丁型肝炎病毒實驗活動風(fēng)險評估報告

丁型肝炎病毒實驗活動風(fēng)險評估報告一、生物學(xué)特性（一）種類和病毒分型丁型肝炎病毒(HepatitisDvirus,HDV）為球形，直徑35-37nm,有包膜，但包膜蛋白并非為HDV的基因產(chǎn)物，而是由HBV編碼產(chǎn)生的HBsAg。核心含單股負(fù)鏈共價閉合的環(huán)狀RNA和HDV抗原(HDAg)，其外包以HBV的HBsAg。經(jīng)核酸分子雜交技術(shù)證明，HDVRNA與HBVDNA無同源性，也不是宿主細(xì)胞的RNA。HDVRNA的分子量很小，只有5.5×IO5，是已知動物病毒中最小的基因組，這決定了HDV的缺陷性，即不能獨立復(fù)制增殖。HDAg具有較好的抗原特異性。感染HDV后，血液中可出現(xiàn)抗-HD。目前，已知HDV只有一個血清型。（二）來源1977年，意大利學(xué)者Rizzetto用免疫熒光法在慢性乙型肝炎病人的肝細(xì)胞核內(nèi)發(fā)現(xiàn)一種新的病毒抗原，并稱為δ因子。它是一種缺陷病毒，必須在HBV或其他嗜肝DNA病毒的輔助下才能復(fù)制增殖，現(xiàn)已正式命名為HDV。目前，HDV的病毒分類學(xué)地位尚未確定。（三）傳染源急、慢性丁型肝炎患者和HDV攜帶者是HDV的傳染源。（四）傳播途徑HDV的傳播途徑與HBV相同，主要是血源性傳播。此外，日常生活密切接觸、受損的皮膚或黏膜暴露于含有HDV的體液、開放性傷口、性交、針刺等也可傳播。在衛(wèi)生條件較差的農(nóng)村，HDV傳播較迅速。（五）易感性人群普遍易感，藥癮者及多次受血者為高危人群。（六）潛伏期HDV的潛伏期一般情況下為4-20周。（七）劑量一效應(yīng)關(guān)系目前尚未見有HDV對人準(zhǔn)確感染劑量的報道。HDV的感染主要與暴露途徑和感染方式密切相關(guān)。（八）致病性HDV有高度的傳染性及很強的致病力。HDV感染可直接造成肝細(xì)胞損害，丁肝的臨床表現(xiàn)與其感染方式有關(guān)。1．丁肝病毒與乙肝病毒同時感染，將可能出現(xiàn)下列兩種情形(l)急性丁肝病毒相關(guān)肝炎其臨床及生化特點與單純乙肝相似，癥狀較輕，肝組織損害不十分嚴(yán)重。(2)暴發(fā)型肝炎臨床癥狀及肝損害嚴(yán)重，病死率高。這是因為急性乙肝病毒血癥時間延長，乙肝病毒復(fù)制增多，為丁肝病毒復(fù)制提供了良好的條件。2．重疊感染丁肝病毒(1)自限性肝炎一般臨床癥狀不嚴(yán)重，病程較短，有自限和恢復(fù)的傾向。乙肝表面抗原攜帶者是丁肝病毒攻擊的目標(biāo)。(2)慢性進(jìn)行性丁型肝炎即從慢性乙型肝炎惡化或無癥狀的乙肝病毒攜帶演變?yōu)檫M(jìn)行性活動性肝炎，病情嚴(yán)重，呈進(jìn)行性發(fā)展?？砂l(fā)展為肝硬化，預(yù)后差。（九）變異性HDAg具有較好的抗原特異性。感染HDV后，血液中可出現(xiàn)抗-HD。目前，已知HDV只有一個血清型，尚未見有關(guān)HDV變異的報道。（十）環(huán)境中的穩(wěn)定性因HBV是HDV存在的基礎(chǔ)，所以消滅HBV的同時也就消滅了HDV。（十一）藥物敏感性至今對HDV尚無滿意的治療藥物。國外曾有應(yīng)用基因重組的干擾素α治療慢性HDV/HBV感染的案例，劑量非常高，達(dá)9×lO6U，每周肌內(nèi)注射3次，12個月為一個療程，可持續(xù)緩解50%的病人的生化異常，HDVRNA受抑制。除此之外，肝組織病理學(xué)也得到改善。但是遠(yuǎn)期療效還是很難鞏固。干擾素與其他抗病毒制劑聯(lián)合應(yīng)用也不能提高療效。曾有報告用膦甲酸治療HDV／HBV同時感染引起的急性重型肝炎，8例Ⅱ度以上肝性腦病的患者予l60m/(kg?d)治療12-14d有6例存活，但對慢性HDV／HBV肝炎的療效尚難肯定。（十二）消毒劑敏感性因HBV是HDV存在的基礎(chǔ)，所以消滅HBV的同時也就消滅了HDV。HBV對外界的抵抗力較強，對一般化學(xué)消毒劑耐受，不被7O%乙醇滅活。因此，這一常用的消毒方法并不能用于HBV的消毒。環(huán)氧乙烷可滅活HBV，O.5%過氧乙酸、5%次氯酸鈉和3%漂白粉也可用于消毒。（十三）物理滅活高壓滅菌法、1O0℃加熱lOmin可滅活HBV，而紫外線、低溫、干燥均不適用于HBV的滅活。消滅HBV的同時也就消滅了HDV。（十四）在宿主體外存活因HBV是HDV存在的基礎(chǔ)，而HBV對外界的抵抗力較強，對低溫、干燥、紫外線和一般化學(xué)消毒劑均耐受。HBV通常在37℃下能穩(wěn)定60分鐘，一般的化學(xué)消毒劑或加熱到60℃4小時均不能將其消滅，在20℃貯存20年以上仍具有抗原性及傳染性。將HBsAg陽性的血清涂于塑料貼面、鉛片、布片上，在25℃的條件下，2個星期后滴度基本保持不變，在6℃條件下，1個月內(nèi)滴度不變。HBsAg陽性的血清傳染唾液和尿液后，其滴度在25℃下可維持l星期，6℃條件下可維持40天。（十五）與其他生物和環(huán)境的交互作用HDV是一種缺陷病毒，HBV是其存在的基礎(chǔ)。所以乙型肝炎患者或HBV攜帶者都是HDV攻擊的目標(biāo)，尤其是急性乙型肝炎，其病毒血癥時間延長，HBV復(fù)制增多，為HDV復(fù)制提供了良好的條件。這種重疊感染?？蓪?dǎo)致原有的乙型肝炎病情加重或惡化，易于發(fā)展成重型肝炎，故在發(fā)現(xiàn)重癥肝炎時，應(yīng)注意是否存在HBV與HDV的重疊感染。（十六）預(yù)防和治療方案1．預(yù)防措施切斷HDV的傳播途徑是主要預(yù)防措施之一，如盡量避免反復(fù)輸血或使用血制品，戒除藥癮，注射器、針頭與針灸針進(jìn)行嚴(yán)格的消毒，認(rèn)真做好病人的早期診斷與隔離，對患者的排泄物與用品進(jìn)行消毒等。此外，防止醫(yī)源性傳播對本病的預(yù)防也甚重要。接種HBV疫苗也可預(yù)防HDV感染。2．治療措施迄今為止，對HDV感染尚無特效治療藥物。有報道，長療程的干擾素治療可改善患者的癥狀。二、實驗室相關(guān)活動風(fēng)險評估與控制（一）實驗室感染性因子的種類、來源和危害1．感染性因子的種類本實驗室可能的感染因子為HDV本身。2．感染性園子的來源(l)用于HDV抗原抗體檢測的血液樣本。(2)樣本采集與檢測過程中涉及的所有實驗場所。(3)實驗室操作中可能產(chǎn)生的含病毒的氣溶膠。3．感染性因子可能造成的危害(l)被污染的實驗器材、器皿等對實驗室環(huán)境造成污染。(2)實驗室廢棄物對環(huán)境造成污染。(3)實驗人員暴露后感染。(4)實驗室含病毒的氣溶膠對實驗室環(huán)境造成污染。（二）實驗室常規(guī)活動過程中的風(fēng)險評估與控制1．實驗方法(1)風(fēng)險點識別若采用國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)之外的其他未經(jīng)確認(rèn)的實驗方法，或在使用國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)之前米進(jìn)行技術(shù)確認(rèn)，操作時可能存在安全風(fēng)險。(2)風(fēng)險控制措施盡量采用國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或經(jīng)過充分驗證的實驗方法；在使用新的或變更過的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)之前，必須經(jīng)過嚴(yán)格的技術(shù)確認(rèn)。2．樣本采集(l)所用器材一次性采血針、真空采血管、消毒棉簽及一次性利器盒。(2)風(fēng)險點識別①采血過程中若被丁型肝炎患者或無癥狀攜帶者的血液污染了皮膚、黏膜，或被含有HDV的血液污染了的針頭刺破皮膚，在抗-HBs陰性的情況下有被HDV感染的風(fēng)險。②血液標(biāo)本濺灑出來可能造成人員或環(huán)境污染。(3)風(fēng)險控制措施采血前做好個人防護(hù)，穿戴防護(hù)服、口罩、帽子、雙層乳膠手套；抽血前檢查針管的密閉性，用過的針頭直接放入利器盒內(nèi)，禁止用手直接接觸使川后的針頭或?qū)⑹褂煤蟮尼橆^重新套上針頭套；采血管用真空抗凝管，采好血后直立于試管架中，防止倒翻；消毒棉簽等污染物放入醫(yī)療廢棄物專用袋中，統(tǒng)一進(jìn)行消毒處理。3．樣本的包裝和運輸(1)所用器材真空采血管、95千帕樣品運輸罐、B類標(biāo)本運輸箱（UN3373冷藏箱），運送車輛。(2)風(fēng)險點識別若使用不合格包裝進(jìn)行運輸、容器密封不嚴(yán)，則將不能安全有效地防止運輸過程中包裝容器意外破損，從而產(chǎn)生污染擴散的可能。(3)風(fēng)險控制措施嚴(yán)格按照生物安全的要求，采用三層容器包裝。第一層采用真空采血管裝樣本，應(yīng)密閉防滲漏；第二層采用95千帕樣品運輸罐，可容納并保護(hù)第一層容器，密封不易破碎、耐壓力防滲漏且易消毒；第三層采用B類標(biāo)本運輸箱，要容納并保護(hù)、固定第二層容器，且易于消毒。樣本應(yīng)由中心專車運回實驗室。4．樣本接收(1)風(fēng)險點識別如果在運輸途中發(fā)生樣本管破裂、血液溢漏，則可能對樣本接收人員造成污染。(2)風(fēng)險控制措施樣本直接送至實驗室，由專業(yè)檢驗人員接收，接收樣本前做好個人防護(hù)，穿戴好防護(hù)服、帽子、口罩、雙層乳膠手套。若有樣本管破裂，則立即在生物安全柜內(nèi)將尚存留的樣本移出，廢棄物放入帶蓋的防刺破的塑料罐中，被污染的容器用0.5％過氧乙酸等消毒液浸泡后再清洗。5．樣品檢測(1)所用器材離心機、生物安全柜、移液器、洗板機及酶標(biāo)儀等設(shè)備。(2)風(fēng)險點識別①離心過程中離心管破裂造成離心機污染。②操作過程中血液樣本濺灑，從而造成人員或臺面、地面等環(huán)境污染。③板、讀板時液體濺出從而污染設(shè)備表面或工作臺面。