SARS冠狀病毒實(shí)驗(yàn)活動(dòng)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估報(bào)告

SARS冠狀病毒實(shí)驗(yàn)活動(dòng)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估報(bào)告一、生物因子(一)一般特性SARS冠狀病毒（SARS-CoV），屬于冠狀病毒科冠狀病毒屬，為單股正鏈RNA病毒。SARS-CoV基因組由大約30000個(gè)核苷酸組成，在已發(fā)現(xiàn)的RNA病毒中是最大的，與經(jīng)典冠狀病毒僅有約60%的同源性，但基因組的組織形式與其他冠狀病毒相似。嚴(yán)重急性呼吸綜合征（SevereAcuteRespiratorySyndromes），又稱傳染性非典型肺炎，簡(jiǎn)稱SARS，是一種因感染SARS冠狀病毒引起的呼吸系統(tǒng)傳染性疾病。其主要通過(guò)近距離空氣飛沫傳播，以發(fā)熱、頭疼、肌肉酸痛、乏力，干咳少痰等為主要臨床表現(xiàn)，嚴(yán)重者可出現(xiàn)呼吸窘迫。此病傳染性強(qiáng)，病死率高。感染后，臨床多表現(xiàn)為重癥肺炎，且以發(fā)病快、癥狀重，以及進(jìn)展迅速為特點(diǎn)。（二）來(lái)源SARS患者是主要的傳染源，處于感染初期的患者的咳嗽癥狀最明顯，這時(shí)也是最危險(xiǎn)的傳染源。不典型患者是比較難管理的傳染源。這類患者并無(wú)異常表現(xiàn)，僅僅是胸部有病變，因而對(duì)于他們的診斷和管理就比較困難，也就容易流散在社會(huì)上造成疫情的蔓延。國(guó)內(nèi)某些研究機(jī)構(gòu)已經(jīng)在果子貍體內(nèi)分離到了與SARS冠狀病毒基因結(jié)構(gòu)相似的冠狀病毒，但是還不能確定哪一種動(dòng)物是SARS病毒的來(lái)源，需進(jìn)行進(jìn)一步研究；實(shí)驗(yàn)室保存的傳染性SARS樣品是需要倍加重視的傳染源。另有研究發(fā)現(xiàn)，蝙蝠是類SARS病毒的自然宿主，蝙蝠攜帶冠狀病毒，蝙蝠類SARS冠狀病毒與人SARS冠狀病毒基因組序列同源性大92%，揭示了蝙蝠是類SARS冠狀病毒的自然宿主，并證明了冠狀病毒與蝙蝠宿主存在協(xié)同進(jìn)化關(guān)系，為SARS冠狀病毒的宿主動(dòng)物溯源提供了證據(jù)。（三）傳染性SARS冠狀病毒傳染性極強(qiáng)，患者的傳染性與其呼吸道癥狀呈正比，在傳播過(guò)程常常會(huì)出現(xiàn)超級(jí)傳染事件（SuperSpreadEvents，SSE），這個(gè)過(guò)程一般會(huì)導(dǎo)致20名以上的健康人被感染SARS冠狀病毒。新加坡的5個(gè)超級(jí)傳染事件一共使122名健康人感染了SARS冠狀病毒；北京市的1個(gè)超級(jí)傳染事件就感染了27名健康人。但沒(méi)有證據(jù)表明超級(jí)傳播者的病原具有特殊的生物學(xué)特性。（四）傳播途徑目前公認(rèn)最主要的傳播途徑是：（1）呼吸道近距離的飛沫傳播。在急性期患者咽拭子、痰標(biāo)本中可以檢測(cè)到很高水平的SARS冠狀病毒，因此，在一定半徑的空間內(nèi)會(huì)存在病毒從而引起近距離呼吸道傳播。氣溶膠傳播，即通過(guò)空氣污染物氣溶膠顆粒這一載體在空氣中作為中距離傳播，是經(jīng)空氣傳播的另一種方式。含有病毒的分泌物可以在許多物體表面存活，因此，在一定意義上講，與患者接觸同一公共設(shè)施也會(huì)導(dǎo)致被感染。（2）腸道傳播。WHO最近的研究成果顯示，SARS冠狀病毒能在腹瀉患者的排泄物內(nèi)存活多達(dá)4d，因此，不能排除經(jīng)糞—口途徑感染SARS的可能，也就是說(shuō)被患者排泄物污染的水、食物和物品都可能造成感染。（3）血液傳播和垂直傳播。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)一些急性期患者伴有病毒血癥。（五）易感性一般來(lái)說(shuō)，人群普遍易感。從發(fā)病年齡分布來(lái)看，成年人比較多見(jiàn)，20～30歲的發(fā)病人數(shù)最多，而10歲以下的兒童發(fā)病人數(shù)最少。老年人的病死率最高，青壯年的死亡率則較低，這可能與老年人免疫力弱、機(jī)體調(diào)節(jié)不良有關(guān)。與SARS癥狀初期的病人的密切接觸者是高危險(xiǎn)人群之一。醫(yī)護(hù)人員和病人家屬與親友在治療、護(hù)理、陪護(hù)、探望病人時(shí)，同病人近距離接觸次數(shù)多，接觸時(shí)間長(zhǎng)，如果防護(hù)措施不力，就很容易感染SARS冠狀病毒。