檢驗科血清總膽汁酸測定標準操作規(guī)程

玉環(huán)縣人民醫(yī)院檢驗科文件編號：JYK-3-SH-015版本/修訂號：C/0主題內容生化室作業(yè)指導書生效日期：20110701第2頁共4頁編寫制定日期審核審核日期：核準執(zhí)行日期李永臣2010-09-15李永臣2011-07-01章林華2011-07-01血清總膽汁酸測定（循環(huán)酶法）標準操作規(guī)程1檢驗申請單獨檢驗項目申請：血清總膽汁酸測定(縮寫TBA)；組合項目申請：血生化中肝功能測定加選本項目。臨床醫(yī)生根據需要提出檢驗申請。2標本采集與處理2.1標本采集2.1.1常規(guī)靜脈采血約2ml，不抗凝，置普通試管中?；虿捎煤蛛x膠的真空采血管。2.1.2檢驗申請單和血標本試管標上統(tǒng)一且唯一的標識符。2.1.3急診標本采集后，在檢驗申請單上填寫標本采集時間。2.1.4標本采集后與檢驗申請單一起及時運送至檢驗科。專人負責標本的接收并記錄標本的狀態(tài)，對不合格標本予以拒收。2.1.5下列標本為不合格標本2.1.5.1標本量不足：少于0.3ml的全血標本，或少于0.1ml的血清或血漿。2.1.5.2對反應吸光度有干擾的標本，包括嚴重溶血、嚴重渾濁的標本。2.1.5.3無法確認標本與申請單對應關系的。2.1.5.4其他如標識涂改、標本試管破裂等。2.2標本保存2.2.1接收標本后在30min內將標本離心分離出血清。2.2.2標本保存時間：室溫（15～25℃）下可穩(wěn)定一周，在冰箱中（2～82.2.3已完成測試的標本保持完整的識別號，置4～8℃2.3標本采集的注意事項2.3.1采血前使受檢者保持平靜、松弛和空腹狀態(tài)。2.3.2不建議采集抗凝血標本，如果必須使用血漿，推薦的抗凝劑是肝素。3方法原理循環(huán)酶法。膽汁酸被3a-羥基類固醇脫氫酶（3a-HSDH）及β-硫代煙酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）氧化，生成3酮類固醇及β-硫代煙酰胺腺嘌呤二核苷酸還原型（Thio-NAD）。生成的3酮類固醇在3a-羥基類固醇脫氫酶及β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸還原型（Thio-NAD）存在下，生成膽汁酸及β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）。如此進行循環(huán)反應，最后測定生成的β-硫代煙酰胺腺嘌呤二核苷酸還原型（Thio-NAD）的吸光度，求得膽汁酸濃度值。4試劑及其他用品4.1試劑：酶循環(huán)法測定總膽汁酸試劑盒，北京利德曼公司出品。4.2試劑盒保存：保存2～8℃4.3試劑盒準備：液態(tài)雙試劑型，即開即用，無特殊準備。4.4試劑盒主要成分：試劑Ⅰ：Thio-NAD952.9mｇ/L，Tris緩沖液120mmol/L；試劑Ⅱ：3α-HSD125000mmol/L，NADH6.1mｇ/L。5校準品與校準模式5.1校準品：與試劑盒配套的標準液。5.2校準類型和數目：線性模式，1個校準點。5.3校準周期：校準間隔時間不限。但在：①更換試劑或出現質控漂移時；②當儀器進行全面保養(yǎng)后；③重要零件更換后；均須進行一次校準。5.4校準液重建方法：即開即用，無需特殊準備。6質控品與室內質控規(guī)則6.1質控品采用由Beckman-Coulter公司提供的兩個不同水平未定值質控血清。6.2質控液重建方法：即開即用，無需特殊準備。6.3質控品測定：在每一批標本中測定兩個水平質控血清各一次。6.4質控規(guī)則：采用Westgard多規(guī)則質控規(guī)則，由計算機程序進行檢索與判斷。6.5如出現失控情況，按室內質控標準操作程序采取各種有效的糾正措施及時糾正，并在確認重新回復到控制狀態(tài)后開始標本檢測。7適用儀器適用AEROSET和C16000全自動生化分析儀器。8標本檢測步驟裝載試劑→進行校準→進行質控→輸入標本檢測項目→加載標本→標本測定→結果復核→報告。主要分析參數參見說明書。10結果計算計算公式：膽汁酸濃度（μmol/L）＝ΔA測定管/min/ΔA校準管/min）×校準液TBA濃度（μmol/L）儀器根據此公式自動給出每個標本測定結果。11檢驗結果的報告及范圍11.1結果的報告11.1.1結果經審核后，確認準確無誤后發(fā)出報告。11.1.2報告單上標明結果的計量單位、參考區(qū)間、報告日期、時間、操作者和審核者簽名，并有與申請單相同的醫(yī)學信息。11.1.3如收到標本的質量可能對測定結果有影響的也在報告單上指出。11.2報告范圍：0～180μmol/L。超過此范圍的結果報告時必須附有證明該結果準確可靠的文字說明，例如：系根據標本稀釋后重復測定的結果。12操作性能12.1精密度：批內CV<3.0%，總CV<5.0%。12.2線性范圍：0-180mol/L。12.3方法的有限性及干擾因素：膽紅素<850μmol/L，血紅蛋白<5g/L，抗壞血酸<2.84mmol/L，乳酸<24mmol/L，乳酸脫氫酶<10000U/L時，偏差均<±5%。13參考范圍及醫(yī)學決定水平參考范圍：0-20umol/L14臨床意義14.1血清膽汁酸水平是反映肝實質損傷的一個重要指標。餐后TBA測定對檢出輕度肝臟病變的靈敏度優(yōu)于所有其他肝功能試驗。對檢測酒精或工業(yè)化學品引起的肝細胞損傷的靈敏度優(yōu)于其它肝功能試驗。14.2急性肝炎時血清TBA可達參考值上限的10～100倍，急性肝炎恢復時TBA與ALT同時下降至正常水平，如持續(xù)不降有可能轉為慢性。14.3血清TBA對慢性肝炎的鑒別以及預后的判斷有意義。慢性肝炎患者如空腹TBA>20μmol/L可能處于活動期。14.4肝硬化患者的空腹TBA和餐后TBA均增高，其異常率高于所有其他肝功能試驗。14.5TBA測定對肝外膽管阻塞和肝內膽汁淤積的診斷有較高的靈敏度。15結果審核以及分析與相關項目的聯系15.1由資深專業(yè)人員負責檢驗結果的審核。15.2認真審核每一個測定結果，審核者對發(fā)出報告結果的準確性和可靠性負責，并在報告單的審核者處簽名。15.3相關項目：審核與丙氨酸氨基轉移酶、堿性磷酸酶、谷胺酰轉移酶及膽紅素的關系，如出現與臨床不符甚至相悖的情況，應分析與查找原因。16威脅生命的“緊急值”及報告規(guī)定（此項不作規(guī)定）17有關引用程序與文件17.1Abbott自動生化分析儀儀器標準操作規(guī)程