(3)風(fēng)險控制措施所有檢測操作均在BSL-2實驗室中進(jìn)行，檢測人員在實驗前按照二級生物安全防護(hù)要求做好個人防護(hù)；加樣移液操作在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，動作輕緩；判讀結(jié)果時酶標(biāo)板輕拿輕放，避免液體濺出；待實驗完畢，先消毒手部，再脫去手套并立即洗手；若有意外情況發(fā)生，應(yīng)及時采取有效措施。6．陽性樣本保存(1)所用器材生物安全柜、移液器、帶螺旋蓋的塑料管及可密封的塑料凍存盒。(2)風(fēng)險點識別若HDAg陽性或抗-HDVIgM陽性樣本保存不當(dāng)，則易造成人員或環(huán)境污染。(3)風(fēng)險控制措施按照二級生物安全防護(hù)要求做好個人防護(hù)；樣本的保留在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，動作要輕緩；所有樣本的血清或血漿都保留在帶螺旋蓋的塑料管內(nèi)，再裝入可密封的塑料凍存盒中，置于-20℃以下冰箱內(nèi)保存，嚴(yán)格實行雙人雙鎖管理。7．實驗室的清潔和消毒（1)風(fēng)險點識別工作完畢后，若不及時對工作臺面、生物安全柜等進(jìn)行消毒，則存在實驗室環(huán)境污染或人員感染的風(fēng)險。(2)風(fēng)險控制措施工作完畢后，及時對檢測所涉及的工作臺而及地面用l0O倍稀釋的施康清洗消毒液I擦拭，用消毒液擦拭后要干燥20min以上；生物安全柜用70%-75%的酒精擦拭消毒。待實驗和消毒完畢，先脫去手套，再脫去防護(hù)服，并正確使用肥皂和流水洗手。8．廢棄物處置(1)所用器材醫(yī)療廢棄物專用袋、硬質(zhì)耐高壓且防滲漏的垃圾桶、高壓滅菌器。(2)風(fēng)險點識別剩余的陽性樣本管是很大的污染源，若采血過的針頭處理不當(dāng)，則易造成人員被刺傷，甚至感染HDV的風(fēng)險。(3)風(fēng)險控制措施實驗過程中產(chǎn)生的所有感染性廢棄物，包括不再需要的剩余樣本、酶標(biāo)反應(yīng)板、移液頭等所有實驗過程涉及的用品，需置于裝有醫(yī)療廢棄物專用袋的硬質(zhì)耐高壓且防滲漏的垃圾桶中，經(jīng)121℃高壓滅菌l5-20min后才可運出實驗室；針頭、破碎玻璃等損傷性廢棄物必須放入利器盒，利器盒嚴(yán)禁再次打開，裝滿針頭等利器的一次性利器盒嚴(yán)禁再次打開，須密封好后，同上述垃圾一起處理。所有處理完畢的廢棄物集中存放，由有資質(zhì)的醫(yī)療廢棄物處理單位上門收集，集中處置。同時，做好交接記錄，所有相關(guān)記錄定期整理歸檔。（三）實驗室常規(guī)活動中其他風(fēng)險評估與預(yù)防控制措施1．電力(l)風(fēng)險點識別若實驗室沒有布置雙路供電，或電力供應(yīng)不穩(wěn)定，則有可能造成實驗活動突然中斷、實驗設(shè)備停止工作等所帶來的相關(guān)安全風(fēng)險。(2)預(yù)防控制措施實驗室盡量要布置雙路供電，沒有布置雙路供電的應(yīng)配置備用電源，以確保高壓滅菌器、生物安全柜等重要設(shè)備的安全運行。2．電氣操作(l)風(fēng)險點識別實驗室活動涉及的電氣操作，包括實驗室工作區(qū)內(nèi)電氣設(shè)備的啟動、關(guān)閉、安裝和維修；設(shè)備層內(nèi)UPS、空調(diào)機組等電氣設(shè)備的啟動、關(guān)閉和維修等。這些電氣操作的過程可能存在觸電、電擊、電氣故障等風(fēng)險。(2)預(yù)防控制措施①電氣設(shè)備的設(shè)計及制造符合相關(guān)安全標(biāo)準(zhǔn)的要求。實驗室T作區(qū)內(nèi)若有380V電源插座，則需明確標(biāo)識，并由有資質(zhì)的專業(yè)人員進(jìn)行操作。②新的、改裝過的或修理過的電氣設(shè)備在未經(jīng)專業(yè)人員（如有資質(zhì)的電工）完成電氣安全測試和設(shè)備符合安全使用要求之前，不允許使用。③電氣設(shè)備使用人員接受正確操作的培訓(xùn)，操作方式不降低電氣安全性。電氣設(shè)備使用人員要定期檢查設(shè)備可能引起電氣故障的破損。只有專業(yè)人員可從事電氣設(shè)備和電路工作。禁止未經(jīng)授權(quán)的工作。④采取措施對設(shè)備去污染，以降低維護(hù)人員感染的風(fēng)險。3．實驗室給排水設(shè)施設(shè)備(l)風(fēng)險點識別實驗室含有給排水的設(shè)施設(shè)備，包括位于工作區(qū)和洗消區(qū)的高壓滅菌器和洗滌池。當(dāng)管道意外破裂、排水管道阻塞時，感染性材料可能溢出，有污染實驗人員和環(huán)境的風(fēng)險。(2)預(yù)防控制措施實驗室產(chǎn)生的所有染菌物及器具，必須先經(jīng)高壓滅菌或含氯消毒劑浸泡消毒后洗滌，產(chǎn)生的污水集中排入中心污水池進(jìn)行消毒處理，嚴(yán)禁直接排放。按照GB18466要求，監(jiān)測總余氯、糞大腸菌群及其他致病菌。4．實驗室設(shè)施設(shè)備管道(l)風(fēng)險點識別實驗室設(shè)施設(shè)備管道穿越維護(hù)結(jié)構(gòu)的部位可能存在密封不嚴(yán)的問題，當(dāng)感染性材料溢出時，有污染環(huán)境的風(fēng)險。(2)預(yù)防控制措施所有管道穿越維護(hù)結(jié)構(gòu)的部位應(yīng)嚴(yán)格密封，定期進(jìn)行檢查，避免感染性材料外溢從而污染環(huán)境。5．主要檢測儀器設(shè)備(l)離心機①風(fēng)險點識別在分離血清的過程中，若沒有做好平衡，則可能會發(fā)生離心管破裂、離心管蓋脫落、離心轉(zhuǎn)子和離心腔被污染的風(fēng)險。②預(yù)防控制措施離心時配備耐離心壓力的且?guī)菪苌w的離心管，離心前做好平衡，選擇正確的離心速度和離心力；規(guī)范正確操作，定期維護(hù)，確保離心機性能正常；每次使用后做好清潔消毒和使用記錄，定期進(jìn)行功能檢查。(2)酶標(biāo)儀和洗板機①風(fēng)險點識別在使用酶標(biāo)儀和洗板機的過程中，可能會存在陽性對照或在測樣品污染設(shè)備表面和工作臺面的風(fēng)險。②預(yù)防控制措施酶標(biāo)儀每年強檢一次，中途再做一次期間核查；洗板機每年進(jìn)行一次功能檢查；在洗板、讀板時，要做到動作輕緩，小心操作；倘若有液體濺出，要馬上進(jìn)行消毒處理。6．生物安全設(shè)施設(shè)備(l)生物安全柜①風(fēng)險點識別若不按照安全柜操作規(guī)程進(jìn)行操作、維護(hù)與檢測，則其防護(hù)屏障效果會明顯降低，甚至消失，失去安全防護(hù)效果；若長時間使用或未及時更換HEPA過濾膜，則會使其功能喪失，造成工作窗口氣流速度降低或流向紊亂；使用后若不徹底消毒處理，則對于清潔、維護(hù)人員將會產(chǎn)生污染。②預(yù)防控制措施正確選配生物安全柜，操作人員應(yīng)接受相關(guān)的操作、維護(hù)培訓(xùn)，日常操作和維護(hù)嚴(yán)格按照設(shè)備操作規(guī)程或使用說明書進(jìn)行；每年請有檢測資質(zhì)的服務(wù)機構(gòu)對生物安全柜進(jìn)行風(fēng)速、氣流、塵埃粒子、紫外線強度等關(guān)鍵要素的檢測，確保其性能正常；一旦造成污染，應(yīng)及時進(jìn)行消毒處理。(2)高壓滅菌器①風(fēng)險點識別若不按照高壓滅菌器操作規(guī)程進(jìn)行操作、維護(hù)，則其效果會明顯降低，甚至失效，失去去污染與無害化的作用；若長時間使用又不定期檢測滅菌效果，對其滅菌效果無從考證，則可能產(chǎn)生功能缺損，存在滅菌不徹底從而引起污染的隱患；在長期關(guān)停期間，若內(nèi)部水分不及時排干，將會使內(nèi)部器件老化從而失去正常功能；②預(yù)防控制措施采用下排式高壓滅菌器，防止氣溶膠污染；規(guī)范操作，定期維護(hù)，確保高壓滅菌器性能正常；定期檢定、核查，做好使用記錄，持證上崗；日常進(jìn)行滅菌效果監(jiān)測，以保證滅菌質(zhì)量。(3)個人防護(hù)用品①風(fēng)險點識別個人防護(hù)用品若穿戴不規(guī)范、大小不合適或使用過期的防護(hù)用品等將會導(dǎo)致防護(hù)效果降低，甚至失效。②預(yù)防控制措施進(jìn)行HDV血清學(xué)相關(guān)操作時要按二級生物安全防護(hù)水平進(jìn)行個人防護(hù)，必須選擇大小合適、有效的防護(hù)用品，穿戴時相互檢查確認(rèn)，避免使用有破損、缺陷和過期的防護(hù)用品。(4)應(yīng)急救治設(shè)施和用品①風(fēng)險點識別若實驗室沒有配備洗眼器、應(yīng)急藥箱等必要的應(yīng)急設(shè)施和物品，或配備的急救用品種類不全、不合適或過期，則導(dǎo)致急用時無法發(fā)揮作用。②預(yù)防控制措施在實驗室內(nèi)正確配備洗眼器，確保功能正常。配備的75%乙醇、碘伏或其他消毒劑、創(chuàng)可貼等急救物品與實驗活動相適應(yīng)，并在有效期內(nèi)使用，由專人負(fù)責(zé)管理，定期維護(hù)、清理和更新。(5)消毒滅菌劑①風(fēng)險點識別消毒產(chǎn)品無生產(chǎn)許可證、過期、配制方法或濃度不正確、種類選擇不合理，都將會導(dǎo)致消毒效果降低、生物滅活能力降低、或?qū)ξ锲犯g性增加、對皮膚造成刺激等問題。②預(yù)防控制措施選擇符合國家標(biāo)準(zhǔn)的正規(guī)廠家生產(chǎn)的產(chǎn)品，選擇合適的消毒劑，按照規(guī)定的消毒方法、消毒時間、消毒濃度（劑量）進(jìn)行消毒，避免使用過期產(chǎn)品；消毒過程中消毒人員應(yīng)做好必要的個人防護(hù)，防止發(fā)生意外。根據(jù)HDV對不同消毒劑的敏感性，本實驗室選用施康消毒劑I（主要成分為次氯酸鈉）、碘伏、漂白粉等作為常用消毒劑。