蠟樣芽孢桿菌實驗活動風險評估報告

蠟樣芽孢桿菌實驗活動風險評估報告一、生物學特性（一）種類和細菌分型拉秧芽孢桿菌（Bacilluscereus），又稱仙人掌桿菌，為芽孢桿菌屬中的一種，是一種地方性、土壤生活的、革蘭陽性、β溶血性的桿狀細菌，有莢膜嚴格需氧或堿性厭氧。該屬細菌的重要特性是少數(shù)幾種能夠產(chǎn)生對不利條件具有特殊抵抗力的芽孢。芽孢桿菌屬可分為以下亞群：多粘芽孢桿菌、枯草桿菌（包括蠟樣桿菌和地衣芽孢桿菌）、短芽孢桿菌和炭疽芽孢桿菌。與其它芽孢桿菌相同，蠟樣芽孢桿菌會產(chǎn)生防御性的內(nèi)芽孢。它們對外界有害因子的抵抗力強。（二）來源蠟樣芽孢桿菌于1950年首次在挪威報告。它分布廣，存在于土壤、水、空氣，以及動物腸道等處，健康成人糞便帶菌率為14.5%，淀粉或乳制品食品由于儲存不當?shù)仍蛟斐晌廴镜臋C會很高。在自然界分布廣泛，在各種食品中的檢出率也較高。（三）傳染性本菌可引起人類食物中毒，以及多種腸外感染，屬人畜共患病原菌。食品中污染蠟樣芽孢桿菌在室溫內(nèi)（16~40℃）即易繁殖并產(chǎn)生腸毒素，往往是食品在食用前保存溫度不當，放置時間過長，使污染在食品中的蠟樣芽孢桿菌或殘存的芽孢得以生長繁殖。人通過進食被蠟樣芽孢桿菌污染的食物而感染，而細菌繁殖的結(jié)果是產(chǎn)生腸毒素，人食用含毒素的食物后會產(chǎn)生嘔吐、腹瀉等不良癥狀。（四）傳播途徑蠟樣芽孢桿菌主要通過泥土、灰塵、昆蟲、不干凈的食具和食品從業(yè)人員等傳播。引起中毒的食品常見為剩米飯、米粉、甜酒釀、涼拌菜、甜點心及乳、肉類食品。因為本菌不分解蛋白質(zhì)，因此，食品在感官上無明顯變化，無異味，很容易誤事而發(fā)生中毒。（五）易感性人群普通易感，孕婦、老年、免疫功能低下者，胃腸道功能較差者為多發(fā)人群。（六）潛伏期腹瀉性食物中毒：由腹瀉腸毒素所致，潛伏期較長（一般為8~16h），平均病程為24h。嘔吐型食物中毒：由嘔吐腸毒素所致，潛伏期為1~5h，平均病程不超過10h。（七）劑量—效應(yīng)關(guān)系蠟樣芽孢桿菌是條件致病菌，引起食物中毒的感染量必須達到一定的程度，即食物中含菌量達106/g以上才能發(fā)病。（八）致病性蠟樣芽孢桿菌會引起食源性疾病和機會性感染。在生長過程中產(chǎn)生多種酶和胞外毒性物質(zhì)，在引起食物中毒時，腹瀉毒素和嘔吐毒素這兩類腸毒素起主要作用。此外，蠟樣芽孢桿菌也是外傷后眼部感染的常見病原菌。對于引起的全眼球炎，常需進行眼球摘除。對免疫功能低下或使用免疫抑制劑的人，本菌還可引起心內(nèi)膜炎、敗血癥和腦膜炎等。蠟樣芽孢桿菌的繁殖體不耐熱，該菌可產(chǎn)生引起人類中毒的腸毒素，不耐熱的腹瀉毒素可見于多種食品中，耐熱的低分子嘔吐毒素常在米飯類食品中形成。（1）腹瀉毒素是蠟樣芽孢桿菌在對數(shù)生長期合成并釋放的胞外毒素，由多組分蛋白質(zhì)構(gòu)成。有抗原性，不耐熱，56℃min失活，對胰蛋白酶敏感。具有致實驗動物腸襻液體積聚、壞死、皮膚血管通透性改變，致實驗動物死亡等多種生物學活性。目前，認為其作用機制與大腸桿菌不耐熱腸毒素相似。（2）嘔吐毒素是某些菌株在芽孢形成時產(chǎn)生的小分子多肽。無抗原性，對熱、酸、堿穩(wěn)定，對胰蛋白酶、胃蛋白酶有抗性，可引起實驗動物嘔吐。（九）變異性蠟樣芽孢桿菌的變異性目前尚未有確證的資料可以證實。（十）環(huán)境中的穩(wěn)定性蠟樣芽孢桿菌兼性好氧。生長溫度范圍為20~45℃，10℃以下生長緩慢或不生長，50℃時不生長。（十一）藥物敏感性對氯霉素、紅霉素、慶大霉素等常用的13種抗生素敏感，但對青霉素、磺胺類和呋喃類等7種抗生素耐藥。（十二）消毒劑敏感性在95%乙醇中生長良好，對1:50的84消毒液和臭氧等均不敏感；而紫外線照射30min、250mg/L健之素作用5min對其有較好的殺滅作用。（十三）物理滅活對干燥、紫外線較敏感，高壓滅菌有較好的殺滅作用。蠟樣芽孢桿菌耐熱，其37℃16h的肉湯培養(yǎng)物的D80℃值（在80℃時使細菌數(shù)減少90%所需的時間）約為10~15min，使肉湯中2.4×107/mL細菌轉(zhuǎn)為陰性需100℃20min。其游離芽孢能耐受100℃30min，而干熱滅菌需120℃60min才能殺死該菌，在100℃下加熱20min可破壞這類菌。（十四）在宿主體外存活蠟樣芽孢桿菌體外培養(yǎng)的營養(yǎng)要求不高，生長溫度為25～37℃，最佳溫度為30～32℃。在肉湯中生長混濁，有菌膜或壁環(huán)，振搖易乳化。在普通瓊脂上生成的菌落較大、灰白色、不透明，表面粗糙似毛玻璃狀或融狀，邊緣常呈擴展狀。（十五）與其他生物和環(huán)境的交互作用對外界有害因子抵抗力強，分布廣，存在于土壤、水、空氣，以及動物腸道等處。蠟樣芽孢桿菌是典型的菌體細胞，有部分菌株能產(chǎn)生腸毒素。