從事SARS冠狀病毒相關(guān)實(shí)驗(yàn)室操作的工作人員和果子貍等野生動(dòng)物飼養(yǎng)銷售的人員，也可能被感染的高危人群。（六）潛伏期患者感染SARS冠狀病毒后，約經(jīng)過(guò)2周左右，一般2～12d的潛伏期，開(kāi)始出現(xiàn)發(fā)熱、咳嗽癥狀。感染初期患者的傳染性較強(qiáng)，排毒量和排毒時(shí)間一般與病情輕重成正比。哈佛大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院的庫(kù)珀等人用“基本傳染數(shù)R”來(lái)評(píng)價(jià)一種傳染病的傳播潛力，即R=2時(shí)就意味著一個(gè)患者可以傳染兩個(gè)健康人。通過(guò)分析香港和新加坡的疫情，發(fā)現(xiàn)SARS的基本傳染數(shù)為2.7～3，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于艾滋病、水痘、天花等傳染病。但是由于冠狀病毒可能在呼吸道上皮細(xì)胞中增殖，局部病毒濃度較高，因此，在對(duì)病人進(jìn)行口腔檢查、氣管插管時(shí)極易被感染，這也正是醫(yī)務(wù)人員感染比例偏高的原因。（七）劑量—效應(yīng)關(guān)系目前SARS冠狀病毒感染人的劑量無(wú)報(bào)道，但由近距離經(jīng)呼吸道飛沫傳播是肯定的，而且經(jīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，SARS冠狀病毒以1×105TCID50劑量經(jīng)滴鼻感染恒河猴，導(dǎo)致出現(xiàn)非典型肺炎的病理性改變。（八）致病性感染SARS冠狀病毒的病例臨床表現(xiàn)為急性起病，自發(fā)病之日起，2～3周內(nèi)病情都可處于進(jìn)展?fàn)顟B(tài)，主要有以下三類癥狀：（1）發(fā)熱及相關(guān)癥狀。常以發(fā)熱為首發(fā)和主要癥狀，體溫一般高于38℃，常呈持續(xù)性高熱，可伴有畏寒、肌肉酸痛、關(guān)節(jié)酸痛、頭痛、乏力。在早期，使用退燒藥可有效退熱；進(jìn)入進(jìn)展期，通常難以用退熱藥控制高熱。使用糖皮質(zhì)激素可對(duì)熱型造成干擾。（2）呼吸系統(tǒng)癥狀可有咳嗽，多為干咳、少痰，少部分患者出現(xiàn)咽痛。常無(wú)上呼吸道卡他癥狀?？捎行貝?，嚴(yán)重者漸出現(xiàn)呼吸加速、氣促，甚至呼吸窘迫。呼吸困難和低氧血癥多見(jiàn)于發(fā)病6～12d以后。（3）其他方面癥狀。部分患者出現(xiàn)腹瀉、惡心、嘔吐等消化道癥狀。（九）變異性SARS冠狀病毒基因組從5’端到3’端依次為：5’-多聚酶-S-E-M-N-3’。5’端有甲基化帽子結(jié)構(gòu)，其后是72個(gè)核苷酸的引導(dǎo)序列?；蚪MRNA約2/3為開(kāi)放閱讀框架（ORF）1a/1b，編碼RNA多聚酶（Rep）。該蛋白直接從基因組RNA翻譯，形成多蛋白前體，后者進(jìn)一步被病毒主要蛋白酶3CLpro切割，主要負(fù)責(zé)病毒的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制。Rep的下游有4個(gè)ORF，分別編碼S、E、M、N四種結(jié)構(gòu)蛋白，它們從亞基因組mRNA中翻譯，亞基因組mRNA以不連續(xù)轉(zhuǎn)錄機(jī)制合成，其轉(zhuǎn)錄由轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列（TRS）起始，后者保守序列為AAACGAAC?；蚪M3’端有polyA尾。目前的基因序列分析表明SARS冠狀病毒的S基因尤其是S1區(qū)變異程度較高，N基因較為保守?；蚪M的突變率在0.4%～0.7%之間，研究結(jié)果分析沒(méi)有發(fā)現(xiàn)病毒變異與臨床病程發(fā)展之間有明確的聯(lián)系。（十）穩(wěn)定性病毒對(duì)有機(jī)溶劑敏感，乙醚4℃24h可完全滅活病毒，75%乙醇5min可使病毒失去活力，含氯的消毒劑5min可以滅活病毒。根據(jù)SARS冠狀病毒對(duì)消毒劑的抵抗力，本實(shí)驗(yàn)選擇75%乙醇溶液和0.5%有效氯濃度的次氯酸鈉溶液用于SARS冠狀病毒相關(guān)實(shí)驗(yàn)的消毒處理。病毒對(duì)溫度敏感，隨溫度升高，其抵抗力下降，37℃可存活4d，56℃加熱90min、75℃加熱30min能夠滅活病毒。紫外線照射60min可破壞病毒的感染性。在人體常見(jiàn)的三種排泄物（痰、糞便、尿液）和血液中，SARS病毒能長(zhǎng)時(shí)間保持活力。在24℃條件下，在痰中和糞便中存活約5d，在尿液中存活約10d，在血液中可存活15d。