7．管理體系的風(fēng)險(1)風(fēng)險點識別管理體系（包括應(yīng)急預(yù)案）、程序文件、作業(yè)指導(dǎo)書和操作規(guī)程都是確保生物安全的主要因素。如果組織結(jié)構(gòu)不健全、設(shè)置不合理，體系文件與實際工作不匹配，以及部門職責(zé)不清或銜接不當(dāng)?shù)?，就都可能帶來安全風(fēng)險。(2)預(yù)防控制措施定期開展對管理體系的評審，發(fā)現(xiàn)問題及時修訂、完善，以確保生物安全管理體系持續(xù)有效地運行。（四）工作人員的風(fēng)險評估與預(yù)防控制措施1．風(fēng)險點識別(1)人員數(shù)量人員過少會因缺少相互提示或因工作量增大而導(dǎo)致操作過程中工作失誤增加，風(fēng)險增加。(2)人員結(jié)構(gòu)及資質(zhì)新進(jìn)人員若沒有高資歷人員帶教操作，則不能很好地處理意外事件，風(fēng)險會增加。實驗人員不熟悉實驗檢測方法及操作規(guī)范，在進(jìn)行實驗前未進(jìn)行相關(guān)的專業(yè)知識培訓(xùn)，無法保證工作質(zhì)量和安全。(3)職業(yè)操守責(zé)任心不強的人員參與該項工作，產(chǎn)生生物危害而危及人員安全、環(huán)境安全與社會安定的可能性較大。(4)健康管理健康狀況主要包括生理、心理素質(zhì)與免疫狀態(tài)。當(dāng)身體出現(xiàn)腹瀉等胃腸道癥狀、手部皮膚有開放性損傷或其他不適合工作的情況，職業(yè)暴露風(fēng)險會增加。(5)生物安全培訓(xùn)及應(yīng)急事件處理能力工作人員上崗前沒有接受嚴(yán)格的生物安全，以及相關(guān)生物安全設(shè)備操作的技術(shù)培訓(xùn)，易造成生物安全事故的發(fā)生。上崗后沒有接受實驗室突發(fā)事件處理的培訓(xùn)，一旦發(fā)生意外事件，就不能有效地進(jìn)行早期處理和控制生物安全事件。2．預(yù)防控制措施(l)人員數(shù)量盡量有2名工作人員同時進(jìn)行采樣、檢測或有質(zhì)量監(jiān)督員對關(guān)鍵步驟進(jìn)行監(jiān)督。(2)人員結(jié)構(gòu)及資質(zhì)實驗室檢測人員的年齡和資歷結(jié)構(gòu)應(yīng)配備合理，新進(jìn)人員應(yīng)南高資歷人員帶教或監(jiān)督操作。檢測技術(shù)人員需經(jīng)過上崗培訓(xùn)和在崗持續(xù)培訓(xùn)。要求掌握相關(guān)專業(yè)知識和技能，能獨立熟練地操作，并經(jīng)考核合格，持證上崗。(3)職業(yè)操守加強職業(yè)道德教育，培養(yǎng)工作責(zé)任心。(4)健康管理建立健康申報制度，遇有手部皮膚有開放性傷口及其他不適合工作的情況，應(yīng)及時向科室負(fù)責(zé)人報告并暫停工作；裸露皮膚的微小傷口、擦傷、皸裂等應(yīng)用防水材料嚴(yán)密覆蓋。(5)生物安全培訓(xùn)及應(yīng)急事件處理能力檢測人員必須接受上崗前培訓(xùn)和復(fù)訓(xùn)，每年參加本中心組織的生物安全知識或生物安全操作技術(shù)培訓(xùn)、考核。實驗室工作人員必須嚴(yán)格按照《實驗室意外事故和職業(yè)性疾病報告制度》和《病原微生物生物安全應(yīng)急處置技術(shù)方案》中規(guī)定的要求進(jìn)行應(yīng)急事件的處置，強化職業(yè)暴露的應(yīng)急處理能力，規(guī)范工作中職業(yè)暴露后現(xiàn)場急救處理辦法。（五）實驗室非常規(guī)活動中的風(fēng)險評估與預(yù)防控制措施1．實驗室主要的非常規(guī)活動(l)檢測外專業(yè)人員對實驗室設(shè)施設(shè)備的維護(hù)、維修、檢測驗證（如主要設(shè)施設(shè)備的檢測驗證）和更換（如高效過濾器等的更換）。(2)實驗室后勤保障人員對實驗室及公共環(huán)境的保潔、實驗器材洗刷消毒。(3)外部人員來實驗室參觀及上級部門對實驗室的檢查。(4)任何其他人員需要進(jìn)入實驗室從事實驗活動以外的行為（如發(fā)生火災(zāi)、水災(zāi)時消防人員、急救人員的進(jìn)入）。2．風(fēng)險點識別(l)進(jìn)入實驗室可能會引起實驗室感染，特別是在不慎打翻、打破血管或損壞儀器部件的情況下。(2)實驗室運行過程中，某些人員需要進(jìn)入實驗室參觀，存在影響實驗室正常運行的風(fēng)險。3．預(yù)防控制措施(l)實行人員準(zhǔn)入、登記制度。外部人員來進(jìn)行參觀或檢查前，應(yīng)對實驗室作徹底消毒；任何外來人員進(jìn)入實驗室時應(yīng)有實驗室人員全程陪同。(2)進(jìn)入人員絕對不能私自動用實驗室內(nèi)有標(biāo)志的危險品（除非經(jīng)過授權(quán)），絕不能將未經(jīng)消毒處理的物品拿出實驗區(qū)。(3)在實驗室進(jìn)行設(shè)施、設(shè)備維護(hù)維修過程中，若發(fā)生意外事件，應(yīng)立即報告實驗室負(fù)責(zé)人。實驗室負(fù)責(zé)人進(jìn)行風(fēng)險評估，并采取應(yīng)對措施。(4)對實驗室的設(shè)施、設(shè)備進(jìn)行維護(hù)維修工作時應(yīng)動作輕柔，避免產(chǎn)生氣溶膠。檢測維修后、離開實驗室前，必須洗手。（六）被誤用和惡意使用的風(fēng)險與預(yù)防控制措施1．風(fēng)險點識別若陽性標(biāo)本未明確標(biāo)識，未嚴(yán)格實行雙人雙鎖管理，實驗活動結(jié)束后不及時消毒操作場所，其他工作人員在不知情的情況下可能誤用標(biāo)本、實驗材料和設(shè)施設(shè)備等，導(dǎo)致人員感染和實驗室環(huán)境污染等。2．預(yù)防控制措施(1)實行嚴(yán)格的人員準(zhǔn)入和持證上崗制度。(2)所有獲得批準(zhǔn)進(jìn)入實驗室工作的人員，必須嚴(yán)格按規(guī)程操作實驗材料和設(shè)施設(shè)備。(3)發(fā)生事故時必須及時報告并作必要的處理和記錄。(4)實驗所用材料和試劑等必須有明確的標(biāo)識。(5)陽性標(biāo)本嚴(yán)格實施雙人雙鎖管理。（七）相關(guān)實驗室已發(fā)生的事故分析和從中得到的啟示目前，因HDV檢測明確引起實驗室人員感染的相關(guān)報道很少，但是因為它與HBV有相似的傳播途徑，主要經(jīng)血液傳播，所以也容易導(dǎo)致實驗室感染。若實驗人員為乙型肝炎患者或HBV攜帶者，則發(fā)生HDV實驗室感染的風(fēng)險更大。因此，工作人員應(yīng)嚴(yán)格遵守實驗室相關(guān)規(guī)定，務(wù)必做好個人防護(hù)和規(guī)范操作，降低和規(guī)避職業(yè)暴露風(fēng)險。三、實驗室理化因素風(fēng)險評估及安全防護(hù)措施（一）紫外線1．風(fēng)險點識別生物安全柜及二級生物安全實驗室均使用紫外線燈進(jìn)行物體表面消毒。紫外線波長為250-280nm，主要影響眼睛和皮膚，可引起急性角膜炎和結(jié)膜炎、慢性白內(nèi)障等眼部疾病，還可誘發(fā)皮膚癌。紫外線燈開啟時，人員在不知情的情況下進(jìn)入可受到傷害。2．安全防護(hù)措施在實驗室工作應(yīng)避免紫外線直接照射人體，特別是眼部。生物安全柜表面貼有紫外線危害的標(biāo)識。在進(jìn)行紫外線消毒時，實驗人員盡量遠(yuǎn)離消毒區(qū)域，基本可以規(guī)避紫外線對人體的危害。（二）輻射1．風(fēng)險點識別實驗室籌建選址時未對周圍輻射源進(jìn)行排查，使用含輻射的儀器時未嚴(yán)格管理，存在輻射源或輻射事故間接導(dǎo)致病原微生物屏障系統(tǒng)破壞的隱患。2．預(yù)防控制措施實驗室籌建選址時對周邊建筑群可能存在的輻射源進(jìn)行嚴(yán)格排查。（三）施康清洗消毒劑I1．風(fēng)險點識別施康清洗消毒劑I屬于含氯消毒劑，有效氯的含量為4.55%-5.55%，次氯酸鈉為主要殺菌因子。含氯的消毒液會殘留在空氣中不揮發(fā)，長期使用會使人感到頭疼、惡心。對于有過敏體質(zhì)的人，還容易引發(fā)過敏、哮喘等疾病。高濃度的含氯消毒劑對人的呼吸道黏膜和皮膚有明顯的刺激作用，可使人流淚、咳嗽，并刺激皮膚和黏膜，嚴(yán)重者可發(fā)生氯氣中毒。急性中毒者出現(xiàn)躁動、惡心、嘔吐、呼吸困難等癥狀，甚至因窒息而死。2．安全防護(hù)措施按照使用說明，根據(jù)消毒對象不同而配制不同的濃度，避免使用不必要的高濃度的消毒液，稀釋和使用時戴好手套，消毒后及時開窗通風(fēng)，基本可規(guī)避消毒液對人體的危害。（四）其他l．風(fēng)險點識別實驗室內(nèi)的照明和聲音（生物安全柜等）有可能因強光和噪聲對人員造成損害。2．安全防護(hù)措施對實驗室的照明和聲音等參數(shù)進(jìn)行檢測，確保合格，避免強光和噪聲對人員的損害。四、實驗室火災(zāi)風(fēng)險評估與預(yù)防控制措施1．風(fēng)險點識別(1)超負(fù)荷用電，電線過長。(2)電器和電源老化、電器保養(yǎng)不良，如電纜的絕緣層破舊或損壞。(3)用火不當(dāng)?shù)纫l(fā)火災(zāi)。(4)儀器設(shè)備在不使用時未關(guān)閉電源。(5)使用的儀器設(shè)備不是專為實驗室環(huán)境設(shè)計。(6)易燃、易爆品處理、保存不當(dāng)。(7)不相容化學(xué)品沒有正確隔離。(8)在易燃物品和蒸汽附近有能產(chǎn)生火花的設(shè)備。(9)通風(fēng)系統(tǒng)不當(dāng)或不充分。2．預(yù)防控制措施(1)定期檢查電器插座、電線絕緣層是否完好，保證用電負(fù)荷，對易燃、易爆等危險品進(jìn)行有效區(qū)域隔離。(2)實驗室配備滅火器。放置在易取的地點，擺放部位張貼滅火器標(biāo)志。