第二十二-二十三章 免疫學(xué)的臨床應(yīng)用課件

免疫學(xué)的臨床應(yīng)用陳水親生化與分子生物學(xué)教研室第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)第一節(jié)體外抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的特點(diǎn)及影響因素一、抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)1．高度特異性

由抗原表位與抗體分子中的超變區(qū)互補(bǔ)結(jié)合所決定的。

2．表面化學(xué)基團(tuán)之間的可逆結(jié)合

3．適宜的抗原抗體濃度和比例抗原抗體結(jié)合后能否出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的反應(yīng)取決于兩者適當(dāng)?shù)臐舛群捅壤?．抗原抗體反應(yīng)的兩個(gè)階段第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用二、抗原抗體反應(yīng)的影響因素

1．電解質(zhì)

抗原、抗體通常為蛋白質(zhì)分子，等電點(diǎn)分別為pH3~5和5~6不等。實(shí)驗(yàn)中常用0.85%的NaCl溶液，以提供適當(dāng)濃度的電解質(zhì)。2．溫度適當(dāng)提高反應(yīng)的溫度可增加抗原與抗體分子的碰撞機(jī)會(huì)，加速抗原抗體復(fù)合物的形成。通常37℃是抗原抗體反應(yīng)的最適溫度。3．酸堿度抗原抗體反應(yīng)的最適pH在6~8之間，pH過(guò)高或過(guò)低，均可直接影響抗原、抗體的理化性質(zhì)。

第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用第二節(jié)檢測(cè)抗原或抗體的體外試驗(yàn)一、凝集反應(yīng)（agglutinationreactions）

細(xì)菌、細(xì)胞等顆粒性抗原或表面包被抗原的顆粒狀物質(zhì)（如聚苯乙稀乳膠等）與相應(yīng)的抗體在電解質(zhì)存在的條件下結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集團(tuán)現(xiàn)象。1.直接凝集反應(yīng)：顆粒性抗原本身直接與相應(yīng)的抗體反應(yīng)出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象，如紅細(xì)胞凝集或細(xì)菌凝集。2.間接凝集反應(yīng)：將可溶性抗原或抗體先吸附在某些顆粒載體上，形成致敏顆粒，然后再與相應(yīng)抗體或抗原進(jìn)行反應(yīng)產(chǎn)生的凝集現(xiàn)象。

直接凝集反應(yīng)和間接凝集反應(yīng)亦常用于溶血性疾病的診斷，如Rh血型不符的新生兒溶血癥及藥物相關(guān)的溶血性疾病。第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用二、沉淀反應(yīng)（precipitationreactions）

毒素、組織浸液及血清中的蛋白等可溶性抗原與相應(yīng)抗體反應(yīng)后，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的沉淀物。1.免疫比濁法利用抗原抗體復(fù)合物在液相中形成濁度來(lái)測(cè)定抗原含量的方法。2.單向瓊脂擴(kuò)散常用于血清中免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）、C3、AFP等定量測(cè)定。第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用3.雙向瓊脂擴(kuò)散①檢測(cè)可溶性抗原或抗體②對(duì)復(fù)雜的抗原或抗體成分進(jìn)行純度鑒定③免疫血清效價(jià)測(cè)定第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用4.免疫電泳常用于血清蛋白的組分分析第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用三、免疫標(biāo)記技術(shù)（immunolabelingtechnique）將抗原抗體反應(yīng)與標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合，以檢測(cè)抗原或抗體的一類試驗(yàn)方法。

常用的標(biāo)記物有酶、熒光素、放射性核素、膠體金及化學(xué)發(fā)光物質(zhì)等。

1.免疫酶測(cè)定法（EIA）

這是一種用酶標(biāo)記一抗或二抗檢測(cè)特異性抗原或抗體的方法。①雙抗體夾心法

②間接EILSA第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)血清檢測(cè)中：肝癌、骨肉瘤-----血清堿性磷酸酶（ALP）升高。

前列癌-------血清酸性磷酸酶升高。第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用2.免疫熒光技術(shù)是用熒光素標(biāo)記一抗或二抗，檢測(cè)特異性抗原或抗體的方法。123.放射免疫測(cè)定法

是用放射性核素標(biāo)記抗原或抗體進(jìn)行的免疫測(cè)定。敏感性可達(dá)到pg/ml水平，常用的放射性核素有131I和125I等。

第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)于1977年因創(chuàng)建放射免疫測(cè)定法而獲得醫(yī)學(xué)諾貝爾獎(jiǎng)。最敏感第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用4.化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)是將化學(xué)發(fā)光分析和免疫反應(yīng)相結(jié)合而建立的一種新的免疫分析技術(shù)。

5.免疫膠體金技術(shù)用膠體金顆粒標(biāo)記抗體或抗原，以檢測(cè)未知抗原或抗體的方法稱免疫膠體金技術(shù)。四、蛋白質(zhì)芯片技術(shù)