蠟樣芽孢桿菌在自然界分布廣泛，在各種食品中的檢出率也較高，，往往是食品在食用前保存溫度不當，放置時間過長，使污染在食品中的蠟樣芽孢桿菌或殘存的芽孢得以生長繁殖，或是由于含有蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)生的熱穩(wěn)定毒素，而導(dǎo)致食物中毒的發(fā)生。（十六）預(yù)防和治療方案蠟樣芽孢桿菌分布廣泛，特別是在剩余熟米飯中，若保存不當，會在米飯中大量繁殖。因此，在食用前，應(yīng)該進行再蒸處理。一般感染后病情較輕，常為自限性疾病，故治療主要根據(jù)病情對癥處理。對于重癥患者，應(yīng)及時送醫(yī)院進行輸液等對癥治療，可采用氯霉素、紅霉素、慶大霉素等抗生素進行治療，必要時進行催吐、洗胃以排除毒物。二、實驗室相關(guān)活動風險評估與控制（一）實驗室感染性因子的種類、來源和危害1．感染性因子的種類蠟樣芽孢桿菌可產(chǎn)生腹瀉毒素和嘔吐毒素。這些物質(zhì)可能與毒力有關(guān)。根據(jù)蠟樣芽孢桿菌生物特性和中心實驗室檢測能力范圍，本實驗室可能的感染因子為蠟樣芽孢桿菌病原體。2．感染性因子的來源(1)食物中毒事件中采集的可疑食物、日常檢測的食品等樣品。(2)樣本采集和檢測過程中涉及的所有實驗場所。(3)在實驗室操作過程中，各種原因?qū)е碌拇罅扛腥拘晕镔|(zhì)飛濺。3．感染性因子可能造成的危害(l)被污染的實驗器材、器皿等對實驗室環(huán)境造成污染。(2)含有病原菌的實驗室廢棄物對環(huán)境造成污染。因為蠟樣芽孢桿菌是條件致病菌，引起食物中毒感染必須達到一定的劑量，所以實驗室人員通過實驗室意外食入感染的風險很小。（二）實驗室常規(guī)活動過程中的風險評估與控制1．實驗方法(1)主要風險點識別未采用國家標準、行業(yè)標準進行檢測；使用新的或變更過的國家標準或行業(yè)標準前，未經(jīng)技術(shù)確認，可能存在安全風險。(2)風險控制措施盡量采用國家標準、行業(yè)標準進行檢測，或使用經(jīng)過充分驗證的實驗方法；在使用新的或變更的國家標準、行業(yè)標準前，必須經(jīng)過嚴格的技術(shù)確認。2．樣品采集(1)食品樣品采集①主要實驗設(shè)備和器材采樣剪刀或鑷子、盛樣容器等。②主要風險點識別食品中可能存在感染性病原體，采樣人員采樣不規(guī)范、盛樣容器密合不嚴、意外破損等，可導(dǎo)致樣品濺灑、溢出、滲漏而污染環(huán)境；同時，銳器使用不當，存在意外刺傷或劃傷采樣人員的風險。③風險控制措施采集容器必須防水、防漏，容器外面要包裹足量的吸收性材料，以便容器打破或泄漏時，能吸收溢出的所有液體。在使用剪刀、鑷子、玻璃容器等銳器時必須規(guī)范操作，做好防護，防止刺傷或劃傷。(2)食物中毒事件中糞便、嘔吐物、食品加工環(huán)節(jié)涂抹物、剩余食物等采集①主要實驗設(shè)備和器材PV螺旋蓋采便盒（管）、玻璃試管或培養(yǎng)皿和采樣棉簽等。②主要風險點識別疑似食物中毒糞便、嘔吐物、剩余食物、食品加工環(huán)節(jié)涂抹物等樣品中可能存在大量感染性的病原體；工作人員采樣不規(guī)范、個人防護不到位，會導(dǎo)致環(huán)境污染和人員感染。③風險控制措施采樣人員應(yīng)戴手套、口罩，采樣時動作輕柔，采樣容器盡量使用外螺旋蓋塑料管；發(fā)生污染時應(yīng)立即進行消毒處理。(3)血樣的采集①主要實驗設(shè)備和器材一次性采血針、真空采血管、消毒棉簽及一次性利器盒。②主要風險點識別血液樣品可能存在不明感染性病原體，真空采血管密封蓋意外脫落或采血針內(nèi)殘留血滴落，造成血樣濺灑從而污染人員或環(huán)境；采血針頭存在意外刺傷或劃傷采樣人員的風險。③風險控制措施使用一次性采血針和真空采血管，采樣人員經(jīng)過正規(guī)采血培訓，并熟練掌握采血技巧。采血前做好個人防護（防護服、乳膠手套、口罩）；認真、仔細、謹慎操作，抽血后的針頭直接放入利器盒內(nèi)，禁止用手直接接觸使用后的針頭或?qū)⑹褂煤蟮尼橆^重新套上針頭套；采好血后直立于試管架中，防止倒翻；消毒棉簽等污染物放入醫(yī)療廢棄物專用袋中，統(tǒng)一進行消毒處理。3．樣品的包裝和運送(1)主要實驗設(shè)備和器材真空密封采血管、外螺旋蓋玻璃瓶、PV螺旋蓋采樣罐（管）主容器、95千帕樣品運輸罐、B類標本運輸箱（UN3373冷藏箱）和運送車輛。(2)主要風險點識別盛樣容器不堅固、密合不嚴，有可能發(fā)生樣品濺灑、溢出、滲漏；樣本運輸包裝不符合生物安全要求，可能導(dǎo)致樣品的側(cè)翻、滲漏，造成污染擴散。(3)風險控制措施盛裝樣品容器必須堅固，不易破碎，盡可能選用塑料制品，采樣后必須檢查容器的密合性。樣品的運輸需使用三層合格包裝材料。4．樣品接收和前處理(1)主要實驗設(shè)備和器材剪刀、鑷子、振蕩器、均質(zhì)器、均質(zhì)袋、離心機、生物安全柜和潔凈工作臺等。(2)主要風險點識別樣品管理員未按實驗室樣品管理程序要求接收樣品；樣品前處理時，打開感染性樣本包裝的動作過猛，會造成樣品側(cè)翻；均質(zhì)器均質(zhì)樣本時發(fā)生均質(zhì)袋破裂。