該滅火器用于撲滅可控制的火災(zāi)，幫助人員撤離火場；對滅火器進(jìn)行定期檢查和維護(hù)，確保其有效使用。（3）實驗室需裝設(shè)應(yīng)急燈，所有出口都有黑暗中可見的“緊急出口”標(biāo)識；當(dāng)出現(xiàn)緊急狀況時，實驗室所有出口的鎖必須處于開啟狀態(tài)，出口設(shè)計應(yīng)保證不經(jīng)過高危險區(qū)域就能逃脫，所有出口都能通向一個開放空間。(4)走廊、流通區(qū)域不得放置障礙物，確保人員流動和滅火設(shè)備移動不受影響。(5)在實驗室工作區(qū)顯著位置張貼火警電話標(biāo)識。實驗室每年對工作人員進(jìn)行消防知識培訓(xùn)，包括消防器材的使用、火災(zāi)發(fā)生時的應(yīng)急行動等。五、自然災(zāi)害風(fēng)險評估與安全防護(hù)措施自然災(zāi)害可能導(dǎo)致的實驗室緊急狀況主要包括水災(zāi)和地震等。（一）水災(zāi)1．風(fēng)險點識別水災(zāi)可能導(dǎo)致實驗室維護(hù)結(jié)構(gòu)和設(shè)施損壞，實驗室內(nèi)感染性材料隨水外溢。2．安全防護(hù)措施(l)在安全手冊中制訂《實驗室緊急事件應(yīng)急預(yù)案》，并對所有實驗室人員進(jìn)行培訓(xùn)。(2)實驗室一旦發(fā)生水災(zāi)報警時，應(yīng)立刻停止工作。首先，考慮實驗室內(nèi)感染性物質(zhì)和人員的轉(zhuǎn)移。實驗室負(fù)責(zé)人、中心主任根據(jù)條件及時采取對策，第一時間聯(lián)系相關(guān)消防人員。消防人員應(yīng)有防護(hù)措施，并在受過訓(xùn)練的實驗室工作人員陪同下，進(jìn)入實驗室完成感染性物質(zhì)和人員的安全轉(zhuǎn)移工作。（二）地震1．風(fēng)險點識別發(fā)生地震等自然災(zāi)害會導(dǎo)致實驗室維護(hù)結(jié)構(gòu)和設(shè)施損壞，存在人員受傷和實驗室感染性材料外溢的風(fēng)險。2．風(fēng)險控制措施實驗室應(yīng)采取措施降低自然災(zāi)害帶來的風(fēng)險，保證災(zāi)害發(fā)生后能夠安全撤離實驗室，減少對人員和環(huán)境的影響。發(fā)生地震后，首先設(shè)立距實驗室維護(hù)結(jié)構(gòu)20m范圍內(nèi)的封鎖區(qū)。其次，對封鎖區(qū)進(jìn)行消毒，然后由專業(yè)人員在做好個人防護(hù)的前提下對實驗內(nèi)部環(huán)境邊消毒邊清理。如果保藏樣品的容器沒有被破壞，可把它安全轉(zhuǎn)移到其他安全的實驗室存放。如果保藏樣品的容器已被破壞和發(fā)生外溢，應(yīng)立即用可靠方法進(jìn)行徹底消毒滅菌。六、生物安全及其他緊急事件（事故）處理預(yù)案（一）實驗室生物安全事件（事故）處理措施(l)當(dāng)生物安全柜出現(xiàn)持續(xù)正壓時，應(yīng)立即停止操作，通知運行保障人員采取措施恢復(fù)負(fù)壓。如果不能及時恢復(fù)和保持負(fù)壓，應(yīng)停止實驗。發(fā)生此類事故或發(fā)生意外停電，造成具有傳染性物質(zhì)暴露潛在危險的事故和污染時，工作人員除了采取緊急措施外，還應(yīng)立即報告實驗室安全負(fù)責(zé)人，組織對實驗室進(jìn)行終末消毒。(2)對于離心過程中離心管破裂時，應(yīng)馬上關(guān)閉電源，讓離心機停止工作，并靜止30min。然后緩慢打開離心機蓋，將離心杯平穩(wěn)地拿到生物安全柜中。如果發(fā)生泄漏，用1%的次氯酸鈉消毒液灌入離心杯腔體中消毒30min，然后棄去消毒液和離心管碎片，將離心杯清洗后擦干。(3)發(fā)生污染物潑濺或溢出時，立即用清潔布或吸水紙覆蓋污染處，并倒上10-25倍稀釋的施康消毒液，作用至少30min，方可清理全部污染物，用消毒劑擦拭污染區(qū)域。所有這些操作過程中都應(yīng)戴手套。若發(fā)生大范圍污染物擴散事故時，應(yīng)立即通知實驗室主管領(lǐng)導(dǎo)和安全負(fù)責(zé)人到達(dá)事故現(xiàn)場。待其查清情況，確定消毒方案，并組織對實驗室進(jìn)行終末消毒。(4)若發(fā)生針頭刺傷或血液標(biāo)本濺灑，從而污染人員、器具或環(huán)境等，應(yīng)及時采取有效的消毒處理措施。①被采血針頭刺傷應(yīng)立即用肥皂和大量流水沖洗，盡可能擠出損傷處的血液，并用碘伏等有效消毒劑對傷口進(jìn)行消毒處理。②皮膚污染立即用肥皂和大量流水沖洗污染部位，并用碘伏或0.2%過氧乙酸等有效消毒劑進(jìn)行消毒處理。③黏膜污染用大量流水或生理鹽水沖洗污染部位。④物品污染耐煮沸的物品煮沸20min后清洗；對不能煮沸的衣服等物品可用1%漂白粉或0.5%過氧乙酸浸泡2h后再用清水洗滌。⑤地面、墻面等環(huán)境污染可用3%漂白粉或2%過氧乙酸噴霧或擦洗2次。（二）其他緊急事件（事故）處理措施在制訂的應(yīng)急預(yù)案中應(yīng)包括消防人員和其他緊急救助人員。應(yīng)事先告知他們哪些實驗室有潛在的感染性物質(zhì)，讓他們熟悉實驗室的布局和設(shè)備。在實驗室發(fā)生不可控制的火災(zāi)、水災(zāi)、爆炸或其他危險情況時，為確保工作人員的安全，要進(jìn)行緊急撤離。所有實驗室人員須了解緊急撤離的行動計劃、撤離路線和集合地點。（三）生物安全及其他緊急事件（事故）報告和記錄(l)發(fā)生生物安全及其他緊急事件時，在緊急處理的同時必須向中心主管領(lǐng)導(dǎo)和生物安全委員會報告。(2)對于生物安全事件必須進(jìn)行登記，記錄發(fā)生的時間、地點、詳細(xì)經(jīng)過及處理方法等。七、生物安全和生物安全保障風(fēng)險管理（一）生物安全風(fēng)險評估依據(jù)風(fēng)險評估所依據(jù)的數(shù)據(jù)及擬采取的風(fēng)險控制措施、安全操作規(guī)程等均應(yīng)以國家衛(wèi)生和計劃生育委員會、世界衛(wèi)生組織、國際標(biāo)準(zhǔn)化組織等機構(gòu)或行業(yè)權(quán)威機構(gòu)發(fā)布的指南、標(biāo)準(zhǔn)等為依據(jù)。（二）危險發(fā)生的概率評估(見表7-3)表7-3丁型肝炎病毒實驗活動危險發(fā)生的概率評估序號潛在危險因素危害程度發(fā)生概率固有風(fēng)險措施合理性殘留風(fēng)險風(fēng)險可控程度l樣本運輸過程中容器意外側(cè)翻、破裂導(dǎo)致樣本泄漏中度可能中度合理低風(fēng)險可控2樣本接收、開啟及加樣等常規(guī)實驗活動中產(chǎn)生氣溶膠中度較大可能中度合理低風(fēng)險可控3離心過程中樣本管破裂產(chǎn)生大量氣溶膠中度可能中度合理低風(fēng)險可控4檢測未經(jīng)滅活的樣本對儀器與環(huán)境造成污染中度較大可能中度合理低風(fēng)險可控5樣本、實驗材料及設(shè)施設(shè)備等被誤用中度較小可能中度合理低風(fēng)險可控6陽性樣本被惡意使用高度較小可能高度合理低風(fēng)險可控7廢棄物處理不當(dāng)造成病原微生物擴散中度可能中度合理低風(fēng)險可控8檢測人員及工勤人員破損的皮膚、黏膜接觸到血液樣本或被銳器刺傷等造成職業(yè)暴露高度可能高度合理低風(fēng)險可控9檢測人員個人防護(hù)不當(dāng)造成病原微生物擴散中度可能中度合理低風(fēng)險可控10非檢測人員、進(jìn)修實習(xí)等外來人員進(jìn)入實驗室的不當(dāng)操作造成病原微生物擴散中度可能中度合理低風(fēng)險可控11水、電、火災(zāi)或自然災(zāi)害造成病原微生物擴散中度較小可能中度合理低風(fēng)險不可控（三）風(fēng)險評估人員由中心主任組織檢驗科、質(zhì)量管理科及其他科室熟悉HDV檢驗相關(guān)風(fēng)險的專業(yè)人員進(jìn)行風(fēng)險評估并形成風(fēng)險評估報告。形成的風(fēng)險評估報告經(jīng)中心生物安全委員會審核，請省市熟悉相關(guān)病原微生物特征、實驗設(shè)施設(shè)備、操作規(guī)程及個體防護(hù)設(shè)備的不同領(lǐng)域的專家進(jìn)行評估和討論，不斷修訂完善。（四）風(fēng)險評估報告風(fēng)險評估報告應(yīng)是實驗室采取風(fēng)險控制措施、建立安全管理體系和制訂安全操作規(guī)程的依據(jù)。在記錄風(fēng)險評估的過程中，風(fēng)險評估報告應(yīng)注明評估時間、編審人員和所依據(jù)的法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)、研究報告、權(quán)威資料及數(shù)據(jù)等。定期進(jìn)行風(fēng)險評估或風(fēng)險評估報告復(fù)審，評估的周期應(yīng)根據(jù)實驗活動和風(fēng)險特征而確定。（五）需重新進(jìn)行風(fēng)險評估的情況(1)生物安全BSL-2實驗室改造前（或新建造前）和正式啟用前。(2)當(dāng)收集到的資料表明HDV的致病性或傳染方式發(fā)生變化時，應(yīng)對其背景資料及時變更，并對其實驗操作的安全性進(jìn)行重新評估。(3)開展新的實驗活動（增加新的項目）時，應(yīng)對該項目的實驗活動進(jìn)行再評估。(4)生物安全實驗室操作人員在進(jìn)行實驗活動中，發(fā)現(xiàn)有原評估報告中未涉及的隱患存在，或者在檢查過程中發(fā)現(xiàn)存在生物安全問題，應(yīng)進(jìn)行再評估。(5)在實驗活動中發(fā)現(xiàn)陽性標(biāo)本泄露或人員感染等意外事件或事故時，應(yīng)立即進(jìn)行再評估。(6)當(dāng)評估過的實驗活動（包括相關(guān)的設(shè)施、設(shè)備、人員、活動范圍、管理等）發(fā)生改變或者操作超出常規(guī)量，以及從事某些特殊活動時，應(yīng)該事先或重新進(jìn)行風(fēng)險評估。