用的真菌菌株。1、傳統(tǒng)分離金線蓮菌根真菌的選材部位為金線蓮的根系組織，可以分離到金線蓮共生真菌，但是共生真菌種類多，工作量大、有效率低。研究表明，獲得金線蓮菌根真菌最好的選材部位為金線蓮野生幼苗長出的根狀莖的凸起或殘余部位，結(jié)合電鏡初篩，分離有效性高，其中能促進(jìn)金線蓮種子共生萌發(fā)的真菌約為50%。金線蓮共生真菌種類多，分離的真菌不一定都是有效菌根真菌，因此需要通過真菌與金線蓮種子的共生培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證。我們采用的測試方法為菌葉實(shí)驗(yàn)，具體為把適宜胚齡的金線蓮種子播種在已培養(yǎng)真菌的山毛櫸科樹葉上共生培養(yǎng)，觀察不同真菌促種子萌發(fā)及生長情況。其中，第一階段：真菌與金線蓮種子是否產(chǎn)生共生促萌發(fā)和生長效應(yīng)，在共生培養(yǎng)30d后觀察金線蓮種子的萌發(fā)率情況，作為一個(gè)鑒別依據(jù)（圖1a）。第二階段：在真菌與金線蓮共生培養(yǎng)60d后，在金線蓮種子萌發(fā)優(yōu)良的前提下，觀察金線蓮原球莖繼續(xù)生長發(fā)育情況，以生長速度及生長是否茁壯為指標(biāo)，篩選促原球莖生長為根狀莖的菌根真菌（圖1b、c）。經(jīng)過多次篩選和驗(yàn)證，我們分離純化了12個(gè)有促進(jìn)共生萌發(fā)及生長效果的金線蓮共生真菌，標(biāo)號(hào)為A1~A12，從中確定A2號(hào)菌株效果最好（圖1d），共生萌發(fā)率可達(dá)20%以上，而且能持續(xù)促進(jìn)原球莖增殖生長和分化成苗，分子鑒定為絲核菌屬Rhizoctoniasp.保藏號(hào)為CGMCCNo.9728。dccbadccba圖1金線蓮有效菌根真菌篩選：a、共生萌發(fā)；b、原球莖生長；c、分化成苗；d、菌株A2的菌落形態(tài)（二）總結(jié)出金線蓮共生萌發(fā)繁育技術(shù)體系，實(shí)現(xiàn)了種苗的規(guī)?；咝Ч采敝?。在金線蓮種子與真菌共生萌發(fā)繁育流程中，共生培養(yǎng)基質(zhì)的篩選和配置是關(guān)鍵步驟。首先，共生培養(yǎng)基質(zhì)的各類營養(yǎng)組分不能太豐富，否則共生真菌會(huì)生長過于旺盛，從而侵噬細(xì)小的金線蓮種子（粉末狀）；同時(shí)培養(yǎng)基的營養(yǎng)又不能太貧乏，限制共生真菌的生長速度，達(dá)不到共生效應(yīng)的目的；其次，在共生培養(yǎng)基質(zhì)上，共生真菌還必須保持兩個(gè)月以上的共生活性，持續(xù)的為金線蓮原球莖提供營養(yǎng)，促進(jìn)其發(fā)育分化形成根狀莖進(jìn)而成苗，達(dá)到大規(guī)模生產(chǎn)應(yīng)用的要求。標(biāo)準(zhǔn)申報(bào)團(tuán)隊(duì)經(jīng)過多年的探索與研究，通過完全使用天然的原材料進(jìn)行配比，成功配制出適合金線蓮種子與真菌共生生長的培養(yǎng)基基質(zhì)。在此基礎(chǔ)上，優(yōu)化并熟化了金線蓮共生萌發(fā)繁育體系，不僅取得了良好的萌發(fā)率，而且萌發(fā)的原球莖在共生真菌的促進(jìn)下，進(jìn)一步生長發(fā)育成粗壯的金線蓮共生幼苗，同時(shí)還證明金線蓮與共生真菌有較高的兼容性和較強(qiáng)的潛在專一性，利用該技術(shù)已實(shí)現(xiàn)金線蓮的規(guī)?；N苗繁殖（圖2）。實(shí)踐中證明，基于與真菌共生萌發(fā)繁育的菌根化苗相較于無菌種苗在栽培中具有顯著優(yōu)勢(shì)，成活率更高，生態(tài)適應(yīng)性更強(qiáng)，有效解決了金線蓮人工栽培困難的問題，并將相關(guān)成果在廣西國有黃冕林場和賀州市大地生物科技有限公司等單位和企業(yè)進(jìn)行了推廣應(yīng)用，具有顯著的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。c