(3)風險控制措施①樣品接收必須在專用的區(qū)域進行，合同評審人員和收樣人員嚴格按照《樣品管理程序》(XJK/CX32)要求交接樣品，不得擅自打開樣品包裝，收樣后及時洗手。②開始檢測前，對盛裝感染性的材料樣品的容器，必須在生物安全柜中緩慢打開，開啟容器管口不能對著操作者。③對食品等固體物樣品取樣，要小心使用剪刀和鑷子，盡可能剪取食物的可食部分，以防止樣品均質(zhì)時堅硬物質(zhì)刺破均質(zhì)袋，造成樣液濺灑。對含有感染性的樣品進行離心振蕩時，必須將離心蓋封嚴實，并關(guān)上離心機蓋。④實驗室應(yīng)配備應(yīng)急藥箱，發(fā)生手剪傷等意外事件時應(yīng)立即進行消毒包扎處理。⑤當發(fā)生離心管或均質(zhì)袋意外破裂、濺出時，及時對所有涉及污染的部位進行消毒處理，同時按《二級生物安全實驗室建設(shè)與管理》實驗室意外事故的處置章節(jié)處置。5．樣本檢測過程(1)主要實驗設(shè)備和器材培養(yǎng)箱、水浴箱、細菌鑒定和藥敏測試儀（ATB儀）、生物安全柜、振蕩器、吸管和試管、移液器及吸頭、接種環(huán)和培養(yǎng)皿等。(2)主要風險點識別對食品、糞便、嘔吐物、剩余食物等樣品進行蠟樣芽孢桿菌分離鑒定、生化試驗、藥敏試驗等實驗活動均涉及活菌操作。在檢測過程中移液、劃線分離、涂片染色等操作都可產(chǎn)生氣溶膠，雖然蠟樣芽孢桿菌不通過呼吸道感染，但由于樣品可能含有其他未知的病原體，也不應(yīng)忽視。雖然需要食入一定量的蠟樣芽孢桿菌方可導(dǎo)致食物中毒，但仍需防范。(3)風險控制措施①開展檢測時檢測人員應(yīng)按照二級生物安全防護要求做好自身防護措施，進行食品樣品制備、均質(zhì)等操作應(yīng)在潔凈實驗室內(nèi)進行；糞便、嘔吐物、食品加工環(huán)節(jié)涂抹物等有具有感染性材料的操作必須在生物安全柜內(nèi)進行，實驗結(jié)束后必須對桌面、臺面及時進行消毒處理。②必須使用移液器或吸球移取樣液，旋蓋和移液操作的動作要輕緩，所有吸管應(yīng)用棉塞，移液頭盡可能使用帶濾芯的，以減少對移液器或吸球的污染。③使用直徑2～3mm且完全封閉、手柄的長度小于6cm的接種環(huán)分離細菌，盡可能使用封閉式微型電加熱器消毒接種環(huán)，避免在酒精燈的明火上加熱從而引起感染性物質(zhì)的爆濺。④盡可能以塑料器皿代替玻璃器皿，若必須使用玻璃器皿，只能用實驗室級玻璃（硼硅酸鹽），且任何破碎或有裂紋的器皿都應(yīng)丟棄。禁止用手直接接觸使用后的針頭、刀片、玻璃碎片等銳器。嚴禁用帶有注射針頭的注射器吸液，更不可當吸管用，用過的銳器應(yīng)直接放入利器盒，經(jīng)消毒后廢棄。⑤在任何可能導(dǎo)致潛在的傳染性物質(zhì)濺出的操作過程中，應(yīng)保護好面部、眼睛和嘴。發(fā)生大量液體濺出、溢出等事故，或者明顯暴露于傳染源時，應(yīng)立即向科室負責人報告，及時處理并對事故的發(fā)生與處理作記錄，必要時進行適當?shù)尼t(yī)學評估、觀察、治療，并保留書面記錄。6．菌株使用、保存(1)主要實驗設(shè)備和器材接種針（環(huán)）、菌株保存管、生物安全柜。(2)主要風險點識別①保菌操作不規(guī)范、個人防護不到位、保菌磁珠管等保菌容器意外破損、磁珠掉落等會導(dǎo)致病原菌污染實驗室環(huán)境和實驗人員。②蠟樣芽孢桿菌使用和保存未按照《菌（毒）種管理規(guī)程》(XJK/CX37)要求實施管理，存在菌株被惡意使用及污染環(huán)境等生物安全隱患。(3)風險控制措施①蠟樣芽孢桿菌分離純化及保菌操作應(yīng)在生物安全柜內(nèi)進行，若發(fā)生保菌磁珠管等破損、磁珠掉落，應(yīng)及時對所有涉及污染的部位進行消毒處理。②蠟樣芽孢桿菌標準菌株的使用、嚴格實行雙人雙鎖管理，嚴防菌株被惡意使用而造成生物危害。7．實驗室的清潔和消毒(l)主要實驗設(shè)備和器材70%～75%的酒精、施康清洗消毒液Ⅰ。(2)主要風險點識別工作完畢后，若不及時對工作臺面、生物安全柜進行消毒，有可能會對下次的操作人員造成污染或感染。(3)風險控制措施工作完畢后，及時對檢測所涉及的工作臺面、地面和生物安全柜進行消毒，使用稀釋100倍的施康清洗消毒液Ⅰ擦拭，用消毒液清潔后要干燥20min以上。生物安全柜用70%-75%的酒精進行擦拭消毒。8．廢棄物處置(l)主要實驗設(shè)備和器材醫(yī)療廢棄物專用袋、硬質(zhì)耐高壓且防滲漏的垃圾桶、高壓滅菌器。(2)主要風險點識別①樣品采集和實驗檢測過程中產(chǎn)生的感染性廢棄物，如食品、糞便、嘔吐物、食品加工環(huán)節(jié)涂抹物等樣本、病原菌的培養(yǎng)基、標本和陽性菌種及所有實驗過程涉及的用品，釋放前未按照規(guī)范要求處理，導(dǎo)致感染或致病因子外泄而污染環(huán)境。②樣品采集和實驗檢測過程中產(chǎn)生的被污染的損傷性廢棄物，如一次性使用采血用具、載玻片、玻璃試管、玻璃安瓿、培養(yǎng)皿等，未按照要求規(guī)范處理，存在意外刺傷或劃傷工作人員的隱患。