(7)相關(guān)政策、法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)等發(fā)生變化時需要風(fēng)險再評估。（六）對風(fēng)險、需求、資源、可行性、適用性等的綜合評估中心已對在生物安全二級實驗室所涉及的所有活動內(nèi)容進(jìn)行了全面的風(fēng)險評估，并根據(jù)風(fēng)險的內(nèi)容已逐項制訂了可行的、適用的防控措施。評估報告不僅適用于實驗室設(shè)施設(shè)備的常規(guī)運行期間，而且適用于實驗室設(shè)施設(shè)備進(jìn)行清潔、維護(hù)及關(guān)停期間。生物安全二級實驗室實驗活動中未涉及化學(xué)、物理、輻射等相關(guān)檢測和研究內(nèi)容，因此，不存在相應(yīng)的風(fēng)險。實驗室所在的地理位置海拔較高，建筑材料可抗六級地震，能夠抵抗水災(zāi)、地震等災(zāi)害。八、評估結(jié)論（一）危害等級《中華人民共和國傳染病防治法》規(guī)定，病毒性肝炎屬乙類傳染病，原衛(wèi)生部《人間傳染的病原微生物名錄》、WHO《實驗室生物安全手冊》規(guī)定，HDV危害程度為第三類、危險度等級為Ⅱ級。（二）實驗活動及生物安全防護(hù)水平原衛(wèi)生部《人間傳染的病原微生物名錄》規(guī)定丁肝動物感染實驗在ABSL-2實驗室進(jìn)行，病毒培養(yǎng)、未經(jīng)培養(yǎng)的感染材料的操作在BSL-2實驗室進(jìn)行，滅活材料的操作、無感染性材料的操作在BSL-l實驗室進(jìn)行。本實驗室主要進(jìn)行HDV抗原抗體的血清學(xué)檢測，從事未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料操作，實驗活動均在二級生物安全實驗室中進(jìn)行，采取了二級生物安全防護(hù)水平。實驗室配備的生物安全柜、高壓滅菌器等設(shè)備符合管理和檢測的要求，并嚴(yán)格按照規(guī)定的操作程序操作。本實驗室HDV檢測所依據(jù)的方法為WS300《丁型病毒性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)》。該方法為原衛(wèi)生部標(biāo)準(zhǔn)，在項目開展時經(jīng)過技術(shù)確認(rèn)，實驗方法風(fēng)險很小。（三）人員健康及素質(zhì)實驗人員及相關(guān)輔助人員在上崗前均經(jīng)過充分的生物安全、專業(yè)知識及操作技能的培訓(xùn)，考核合格后持證上崗。新上崗人員和進(jìn)修人員經(jīng)過培訓(xùn)，并在指導(dǎo)老師指導(dǎo)下從事檢測工作。（四）防治原則迄今為止，對HDV感染尚無特效治療藥物，但可通過接種HBV疫苗預(yù)防HDV感染。HDV的傳播途徑與HBV相同，主要是血源性傳播。此外，受損的皮膚或黏膜暴露于含有HDV的體液、開放性傷口、針刺等也可進(jìn)行傳播。實驗室工作人員在實驗活動過程中加強個人防護(hù)，規(guī)范操作是最有效的防控策略。普遍性防護(hù)原則如下：使用必要的防護(hù)用品和防護(hù)設(shè)施，避免直接接觸血液；安全規(guī)范處置銳利器具；對所涉及的器械實施嚴(yán)格消毒；安全處置廢棄物；嚴(yán)格洗手和對手進(jìn)行消毒。（五）管理體系和應(yīng)急預(yù)案相關(guān)管理體系文件如《生物安全柜操作規(guī)程》(XJK/JS41)、《HEV-50高壓滅菌器操作規(guī)程》(XJK/JS36)、《0412-1(80-2)型離心機操作規(guī)程》(XJK/JSlO)、《EIX50型洗板機操作規(guī)程》(XJK/JS71)、《微生物實驗器具消毒滅菌和廢棄物的管理》(XJK/JY07)、《樣品管理程序》(XJK/CX32)等經(jīng)過技術(shù)委員會的評審是有效和安全的。實驗室對制訂的《實驗室意外事故和職業(yè)性疾病報告制度》和《病原微生物生物安全應(yīng)急處置技術(shù)方案》，經(jīng)過培訓(xùn)和反復(fù)演練，能確保一旦發(fā)生意外感染事件時能有效應(yīng)對，把危害控制在最小范圍和最低限度。綜上所述，本實驗室在人員素質(zhì)、設(shè)施設(shè)備、實驗器材及實驗方法、管理體系、廢棄物處置等方面能滿足開展HDV抗原抗體血清學(xué)檢測相關(guān)實驗活動的安全管理要求，實驗過程中的風(fēng)險是可控的，實驗人員的健康與安全是有保障的，不會對周圍環(huán)境產(chǎn)生危害。第四節(jié)變形桿菌實驗活動風(fēng)險評估報告一、生物學(xué)特性（一）種類和細(xì)菌分型變形桿菌(Proteusspecies)是腸桿菌科（Enterobacteriaceae）革蘭氏陰性桿菌。變形桿菌包括變形桿菌屬、普羅菲登屬和摩根氏菌屬，變形桿菌屬包括5個已命名的種，即奇異變形桿菌（Proteusmirabilis）、普通變形桿菌（Proteusvulgaris）、潘氏變形桿菌(Pro-teuspenneri)、黏化變形桿菌(Proteusmyxofaciens)、豪氏變形桿菌(Proteushauseri)和3個未命名的種。其中，普通變形桿菌和奇異變形桿菌與臨床關(guān)系較密切，也最為常見。（二）來源變形桿菌廣泛存在于土壤、水、垃圾、腐敗有機物及人或動物的腸道內(nèi)，為條件致病菌，多為繼發(fā)感染，如慢性中耳炎、創(chuàng)傷感染等，也可引起膀胱炎、嬰兒腹瀉、食物中毒等。以下介紹主要以食物中毒為主。（三）傳染性傳染源為帶有變形桿菌或被陔菌污染的介質(zhì)。變形桿菌主要通過糞—口途徑感染。（四）傳播途徑變形桿菌是一種條件致病菌。只有離開了正常寄居的腸道而進(jìn)入人體其他部位時，才引起感染。在烹調(diào)的制作過程中處理生熟食品的工具、容器未嚴(yán)格分開使用，使制成的熟食品受到嚴(yán)重污染，或者操作人員通過手污染食品從而引起食物中毒。變形桿菌與其他腐敗菌共同污染生食品，使生食品發(fā)生感官上的改變，但熟制品被變形桿菌污染通常無感官性狀的變化，極易被忽視而引起食物中毒。（五）易感性沒有明顯的季節(jié)性，全年均可發(fā)生，大多數(shù)發(fā)生在5-10月，以7-9月常見。（六）潛伏期變形桿菌引起的食物中毒起病急驟，食物中毒型潛伏期為3-20h，過敏型潛伏期為0.5-2h。（七）劑量一效應(yīng)關(guān)系食物被變形桿菌污染后，活菌在食品上大量繁殖，被人攝食后進(jìn)入人體，在條件適合時，就有可能引起食物中毒。所以，只從樣品中檢出變形桿菌并無實際意義。凡懷疑變形桿菌中毒時，應(yīng)取可疑食物、嘔吐物和糞便作細(xì)菌培養(yǎng)，分離出同型變形桿菌。分離出的變形桿菌，必須作血凝試驗，才能確認(rèn)。普通變形桿菌對OXl9、奇異變形桿菌對OXK的凝集效價應(yīng)在4倍以上增長者，才能被確診。人攝入變形桿菌是否發(fā)病及發(fā)病輕重與攝入的細(xì)菌數(shù)量（一般認(rèn)為達(dá)105個/g以上）、產(chǎn)生的毒素以及人體防御功能等因素有關(guān)。變形桿菌還可產(chǎn)生組氨脫羧酶，可使肉類中組氨酸脫羧基成為組胺，組胺攝入量超過lOOmg引起類似組胺中毒過敏癥狀。（八）致病性1．致病物質(zhì)變形桿菌致病物質(zhì)有鞭毛、菌毛、內(nèi)毒素、溶血毒素等。變形桿菌的致病力主要是細(xì)菌所產(chǎn)生的腸毒素，它可產(chǎn)生一種細(xì)胞結(jié)合溶血因子(Cell-boundhemolyticfactor)，對人類移行細(xì)胞具有很好的黏附力和較強侵襲力，有些菌株能產(chǎn)生α溶血素從而具有細(xì)胞毒效應(yīng)。變形桿菌還可產(chǎn)生組氨脫羧酶，引起類似組胺中毒過敏癥狀。2．所致疾病變形桿菌污染食物后，引起食物中毒的主要表現(xiàn)為以下2種類型。(1)胃腸炎型潛伏期為3-20h，起病急驟、伴有惡心、嘔吐、腹痛等癥狀，腹瀉為水樣、帶黏液惡臭、無膿血，一天數(shù)次至十余次。有1/3-1/2患者在胃腸道癥狀之后，發(fā)熱伴有畏寒，持續(xù)數(shù)小時后下降。嚴(yán)重者有脫水或休克。(2)過敏型潛伏期為0.5-2h，表現(xiàn)為全身充血、顏面潮紅、酒醉貌周身癢感，胃腸癥狀輕，少數(shù)患者可出現(xiàn)蕁麻疹。（九）變異性變形桿菌存在抗生素敏感性變異株。（十）環(huán)境中的穩(wěn)定性變形桿菌在自然界分布廣泛，在土壤、污水和垃圾中可檢測出該菌，亦可寄生于人和動物的腸道。（十一）藥物敏感性臨床多選用氨基糖苷類抗生素如慶大霉素、卡那霉素，以及新霉素等治療。但近年來發(fā)現(xiàn)了不少耐藥菌株。氨基糖苷類抗生素仍為主要的抗變形桿菌藥物之一。其他有哌拉西林和第二、三代頭孢菌素。喹諾酮類等也有效。（十二）消毒劑敏感性變形桿菌的抵抗力中等，對巴氏滅菌及常用消毒劑敏感。（十三）物理滅活變形桿菌不耐干燥，60℃30min可被殺死。（十四）在宿主體外存活變形桿菌在體外需氧生長，對營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好。（十五）與其他生物和環(huán)境的交互作用變形桿菌在自然界中分布較廣泛，多數(shù)存在于水中、土壤中及污物上。食品中變形桿菌者的污染菌率為3.8%-100%不等，以熟肉、水產(chǎn)品等動物性食品的污染菌率較高，涼拌菜、剩飯等也易被污染。（十六）預(yù)防和治療方案1．預(yù)防預(yù)防方法為注意環(huán)境衛(wèi)生，嚴(yán)格做好炊具食具及食物的清潔衛(wèi)生。禁食變質(zhì)食物。食物應(yīng)充分加熱，烹調(diào)后不宜放置過久，涼拌菜須進(jìn)行嚴(yán)格的衛(wèi)生操作。2．治療一般不必服抗生素，僅需補液、解癥等對癥處理。重者患者可服用氯霉素、諾氟沙星等抗菌藥物。