是指固定于支持介質(zhì)上的大量蛋白質(zhì)構(gòu)成的微陣列。

6.免疫印跡技術(shù)又稱Westernblotting第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)蛋白定性定量應(yīng)用最廣泛第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用第三節(jié)免疫細(xì)胞功能的檢測(cè)一、免疫細(xì)胞的分離1.外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離

第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用2.淋巴細(xì)胞及其亞群的分離和分析有：免疫吸附分離法、磁珠分離法、熒光激活細(xì)胞分離儀分離法、抗原肽-MHC分子四聚體技術(shù)

第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)流式細(xì)胞術(shù)可用于分離混合的T、B細(xì)胞。用于細(xì)胞分離鑒定的最好方法。第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用二、免疫細(xì)胞功能的測(cè)定1.T細(xì)胞功能測(cè)定①T淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)：T細(xì)胞受到特異性抗原或有絲分裂原（PHA、ConA）刺激后可發(fā)生增殖，可通過(guò)以下三種方法檢測(cè)。

形態(tài)計(jì)數(shù)法3H-TdR或125Ｉ-UdR摻入法

MTT比色法

第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用②遲發(fā)型超敏反應(yīng)（DTH）的檢測(cè)此方法為體內(nèi)檢測(cè)細(xì)胞免疫功能的簡(jiǎn)便易行的皮試方法。2.B細(xì)胞功能測(cè)定抗體形成細(xì)胞測(cè)定：常用溶血空斑試驗(yàn)。3.細(xì)胞毒試驗(yàn)培養(yǎng)4-6小時(shí)51Cr釋放法乳酸脫氫酶釋放法

細(xì)胞染色法凋亡細(xì)胞檢測(cè)法

第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用4.吞噬功能測(cè)定①硝基藍(lán)四氮唑試驗(yàn)

②巨噬細(xì)胞吞噬試驗(yàn)5.細(xì)胞因子的檢測(cè)

①生物活性檢測(cè)法②免疫學(xué)檢測(cè)法酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)

第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)用于功能性細(xì)胞的定量檢測(cè)第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用第二十三章免疫學(xué)防治第一節(jié)免疫預(yù)防特異性免疫的獲得方式有自然免疫和人工免疫兩種。

自然免疫主要指機(jī)體感染病原體后建立的特異性免疫，也包括胎兒或新生兒經(jīng)胎盤(pán)或乳汁從母體獲得抗體。

人工免疫則是人為地使機(jī)體獲得特異性免疫，是免疫預(yù)防的重要手段，包括人工主動(dòng)免疫和人工被動(dòng)免疫。

一、疫苗的基本要求

習(xí)慣上將細(xì)菌性制劑、病毒性制劑以及類毒素等人工主動(dòng)免疫制劑統(tǒng)稱為疫苗。

1．安全2．有效

3．實(shí)用第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用第二十三章免疫學(xué)防治二、人工主動(dòng)免疫用疫苗接種機(jī)體，使之產(chǎn)生特異性免疫，從而預(yù)防感染的措施。1.滅活疫苗

又稱死疫苗，是選用免疫原性強(qiáng)的病原體，經(jīng)人工大量培養(yǎng)后，用理化方法滅活制成。2.減毒活疫苗

用減毒或無(wú)毒力的活病原微生物制成。3.類毒素用細(xì)菌的外毒素經(jīng)0.3%~0.4%甲醛處理制成。因其已失去外毒素的毒性，但保留免疫原性，接種后能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗毒素。第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用第二十三章免疫學(xué)防治第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用第二十三章免疫學(xué)防治三、人工被動(dòng)免疫

給人體注射含特異性抗體或細(xì)胞因子的制劑，以治療或緊急預(yù)防感染的措施。

1.抗毒素用細(xì)菌外毒素或類毒素免疫動(dòng)物制備的免疫血清，具有中和外毒素毒性的作用。2.人免疫球蛋白制劑從大量混合血漿或胎盤(pán)血中分離制成的免疫球蛋白濃縮劑。

3.細(xì)胞因子與單克隆抗體細(xì)胞因子制劑與單抗制劑是近年來(lái)研制的新型免疫治療劑，可望成為腫瘤、艾滋病等的有效治療手段。第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用第二十三章免疫學(xué)防治第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用第二十三章免疫學(xué)防治四、佐劑是一類與抗原合用時(shí)能增強(qiáng)抗原免疫效應(yīng)的物質(zhì)。

可能的作用機(jī)制1.在淋巴細(xì)胞接觸抗原的局部可濃縮抗原，即儲(chǔ)存效應(yīng)；2.通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞因子的產(chǎn)生，調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞的功能。種類氫氧化鋁、磷酸鋁、磷酸鈣等無(wú)機(jī)鹽以及結(jié)合細(xì)菌類毒素的百日咳桿菌。

