DB54T 0410-2024 綿羊細管凍精制作技術規(guī)范

ICS65.020.3054CCSB4354西 藏 自 治 區(qū) 地 方 標 準DB54/T0410—2024綿羊細管凍精制作技術規(guī)范2024-09-15發(fā)布 2024-10-15實施西藏自治區(qū)市場監(jiān)督管理局??發(fā)布DB54/T0410DB54/T0410—2024PAGE\*ROMANPAGE\*ROMANII目 次前言 II范圍 1規(guī)范性引用文件 1術語和定義 1采精前的準備 1采精 2凍精制作 3精液質(zhì)量要求及試驗方法 4附錄A（資料性） 稀釋液的配制 6前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則 第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由西藏自治區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村標準化技術委員會提出并歸口。本文件起草單位：西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學院畜牧獸醫(yī)研究所。本文件主要起草人：任越、劉孟君、扎西央宗、次旺仁增、達娃頓珠、闞向東、石斌。DB54/T0410DB54/T0410—2024PAGEPAGE1綿羊細管凍精制作技術規(guī)范范圍本文件規(guī)定了高ft理、精液冷凍、標記、貯存、解凍與活力檢測、精液質(zhì)量要求及試驗方法等。本文件適用于綿羊規(guī)?；B(yǎng)殖場或合作社。規(guī)范性引用文件（包括所有的修改單）適用于本文件。GB20557 ft羊冷凍精液GB/T5458 液氮生物容器NY1181 輸精細管NY/T1234 牛冷凍精液生產(chǎn)技術規(guī)程術語和定義下列術語和定義適用于本文件。3.1鮮精未經(jīng)處理的新鮮精液。3.2精子密度1ml精液中的精子個數(shù)。3.3精子活力精液中呈直線向前運動精子個數(shù)所占總精子個數(shù)的百分比。3.4前進運動精子數(shù)每劑量精液中呈前進運動精子個數(shù)。3.5細菌數(shù)每劑量精液經(jīng)培養(yǎng)后觀察到的細菌菌落數(shù)。3.6細管凍精細管注入精液經(jīng)液氮冷凍所形成的產(chǎn)品。采精前的準備凍精制作室的要求凍精制作室要求封閉，溫度為18℃～25℃，室內(nèi)清潔衛(wèi)生，做到無菌操作。儀器設備生產(chǎn)設備用于綿羊細管冷凍精液生產(chǎn)的儀器設備見表1。表1 綿羊細管凍精生產(chǎn)設備序號設備名稱規(guī)格/參數(shù)1精液細管噴碼機2細管封裝機0.21ml～0.23ml3精液程控冷凍儀45℃～-140℃4電子天平0.0001克檢驗設備用于綿羊細管凍精質(zhì)量檢驗的設備見表2.表2 綿羊細管凍精質(zhì)量檢驗設備序號設備名稱規(guī)格/參數(shù)1動物精子全自動分析系統(tǒng)含顯微鏡(100倍～400倍)、電腦、成像系統(tǒng)2恒溫恒濕培養(yǎng)箱±0.5℃3凈化工作臺菌落數(shù)≤0.5個每皿每小時4數(shù)顯恒溫水浴鍋±0.5℃5電熱高壓滅菌鍋0Mpa～0.25Mpa器械清洗和消毒器械的清洗與消毒按照NY/T1234進行。稀釋液的配制稀釋液的配制參照規(guī)范性附錄A執(zhí)行。采精采精環(huán)境要求采精場所應保持安靜，地面平整，清潔衛(wèi)生，采精前做好徹底消毒。