(1)胃腸炎型主要為對癥治療。由于該病大多為自限性，不經(jīng)治療，一兩天內(nèi)能自行恢復(fù)。若吐瀉嚴(yán)重，可給予補液及解痙劑。對重癥者可采用抗菌藥物治療，選用諾氟沙星0.2g/次，4次/d，或用氯霉素0.25-0.5g/次，4次／d，口服。(2)過敏型以抗組胺療法為主，可選用氯苯那敏4mg/次，3次/d，口服。嚴(yán)重者應(yīng)用氫化可松或地塞米松靜脈滴注。二、實驗室相關(guān)活動風(fēng)險評估與控制（一）實驗室感染性因子的種類、來源和危害1．感染性因子的種類根據(jù)其生物學(xué)特性和本中心實驗室檢測能力范圍，本實驗室可能的感染因子為沙門菌病原體本身。2．感染性因子的來源(1)用于變形桿菌檢測的食品和水樣、不明原因腹瀉采集的糞便、嘔吐物、食品加工環(huán)節(jié)涂抹物、血液等樣本。(2)樣本采集和檢測過程中涉及的所有實驗場所。(3)實驗室操作中可能產(chǎn)生的含病原菌的氣溶膠。(4)實驗相關(guān)廢棄物。3．感染性因子造成的危害(1)被污染的實驗器材、器皿等對實驗室環(huán)境造成污染。(2)實驗室含有病原菌的廢棄物對環(huán)境造成污染。(3)實驗人員暴露后感染。(4)實驗室檢測活動工作中，各種原因?qū)е碌囊后w飛濺或微滴濺出及氣溶膠對實驗室環(huán)境造成污染。變形桿菌主要通過糞一口途徑感染。變形桿菌被攝入后進(jìn)入胃腸道，引起食物中毒，或接觸染疫動物而感染，傷口感染可引起敗血癥等疾病。一般不通過呼吸道途徑傳播。在對變形桿菌進(jìn)行上述實驗操作時不會因氣溶膠的直接吸入造成人員感染。實驗中各種原因?qū)е碌母腥拘砸后w飛濺及微滴濺出，從而污染地面、器物表面及工作人員的手，造成感染性物質(zhì)的意外食入感染；被可能存在感染性病原體的銳器刺傷、割傷可造成皮膚黏膜感染：這兩種是較可能的實驗室獲得性感染方式。（二）實驗活動風(fēng)險識別與風(fēng)險控制1．實驗方法(l)風(fēng)險點識別未采用國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測；使用新的或變更過的國家標(biāo)準(zhǔn)或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)前，未經(jīng)技術(shù)確認(rèn)，可能存在安全風(fēng)險。(2)風(fēng)險控制措施盡量采用國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測，或使用經(jīng)過充分驗證的實驗方法；在使用新的或變更過的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)前，必須經(jīng)過嚴(yán)格的技術(shù)確認(rèn)。2．樣品采集(1)食品和水樣等樣品采集①主要實驗設(shè)備和器材采樣剪刀或鑷子、密閉盛樣容器等。②主要風(fēng)險點識別食品和水樣等樣品中可能存在感染性病原體，采樣人員采樣不規(guī)范、盛裝容器密合不嚴(yán)、玻璃容器意外破損等，可導(dǎo)致樣品濺灑、溢出、滲漏而污染環(huán)境；同時，玻璃容器意外破損和剪刀、鑷子的使用不當(dāng)，存在意外刺傷或劃傷采樣人員的風(fēng)險。③風(fēng)險控制措施食品和水樣等樣品采集容器必須防水、防漏，容器外面要包裹足量的吸收性材料，以便容器打破或泄漏時，能吸收溢出的所有液體。在使用剪刀、鑷子、玻璃容器等銳器時必須規(guī)范操作，做好防護(hù)，防止刺傷或劃傷。(2)糞便、嘔吐物、食品加工環(huán)節(jié)涂抹物等樣本采集①主要實驗設(shè)備和器材PV螺旋蓋采便盒（管）、玻璃試管或培養(yǎng)皿、采樣棉簽等。②主要風(fēng)險點識別糞便、嘔吐物、食品加工環(huán)節(jié)涂抹物等樣本可能存在感染性病原體，采集過程中存在樣本濺出從而形成小顆粒氣溶膠進(jìn)而污染人員和環(huán)境的風(fēng)險；工作人員采樣不規(guī)范、個人防護(hù)不到位，導(dǎo)致環(huán)境污染和人員感染；破碎玻璃試管或培養(yǎng)皿存在刺傷或劃傷采樣人員的隱患。③風(fēng)險控制措施采集糞便和嘔吐物等感染性樣品時，采樣人員應(yīng)戴手套、口罩，必要時戴防護(hù)眼鏡；采樣動作輕柔，采樣容器盡量使用外螺旋蓋塑料管：發(fā)生污染時，應(yīng)立即進(jìn)行消毒處理。(3)血液的采集①主要實驗設(shè)備和器材一次性采血針和塑料采血管、消毒棉簽及一次性利器盒。②主要風(fēng)險點識別血液樣品可能存在感染性病原體，采血管密封蓋意外脫落或注射器內(nèi)殘留血滴落，造成血樣濺灑從而污染人員或環(huán)境；采血針頭存在意外刺傷或劃傷采樣人員的風(fēng)險。③風(fēng)險控制措施使用一次性采血針和真空采血管，采樣人員經(jīng)過正規(guī)采血培訓(xùn)，并熟練掌握采血技巧。采血前做好個人防護(hù)（防護(hù)服、乳膠手套、口罩）；認(rèn)真、仔細(xì)、謹(jǐn)慎操作，抽血后的針頭直接放入利器盒內(nèi)，禁止用手直接接觸使用后的針頭或?qū)⑹褂煤蟮尼橆^重新套上針頭套；采好血后直立于試管架中，防止倒翻；消毒棉簽等污染物放入醫(yī)療廢棄物專用袋中，統(tǒng)一進(jìn)行消毒處理。3．樣品的包裝和運送(1)主要實驗設(shè)備和器材真空密封采血管、外螺旋蓋玻璃瓶、PV螺旋蓋采樣罐（管）主容器、95千帕樣品運輸罐、B類標(biāo)本運輸箱（UN3373冷藏箱）、運送車輛。(2)主要風(fēng)險點識別盛樣容器不堅固、密合不嚴(yán)，有可能存在樣品濺灑、溢出、滲漏；使用不合格運輸包裝進(jìn)行樣本運送，存在玻璃容器或包裝容器意外破損而刺傷或劃傷采送樣人員的隱患。(3)風(fēng)險控制措施盛裝樣品容器必須堅固，不易破碎，盡可能選用塑料制品，采樣后必須檢查容器的密合性。樣品的運輸需使用三層合格包裝材料。4．樣品接收和前處理(l)主要實驗設(shè)備和器材剪刀、鑷子、振蕩器、均質(zhì)器、均質(zhì)袋、離心機、生物安全柜、潔凈工作臺。(2)主要風(fēng)險點識別樣品管理員未按實驗室《樣品管理程序》(XJK/CX32)要求接收樣品；樣品前處理時，打開糞便或嘔吐物等感染性樣品包裝的動作過猛，會造成樣品側(cè)翻；對食品等圓形物樣品進(jìn)行剪切時，操作不慎發(fā)生手剪傷；均質(zhì)器均質(zhì)樣本時發(fā)生均質(zhì)袋破裂，離心操作時離心管破裂。(3)風(fēng)險控制措施①樣品接收必須在專用的區(qū)域進(jìn)行，合同評審人員和收樣人員嚴(yán)格按照《樣品管理程序》(XJK/CX32)要求交接樣品，不得擅自打開樣品包裝，收樣后及時洗手。②開始檢測前，對盛裝感染性材料樣品的容器，必須在生物安全柜中緩慢打開，食品和水樣必須在潔凈工作室內(nèi)打開，開啟容器時管口不能對著操作者。③對食品等固體物樣品取樣，要小心使用剪刀和鑷子，盡可能剪取食物的可食部分，以防止樣品均質(zhì)時堅硬物質(zhì)刺破均質(zhì)袋，造成樣液濺灑。對含有感染性的樣品進(jìn)行離心振蕩時，必須將離心蓋封嚴(yán)實，并關(guān)上離心機蓋。④實驗室應(yīng)配備應(yīng)急藥箱，當(dāng)發(fā)生手剪傷、離心管或均質(zhì)袋意外破裂、濺出等意外事件時，及時對所有涉及污染的部位、場所進(jìn)行消毒處理。5．樣本檢測過程(l)主要實驗設(shè)備和器材培養(yǎng)箱、水浴箱、細(xì)菌鑒定和藥敏測試儀（ATB儀）、顯微鏡、生物安全柜、振蕩器、吸管和試管、移液器及吸頭、接種環(huán)、培養(yǎng)皿等。(2)主要風(fēng)險點識別①對食品、水樣、糞便和嘔吐物等樣品進(jìn)行變形桿菌菌株分離鑒定、生化試驗、血清分型、藥敏試驗等實驗活動均涉及活菌操作。在檢測過程中移液或混勻震蕩等操作可能釋放的較大顆粒和小液滴，離心振蕩過程中容器的破碎或滲漏等意外事故，都可能造成感染性物質(zhì)污染操作者的手、操作臺面、器物表面及地面，從而污染實驗室環(huán)境和人，實驗室人員通過皮膚接觸或黏膜接觸而意外食入。②實驗過程中未正確操作銳器、玻璃實驗器材意外破碎等，存在人員被割傷和刺傷而導(dǎo)致的接種感染隱患。③樣品檢測時試管開啟、樣品轉(zhuǎn)移、稀釋混均吹打、劃線分離、涂片染色、離心等操作都可產(chǎn)生氣溶膠，但變形桿菌不通過吸入感染，實驗室人員通過氣溶膠感染變形桿菌的風(fēng)險非常小。(3)風(fēng)險控制措施①開展檢測時檢測人員應(yīng)按照二級生物安全防護(hù)要求做好自身防護(hù)措施。②進(jìn)行食品、水樣等樣品制備、均質(zhì)等操作應(yīng)在潔凈實驗室內(nèi)進(jìn)行；糞便、嘔吐物等所有具有感染性材料的操作必須在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，必須保證潔凈實驗室和生物安全柜處于正常運行狀態(tài)。③進(jìn)行活菌操作時，應(yīng)在安全柜工作臺面上放置一塊浸有消毒液的紗布或吸有消毒液的紙，避免感染性物質(zhì)的擴散；涉及高濃度或大體積的感染性的材料離心操作時，應(yīng)選用密封轉(zhuǎn)頭或帶安全罩的離心機離心。若有意外污染，應(yīng)及時進(jìn)行消毒、沖洗并擦干飛濺出的液體。實驗結(jié)束后必須對桌面、臺面及時進(jìn)行消毒處理。④必須使用移液器或吸球移取樣液，嚴(yán)禁用嘴吸液，移液時旋蓋及移液操作的動作要輕緩，所有吸管應(yīng)用棉塞，移液頭盡可能使用帶濾芯的，以減少對移液器或吸球的污染。⑤為避免接種液從接種環(huán)上滴落，接種環(huán)的直徑應(yīng)為2-3mm并完全封閉，手柄的長度應(yīng)小于6cm以最大限度減少振動。盡可能使用封閉式微型電加熱器消毒接種環(huán)，避免在酒精燈的明火上加熱從而引起感染性物質(zhì)的爆濺。⑥盡可能避免使用注射器及其他銳利的器具，嚴(yán)禁用帶有注射針頭的注射器吸液，更不可當(dāng)吸管用，用過的銳器應(yīng)直接放入利器盒，經(jīng)消毒后廢棄。