DB54T 0410-2024 綿羊細(xì)管凍精制作技術(shù)規(guī)范

ICS65.020.3054CCSB4354西 藏 自 治 區(qū) 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB54/T0410—2024綿羊細(xì)管凍精制作技術(shù)規(guī)范2024-09-15發(fā)布 2024-10-15實(shí)施西藏自治區(qū)市場(chǎng)監(jiān)督管理局??發(fā)布DB54/T0410DB54/T0410—2024PAGE\*ROMANPAGE\*ROMANII目 次前言 II范圍 1規(guī)范性引用文件 1術(shù)語(yǔ)和定義 1采精前的準(zhǔn)備 1采精 2凍精制作 3精液質(zhì)量要求及試驗(yàn)方法 4附錄A（資料性） 稀釋液的配制 6前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由西藏自治區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所。本文件主要起草人：任越、劉孟君、扎西央宗、次旺仁增、達(dá)娃頓珠、闞向東、石斌。DB54/T0410DB54/T0410—2024PAGEPAGE1綿羊細(xì)管凍精制作技術(shù)規(guī)范范圍本文件規(guī)定了高ft理、精液冷凍、標(biāo)記、貯存、解凍與活力檢測(cè)、精液質(zhì)量要求及試驗(yàn)方法等。本文件適用于綿羊規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)或合作社。規(guī)范性引用文件（包括所有的修改單）適用于本文件。GB20557 ft羊冷凍精液GB/T5458 液氮生物容器NY1181 輸精細(xì)管NY/T1234 牛冷凍精液生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1鮮精未經(jīng)處理的新鮮精液。3.2精子密度1ml精液中的精子個(gè)數(shù)。3.3精子活力精液中呈直線向前運(yùn)動(dòng)精子個(gè)數(shù)所占總精子個(gè)數(shù)的百分比。3.4前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子數(shù)每劑量精液中呈前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子個(gè)數(shù)。3.5細(xì)菌數(shù)每劑量精液經(jīng)培養(yǎng)后觀察到的細(xì)菌菌落數(shù)。3.6細(xì)管凍精細(xì)管注入精液經(jīng)液氮冷凍所形成的產(chǎn)品。采精前的準(zhǔn)備凍精制作室的要求凍精制作室要求封閉，溫度為18℃～25℃，室內(nèi)清潔衛(wèi)生，做到無(wú)菌操作。儀器設(shè)備生產(chǎn)設(shè)備用于綿羊細(xì)管冷凍精液生產(chǎn)的儀器設(shè)備見表1。表1 綿羊細(xì)管凍精生產(chǎn)設(shè)備序號(hào)設(shè)備名稱規(guī)格/參數(shù)1精液細(xì)管噴碼機(jī)2細(xì)管封裝機(jī)0.21ml～0.23ml3精液程控冷凍儀45℃～-140℃4電子天平0.0001克檢驗(yàn)設(shè)備用于綿羊細(xì)管凍精質(zhì)量檢驗(yàn)的設(shè)備見表2.表2 綿羊細(xì)管凍精質(zhì)量檢驗(yàn)設(shè)備序號(hào)設(shè)備名稱規(guī)格/參數(shù)1動(dòng)物精子全自動(dòng)分析系統(tǒng)含顯微鏡(100倍～400倍)、電腦、成像系統(tǒng)2恒溫恒濕培養(yǎng)箱±0.5℃3凈化工作臺(tái)菌落數(shù)≤0.5個(gè)每皿每小時(shí)4數(shù)顯恒溫水浴鍋±0.5℃5電熱高壓滅菌鍋0Mpa～0.25Mpa器械清洗和消毒器械的清洗與消毒按照NY/T1234進(jìn)行。稀釋液的配制稀釋液的配制參照規(guī)范性附錄A執(zhí)行。采精采精環(huán)境要求采精場(chǎng)所應(yīng)保持安靜，地面平整，清潔衛(wèi)生，采精前做好徹底消毒。種公羊選擇用于凍精生產(chǎn)的種公羊應(yīng)符合本品種標(biāo)準(zhǔn)，體質(zhì)健壯，無(wú)遺傳缺陷及國(guó)家規(guī)定的傳染病。