在室內(nèi)條件下，濾紙、棉布、木塊、土壤、金屬、塑料、玻璃等表面可存活3d。（十一）預(yù)防和治療目前尚缺少針對(duì)SARS病毒的特異性治療方法，臨床上應(yīng)以對(duì)癥支持治療和針對(duì)并發(fā)癥的治療為主。應(yīng)避免盲目應(yīng)用藥物治療，尤其應(yīng)避免多種藥物（如抗生素、抗病毒藥、免疫調(diào)節(jié)劑、糖皮質(zhì)激素等）長(zhǎng)期、大劑量地應(yīng)用。具體治療方案詳見(jiàn)原衛(wèi)生部《傳染性非典型肺炎<SARS>診療方案》?！吨腥A人民共和國(guó)傳染病防治法》已將SARS列為法定乙類傳染病并參照甲類傳染病進(jìn)行管理。要針對(duì)傳染源、傳播途徑、易感人群三個(gè)環(huán)節(jié)，采取以管理和控制傳染源、預(yù)防控制醫(yī)院內(nèi)傳播為主的綜合性防治措施，努力做到“早發(fā)現(xiàn)、早報(bào)告、早隔離、早治療”。特別是在SARS流行的情況下，要采取措施，確?！八脑纭贝胧┞鋵?shí)到位。強(qiáng)調(diào)就地隔離、就地治療，避免遠(yuǎn)距離傳播。（十二）事故分析迄今為止，國(guó)內(nèi)外共報(bào)道多起實(shí)驗(yàn)室感染事件。2003年9月，由于不當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)程序?qū)е挛髂崃_病毒樣本與SARS冠狀病毒在BSL-3實(shí)驗(yàn)室里交叉感染，新加坡國(guó)立大學(xué)一名27歲的研究生感染SARS冠狀病毒；2003年12月，臺(tái)灣軍方醫(yī)學(xué)院防非典研究所BSL-4實(shí)驗(yàn)室里，一名研究人員在處理含有SARS冠狀病毒廢棄物時(shí)，違規(guī)打開(kāi)密封門(mén)，在此過(guò)程中感染SARS冠狀病毒；2004年3～4月，中國(guó)疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所研究人員采用未經(jīng)證實(shí)有效的滅活方法在BSL-3實(shí)驗(yàn)室滅活SARS冠狀病毒后，將其帶到普通實(shí)驗(yàn)室，而未經(jīng)完全滅活的病毒，感染了本實(shí)驗(yàn)室兩名工作人員，引起發(fā)病，并造成社會(huì)上的再次傳染，共感染10人，其中一人死亡。二、風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與風(fēng)險(xiǎn)控制（一）實(shí)驗(yàn)室活動(dòng)BSL-3實(shí)驗(yàn)室從事SARS冠狀病毒的實(shí)驗(yàn)活動(dòng)包括病毒核酸檢測(cè)、病毒分離培養(yǎng)和血清抗體微量中和試驗(yàn)。1.病毒核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)存在的風(fēng)險(xiǎn)和控制措施（見(jiàn)表8-15）表8-15病毒核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)存在的風(fēng)施險(xiǎn)和控制措施名稱實(shí)驗(yàn)操作可能風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生概率發(fā)生范圍控制措施殘留風(fēng)險(xiǎn)核酸提取1.標(biāo)本轉(zhuǎn)移至生物安全柜離心管掉落破裂或破碎，感染性物質(zhì)濺出，同時(shí)可能產(chǎn)生氣溶膠低生物安全柜內(nèi)標(biāo)本處理時(shí)要?jiǎng)幼鬏p柔，應(yīng)事先在操作臺(tái)面鋪含有5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布。一旦發(fā)生上述意外，馬上將污染的紗布或紙棄入含5000mg/L有效氯的次氯酸鈉的消毒缸內(nèi)及立即消毒臺(tái)面及更換新的紗布或吸水紙低2.標(biāo)本振蕩和擠壓產(chǎn)生氣溶膠和濺出液體低生物安全柜內(nèi)標(biāo)本處理時(shí)要?jiǎng)幼鬏p柔，應(yīng)事先在操作臺(tái)面鋪含有5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布。一旦發(fā)生上述意外，馬上將污染的紗布或紙棄入含5000mg/L有效氯的次氯酸鈉的消毒缸內(nèi)及立即消毒臺(tái)面及更換新的紗布或吸水紙低3.標(biāo)本離心產(chǎn)生氣溶膠或破裂溢出低生物安全柜內(nèi)或離心機(jī)實(shí)驗(yàn)室采用帶有安全套蓋的離心套筒，如離心過(guò)程中發(fā)生收集管破裂，應(yīng)關(guān)閉電源，在生物安全柜內(nèi)處理相關(guān)感染性物質(zhì)，徹底清潔和消毒離心機(jī)套桶。