檢驗(yàn)科血清總蛋白測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

玉環(huán)縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科文件編號(hào)：JYK-3-SH-011版本/修訂號(hào)：C/0主題內(nèi)容生化室作業(yè)指導(dǎo)書生效日期：20110701第4頁(yè)共5頁(yè)編寫制定日期審核審核日期：核準(zhǔn)執(zhí)行日期李永臣2013-08-01李永臣2013-08-01章林華2013-08-01血清總蛋白測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1檢驗(yàn)申請(qǐng)單獨(dú)檢驗(yàn)項(xiàng)目申請(qǐng)：血清總蛋白測(cè)定(縮寫TP)；組合項(xiàng)目申請(qǐng)：血生化中肝功能測(cè)定項(xiàng)目組合。臨床醫(yī)生根據(jù)需要提出檢驗(yàn)申請(qǐng)。2標(biāo)本采集與處理2.1標(biāo)本采集2.1.1常規(guī)靜脈采血約2ml，不抗凝，置普通試管中。或采用含分離膠的真空采血管。2.1.2檢驗(yàn)申請(qǐng)單和血標(biāo)本試管標(biāo)上統(tǒng)一且唯一的標(biāo)識(shí)符。2.1.3急診標(biāo)本采集后，在檢驗(yàn)申請(qǐng)單上填寫標(biāo)本采集時(shí)間。2.1.4標(biāo)本采集后與檢驗(yàn)申請(qǐng)單一起及時(shí)運(yùn)送至檢驗(yàn)科。專人負(fù)責(zé)標(biāo)本的接收并記錄標(biāo)本的狀態(tài)，對(duì)不合格標(biāo)本予以拒收。2.1.5下列標(biāo)本為不合格標(biāo)本2.1.5.1標(biāo)本量不足：少于0.3ml的全血標(biāo)本，或少于0.1ml的血清或血漿。2.1.5.2對(duì)反應(yīng)吸光度有干擾的標(biāo)本，包括嚴(yán)重溶血、嚴(yán)重渾濁的標(biāo)本。2.1.5.3無(wú)法確認(rèn)標(biāo)本與申請(qǐng)單對(duì)應(yīng)關(guān)系的。2.1.5.4其他如標(biāo)識(shí)涂改、標(biāo)本試管破裂等。2.2標(biāo)本保存2.2.1接收標(biāo)本后在30min內(nèi)將標(biāo)本離心分離出血清。2.2.2標(biāo)本保存時(shí)間：室溫（15～25℃）下可穩(wěn)定一周，普通冰箱中（2～8℃）穩(wěn)定一個(gè)月。為避免標(biāo)本中水分揮發(fā)使血清濃縮，對(duì)保存時(shí)間超過(guò)1天的標(biāo)本均加塞密閉或覆蓋濕巾。2.2.3已完成測(cè)試的標(biāo)本保持完整的識(shí)別號(hào)，置4～8℃冰箱內(nèi)保存7天。2.3標(biāo)本采集的注意事項(xiàng)2.3.1采血前使受檢者保持平靜、松弛和空腹?fàn)顟B(tài)。2.3.2不建議采集抗凝血標(biāo)本，如果必須使用血漿，推薦的抗凝劑是肝素。3方法原理蛋白質(zhì)是由許多氨基酸通過(guò)肽鍵相互結(jié)合而成的，肽鍵在堿性溶液中，能與銅離子作用產(chǎn)生紫紅色絡(luò)合物，在540nm有吸收峰，并與蛋白含量成正比。通過(guò)與同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)蛋白比較可求出血清總蛋白含量。堿性蛋白質(zhì)+銅離子紫紅色絡(luò)合物4試劑及其他用品4.1試劑：總蛋白試劑盒（貨號(hào)TP6020，80ｍl*5），由北京利德曼生化技術(shù)有限公司出品。4.2試劑盒保存：保存于2～8℃，不開蓋情況下至標(biāo)簽的失效期。啟封使用的試劑置儀器試劑倉(cāng)冰箱內(nèi)穩(wěn)定14天。開蓋后避免污染。4.3試劑盒準(zhǔn)備：液態(tài)單試劑型，即開即用，無(wú)特殊準(zhǔn)備。4.4試劑盒主要成分：氫氧化鈉600mmol/L、硫酸銅12mmol/L、酒石酸鉀鈉32mmol/L、碘化鉀30mmol/L、穩(wěn)定劑＜0.1%。5校準(zhǔn)品與校準(zhǔn)模式5.1校準(zhǔn)品：Beckman-CoulterSYNCHRONMULTI校準(zhǔn)液，其濃度可溯源至美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)研究所（NIST）標(biāo)準(zhǔn)參考材料。5.2校準(zhǔn)類型和校準(zhǔn)點(diǎn)數(shù)目：線性模式，1個(gè)校準(zhǔn)點(diǎn)。5.3校準(zhǔn)周期：校準(zhǔn)間隔時(shí)間不限，試劑換批號(hào)使用時(shí)或質(zhì)控結(jié)果超過(guò)規(guī)定的2SD范圍，需要定標(biāo)。。5.4校準(zhǔn)液重建方法：Beckman-CoulterSYNCHRONProtein校準(zhǔn)液即開即用，無(wú)需特殊準(zhǔn)備。6質(zhì)控品與室內(nèi)質(zhì)控規(guī)則6.1質(zhì)控品采用由Beckman-Coulter公司提供的兩個(gè)不同水平未定值質(zhì)控血清。6.2質(zhì)控液重建方法：液態(tài)質(zhì)控血清，即開即用，無(wú)需特殊準(zhǔn)備。6.3質(zhì)控品測(cè)定：在每一批標(biāo)本中測(cè)定兩個(gè)水平質(zhì)控血清各一次。