檢驗科血清總蛋白測定標準操作規(guī)程

玉環(huán)縣人民醫(yī)院檢驗科文件編號：JYK-3-SH-011版本/修訂號：C/0主題內(nèi)容生化室作業(yè)指導書生效日期：20110701第4頁共5頁編寫制定日期審核審核日期：核準執(zhí)行日期李永臣2013-08-01李永臣2013-08-01章林華2013-08-01血清總蛋白測定標準操作規(guī)程1檢驗申請單獨檢驗項目申請：血清總蛋白測定(縮寫TP)；組合項目申請：血生化中肝功能測定項目組合。臨床醫(yī)生根據(jù)需要提出檢驗申請。2標本采集與處理2.1標本采集2.1.1常規(guī)靜脈采血約2ml，不抗凝，置普通試管中。或采用含分離膠的真空采血管。2.1.2檢驗申請單和血標本試管標上統(tǒng)一且唯一的標識符。2.1.3急診標本采集后，在檢驗申請單上填寫標本采集時間。2.1.4標本采集后與檢驗申請單一起及時運送至檢驗科。專人負責標本的接收并記錄標本的狀態(tài)，對不合格標本予以拒收。2.1.5下列標本為不合格標本2.1.5.1標本量不足：少于0.3ml的全血標本，或少于0.1ml的血清或血漿。2.1.5.2對反應吸光度有干擾的標本，包括嚴重溶血、嚴重渾濁的標本。2.1.5.3無法確認標本與申請單對應關(guān)系的。2.1.5.4其他如標識涂改、標本試管破裂等。2.2標本保存2.2.1接收標本后在30min內(nèi)將標本離心分離出血清。2.2.2標本保存時間：室溫（15～25℃）下可穩(wěn)定一周，普通冰箱中（2～8℃）穩(wěn)定一個月。為避免標本中水分揮發(fā)使血清濃縮，對保存時間超過1天的標本均加塞密閉或覆蓋濕巾。2.2.3已完成測試的標本保持完整的識別號，置4～8℃冰箱內(nèi)保存7天。2.3標本采集的注意事項2.3.1采血前使受檢者保持平靜、松弛和空腹狀態(tài)。2.3.2不建議采集抗凝血標本，如果必須使用血漿，推薦的抗凝劑是肝素。3方法原理蛋白質(zhì)是由許多氨基酸通過肽鍵相互結(jié)合而成的，肽鍵在堿性溶液中，能與銅離子作用產(chǎn)生紫紅色絡合物，在540nm有吸收峰，并與蛋白含量成正比。通過與同樣處理的標準蛋白比較可求出血清總蛋白含量。堿性蛋白質(zhì)+銅離子紫紅色絡合物4試劑及其他用品4.1試劑：總蛋白試劑盒（貨號TP6020，80ｍl*5），由北京利德曼生化技術(shù)有限公司出品。4.2試劑盒保存：保存于2～8℃，不開蓋情況下至標簽的失效期。啟封使用的試劑置儀器試劑倉冰箱內(nèi)穩(wěn)定14天。開蓋后避免污染。4.3試劑盒準備：液態(tài)單試劑型，即開即用，無特殊準備。4.4試劑盒主要成分：氫氧化鈉600mmol/L、硫酸銅12mmol/L、酒石酸鉀鈉32mmol/L、碘化鉀30mmol/L、穩(wěn)定劑＜0.1%。5校準品與校準模式5.1校準品：Beckman-CoulterSYNCHRONMULTI校準液，其濃度可溯源至美國國家標準技術(shù)研究所（NIST）標準參考材料。5.2校準類型和校準點數(shù)目：線性模式，1個校準點。5.3校準周期：校準間隔時間不限，試劑換批號使用時或質(zhì)控結(jié)果超過規(guī)定的2SD范圍，需要定標。。5.4校準液重建方法：Beckman-CoulterSYNCHRONProtein校準液即開即用，無需特殊準備。6質(zhì)控品與室內(nèi)質(zhì)控規(guī)則6.1質(zhì)控品采用由Beckman-Coulter公司提供的兩個不同水平未定值質(zhì)控血清。6.2質(zhì)控液重建方法：液態(tài)質(zhì)控血清，即開即用，無需特殊準備。6.3質(zhì)控品測定：在每一批標本中測定兩個水平質(zhì)控血清各一次。6.4質(zhì)控規(guī)則：采用Westgard多規(guī)則質(zhì)控規(guī)則，由計算機程序進行檢索與判斷。6.5如出現(xiàn)失控情況，按室內(nèi)質(zhì)控標準操作程序采取各種有效的糾正措施及時糾正，并在確認重新回復到控制狀態(tài)后開始標本檢測。