如果在不帶有安全套筒的離心機(jī)操作，離心過(guò)程中發(fā)生收集管破裂時(shí)，應(yīng)關(guān)閉電源并且保持離心機(jī)蓋子關(guān)閉30min。如果在機(jī)器停止運(yùn)行后發(fā)生了破裂，離心機(jī)蓋應(yīng)立即關(guān)閉并保持30min，并及時(shí)通知本實(shí)驗(yàn)室生物安全員采取相應(yīng)措施低4.標(biāo)本轉(zhuǎn)移離心管1.離心管開(kāi)蓋時(shí)液體濺出，離心管滑落，打翻標(biāo)本2.標(biāo)本轉(zhuǎn)移時(shí)，吸頭漏液3.加樣時(shí)，感染性液體濺出，污染離心管外部、手臂或生物安全柜臺(tái)面低生物安全柜內(nèi)1.在操作時(shí)，動(dòng)作要小心，以防開(kāi)蓋時(shí)離心管滑落、打翻或?yàn)R出2.使用移液器時(shí)，確保吸頭與移液器連接緊密3.樣品打開(kāi)前進(jìn)行短暫離心，去除樣品管蓋上的殘留，避免開(kāi)蓋時(shí)樣品濺出4.使用帶濾芯的吸管，動(dòng)作要輕緩。若滴落在生物安全柜臺(tái)面，應(yīng)及時(shí)消毒處理，以5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布、75%的酒精紗布處理。若手接觸感染材料，用75%的酒精消毒后脫去最外層的手套，換一副新手套，并用75%的酒精紗布擦拭管壁，將污染的紗布放在生物安全柜內(nèi)的垃圾袋內(nèi)，封口后移出生物安全柜，進(jìn)行高壓處理低2.SARS病毒分離實(shí)驗(yàn)操作風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別與控制（見(jiàn)表8-16）表8-16SARS病毒分離實(shí)驗(yàn)操作風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別與控制措施名稱實(shí)驗(yàn)操作可能風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生概率發(fā)生范圍控制措施殘留風(fēng)險(xiǎn)接種前標(biāo)本處理1.標(biāo)本轉(zhuǎn)移至生物安全柜離心管掉落破裂或破碎，感染性物質(zhì)濺出，同時(shí)可能產(chǎn)生氣溶膠低生物安全柜內(nèi)標(biāo)本處理時(shí)要?jiǎng)幼鬏p柔，應(yīng)事先在操作臺(tái)面鋪含有5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布。一旦發(fā)生上述意外，馬上將污染的紗布或紙棄入含5000mg/L有效氯的次氯酸鈉的消毒缸內(nèi)及立即消毒臺(tái)面及更換新的紗布或吸水紙低2.標(biāo)本振蕩和擠壓產(chǎn)生氣溶膠和濺出液體低生物安全柜內(nèi)標(biāo)本處理時(shí)要?jiǎng)幼鬏p柔，應(yīng)事先在操作臺(tái)面鋪含有5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布。一旦發(fā)生上述意外，馬上將污染的紗布或紙棄入含5000mg/L有效氯的次氯酸鈉的消毒缸內(nèi)及立即消毒臺(tái)面及更換新的紗布或吸水紙低3.標(biāo)本離心產(chǎn)生氣溶膠或破裂溢出低生物安全柜內(nèi)或離心機(jī)實(shí)驗(yàn)室采用帶有安全套蓋的離心套筒，如離心過(guò)程中發(fā)生收集管破裂，應(yīng)關(guān)閉電源，在生物安全柜內(nèi)處理相關(guān)感染性物質(zhì)，徹底清潔和消毒離心機(jī)套桶。如果在不帶有安全套筒的離心機(jī)操作，離心過(guò)程中發(fā)生收集管破裂時(shí)，應(yīng)關(guān)閉電源并且保持離心機(jī)蓋子關(guān)閉30min。如果在機(jī)器停止運(yùn)行后發(fā)生了破裂，離心機(jī)蓋應(yīng)立即關(guān)閉并保持30min，并及時(shí)通知本實(shí)驗(yàn)室生物安全員采取相應(yīng)措施低4.標(biāo)本轉(zhuǎn)移至離心管1.離心管開(kāi)蓋時(shí)液體濺出，離心管滑落，打翻標(biāo)本2.標(biāo)本轉(zhuǎn)移時(shí)，吸頭漏液3.加樣時(shí)，感染性液體濺出，污染離心管外部、手臂或生物安全柜臺(tái)面低生物安全柜內(nèi)1.在操作時(shí)，動(dòng)作要輕緩，以防開(kāi)蓋時(shí)離心管滑落、打翻或?yàn)R出2.