(3)風險控制措施實驗室廢棄物處理應(yīng)遵循《醫(yī)療廢棄物管理條例》《醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)醫(yī)療廢棄物管理辦法》《醫(yī)療廢物專用包裝袋、容器和警示標志標準》等相關(guān)法規(guī)要求，分類收集，規(guī)范處置。所有損傷性廢棄物必須放置于有警示標識的硬質(zhì)、防漏、防銳器刺破的專用利器盒中；所有感染性廢棄物必須放置于有警示標識的醫(yī)療廢物專用包裝袋中；使用高效消毒液浸泡或高溫高壓滅菌后集中處理，集中存放至中心指定的醫(yī)療廢棄室，由有資質(zhì)的醫(yī)療廢棄物處理單位上門收集、集中處置。同時，做好廢棄物處置交接記錄，所有相關(guān)記錄應(yīng)定期整理歸檔。（三）實驗室常規(guī)活動中其他風險評估與預(yù)防控制措施1．電力(l)主要風險點識別斷電或電壓不穩(wěn)，存在引發(fā)電氣設(shè)備故障的隱患。斷電可使運行中的生物安全柜、檢測設(shè)備突然停止工作，致使實驗活動被迫中斷，存在感染性物質(zhì)外溢從而污染操作人員和環(huán)境的風險。(2)預(yù)防控制措施實驗室由雙路市電供電，并為關(guān)鍵儀器設(shè)備配備應(yīng)急電源(UPS),避免實驗室由斷電可能引發(fā)的生物安全風險，確保檢測工作順利講行。2．電氣操作(1)主要風險點識別實驗室活動涉及的電氣操作，包括實驗室工作區(qū)內(nèi)電氣設(shè)備的啟動、關(guān)閉、安裝和維修；設(shè)備層內(nèi)UPS、空調(diào)機組等電氣設(shè)備的啟動、關(guān)閉和維修等。這些電氣操作的過程可能存在觸電、電擊、造成電氣故障等事故。(2)預(yù)防控制措施①電氣設(shè)備的設(shè)計及制造符合相關(guān)安全標準的要求。實驗室工作區(qū)內(nèi)若有380V電源插座，則需明確標識，并由有資質(zhì)的專業(yè)人員進行操作。②新的、改裝過的或修理過的電氣設(shè)備在未經(jīng)專業(yè)人員（如有資質(zhì)的電工）完成電氣安全測試和設(shè)備符合安全使用要求之前，不允許使用。③電氣設(shè)備使用人員接受正確操作的培訓，操作方式不降低電氣安全性。電氣設(shè)備使用人員要定期檢查設(shè)備可能引起電氣故障的破損。只有專業(yè)人員才可從事電氣設(shè)備和電路工作。禁止未經(jīng)授權(quán)的工作。④采取措施對設(shè)備去污染，以降低維護人員被病原菌感染的風險。3．實驗室給排水設(shè)施設(shè)備(l)主要風險點識別實驗室含有給排水的設(shè)施設(shè)備，包括位于工作區(qū)和洗消區(qū)的高壓滅菌器和洗滌池。當水管道意外破裂、排水管道阻塞時，感染性材料可能溢出，有污染實驗人員和環(huán)境的風險。(2)預(yù)防控制措施實驗室產(chǎn)生的所有染菌物及器具，必須先經(jīng)高壓滅菌或含氯消毒劑浸泡消毒后洗滌，洗消產(chǎn)生的污水集中排入中心污水池進行消毒處理，嚴禁直接排放。至少每月監(jiān)測糞大腸菌群，定期檢查實驗室給排水管道各接口的密封性，及時發(fā)現(xiàn)安全隱患。4．實驗室設(shè)施設(shè)備管道(1)主要風險點識別實驗室設(shè)施設(shè)備管道穿越維護結(jié)構(gòu)的部位存在密封不嚴的問題，當感染性材料溢出時，有污染環(huán)境的風險。(2)預(yù)防控制措施所有管道穿越維護結(jié)構(gòu)的部位應(yīng)嚴格密封，定期進行檢查檢測，避免感染性材料外溢從而污染環(huán)境。5．主要檢測儀器設(shè)備(l)細菌鑒定和藥敏測試儀（ATB儀）等設(shè)備①主要風險點識別對疑似蠟樣芽孢桿菌鑒定時要用到ATB儀進行生化鑒定及藥敏試驗，如果不按操作規(guī)程進行規(guī)范操作，則會導(dǎo)致病原體濺出、滲漏而污染實驗環(huán)境。②風險控制措施嚴格按ATB儀等設(shè)備操作規(guī)程操作和維護，每次使用完畢后對設(shè)備箱體及可能被污染的實驗環(huán)境進行消毒。(2)離心機①主要風險點識別在分離血清、濃縮菌液、核酸提取過程中會使用到離心機，離心過程中可能存在離心管破裂、離心管蓋脫落、離心轉(zhuǎn)子和離心腔被污染的風險。②預(yù)防控制措施離心時配備耐離心壓力的且?guī)菪苌w的離心管，離心前做好平衡，選擇正確的離心速度和離心力。規(guī)范正確操作，定期維護，確保離心機性能正常，每次做好使用記錄，并定期進行功能檢查。6．生物安全設(shè)施設(shè)備(1)生物安全柜①主要風險點識別沒有按照設(shè)備操作規(guī)程或使用說明書進行操作、維護，使生物安全柜的氣溶膠防護效果明顯降低，甚至消失，失去安全防護效果。