禁止將使用后的針頭重新套上針頭套。盡可能以塑料器皿代替玻璃器皿，若必須使用玻璃器皿，只能用實驗室級玻璃（硼硅酸鹽），且任何破碎或有裂紋的器皿都應(yīng)丟棄。禁止用手直接接觸使用后的針頭、刀片、玻璃碎片等銳器。⑦在任何可能導(dǎo)致潛在的傳染性物質(zhì)濺出的操作過程中，應(yīng)保護(hù)好面部、眼睛和嘴；發(fā)生液體濺出、溢出等事故或明顯暴露于傳染源時，應(yīng)立即向科室負(fù)責(zé)人報告，及時處理并對事故的發(fā)生與處理作記錄。6．菌株使用、保存和運輸(1)主要實驗設(shè)備和器材接種針、菌株保存管、振蕩器、生物安全柜、移液器、95千帕樣品運輸罐、生物安全運送箱和專用運送車。(2)主要風(fēng)險點識別①工作人員保菌操作不規(guī)范、個人防護(hù)不到位、磁珠管等保存容器意外破損、磁珠掉落等會導(dǎo)致病原菌污染實驗室環(huán)境和實驗人員。②變形桿菌使用和保存未按照《菌（毒）種管理規(guī)程》(XJK/CX37)要求實施管理，存在菌株被惡意使用及污染環(huán)境等生物安全隱患。③變形桿菌陽性菌株上送等運輸過程中，若使用不合格包裝進(jìn)行運輸、容器密封不嚴(yán)或運輸工具無安全保障，則可能導(dǎo)致運輸過程中包裝容器意外破損，從而產(chǎn)生病原體的擴散，甚至樣本丟失的隱患。(3)風(fēng)險控制措施①變形桿菌分離純化及保菌操作應(yīng)在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，若發(fā)生磁珠管破損、磁珠掉落時，應(yīng)及時對臺面進(jìn)行消毒處理。②變形桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株的使用、保存嚴(yán)格按照《菌（毒）種管理規(guī)程》(XJK/CX37)要求進(jìn)行操作，嚴(yán)格實行雙人雙鎖保管，嚴(yán)防菌株被惡意使用而造成生物危害。③變形桿菌陽性菌株的上送應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行B類運輸包裝，攜帶“可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸許可證”，由專車運送，并由專業(yè)人員全程護(hù)送。7．實驗室的清潔和消毒(l)主要實驗設(shè)備和器材70%-75%的酒精、施康清洗消毒液=1\*ROMANI。(2)主要風(fēng)險點識別工作完畢后，若不及時對工作臺面、生物安全柜進(jìn)行消毒，有可能會對下次操作人員造成污染或感染。(3)風(fēng)險控制措施工作完畢后，及時對檢測所涉及的工作臺面、地面和生物安全柜進(jìn)行消毒，使用稀釋lOO倍的施康清洗消毒液I擦拭，用消毒液清潔后要干燥20min以上。生物安全柜用70%-75%的酒精擦拭消毒。待實驗和消毒完畢，先脫去手套，再脫去防護(hù)服，并正確用肥皂和流水洗手。8．廢棄物處置(l)主要實驗設(shè)備和器材醫(yī)療廢棄物專用袋、硬質(zhì)耐高壓且防滲漏的垃圾桶、高壓滅菌器。(2)主要風(fēng)險點識別①樣品采集和實驗檢測過程產(chǎn)生的感染性廢棄物，如食品、水樣等剩余樣品；血液血清及排泄物標(biāo)本；病原菌的培養(yǎng)基、生化鑒定條件和菌種等所有實驗過程涉及的用品，釋放前未按照規(guī)范要求處理，導(dǎo)致致病因子外泄從而污染環(huán)境或人員。②樣品采集和實驗檢測過程產(chǎn)生的被病原微生物污染的損傷性廢棄物，如一次性使用采血用具、載玻片、玻璃試管、玻璃安瓿、培養(yǎng)皿等，未按照規(guī)范處理，存在意外刺傷或劃傷工作人員的隱患。(3)風(fēng)險控制措施實驗室廢棄物處理應(yīng)遵循《醫(yī)療廢棄物管理條例》《醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)醫(yī)療廢棄物管理辦法》《醫(yī)療廢物專用包裝袋、容器和警示標(biāo)志標(biāo)準(zhǔn)》等相關(guān)法規(guī)要求，分類收集，規(guī)范處置。所有損傷性廢棄物必須放置于有警示標(biāo)識的硬質(zhì)、防漏、防銳器刺破的專用容器中。所有感染性廢棄物必須放置于有警示標(biāo)識的專用醫(yī)療廢物包裝袋中，經(jīng)高溫高壓滅菌處理后，集中存放至中心指定的醫(yī)療廢棄室，由有資質(zhì)的醫(yī)療廢棄物處理單位上門收集，集中處置。同時，做好廢棄物處置交接記錄，所有相關(guān)記錄應(yīng)定期整理歸檔。（三）實驗過程中其他風(fēng)險識別和控制1．電力(l)主要風(fēng)險點識別變形桿菌的分離和鑒定對溫度有明確要求，實驗過程中突然間隙斷電或電力供應(yīng)不穩(wěn)定對檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性帶來一定的影響。實驗室沒有布置雙路供電或者相關(guān)儀器未配備不間斷電源。當(dāng)電力供應(yīng)發(fā)生故障時，可導(dǎo)致設(shè)備突然停止工作，存在實驗活動被迫終止等所帶來的相關(guān)安全風(fēng)險。(2)預(yù)防控制措施盡可能在實驗室布置雙路供電，若客觀條件受限制，則對變形桿菌檢測所用的關(guān)鍵儀器須配備不間斷電源。2．電氣操作(1)主要風(fēng)險點識別實驗室活動涉及的電氣操作，包括實驗室工作區(qū)內(nèi)電氣設(shè)備的啟動、關(guān)閉、安裝和維修；設(shè)備層內(nèi)UPS、空調(diào)機組等電氣設(shè)備的肩動、關(guān)閉和維修等。這些電氣操作的過程可能存在觸電、電擊、造成電氣故障等風(fēng)險。(2)預(yù)防控制措施①電氣設(shè)備的設(shè)計及制造符合相關(guān)安全標(biāo)準(zhǔn)的要求。實驗室工作區(qū)內(nèi)若有380V電源插座，需明確標(biāo)識，并由有資質(zhì)的專業(yè)人員進(jìn)行操作。②新的、改裝過的或修理過的電氣設(shè)備在未經(jīng)專業(yè)人員（如有資質(zhì)的電工）完成電氣安全測試和設(shè)備符合安全使用要求之前，不允許使用。③電氣設(shè)備使用人員接受正確操作的培訓(xùn)，操作方式不降低電氣安全性。電氣設(shè)備使用人員要定期檢查設(shè)備中可能引起電氣故障的破損。只有專業(yè)人員可從事電氣設(shè)備和電路工作。禁止未經(jīng)授權(quán)的工作。④采取措施對設(shè)備去污染，以降低維護(hù)人員感染的風(fēng)險。3．實驗室給排水設(shè)施設(shè)備(1)主要風(fēng)險點識別實驗室含有給排水的設(shè)施設(shè)備，包括位于工作區(qū)和洗消區(qū)的高壓滅菌器和洗滌池。當(dāng)水管道意外破裂、排水管道阻塞時，感染性材料可能溢出，有污染實驗人員和環(huán)境的風(fēng)險。(2)預(yù)防控制措施實驗室產(chǎn)生的所有染菌物及器具，必須先經(jīng)高壓滅菌或含氯消毒劑浸泡消毒后洗滌，洗消產(chǎn)生的污水集中排入中心污水池進(jìn)行消毒處理，嚴(yán)禁直接排放。按照GB18466中6.1污水取樣與監(jiān)測要求執(zhí)行。4．實驗室設(shè)施設(shè)備管道(l)主要風(fēng)險點識別實驗室設(shè)施設(shè)備管道穿越維護(hù)結(jié)構(gòu)的部位可能存在密封不嚴(yán)的問題，當(dāng)感染性材料溢出時，有污染環(huán)境的風(fēng)險。(2)預(yù)防控制措施所有管道穿越維護(hù)結(jié)構(gòu)的部位應(yīng)嚴(yán)格密封，定期進(jìn)行檢查檢測，避免感染性材料外溢從而污染環(huán)境。5．主要檢測儀器設(shè)備(1)細(xì)菌鑒定和藥敏測試儀（ATB儀）、顯微鏡等設(shè)備①主要風(fēng)險點識別對可疑變形桿菌進(jìn)行鑒定時，需要使用ATB儀、定量熒光PCR儀、核酸提取液、凝膠成像儀等設(shè)備，如果不按操作規(guī)程操作，則會導(dǎo)致病原體濺出、滲漏而污染實驗環(huán)境。②預(yù)防控制措施嚴(yán)格按ATB儀等沒備操作規(guī)程操作和維護(hù)，每次使用完畢后對設(shè)備箱體及可能污染的實驗環(huán)境進(jìn)行消毒。(2)離心機①主要風(fēng)險點識別在分離血清、濃縮菌液等檢測活動中會使用到離心機，離心過程中可能存在離心管破裂、離心管蓋脫落、離心轉(zhuǎn)子和離心腔被污染的風(fēng)險。②預(yù)防控制措施離心時配備耐離心壓力的外螺旋蓋的離心管，離心前做好平衡，選擇正確的離心速度和離心力。規(guī)范正確操作，定期維護(hù)，確保離心機性能正常，每次做好清潔消毒和使用記錄，定期進(jìn)行功能檢查。6．生物安全設(shè)施設(shè)備(1)生物安全柜①主要風(fēng)險點識別變形桿菌大量活菌操作必須在生物安全柜中進(jìn)行，若不按照安全柜操作規(guī)程進(jìn)行操作、維護(hù)與年度監(jiān)測，其防護(hù)屏障作用會明顯降低，甚至消失，失去安全防護(hù)效果；若長時間使用或未及時更換HEPA過濾膜，會使其功能喪失，造成工作窗口氣流速度降低或流向紊亂；使用后若不進(jìn)行徹底消毒處理，會造成使用和維護(hù)人員間接接觸污染。②預(yù)防控制措施正確選配生物安全柜，操作人員應(yīng)接受相關(guān)的操作、維護(hù)培訓(xùn)，日常操作和維護(hù)嚴(yán)格按照設(shè)備操作規(guī)程或使用說明書進(jìn)行。每年請有檢測資質(zhì)的服務(wù)機構(gòu)對生物安全柜進(jìn)行風(fēng)速、氣流、塵埃粒子、紫外線強度等關(guān)鍵要素的檢測，實驗室定期進(jìn)行沉降菌檢測，確保其正常性能。