使用移液器時(shí)，確保吸頭與移液器連接緊密，吸取或吹打液體時(shí)動(dòng)作要輕緩3.樣品打開(kāi)前進(jìn)行短暫離心，去除樣品管蓋上的殘留，避免開(kāi)蓋時(shí)樣品濺出4.使用帶濾芯的吸管，動(dòng)作要輕緩。若滴落在生物安全柜臺(tái)面，應(yīng)及時(shí)消毒處理，以5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布、75%的酒精紗布處理。若手接觸感染材料，用75%的酒精消毒后脫去最外層的手套，換一副新手套，并用75%的酒精紗布擦拭管壁，將污染的紗布放在生物安全柜內(nèi)的垃圾袋內(nèi)，封口后移出生物安全柜，進(jìn)行高壓處理低接種細(xì)胞過(guò)程1.吸取處理后標(biāo)本接種細(xì)胞標(biāo)本滴落臺(tái)面或抽吸的過(guò)程形成氣溶膠低生物安全柜內(nèi)使用帶濾芯的吸管，動(dòng)作要輕緩。若滴落在生物安全柜臺(tái)面，應(yīng)及時(shí)消毒處理，以5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布、75%的酒精紗布處理。若手接觸感染材料，用75%的酒精消毒后脫去最外層的手套，換一副新手套，并用75%的酒精紗布擦拭管壁，將污染的紗布放在生物安全柜內(nèi)的垃圾袋內(nèi)，封口后移出生物安全柜，進(jìn)行高壓處理低2.移至孵箱孵育接種后培養(yǎng)瓶跌落形成氣溶膠低實(shí)驗(yàn)室核心區(qū)將培養(yǎng)瓶口擰緊，轉(zhuǎn)移時(shí)使用轉(zhuǎn)移托盤(pán)低3.孵育后Hank’s液清洗細(xì)胞形成氣溶膠，清洗液濺灑低生物安全柜內(nèi)操作時(shí)在生物安全柜內(nèi)放好帶有消毒液的紗布。用帶濾芯的吸管，動(dòng)作要輕緩。若滴落在生物安全柜臺(tái)面應(yīng)及時(shí)消毒處理，以5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布、75%的酒精紗布處理。若手接觸感染材料，用75%的酒精消毒后脫去最外層的手套，換一副新手套低4.加生長(zhǎng)液形成氣溶膠低生物安全柜內(nèi)加生長(zhǎng)液時(shí)動(dòng)作輕柔，避免對(duì)著細(xì)胞生長(zhǎng)面加液，加液后及時(shí)將瓶口擰緊或蓋上培養(yǎng)板板蓋低培養(yǎng)觀察1.顯微鏡觀察培養(yǎng)物移動(dòng)過(guò)程跌落導(dǎo)致溢出或形成氣溶膠低實(shí)驗(yàn)室核心區(qū)為避免大量病毒產(chǎn)生危害，一次病毒培養(yǎng)體積不超過(guò)100mL。將培養(yǎng)瓶口擰緊，放置托盤(pán)中，移動(dòng)時(shí)輕緩，注意安全。大量培養(yǎng)物溢出時(shí)，停止實(shí)驗(yàn)，先用一塊布或紙巾蓋上，再把消毒劑倒到上面，實(shí)驗(yàn)人員先退出實(shí)驗(yàn)室，至少靜置30min，然后才可把布和紙巾等物品清理走低2.培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過(guò)程形成氣溶膠低培養(yǎng)箱內(nèi)放在CO2孵箱內(nèi)的病毒培養(yǎng)瓶需擰緊，密封袋包裝，并放在托盤(pán)上，以防止污染孵箱低培養(yǎng)物收獲細(xì)胞培養(yǎng)物的收獲分裝分裝過(guò)程滴落臺(tái)面，污染管壁，凍存管封口不嚴(yán)低生物安全柜內(nèi)為避免大量病毒產(chǎn)生危害，一次病毒培養(yǎng)體積不超過(guò)100mL。操作時(shí)在生物安全柜內(nèi)放好帶有消毒液的紗布。若滴落在生物安全柜臺(tái)面，應(yīng)及時(shí)消毒處理，以5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布、75%的酒精紗布處理。分裝病毒時(shí)應(yīng)使用帶墊圈、密封效果好的旋蓋管，分裝時(shí)注意安全，確保病毒不污染管外壁，管外壁經(jīng)75%醫(yī)用酒精紗布擦拭后方可移出生物安全柜低3.微量中和實(shí)驗(yàn)存在的風(fēng)險(xiǎn)和控制措施（見(jiàn)表8-17）表8-17微量中和實(shí)驗(yàn)存在的風(fēng)險(xiǎn)和控制措施名稱實(shí)驗(yàn)操作可能風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生概率發(fā)生范圍控制措施殘留風(fēng)險(xiǎn)微量中和試驗(yàn)在96孔板中加入已知滴度的病毒產(chǎn)生氣溶膠和濺出液體低生物安全柜內(nèi)加病毒時(shí)動(dòng)作輕柔，應(yīng)事先在操作臺(tái)面鋪含有5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布。