設(shè)備長時間使用未及時更換HEPA過濾膜，可出現(xiàn)工作窗口氣流速度降低或流向紊亂等功能失常狀況。生物安全柜使用后未進行徹底消毒處理，對于清潔、維護人員將會產(chǎn)生污染。設(shè)備長期關(guān)停，將會使部分電器元件老化從而失去正常功能。沒有及時對設(shè)備移位、碰撞受損等進行性能檢測等。②預(yù)防控制措施使用人員接受相關(guān)操作、維護培訓，做到規(guī)范使用和維護。每月進行空氣沉降菌檢測，每年請有資質(zhì)的服務(wù)機構(gòu)對生物安全柜進行風速、氣流、塵埃粒子數(shù)、紫外線強度等主要性能的檢測，確保其功能正常。(2)高壓滅菌器①主要風險點識別沒有正確配備高壓滅菌器，存在氣溶膠污染環(huán)境的隱患；沒有按照設(shè)備操作規(guī)程或使用說明書進行操作、維護，可能使高壓滅菌器效果明顯降低，甚至失效，失去去污染與無害化的作用；壓力鍋長時間使用又不定期監(jiān)測滅菌效果，對壓力容器的滅菌效果無從考證，存在滅菌不徹底從而引發(fā)污染的隱患。壓力鍋長期關(guān)停期間，如果不及時排干鍋體水分，將會使內(nèi)部器件老化從而失去正常功能。②預(yù)防控制措施選擇下排式高壓滅菌器，防止氣溶膠污染，正確規(guī)范操作，定期維護，確保高壓滅菌器性能正常，做好使用記錄。對壓力滅菌器按照WS310.3《醫(yī)院消毒供應(yīng)中心第3部分：清洗消毒及滅菌效果監(jiān)測標準》規(guī)定，每次監(jiān)測化學指示物，監(jiān)控記錄溫度、壓力、時間等滅菌參數(shù)，每周進行生物監(jiān)測，以保證滅菌質(zhì)量。(3)個人防護用品①主要風險點識別實驗室不提供足夠數(shù)量的、符合質(zhì)量要求的防護服、防護眼罩、一次性乳膠手套等，使用大小不合適的個人防護用品，個人防護用品穿戴、脫卸的程序、方法不符合要求，均可能造成人員感染或環(huán)境污染。②風險控制措施選擇正規(guī)、符合質(zhì)量要求的防護用品，使用前進行必要的培訓，按照規(guī)定的程序正確使用、脫卸。(4)應(yīng)急救治設(shè)施和用品①主要風險點識別實驗室若沒有配備洗眼器、應(yīng)急藥箱等必要的應(yīng)急設(shè)施和物品，或配備的急救用品種類不全、不合適或過期，則導(dǎo)致急用時無法發(fā)揮作用。②預(yù)防控制措施在實驗室內(nèi)正確配備洗眼器，確保其功能正常。配備的碘伏或其他消毒劑、創(chuàng)可貼等急救物品與實驗活動相適應(yīng)并在有效期內(nèi)使用，由專人負責管理，定期維護、清理和更新。(5)消毒滅菌劑①主要風險點識別消毒劑產(chǎn)品無生產(chǎn)許可證、過期、配制方法或濃度不正確、種類選擇不合理，將會導(dǎo)致消毒效果降低、生物滅活能力降低或?qū)ξ锲犯g性增加、對皮膚造成刺激等問題。②預(yù)防控制措施選擇符合國家標準的正規(guī)廠家生產(chǎn)的產(chǎn)品，選擇合適的消毒劑，按照規(guī)定的消毒方法、消毒時間、消毒濃度（劑量）進行消毒，避免使用過期產(chǎn)品；消毒過程中消毒人員應(yīng)做好必要的個體防護，防止發(fā)生意外。7．管理體系的風險(1)主要風險點識別管理體系（包括應(yīng)急預(yù)案）是否健全和完善，是否符合實際管理要求，程序文件、作業(yè)指導(dǎo)書和操作規(guī)程是否科學和具有可操作性，是否能確保生物安全的主要因素。如果組織結(jié)構(gòu)不健全、設(shè)置不合理，體系文件與實際工作不匹配，以及部門職責不清或銜接不當?shù)?，就都可能帶來安全風險。(2)預(yù)防控制措施定期開展對管理體系的評審，發(fā)現(xiàn)問題及時修訂、完善，以確保生物安全管理體系持續(xù)有效運行。（四）工作人員的風險評估與預(yù)防控制措施1．人員數(shù)量和素質(zhì)(1)人員數(shù)量①主要風險點識別人員過少會因缺少相互提示監(jiān)督或因工作量增大而導(dǎo)致操作過程中工作失誤增加，風險增加。②預(yù)防控制措施采樣和檢測人員的數(shù)量應(yīng)與工作量相匹配，盡量有2名工作人員同時進行采樣和檢測工作。(2)人員結(jié)構(gòu)①主要風險點識別實驗室檢測人員的職稱分布不合理，新進人員沒有高資歷人員帶教操作，不能很好應(yīng)對意外事件，風險增加。②預(yù)防控制措施實驗室檢測人員的年齡和資歷結(jié)構(gòu)應(yīng)配備合理，新進人員應(yīng)由高資歷人員帶教或監(jiān)督操作。(3)職業(yè)操守①主要風險點識別蠟樣芽孢桿菌檢測存在一定的生物安全風險。②預(yù)防控制措施加強職業(yè)道德教育，培養(yǎng)工作責任心。2．健康管理(l)主要風險點識別健康狀況主要包括生理、心理素質(zhì)與免疫狀態(tài)。(2)預(yù)防控制措施建立健康申報制度，遇有不適合工作的情況，應(yīng)及時向科室負責人報告并暫停工作。3．