一旦生物安全柜的使用造成污染，應(yīng)及時消毒。(2)高壓滅菌器①主要風(fēng)險點識別變形桿菌檢測過程中被病原菌污染的玻璃、耐高壓的實驗器材及實驗廢棄物要進(jìn)行高壓滅菌消毒才可移出實驗室，若不按照高壓滅菌器操作規(guī)程進(jìn)行操作、維護(hù)，其效果會明顯降低，甚至失效，失去去污染與無害化的作用；若長時問使用又不定期檢測滅菌效果，對其滅菌效果無從考證，可能產(chǎn)生功能缺損，存在滅菌不徹底從而引起污染的隱患：在長期關(guān)停期間，若內(nèi)部水分不及時排干，將會使內(nèi)部器件老化從而失去正常功能。②預(yù)防控制措施采用下排式高壓滅菌器，防止氣溶膠污染；操作人員持證上崗，規(guī)范操作，定期維護(hù)，確保高壓滅菌器性能正常；定期進(jìn)行檢定與核查，做好使用記錄。日常進(jìn)行滅菌效果檢測，以保證滅菌質(zhì)量。(3)個人防護(hù)用品①主要風(fēng)險點識別個人防護(hù)用品若穿戴不規(guī)范、大小不合適或使用過期的防護(hù)用品等，則將會導(dǎo)致防護(hù)效果降低，甚至失效。②預(yù)防控制措施進(jìn)行變形桿菌大量活菌操作時，個人防護(hù)采取二級生物安全防護(hù)水平，選擇大小合適、有效的防護(hù)用品。(4)應(yīng)急救治設(shè)施和用品①主要風(fēng)險點識別若實驗室沒有配備洗眼器、應(yīng)急藥箱等必要的應(yīng)急設(shè)施和物品，或配備的急救用品種類不全、不合適或過期，則導(dǎo)致急用時無法發(fā)揮作用。②預(yù)防控制措施在實驗室內(nèi)正確配備洗眼器，確保功能正常。配備的75%乙醇、碘伏或其他消毒劑、創(chuàng)可貼等急救物品與實驗活動相適應(yīng)并在有效期內(nèi)使用，由專人負(fù)責(zé)管理，定期維護(hù)、清理和更新。(5)消毒滅菌劑①主要風(fēng)險點識別消毒劑產(chǎn)品無生產(chǎn)許可證、過期、配制方法或濃度不正確、種類選擇不合理，將會導(dǎo)致消毒效果降低、生物滅活能力降低或?qū)ξ锲犯g性增加、對皮膚造成刺激等問題。②預(yù)防控制措施選擇符合國家標(biāo)準(zhǔn)的正規(guī)廠家生產(chǎn)的產(chǎn)品，選擇合適的消毒劑，按照規(guī)定的消毒方法、消毒時間、消毒濃度（劑量）進(jìn)行消毒，避免使用過期產(chǎn)品；消毒過程中消毒人員應(yīng)做好必要的個體防護(hù)，防止發(fā)生意外。根據(jù)變形桿菌特點，選用70%-75%酒精和稀釋10-25倍、50-100倍、200倍的施康消毒劑I（主要成分為次氯酸鈉）作為實驗室常用消毒劑。7．管理體系的風(fēng)險(l)主要風(fēng)險點識別管理體系（包括應(yīng)急預(yù)案）是否健全和完善，是否符合實際管理要求，程序文件、作業(yè)指導(dǎo)書和操作規(guī)程是否科學(xué)和具有可操作性，是能否確保生物安全的主要因素。如果組織結(jié)構(gòu)不健全、設(shè)置不合理，體系文件與實際工作不匹配，以及部門職責(zé)不清或銜接不當(dāng)?shù)?，就都可能帶來安全風(fēng)險。(2)預(yù)防控制措施定期開展對管理體系的評審，發(fā)現(xiàn)問題及時修訂、完善，以確保生物安全管理體系持續(xù)有效運行。（四）工作人員的風(fēng)險評估與預(yù)防控制措施l．人員數(shù)量和素質(zhì)(1)人員數(shù)量①主要風(fēng)險點識別人員過少會因缺少相互提示監(jiān)督或因工作量增大而導(dǎo)致操作過程中工作失誤增加，風(fēng)險增加。②預(yù)防控制措施采樣和檢測人員的數(shù)量應(yīng)與工作量相匹配，盡量有2名工作人員同時進(jìn)行采樣和檢測工作。(2)人員結(jié)構(gòu)①主要風(fēng)險點識別實驗室新進(jìn)人員沒有高資歷人員帶教操作，不能很好應(yīng)對意外事件，風(fēng)險增加。②預(yù)防控制措施實驗室檢測人員的年齡和資歷結(jié)構(gòu)應(yīng)配備合理，新進(jìn)人員應(yīng)由高資歷人員帶教或監(jiān)督操作。(3)職業(yè)操守①主要風(fēng)險點識別變形桿菌檢測存在一定的生物安全風(fēng)險，若責(zé)任心不強的人員參與該項工作，則產(chǎn)生生物危害而危及人員安全、環(huán)境安全與社會安定的可能性較大。②預(yù)防控制措施加強職業(yè)道德教育，培養(yǎng)工作責(zé)任心。2．健康管理(l)主要風(fēng)險點識別健康狀況主要包括生理、心理素質(zhì)與免疫狀態(tài)。若實驗室檢測相關(guān)人員出現(xiàn)呼吸道或者消化道感染癥狀、機體免疫力低下等其他不適合工作的狀況，職業(yè)暴露風(fēng)險增加。(2)預(yù)防控制措施建立健康申報制度，遇有呼吸道或者消化道感染及其他不適合工作的情況時，應(yīng)及時向科室負(fù)責(zé)人報告并暫停工作。3．人員資質(zhì)(1)主要風(fēng)險點識別檢測人員不具備衛(wèi)生檢測相關(guān)學(xué)歷教育背景，不熟悉變形桿菌檢測方法及操作規(guī)范，未執(zhí)行相關(guān)的專業(yè)知識培訓(xùn)和考核，并未獲得上崗證，無法保證工作質(zhì)量和安全。(2)預(yù)防控制措施檢測人員必須是檢驗或相關(guān)專業(yè)畢業(yè)，經(jīng)過上崗培訓(xùn)和持證上崗。4．生物安全培訓(xùn)要求(l)主要風(fēng)險點識別檢測人員、輔助人員、后勤保障人員、進(jìn)修實習(xí)人員上崗前沒有接受嚴(yán)格的生物安全，以及相關(guān)生物安全設(shè)備操作的技術(shù)培訓(xùn)，易造成生物安全事故的發(fā)生。(2)預(yù)防控制措施檢測人員、輔助人員、后勤保障人員每年參加本中心組織的生物安全知識或生物安全操作技術(shù)培訓(xùn)、考核。上崗前熟練掌握生物安全儀器設(shè)備、設(shè)施操作技術(shù)，具備相關(guān)的安全防護(hù)能力。進(jìn)修實習(xí)人員參與實驗活動前必須進(jìn)行生物安全知識的培訓(xùn)，在帶教老師的監(jiān)督下工作。5．應(yīng)急事件處理能力(l)主要風(fēng)險點識別實驗室人員上崗前沒有接受實驗室意外事故處理、職業(yè)暴露后預(yù)防等突發(fā)事件處置的培訓(xùn)，一旦發(fā)生意外事件，就不能有效地進(jìn)行早期處理和控制生物安全事件。(2)預(yù)防控制措施實驗室工作人員必須嚴(yán)格按照《實驗室意外事故和職業(yè)性疾病報告制度》和《病原微生物生物安全應(yīng)急處置技術(shù)方案》中規(guī)定的要求進(jìn)行應(yīng)急事件的處置，強化職業(yè)暴露的應(yīng)急處理能力。（五）實驗室非常規(guī)活動中的風(fēng)險評估與預(yù)防控制措施1.主要的實驗室非常規(guī)活動(l)實驗室外專業(yè)人員對實驗室設(shè)施設(shè)備的維護(hù)、維修、檢定／校準(zhǔn)、檢測驗證（如主要設(shè)施設(shè)備的檢測驗證）和更換（如高效過濾器等的更換）等。(2)實驗室后勤保障人員對實驗室及公共環(huán)境的保潔、實驗器材的清洗消毒。(3)實驗室外人員參觀實驗室和上級部門對實驗室的檢查。(4)任何其他人員需要進(jìn)入實驗室從事實驗活動外的行為。2.主要風(fēng)險點識別(1)上述人員進(jìn)入實驗室從事相關(guān)活動，特別是不慎打翻、打破標(biāo)本管或損壞儀器零部件等情況，可能存在實驗室感染的風(fēng)險。(2)實驗室運行過程中某些人員需要進(jìn)入實驗室參觀，存在影響實驗活動正常運行或者導(dǎo)致相關(guān)或不相關(guān)的設(shè)施設(shè)備損壞的風(fēng)險。3．預(yù)防控制措施(l)實行人員準(zhǔn)入、登記制度。進(jìn)修實習(xí)人員進(jìn)入實驗室從事檢測活動前，必須先進(jìn)行生物安全和實驗室規(guī)章制度的培訓(xùn)。若中心實驗室外專業(yè)人員和實驗室后勤保障人員確實需要進(jìn)入實驗室進(jìn)行相關(guān)活動，或上級部門需要進(jìn)入實驗室進(jìn)行檢查，進(jìn)入實驗室時應(yīng)有中心實驗室人員陪同。(2)實驗室外專業(yè)人員和實驗室后勤保障人員必須要有相應(yīng)的專業(yè)知識，應(yīng)對其進(jìn)行生物安全培訓(xùn)，提供安全指南，實驗室人員應(yīng)協(xié)助、指導(dǎo)和規(guī)范進(jìn)入人員在實驗室內(nèi)的活動并對其安全行為進(jìn)行監(jiān)督，進(jìn)入人員必須遵守實驗室的各項管理規(guī)定，以確保人員和環(huán)境安全。(3)進(jìn)入人員未經(jīng)許可絕對不能私自動用實驗室內(nèi)有標(biāo)志的危險品，絕不能將未經(jīng)消毒處理的物品拿出實驗區(qū)。(4)在生物安全實驗室進(jìn)行設(shè)施、設(shè)備維護(hù)維修過程中，若發(fā)生意外事件，應(yīng)立即報告實驗室負(fù)責(zé)人。實驗室負(fù)責(zé)人根據(jù)造成的事故進(jìn)行風(fēng)險洋估，并采取應(yīng)對措拖。按專業(yè)技術(shù)要求進(jìn)行設(shè)施、設(shè)備的維護(hù)維修時，不能私自動用其他設(shè)施設(shè)備。若導(dǎo)致相關(guān)或不相關(guān)的設(shè)施設(shè)備損壞時，應(yīng)及時報告。(5)當(dāng)需要更換HEPA過濾膜或高效過濾器時，應(yīng)先對高效過濾器、HEPA過濾膜等作原位消毒后，專業(yè)人員才能進(jìn)行更換。(6)為確保自己和他人的安全，禁止未穿防護(hù)服的人員隨意進(jìn)出實驗室的防護(hù)區(qū)域。同時也禁止穿防護(hù)服的人員走出實驗室的防護(hù)區(qū)域。