一旦發(fā)生上述意外，馬上將污染的紗布或紙棄入含5000mg/L有效氯的次氯酸鈉的消毒缸內(nèi)及立即消毒臺(tái)面并更換新的紗布或吸水紙低病毒和抗體混勻產(chǎn)生氣溶膠和濺出液體低生物安全柜內(nèi)混勻時(shí)動(dòng)作輕柔，應(yīng)事先在操作臺(tái)面鋪含有5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布。一旦發(fā)生上述意外，馬上將污染的紗布或紙棄入含5000mg/L有效氯的次氯酸鈉的消毒缸內(nèi)及立即消毒臺(tái)面及更換新的紗布或吸水紙低96孔細(xì)胞培養(yǎng)板的轉(zhuǎn)移細(xì)胞板跌落而產(chǎn)生氣溶膠低實(shí)驗(yàn)核心區(qū)使用細(xì)胞托盤(pán)轉(zhuǎn)運(yùn)細(xì)胞板，發(fā)生細(xì)胞板意外跌落時(shí)，將含有5000mg/L有效氯的次氯酸鈉紗布覆蓋污染區(qū)，并用次氯酸鈉消毒劑噴灑污染區(qū)及周邊，作用半小時(shí)左右后，將污染的紗布和細(xì)胞板放于垃圾袋內(nèi)進(jìn)行高壓處理；實(shí)驗(yàn)室核心區(qū)疑有氣溶膠污染時(shí)，需用過(guò)氧化氫消毒器進(jìn)行室內(nèi)空氣消毒，并按照程序進(jìn)行意外事故報(bào)告低（二）設(shè)施設(shè)備設(shè)施設(shè)備中，生物安全柜、培養(yǎng)箱、離心機(jī)、振蕩器、冰箱、高壓滅菌器的可能風(fēng)險(xiǎn)以及控制措施見(jiàn)表8-18。表8-18設(shè)施、設(shè)備使用中的可能風(fēng)險(xiǎn)及控制措施儀器名稱可能風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生可能性后果描述控制措施生物安全柜氣流異常不大可能對(duì)實(shí)驗(yàn)人員及實(shí)驗(yàn)室的高度危險(xiǎn)操作培訓(xùn)，設(shè)備定期維護(hù)。使用時(shí)，觀察窗不要抬得過(guò)高；柜內(nèi)盡量少放儀器和物品，不要阻塞后面氣口處的空氣流通；禁止在柜內(nèi)使用酒精燈；在柜內(nèi)的所有工作都要在工作臺(tái)中央或后部進(jìn)行，并且通過(guò)觀察窗能看見(jiàn)柜內(nèi)的操作；盡量減少操作者后面的人員走動(dòng)，操作者不要頻繁移動(dòng)及揮動(dòng)手臂以免破壞定向氣流；前面的空氣柵格不要被吸管或其他材料擋住；生物安全柜的風(fēng)扇在工作開(kāi)始前及操作結(jié)束后至少要再運(yùn)行5min培養(yǎng)箱二氧化碳泄漏；電源短路；培養(yǎng)物產(chǎn)生氣溶膠可能性低人員接觸污染1.每次使用二氧化碳培養(yǎng)箱時(shí)，注意觀察二氧化碳?xì)獗硪约芭囵B(yǎng)箱顯示是否正常，確保電源線連接正常，電源線周圍無(wú)液體存在2.定期更換二氧化碳培養(yǎng)箱的空氣濾膜3.嚴(yán)格規(guī)范操作，定期檢查離心機(jī)離心管發(fā)生破裂而氣溶膠釋放可能性低人員接觸污染配備有安全套筒的離心機(jī)，可把它轉(zhuǎn)移到生物安全柜內(nèi)處理振蕩器產(chǎn)生氣溶膠、泄漏和容器破裂可能性低人員樣品接觸污染必須使用塑料的器皿，因?yàn)椴ＡЭ赡軙?huì)破裂而釋放出感染性物質(zhì)，而且可能傷及操作者。在操作結(jié)束后，容器應(yīng)在生物安全柜里才能重新開(kāi)啟冰箱保存管泄漏可能性極低人員樣品接觸污染操作培訓(xùn)，做好個(gè)人防護(hù)高壓滅菌器人員接觸高溫部位，發(fā)生燙傷可能性中等人員發(fā)生燙傷操作培訓(xùn)，做好個(gè)人防護(hù)（三）人員1.健康監(jiān)護(hù)和健康狀況評(píng)估實(shí)驗(yàn)人員、輔助人員、后勤保障人員上崗前應(yīng)建立個(gè)人健康檔案，進(jìn)行定期的健康體檢和相應(yīng)的免疫接種。人員的健康狀況應(yīng)當(dāng)符合實(shí)驗(yàn)室的安全工作要求。從事SARS冠狀病毒研究的實(shí)驗(yàn)室工作人員必須在身體狀況良好的情況下，才能進(jìn)入BSL-3實(shí)驗(yàn)室工作，出現(xiàn)下列情況時(shí)不能進(jìn)入:患發(fā)熱性疾?。桓忻?、上呼吸道感染，或其他導(dǎo)致抵抗力下降的情況；妊娠；已經(jīng)在實(shí)驗(yàn)室控制區(qū)域內(nèi)連續(xù)工作4h以上，或其他原因造成的疲勞狀態(tài)；心理素質(zhì)不穩(wěn)定的也盡量避免進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室；未經(jīng)充分專業(yè)操作技能培訓(xùn)的人員。