人員資質(zhì)(l)主要風險點識別檢測人員不具備衛(wèi)生檢測相關(guān)學歷教育背景，不熟悉蠟樣芽孢桿菌檢測方法及操作規(guī)范，未執(zhí)行相關(guān)的專業(yè)知識培訓和考核并未獲得上崗證，無法保證工作質(zhì)量和安全。(2)預(yù)防控制措施檢測人員必須是檢驗或相關(guān)專業(yè)畢業(yè)，經(jīng)過上崗培訓和考核合格。上崗培訓內(nèi)容應(yīng)包括病原菌檢測相關(guān)基礎(chǔ)理論、相關(guān)檢測技術(shù)及管理要求、實驗操作步驟、檢測質(zhì)量保證與質(zhì)量控制等。4．生物安全培訓要求(1)主要風險點識別檢測人員、輔助人員、后勤保障人員、進修實習人員上崗前沒有接受嚴格的生物安全，以及相關(guān)生物安全設(shè)備操作的技術(shù)培訓，易造成生物安全事故的發(fā)生。(2)預(yù)防控制措施檢測人員、輔助人員、后勤保障人員每年參加本中心組織的生物安全知識或生物安全操作技術(shù)培訓、考核。上崗前熟練掌握生物安全儀器設(shè)備、設(shè)施操作技術(shù)，具備相關(guān)的安全防護能力。進修實習人員參與實驗活動前必須進行生物安全知識的培訓，在帶教老師的監(jiān)督下工作。5．應(yīng)急事件處理能力(l)主要風險點識別實驗人員上崗前沒有接受實驗室意外事故處理、職業(yè)暴露后預(yù)防等突發(fā)事件處置的培訓，一旦發(fā)生意外事件，就不能有效地進行早期處理和控制生物安全事件。(2)預(yù)防控制措施實驗室工作人員必須嚴格按照《實驗室意外事故和職業(yè)性疾病報告制度》和《病原微生物生物安全應(yīng)急處置技術(shù)方案》中規(guī)定的要求進行應(yīng)急事件的處置，強化職業(yè)暴露的應(yīng)急處理能力。（五）實驗室非常規(guī)活動中的風險評估與預(yù)防控制措施1．主要的實驗室非常規(guī)活動(1)實驗室外專業(yè)人員對實驗室設(shè)施設(shè)備的維護、維修、檢定／校準、檢測驗證（如主要設(shè)施設(shè)備的檢測驗證）和更換（如高效過濾器等的更換）等。(2)實驗室后勤保障人員對實驗室及公共環(huán)境的保潔、實驗器材的清洗消毒。(3)實驗室外人員參觀實驗室和上級部門對實驗室的檢查等。(4)任何其他人員需要進入實驗室從事實驗活動以外的行為。2．主要風險點識別(l)上述人員進入實驗室從事相關(guān)活動，特別是不慎打翻、打破標本管或損壞儀器零部件等情況，可能會引起實驗室感染。(2)實驗室運行過程中某些人員需要進入實驗室參觀，存在影響實驗活動正常運行或者導(dǎo)致相關(guān)或不相關(guān)的設(shè)施設(shè)備損壞的風險。3．預(yù)防控制措施(l)實行人員準入、登記制度。進修實習人員進入實驗室從事檢測活動前，必須先進行生物安全和實驗室規(guī)章制度的培訓。參觀和檢查活動等應(yīng)有中心實驗室人員陪同。(2)實驗室外專業(yè)人員和實驗室后勤保障人員必須要有相應(yīng)的專業(yè)知識，應(yīng)對其進行生物安全培訓，提供安全指南，實驗室人員應(yīng)協(xié)助、指導(dǎo)和規(guī)范進入人員在實驗室內(nèi)的活動并對其安全行為進行監(jiān)督，進入人員必須遵守實驗室的各項管理規(guī)定，以確保人員和環(huán)境安全。(3)進入人員未經(jīng)許可絕對不能私自動用實驗室內(nèi)有標志的危險品（除非經(jīng)過授權(quán)），絕不能將未經(jīng)消毒處理的物品拿出實驗區(qū)。(4)在生物安全BSL-2實驗室進行設(shè)施、設(shè)備維護維修過程中，若發(fā)生意外事件，應(yīng)立即報告實驗室負責人。實驗室負責人根據(jù)造成的事故進行風險評估，采取應(yīng)對措施。(5)當需要更換HEPA過濾膜或高效過濾器時，應(yīng)先對高效過濾器、HEPA過濾膜等作原位消毒后，專業(yè)人員才能進行更換。(6)離開實驗室前，必須洗手。（六）被誤用和惡意使用的風險與預(yù)防控制措施1.主要風險點識別陽性標本未明確標識，未嚴格實行雙人雙鎖管理，實驗活動結(jié)束后不及時消毒操作場所，工作人員在不知情的情況下可能誤用標本、實驗材料和設(shè)施設(shè)備等，導(dǎo)致人員感染和實驗室環(huán)境污染、人員受傷或設(shè)施設(shè)備損壞等事故。2．預(yù)防控制措施(l)實行嚴格的人員準入和持證上崗制度。(2)所有獲得批準進入實驗室工作的人員，必須嚴格按規(guī)程操作實驗材料和設(shè)施設(shè)備，以及其他一切實驗活動，不得私自動用實驗室內(nèi)任何不熟悉物品。(3)實驗所用材料和試劑等必須有明確的標識。(4)陽性標本嚴格實施雙人雙鎖管理。（七）相關(guān)實驗室已發(fā)生的事故分析和從中得到的啟示雖然蠟樣芽孢桿菌引起的實驗室人員感染概率非常低，但檢測人員和相關(guān)人員仍然應(yīng)嚴格遵守相關(guān)生物安全規(guī)定。