1.ISCOMs

是一種緩釋的復(fù)合物。含磷脂、皂素、膽固醇及蛋白質(zhì)，為30~40nm直徑的二十面體對(duì)稱結(jié)構(gòu)，能捕獲大量抗原分子并釋放給抗原提呈細(xì)胞。ISCOMs可上調(diào)MHC分子的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞免疫尤其是CTL活性。2.CpG寡核苷酸指人工合成的一段含非甲基化胞嘧啶-鳥(niǎo)嘌呤的寡核苷酸鏈，其受體是TLR9，能誘導(dǎo)細(xì)胞因子的產(chǎn)生，活化B細(xì)胞、NK細(xì)胞及樹(shù)突狀細(xì)胞，對(duì)蛋白疫苗和核酸疫苗均有明顯佐劑活性。

第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用第二十三章免疫學(xué)防治五、計(jì)劃免疫

根據(jù)某些特定傳染病的疫情監(jiān)測(cè)和人群免疫狀況分析，有計(jì)劃地用疫苗進(jìn)行免疫接種，預(yù)防相應(yīng)傳染病，確保兒童健康成長(zhǎng)的重要手段，最終達(dá)到控制以至消滅相應(yīng)傳染病的目的而采取的重要措施。第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用第二十三章免疫學(xué)防治六、新型疫苗及其發(fā)展

1.亞單位疫苗去除病原體中與激發(fā)保護(hù)性免疫無(wú)關(guān)的甚至有害的成分，保留有效免疫原成分制作的疫苗。

2.結(jié)合疫苗能引起T、B細(xì)胞的聯(lián)合識(shí)別，B細(xì)胞可產(chǎn)生IgG類抗體，明顯提高了免疫效果。3.合成肽疫苗根據(jù)有效免疫原的氨基酸序列，設(shè)計(jì)和合成的免疫原性多肽，以期用最小的免疫原性肽來(lái)激發(fā)有效的特異性免疫應(yīng)答。4.基因工程疫苗①重組抗原疫苗：是利用DNA重組技術(shù)制備的只含保護(hù)性抗原的純化疫苗。

②重組載體疫苗：是將編碼病原體有效免疫原的基因插入載體（減毒的病毒或細(xì)菌）基因組中，接種后，隨疫苗株在體內(nèi)的增殖，大量所需的抗原得以表達(dá)。

第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用第二十三章免疫學(xué)防治③DNA疫苗：用編碼病原體有效免疫原的基因與細(xì)菌質(zhì)粒構(gòu)建成重組體，經(jīng)注射等途徑進(jìn)入機(jī)體，重組質(zhì)粒可轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，使其表達(dá)保護(hù)性蛋白抗原，從而誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫。

④轉(zhuǎn)基因植物疫苗：用轉(zhuǎn)基因方法，將編碼有效免疫原的基因?qū)肟墒秤弥参锛?xì)胞的基因組中，免疫原即可在植物的可食用部分穩(wěn)定的表達(dá)和積累，人類和動(dòng)物通過(guò)攝食達(dá)到免疫接種的目的。七、疫苗的應(yīng)用1.抗感染抗感染仍是未來(lái)應(yīng)用疫苗的首要任務(wù)。

2.抗腫瘤一些病毒的感染與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，這些病毒的疫苗可被看作是腫瘤疫苗。3.計(jì)劃生育避孕疫苗也是近年來(lái)活躍的研究領(lǐng)域。4.防止免疫病理?yè)p傷第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用第二十三章免疫學(xué)防治第二節(jié)免疫治療

免疫治療是指利用免疫學(xué)原理，針對(duì)疾病的發(fā)生機(jī)制，人為地調(diào)整機(jī)體的免疫功能，達(dá)到治療目的所采取的措施。

第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用第二十三章免疫學(xué)防治一、分子治療

分子治療指給機(jī)體輸入分子制劑，以調(diào)節(jié)機(jī)體的特異性免疫應(yīng)答，例如使用抗體、細(xì)胞因子以及微生物制劑等。1.分子疫苗

2.抗體

3.細(xì)胞因子4.微生物抗原疫苗

二、細(xì)胞治療

細(xì)胞治療指給機(jī)體輸入細(xì)胞制劑，以激活或增強(qiáng)機(jī)體的特異性免疫應(yīng)答，例如使用細(xì)胞疫苗、干細(xì)胞移植、過(guò)繼免疫治療等。1.細(xì)胞疫苗腫瘤細(xì)胞疫苗、基因修飾的瘤苗、樹(shù)突狀細(xì)胞疫苗。2.過(guò)繼免疫治療取自體淋巴細(xì)胞經(jīng)體外激活、增殖后回輸患者，直接殺傷腫瘤或激發(fā)機(jī)體抗腫瘤免疫效應(yīng)。如TIL。3.造血干細(xì)胞移植干細(xì)胞是具有多種分化潛能，自我更新能力很強(qiáng)的細(xì)胞，在適當(dāng)條件下可被誘導(dǎo)分化為多種細(xì)胞組織。骨髓、外周血、臍血

第二十二-二十三章免疫學(xué)的臨床應(yīng)用第二十三章免