SARS冠狀病毒實(shí)驗(yàn)人員的健康監(jiān)護(hù)從開(kāi)始進(jìn)行實(shí)驗(yàn)當(dāng)日開(kāi)始，直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束后最長(zhǎng)潛伏期結(jié)束，期間應(yīng)每日早晚測(cè)量體溫并觀察相應(yīng)癥狀并記錄。若操作者或其所在實(shí)驗(yàn)室的工作人員在此期間出現(xiàn)發(fā)熱、體溫高于38℃等類似癥狀，則應(yīng)被視為可能發(fā)生實(shí)驗(yàn)室感染，應(yīng)立即報(bào)告實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人，采取早發(fā)現(xiàn)、早報(bào)告、早隔離、早治療以控制管理傳染源為主的綜合性防治措施。對(duì)疑似感染者，采取嚴(yán)格的隔離防護(hù)措施，送至指定醫(yī)院就診，并做好轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程的安全隔離和防護(hù)、消毒工作。另外的措施有實(shí)驗(yàn)活動(dòng)前采集本底血清樣本，實(shí)驗(yàn)活動(dòng)期間每天測(cè)體溫，必要時(shí)采集血液樣本進(jìn)行前后對(duì)比檢測(cè)，以確定是否感染。2.人員資質(zhì)和培訓(xùn)實(shí)驗(yàn)人員、輔助人員、后勤保障人員上崗前均須接受嚴(yán)格的生物安全，以及相關(guān)操作的技術(shù)培訓(xùn)，包括實(shí)驗(yàn)室設(shè)施、設(shè)備、個(gè)人防護(hù)、實(shí)驗(yàn)操作等培訓(xùn)。同時(shí)，必須熟悉和嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室的管理要求。SARS病毒實(shí)驗(yàn)操作人員風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別與控制明細(xì)表見(jiàn)表8-19.表8-19SARS病毒實(shí)驗(yàn)操作人員風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別與控制措施潛在風(fēng)險(xiǎn)因素發(fā)生可能性后果嚴(yán)重性控制措施實(shí)驗(yàn)人員技術(shù)水平技術(shù)培訓(xùn)不足或操作不熟練導(dǎo)致誤操作低嚴(yán)重實(shí)驗(yàn)人員需接受相關(guān)技術(shù)培訓(xùn)并考核合格后方能上崗，定期進(jìn)行相關(guān)培訓(xùn)及演練人員健康水平實(shí)驗(yàn)人員身體狀況不佳或患有基礎(chǔ)疾病低中實(shí)驗(yàn)室工作人員每年參加體檢，預(yù)留本底血清標(biāo)本；實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入BSL-3實(shí)驗(yàn)室前需測(cè)量體溫，體溫高于37℃者不能進(jìn)入未經(jīng)授權(quán)人員未經(jīng)授權(quán)人員進(jìn)入BSL-3實(shí)驗(yàn)室低嚴(yán)重進(jìn)入BSL-3實(shí)驗(yàn)室須得到相關(guān)部門(mén)和實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人的批準(zhǔn)，應(yīng)詳細(xì)登記出入時(shí)間，并保證2名以上的人員同時(shí)進(jìn)入（四）意外事件、事故帶來(lái)的風(fēng)險(xiǎn)SARS冠狀病毒實(shí)驗(yàn)的安全防護(hù)重點(diǎn)是實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中盡量減少氣溶膠的產(chǎn)生和相關(guān)人員的呼吸道的保護(hù)，如佩戴N95口罩等，防止通過(guò)吸入氣溶膠而感染。1.臨床標(biāo)本的處理對(duì)疑似SARS冠狀病毒感染的病人的咽拭子、肺組織和血液標(biāo)本，這些標(biāo)本當(dāng)中有可能含活病毒，但濃度不詳。對(duì)此類臨床標(biāo)本的操作都必須在實(shí)驗(yàn)室生物安全柜內(nèi)操作，實(shí)驗(yàn)操作人員按三級(jí)防護(hù)級(jí)別進(jìn)行個(gè)體防護(hù)。2.