三、實驗室理化因素風險評估及安全防護措施（一）紫外線1．主要風險點識別潔凈實驗室內(nèi)傳遞窗、生物安全柜、BSL-2實驗室均使用紫外線燈進行物體表面消毒。紫外線波長為250～280nm，主要影響眼睛和皮膚，引起急性角膜炎和結(jié)膜炎、慢性白內(nèi)障等眼疾病，還可誘發(fā)皮膚癌。紫外線燈開啟時，人員在不知情的情況下進入可受到傷害。2．安金防護措施在實驗室工作應(yīng)避免紫外線直接照射人體，特別是眼部。生物安全柜表面固定紫外線危害的標識，提醒實驗人員小心紫外線危害。在進行紫外線消毒時，實驗人員盡量遠離消毒區(qū)域，基本可以規(guī)避紫外線對人體的危害。（二）輻射1.主要風險點識別輻射源或輻射事故可以間接導(dǎo)致病原微生物屏障系統(tǒng)的破壞，增加實驗人員被病原微生物感染的風險。2．預(yù)防控制措施實驗室應(yīng)遠離輻射源，如果無法避開，則應(yīng)采取物理隔離措施，防止輻射源對檢測工作和人員健康產(chǎn)生影響。本中心實驗室內(nèi)部和周邊建筑群均沒有輻射源，所以輻射風險基本不用考慮。（三）施康清洗消毒劑I1．主要風險點識別施康清洗消毒劑I屬于含氯消毒劑，有效氯的含量為4.55%～5.55%，次氯酸鈉為主要殺菌因子。含氯的消毒液會殘留在空氣中不揮發(fā)，長期使用會使人感到頭疼、惡心，刺激黏膜，對于有體質(zhì)過敏的人，還容易引發(fā)過敏、哮喘疾病等。高濃度含氯消毒劑對人的呼吸道黏膜和皮膚有明顯的刺激作用，可使人流淚、咳嗽，并刺激皮膚和黏膜，嚴重者可發(fā)生氯氣中毒。急性中毒者出現(xiàn)躁動、惡心、嘔吐、呼吸困難等癥狀，甚至因窒息而死。2．安全防護措施按照使用說明，根據(jù)消毒對象不同而配制不同的稀釋倍數(shù)，避免使用不必要的高濃度的消毒液，稀釋和使用時戴好手套，消毒后可及時開窗通風，基本可規(guī)避消毒液對人體的危害。（四）其他1．主要風險點識別實驗室內(nèi)的照明和聲音（生物安全柜等）有可能因強光和噪聲對人員造成損害。2．安全防護措施對實驗室的照明和聲音等參數(shù)進行檢測，確保合格，避免強光和噪聲對人員的損害。四、實驗室火災(zāi)風險評估與預(yù)防控制措施1．主要風險點識別(l)超負荷用電，電線過長。(2)電器和電源老化、電器保養(yǎng)不良，例如電纜的絕緣層破舊或損壞。(3)用火不當?shù)纫l(fā)火災(zāi)。(4)儀器設(shè)備在不使用時未關(guān)閉電源。(5)使用的儀器設(shè)備不是專為實驗室環(huán)境設(shè)計。(6)易燃、易爆品處理、保存不當。(7)不相容化學品沒有正確隔離。(8)在易燃物品和蒸汽附近有能產(chǎn)生火花的設(shè)備。(9)通風系統(tǒng)不當或不充分。2．預(yù)防控制措施實驗室采取以下預(yù)防控制措施以避免火災(zāi)發(fā)生，保證發(fā)生火災(zāi)后能夠安全撤離實驗室。(l)定期檢查電器插座、電線絕緣層是否完好，保證用電負荷，對易燃、易爆等危險品進行有效區(qū)域隔離。(2)實驗室配備滅火器。放置在易取的地點，擺放部位張貼滅火器標識。該滅火器用于撲滅可控制的火災(zāi)，幫助人員撤離火場；對滅火器進行定期檢查和維護，確保其有效使用。(3)實驗室需裝設(shè)應(yīng)急燈，所有出口都有黑暗中可見的“緊急出口”標識；當出現(xiàn)緊急狀況時，實驗室所有出口的鎖必須處于開啟狀態(tài)，出口設(shè)計應(yīng)保證不經(jīng)過高危險區(qū)域就能逃脫，所有出口都能通向一個開放空間。(4)走廊、流通區(qū)域不得放置障礙物，不受人員流動和滅火設(shè)備移動的影響。(5)在實驗室工作區(qū)顯著位置張貼火警電話標識。實驗室每年對工作人員進行消防知識培訓，包括消防器材的使用、火災(zāi)發(fā)生時的應(yīng)急行動等。五、自然災(zāi)害風險評估與安全防護措施自然災(zāi)害可能導(dǎo)致的實驗室緊急狀況主要包括水災(zāi)和地震等。（一）水災(zāi)1．風險識別水災(zāi)可能導(dǎo)致實驗室維護結(jié)構(gòu)和設(shè)施損壞，實驗室內(nèi)感染性材料隨水外溢。2．安全防護措施(1)在安全手冊中制訂《實驗室緊急事件應(yīng)急預(yù)案》，并對所有實驗室人員進行培訓。(2)實驗室一旦發(fā)生水災(zāi)報警時，應(yīng)立刻停止工作。首先，考慮實驗室內(nèi)感染性物質(zhì)和人員的轉(zhuǎn)移。實驗室負責人、中心主任根據(jù)條件及時采取對策，第一時間聯(lián)系相關(guān)消防人員，消防人員應(yīng)有防護措施，并在受過訓練的實驗室工作人員陪同下，進入實驗室完成菌毒種和人員的安全轉(zhuǎn)移工作。（二）地震1．風險識別發(fā)生地震等自然災(zāi)害會導(dǎo)致實驗室維護結(jié)構(gòu)和設(shè)施損壞，導(dǎo)致人員傷害和實驗室感染性材料外溢的風險。