6.4質(zhì)控規(guī)則：采用Westgard多規(guī)則質(zhì)控規(guī)則，由計(jì)算機(jī)程序進(jìn)行檢索與判斷。6.5如出現(xiàn)失控情況，按室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序采取各種有效的糾正措施及時(shí)糾正，并在確認(rèn)重新回復(fù)到控制狀態(tài)后開始標(biāo)本檢測(cè)。7適用儀器適用AEROSET和C16000全自動(dòng)生化分析儀器。8標(biāo)本檢測(cè)步驟裝載試劑→進(jìn)行校準(zhǔn)→進(jìn)行質(zhì)控→輸入標(biāo)本檢測(cè)項(xiàng)目→加載標(biāo)本→標(biāo)本測(cè)定→結(jié)果復(fù)核→報(bào)告。9主要分析參數(shù)化學(xué)原理：雙縮脲法；測(cè)定原理:比色法；測(cè)定方法：終點(diǎn)法；反應(yīng)方向：正反應(yīng)；單位：g/L；校準(zhǔn)模式：線性；校準(zhǔn)周期：不限；校準(zhǔn)點(diǎn)：1個(gè)；波長(zhǎng):540nm；樣本量：5μl；試劑：300ｕl；測(cè)定時(shí)間：10Min；分析范圍：10-100g/L。10結(jié)果計(jì)算總蛋白含量（g/L）=（標(biāo)本吸光度÷標(biāo)準(zhǔn)管吸光度）×標(biāo)準(zhǔn)液濃度。11檢驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告及范圍11.1結(jié)果的報(bào)告11.1.1結(jié)果經(jīng)審核確認(rèn)準(zhǔn)確無(wú)誤后發(fā)出報(bào)告。11.1.2報(bào)告單上標(biāo)明結(jié)果的計(jì)量單位、參考區(qū)間、報(bào)告日期、時(shí)間、操作者和審核者簽名，并有與申請(qǐng)單相同的醫(yī)學(xué)信息。11.1.3如收到標(biāo)本的質(zhì)量可能對(duì)測(cè)定結(jié)果有影響的也在報(bào)告單上指出。11.2報(bào)告范圍：10～100g/L，超過(guò)此范圍的結(jié)果報(bào)告時(shí)必須附有證明該結(jié)果準(zhǔn)確可靠的文字說(shuō)明，例如：系根據(jù)標(biāo)本稀釋后重復(fù)測(cè)定的結(jié)果。12操作性能12.1精密度：血清/血漿：批內(nèi)CV2.0%，總CV3.0%；腦脊液批內(nèi)CV5.0%，總CV7.5%。12.2線性范圍：10～100g/L。12.3方法的有限性及干擾因素：甘油三酯達(dá)11.3mmol/L時(shí)影響小于2%，血紅蛋白達(dá)5g/L時(shí)影響小于9%，膽紅素達(dá)547umol/L時(shí)影響小于10%。13參考范圍65-85g/L(早產(chǎn)兒36-60g/L；新生兒46-70g/L；1-2歲56-75g/L；≥3歲60-80g/L；成人非臥床64-83g/L；臥床60-78g/L。)14臨床意義14.1血漿總蛋白包括血漿中所有的蛋白質(zhì)，其中主要有白蛋白和球蛋白兩大類。血漿蛋白主要的生理功能是維持血漿膠體滲透壓和pH值、運(yùn)送多種物質(zhì)的載體、參與凝血和抗凝血、免疫作用和營(yíng)養(yǎng)作用等。14.2TP－ALB＝球蛋白（含量），并可由此得出A/G比值。14.3血清TP增高（1）多數(shù)反映高免疫球蛋白血癥。1）各種單克隆性免疫球蛋白病，如多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、冷沉淀球蛋白血癥等。2）自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、硬皮病、風(fēng)濕病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。（2）多種原因引起的明顯脫水使血漿濃縮，致TP相對(duì)增高。這種情況A/G比值變化不大，為假性蛋白增多血癥。14.4血清TP降低：多反映白蛋白合成減少或蛋白質(zhì)丟失。（1）肝臟合成減少：各種慢性肝病，吸收不良綜合癥，蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)缺乏等。（2）蛋白質(zhì)尤其是白蛋白丟失：腎病綜合癥、急性腎炎和慢性腎炎從腎臟丟失；嚴(yán)重?zé)齻麖膭?chuàng)面丟失；潰瘍性結(jié)腸炎等胃腸疾病從胃腸道丟失；大量失血和漿膜腔滲液也可使蛋白丟失。15結(jié)果審核以及分析與相關(guān)項(xiàng)目的聯(lián)系15.1由資深專業(yè)人員負(fù)責(zé)檢驗(yàn)結(jié)果的審核。15.2認(rèn)真審核每一個(gè)測(cè)定結(jié)果，審核者對(duì)發(fā)出報(bào)告結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性負(fù)責(zé)，并在報(bào)告單的審核者處簽名。15.3相關(guān)項(xiàng)目：審核與白蛋白、血清蛋白電泳、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶等的關(guān)系，如出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的情況，應(yīng)分析與查找原因。威脅生命的“緊急值”及報(bào)告規(guī)定（此項(xiàng)不作規(guī)定）17有關(guān)引用程序與文件17.1Abbott生化分析儀儀器標(biāo)