涉及活病毒的操作涉及活病毒的操作是指如病毒分離、組織培養(yǎng)、TCID50測(cè)定、中和試驗(yàn)、間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)等，以及SARS冠狀病毒抗原、抗體檢測(cè)前，對(duì)血清進(jìn)行56℃水浴90min滅活處理，以及SARS冠狀病毒電鏡標(biāo)本制作，超薄切片標(biāo)本甲醛、鋨酸固定前的實(shí)驗(yàn)。此類實(shí)驗(yàn)必須在生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室的生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)操作人員按三級(jí)防護(hù)級(jí)別進(jìn)行個(gè)人防護(hù)。3.已滅活的病毒或標(biāo)本的操作已滅活的病毒或血清標(biāo)本等用于病毒特異性核酸、抗原、抗體檢測(cè)和電鏡切片的觀察實(shí)驗(yàn)時(shí)，可在BSL-2實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行操作。實(shí)驗(yàn)操作人員按二級(jí)防護(hù)級(jí)盡量使用塑料材質(zhì)的實(shí)驗(yàn)物品，避免使用尖銳物品和利器。必須使用時(shí)應(yīng)倒放在耐扎的容器內(nèi)，使用后收集在特定的帶蓋的銳器容器內(nèi)保存至最后作消毒處理或銷毀。禁止將使用后的一次性針頭重新套上針頭套。嚴(yán)格禁止用手直接接觸使用后的針頭、刀片等銳器。禁止徒手處理破損或打碎的玻璃器材。對(duì)于實(shí)驗(yàn)室的臺(tái)面，應(yīng)當(dāng)對(duì)其銳角進(jìn)行處理，如加裝桌角保護(hù)器或?qū)ψ澜沁M(jìn)行打磨等，使桌角保持光滑，避免割傷皮膚。4.實(shí)驗(yàn)室操作后的消毒措施涉及臨床標(biāo)本和活病毒的實(shí)驗(yàn)操作，在實(shí)驗(yàn)完畢后用含0.5％有效氯的次氯酸鈉消毒劑溶液擦拭工作臺(tái)面、生物安全柜內(nèi)壁及臺(tái)面，實(shí)驗(yàn)器材表面用70％酒精擦拭后移出生物安全柜。廢棄物在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)121℃高壓處理30min后才允許運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室。在BSL-2實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行核酸擴(kuò)增、抗體檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)時(shí)，為了確保安全，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生的廢液和使用過(guò)的耗材等都必須用含10％有效氯的次氯酸鈉消毒液浸泡30min后，才允許運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室，并存放在指定的存放點(diǎn)進(jìn)行集中處理。5.標(biāo)本接種處理量的控制出于安全考慮以及便于操作，如果處理臨床標(biāo)本以備接種，每次操作的標(biāo)本不應(yīng)超過(guò)20份。如果處理經(jīng)過(guò)擴(kuò)增后的標(biāo)本，病毒的原始容積≤2.5mL/份時(shí)，每次操作的標(biāo)本不能超過(guò)10份；2.5～10.5mL/份時(shí)，每次實(shí)驗(yàn)的標(biāo)本不能超過(guò)5份；＞10.5mL/份時(shí)，每次操作的標(biāo)本不能超過(guò)3份。（五）其他風(fēng)險(xiǎn)控制其他風(fēng)險(xiǎn)主要包括對(duì)化學(xué)、物理、輻射、電器和水災(zāi)、火災(zāi)等自然災(zāi)害等的引起的風(fēng)險(xiǎn)。1.化學(xué)風(fēng)險(xiǎn)應(yīng)熟知實(shí)驗(yàn)涉及的試劑的化學(xué)品安全說(shuō)明書(shū)（MSDS），本實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可能接觸免疫學(xué)檢測(cè)中的酸、堿，抗原片制備過(guò)程中的固定試劑，遠(yuǎn)離火源，通風(fēng)良好，應(yīng)注意操作輕緩，防止濺落而接觸皮膚。如發(fā)生皮膚接觸，應(yīng)停止實(shí)驗(yàn)，在做好緊急處置后，撤離實(shí)驗(yàn)區(qū)，用大量水沖洗，如有需要應(yīng)就醫(yī)。2.物理風(fēng)險(xiǎn)如破損器皿的刺傷