種公羊選擇用于凍精生產(chǎn)的種公羊應符合本品種標準，體質(zhì)健壯，無遺傳缺陷及國家規(guī)定的傳染病。采精方法臺羊選擇選擇體高略低于種公羊、體格結實、性情溫順的母羊作臺羊，保定在采精架內(nèi)。假陰道的準備要注入30℃～35℃145毫升～150毫升的50℃～55℃嘴活塞，套上雙連球打氣，使假陰道的采精口形成丫字形。最后把溫度計插入假陰道內(nèi)測溫，溫度在38℃～40℃為宜。在假陰道內(nèi)胎的前1/3，涂抹適量凡士林作潤滑劑。采精操作將假陰道取下，立即使集精瓶的一端向下堅立，打開氣卡塞，放氣取下集精瓶，送操作室檢查。凍精制作鮮精保存玻璃器皿均應放在32℃恒溫箱中，稀釋液放在34℃恒溫水浴箱中備用。盛裝稀釋精液的稀釋管，應做明顯標記。精液稀釋根據(jù)精液分析儀對精液的品質(zhì)分析結果，加入稀釋液，稀釋5倍液～10倍液。精液封裝細管要求0.25mlNY1181要求。封裝采用細管（灌裝、封口、印字）一體機，在室溫下封裝，管內(nèi)需留0.4cm～0.6cm的空隙。降溫和平衡將封裝好的細管凍精放在假陰道中，用棉花固定，插入溫度計，外邊用84℃箱中經(jīng)1h～1.5h逐漸降溫到3℃～5℃，然后在此溫度下平衡1h。細管精液的冷凍程控冷凍儀冷凍采用程控冷凍儀按預選的最佳冷凍曲線自動完成冷凍過程。冷凍曲線最佳降溫速率為：4℃～-10℃（降溫速率5℃/min）,-10℃～-100℃（降溫速率55℃/min），-100℃～-140℃（降溫速率20℃/min）。冷凍時間7min。自制冷凍槽冷凍用自制冷凍槽冷凍細管時，冷凍溫度控制在-100℃～-140℃。冷凍時間8min。凍精收集生產(chǎn)日期等，放入液氮中浸泡。解凍與活力檢查38℃～40管剪減去封口端，滴5微升～10微升精液于載玻片上進行活力檢查。檢查合格的凍精作為初檢合格品妥善貯存。貯存用液氮生物容器貯存藏羊凍精，液氮生物容器應符合GB/T5458要求。設專人保管，每周定時加一移到其他完好的容器內(nèi)。取存凍精時，凍精離開液氮的時間不得超過5秒。取放凍精之后，應及時蓋好容器塞，防止液氮蒸發(fā)或異物浸入。精液質(zhì)量要求及試驗方法鮮精質(zhì)量要求及試驗方法用于綿羊細管凍精生產(chǎn)的鮮精質(zhì)量應符合表3的要求。有一項不符合的精液，不得用于凍精生產(chǎn)。表3 鮮精質(zhì)量指標序號項目質(zhì)量指標試驗方法1外觀顏色為乳白色或淡黃色，有腥味目測2精液量0.5ml～1.0ml帶刻度的集精杯3PH值7.2～8.0PH檢測儀/試紙4精子活力≥70%用動物精子全自動分析系統(tǒng)/按照GB20557中附錄A測定5精子密度≥15億每毫升6精子畸形率≤10%凍精質(zhì)量要求及試驗方法檢驗規(guī)則每只公羊每季度凍精型式檢驗不少于一次。出站檢驗的項目：外觀、精子活力。檢驗合格，可作為合格品交付使用。凍精質(zhì)量評價綿羊細管凍精質(zhì)量應符合表4的要求。表4 凍精質(zhì)量指標序號項目質(zhì)量指標試驗方法1細管外觀細管無裂痕、兩端封口嚴實目測2劑量≥0.18ml分度吸量管：精度0.01ml3精子活力≥30%用動物精子全自動分析系統(tǒng)/按照GB20557中附錄A測定4前進運動精子數(shù)≥3×107個5精子畸形率≤20%6細菌數(shù)≤800個凍精質(zhì)量判定要求每劑凍精解凍后應同時具備上列質(zhì)量指標要求，不具備任何一項者，為凍精質(zhì)量不合格。附錄 A（資料性）稀釋液成分B6、維生素B12及