7適用儀器適用AEROSET和C16000全自動生化分析儀器。8標本檢測步驟裝載試劑→進行校準→進行質(zhì)控→輸入標本檢測項目→加載標本→標本測定→結(jié)果復核→報告。9主要分析參數(shù)化學原理：雙縮脲法；測定原理:比色法；測定方法：終點法；反應方向：正反應；單位：g/L；校準模式：線性；校準周期：不限；校準點：1個；波長:540nm；樣本量：5μl；試劑：300ｕl；測定時間：10Min；分析范圍：10-100g/L。10結(jié)果計算總蛋白含量（g/L）=（標本吸光度÷標準管吸光度）×標準液濃度。11檢驗結(jié)果的報告及范圍11.1結(jié)果的報告11.1.1結(jié)果經(jīng)審核確認準確無誤后發(fā)出報告。11.1.2報告單上標明結(jié)果的計量單位、參考區(qū)間、報告日期、時間、操作者和審核者簽名，并有與申請單相同的醫(yī)學信息。11.1.3如收到標本的質(zhì)量可能對測定結(jié)果有影響的也在報告單上指出。11.2報告范圍：10～100g/L，超過此范圍的結(jié)果報告時必須附有證明該結(jié)果準確可靠的文字說明，例如：系根據(jù)標本稀釋后重復測定的結(jié)果。12操作性能12.1精密度：血清/血漿：批內(nèi)CV2.0%，總CV3.0%；腦脊液批內(nèi)CV5.0%，總CV7.5%。12.2線性范圍：10～100g/L。12.3方法的有限性及干擾因素：甘油三酯達11.3mmol/L時影響小于2%，血紅蛋白達5g/L時影響小于9%，膽紅素達547umol/L時影響小于10%。13參考范圍65-85g/L(早產(chǎn)兒36-60g/L；新生兒46-70g/L；1-2歲56-75g/L；≥3歲60-80g/L；成人非臥床64-83g/L；臥床60-78g/L。)14臨床意義14.1血漿總蛋白包括血漿中所有的蛋白質(zhì)，其中主要有白蛋白和球蛋白兩大類。血漿蛋白主要的生理功能是維持血漿膠體滲透壓和pH值、運送多種物質(zhì)的載體、參與凝血和抗凝血、免疫作用和營養(yǎng)作用等。14.2TP－ALB＝球蛋白（含量），并可由此得出A/G比值。14.3血清TP增高（1）多數(shù)反映高免疫球蛋白血癥。1）各種單克隆性免疫球蛋白病，如多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、冷沉淀球蛋白血癥等。2）自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、硬皮病、風濕病、類風濕性關(guān)節(jié)炎。（2）多種原因引起的明顯脫水使血漿濃縮，致TP相對增高。這種情況A/G比值變化不大，為假性蛋白增多血癥。14.4血清TP降低：多反映白蛋白合成減少或蛋白質(zhì)丟失。（1）肝臟合成減少：各種慢性肝病，吸收不良綜合癥，蛋白質(zhì)營養(yǎng)缺乏等。（2）蛋白質(zhì)尤其是白蛋白丟失：腎病綜合癥、急性腎炎和慢性腎炎從腎臟丟失；嚴重燒傷從創(chuàng)面丟失；潰瘍性結(jié)腸炎等胃腸疾病從胃腸道丟失；大量失血和漿膜腔滲液也可使蛋白丟失。15結(jié)果審核以及分析與相關(guān)項目的聯(lián)系15.1由資深專業(yè)人員負責檢驗結(jié)果的審核。15.2認真審核每一個測定結(jié)果，審核者對發(fā)出報告結(jié)果的準確性和可靠性負責，并在報告單的審核者處簽名。15.3相關(guān)項目：審核與白蛋白、血清蛋白電泳、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶等的關(guān)系，如出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的情況，應分析與查找原因。威脅生命的“緊急值”及報告規(guī)定（此項不作規(guī)定）17有關(guān)引用程序與文件17.1Abbott生化分析儀儀器標