采精方法臺(tái)羊選擇選擇體高略低于種公羊、體格結(jié)實(shí)、性情溫順的母羊作臺(tái)羊，保定在采精架內(nèi)。假陰道的準(zhǔn)備要注入30℃～35℃145毫升～150毫升的50℃～55℃嘴活塞，套上雙連球打氣，使假陰道的采精口形成丫字形。最后把溫度計(jì)插入假陰道內(nèi)測(cè)溫，溫度在38℃～40℃為宜。在假陰道內(nèi)胎的前1/3，涂抹適量凡士林作潤(rùn)滑劑。采精操作將假陰道取下，立即使集精瓶的一端向下堅(jiān)立，打開氣卡塞，放氣取下集精瓶，送操作室檢查。凍精制作鮮精保存玻璃器皿均應(yīng)放在32℃恒溫箱中，稀釋液放在34℃恒溫水浴箱中備用。盛裝稀釋精液的稀釋管，應(yīng)做明顯標(biāo)記。精液稀釋根據(jù)精液分析儀對(duì)精液的品質(zhì)分析結(jié)果，加入稀釋液，稀釋5倍液～10倍液。精液封裝細(xì)管要求0.25mlNY1181要求。封裝采用細(xì)管（灌裝、封口、印字）一體機(jī)，在室溫下封裝，管內(nèi)需留0.4cm～0.6cm的空隙。降溫和平衡將封裝好的細(xì)管凍精放在假陰道中，用棉花固定，插入溫度計(jì)，外邊用84℃箱中經(jīng)1h～1.5h逐漸降溫到3℃～5℃，然后在此溫度下平衡1h。細(xì)管精液的冷凍程控冷凍儀冷凍采用程控冷凍儀按預(yù)選的最佳冷凍曲線自動(dòng)完成冷凍過程。冷凍曲線最佳降溫速率為：4℃～-10℃（降溫速率5℃/min）,-10℃～-100℃（降溫速率55℃/min），-100℃～-140℃（降溫速率20℃/min）。冷凍時(shí)間7min。自制冷凍槽冷凍用自制冷凍槽冷凍細(xì)管時(shí)，冷凍溫度控制在-100℃～-140℃。冷凍時(shí)間8min。凍精收集生產(chǎn)日期等，放入液氮中浸泡。解凍與活力檢查38℃～40管剪減去封口端，滴5微升～10微升精液于載玻片上進(jìn)行活力檢查。檢查合格的凍精作為初檢合格品妥善貯存。貯存用液氮生物容器貯存藏羊凍精，液氮生物容器應(yīng)符合GB/T5458要求。設(shè)專人保管，每周定時(shí)加一移到其他完好的容器內(nèi)。取存凍精時(shí)，凍精離開液氮的時(shí)間不得超過5秒。取放凍精之后，應(yīng)及時(shí)蓋好容器塞，防止液氮蒸發(fā)或異物浸入。精液質(zhì)量要求及試驗(yàn)方法鮮精質(zhì)量要求及試驗(yàn)方法用于綿羊細(xì)管凍精生產(chǎn)的鮮精質(zhì)量應(yīng)符合表3的要求。有一項(xiàng)不符合的精液，不得用于凍精生產(chǎn)。表3 鮮精質(zhì)量指標(biāo)序號(hào)項(xiàng)目質(zhì)量指標(biāo)試驗(yàn)方法1外觀顏色為乳白色或淡黃色，有腥味目測(cè)2精液量0.5ml～1.0ml帶刻度的集精杯3PH值7.2～8.0PH檢測(cè)儀/試紙4精子活力≥70%用動(dòng)物精子全自動(dòng)分析系統(tǒng)/按照GB20557中附錄A測(cè)定5精子密度≥15億每毫升6精子畸形率≤10%凍精質(zhì)量要求及試驗(yàn)方法檢驗(yàn)規(guī)則每只公羊每季度凍精型式檢驗(yàn)不少于一次。出站檢驗(yàn)的項(xiàng)目：外觀、精子活力。檢驗(yàn)合格，可作為合格品交付使用。凍精質(zhì)量評(píng)價(jià)綿羊細(xì)管凍精質(zhì)量應(yīng)符合表4的要求。表4 凍精質(zhì)量指標(biāo)序號(hào)項(xiàng)目質(zhì)量指標(biāo)試驗(yàn)方法1細(xì)管外觀細(xì)管無(wú)裂痕、兩端封口嚴(yán)實(shí)目測(cè)2劑量≥0.18ml分度吸量管：精度0.01ml3精子活力≥30%用動(dòng)物精子全自動(dòng)分析系統(tǒng)/按照GB20557中附錄A測(cè)定4前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子數(shù)≥3×107個(gè)5精子畸形率≤20%6細(xì)菌數(shù)≤800個(gè)凍精質(zhì)量判定要求每劑凍精解凍后應(yīng)同時(shí)具備上列質(zhì)量指標(biāo)要求，不具備任何一項(xiàng)者，為凍精質(zhì)量不合格。附錄 A（資料性）稀釋液成分B6、維生素B12及