2．安全防護措施實驗室應(yīng)采取措施降低自然災(zāi)害帶來的風險，保證災(zāi)害發(fā)生后實驗人員能夠安全撤離實驗室，減少對人員和環(huán)境的影響。發(fā)生地震后，首先設(shè)立距實驗室維護結(jié)構(gòu)20m范圍內(nèi)的封鎖區(qū)。其次，對封鎖區(qū)進行消毒，然后由專業(yè)人員在做好個人防護的前提下對實驗內(nèi)部環(huán)境邊消毒邊清理，清理到樣品保存地點。如果保藏樣品的容器沒有被破壞，可把它安全轉(zhuǎn)移到其他安全的實驗室存放。如果保藏樣品的容器已被破壞和發(fā)生外溢，應(yīng)立即用可靠方法進行徹底消毒滅菌。六、生物安全及其他緊急事件（事故）處理預(yù)案（一）實驗室生物安全事件（事故）處理措施(l)當生物安全柜或潔凈實驗室出現(xiàn)持續(xù)正壓時，室內(nèi)人員應(yīng)立即停止操作，通知運行保障人員采取措施恢復(fù)負壓。如果不能及時恢復(fù)和保持負壓，應(yīng)停止實驗，按規(guī)程退出。發(fā)生此類事故或發(fā)生意外停電，造成具有傳染性物質(zhì)暴露潛在危險的事故和污染時，工作人員除了采取緊急措施外，立即報告實驗室安全負責人，組織對實驗室進行終末消毒。(2)發(fā)生污染物潑濺或溢出時，立即用清潔布或吸水紙覆蓋污染處，并倒上10～25倍稀釋的施康消毒液，至少作用30min，方可清理全部污染物。用消毒劑擦拭污染區(qū)域，所有這些操作過程中都應(yīng)戴手套。若發(fā)生大范圍污染物擴散事故時，應(yīng)立即通知實驗室主管領(lǐng)導(dǎo)和安全負責人到達事故現(xiàn)場。待其查清情況，確定消毒方案，組織對實驗室進行終末消毒。（二）其他緊急事件（事故）處理措施在制訂的應(yīng)急預(yù)案中應(yīng)包括消防人員和其他緊急救助人員。應(yīng)事先告知他們哪些實驗室有潛在的感染性物質(zhì)，讓他們熟悉實驗室的布局和設(shè)備。實驗室人員要熟悉緊急撤離的情況及緊急撤離的路線標識，在實驗室發(fā)生不可控制的火災(zāi)、水災(zāi)、爆炸或其他危險情況時，為確保工作人員的安全，要進行緊急撤離。所有實驗室人員須了解緊急撤離的行動計劃、撤離路線和緊急撤離的集合地點，每年至少參加一次緊急撤離演習，包括急救設(shè)備使用和采取相應(yīng)急救措施。（三）生物安全及其他緊急事件（事故）報告和記錄(1)發(fā)生生物安全及其他緊急事件時，在緊急處理的同時必須向中心主管領(lǐng)導(dǎo)和生物安全委員會報告。(2)對于生物安全事件必須進行登記，記錄發(fā)生的時間、地點、詳細經(jīng)過及處理方法等。七、生物安全和生物安全保障風險管理（一）生物安全風險評估依據(jù)標準風險評估所依據(jù)的數(shù)據(jù)及擬采取的風險控制措施、安全操作規(guī)程等均應(yīng)以國家衛(wèi)生和計劃生育委員會、世界衛(wèi)生組織、國際標準化組織等機構(gòu)或行業(yè)權(quán)威機構(gòu)發(fā)布的指南、標準等為依據(jù)。（二）危險發(fā)生的概率評估（見表7-7）表7-7蠟樣芽孢桿菌實驗活動發(fā)生的概率評估序號潛在危險因素危害程度發(fā)生概率固有風險措施合理性殘留風險風險可控程度1樣品運輸過程中容器意外側(cè)翻、泄露、破裂造成污染中度可能中度合理低風險可控2樣品的接收、開啟及加樣等常規(guī)實驗活動中產(chǎn)生的氣溶膠中度較大可能中度合理低風險可控3離心、加樣等實驗活動中意外事故造成盛裝標本容器破裂、溢出瞬間產(chǎn)生的氣溶膠中度可能中度合理低風險可控4檢測未經(jīng)滅活的樣品對儀器與環(huán)境造成的污染中度較大可能中度合理低風險可控5標本、實驗材料、設(shè)施設(shè)備等被誤用的風險中度可能中度合理低風險可控6陽性標本被惡意使用的風險高度較小可能高度合理低風險可控7實驗器材未經(jīng)規(guī)范消毒造成污染中度可能中度合理低風險可控8廢棄物處理不當造成病原微生物擴散中度較大可能中度合理低風險可控9滅菌裝置不符合要求，滅菌不徹底造成污染中度較小可能中度合理低風險可控10檢測人員和工勤人員被銳器誤傷造成職業(yè)暴露中度可能中度合理低風險可控11檢測人員個人防護不當造成的病原微生物擴散中度可能中度合理低風險可控12非檢測人員、進修實習等外來人員進入實驗室的不當操作中度可能中度合理低風險可控13水、電、火災(zāi)及自然災(zāi)害造成的風險中度較小可能中度合理低風險不可控（三）風險評估人員風險評估由中心主任組織檢驗科、質(zhì)量管理科及其他熟悉蠟樣芽孢桿菌檢驗相關(guān)風險的專業(yè)人員進行風險評估并形成風險評估報告。形成的風險評估報告經(jīng)中心生物安全委員會審核，請省市熟悉相關(guān)病原微生物特征、實驗設(shè)施設(shè)備、操作規(guī)程及個體防護設(shè)備的不同領(lǐng)域的專家進行評估