醫(yī)院消毒滅菌的效果監(jiān)測

醫(yī)院消毒滅菌效果監(jiān)測

廣西區(qū)疾病預防控制中心

消毒與媒介防制科

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醫(yī)院消毒效果監(jiān)測的意義醫(yī)院消毒滅菌是預防醫(yī)院內(nèi)感染的重要措施之一，消毒效果的監(jiān)測是評價其消毒設備運轉(zhuǎn)是否正常、消毒藥劑是否有效、消毒方法是否合理、消毒效果是否達標的唯一手段，因而在醫(yī)院消毒、滅菌工作中必不可少。醫(yī)院消毒效果監(jiān)測的原則01監(jiān)測人員需經(jīng)過專業(yè)培訓，掌握一定的消毒知識，熟悉消毒設備和藥劑性能，具備熟練的檢驗技能；選擇合理的采樣時間和順序遵循嚴格的無菌操作02常監(jiān)測重點科室（手術室、層流潔凈病房、ICU、產(chǎn)房、新生兒科、母嬰同室病房、透析室、血液病房、燒傷病房、供應室、內(nèi)鏡室、治療室、換藥室發(fā)生醫(yī)院內(nèi)感染時應在發(fā)生感染的科室及相關科室采樣監(jiān)測0102二、醫(yī)院消毒效果監(jiān)測范圍12使用中消毒液或無菌器械保存液滅菌設備（壓力蒸汽滅菌器、環(huán)氧乙烷滅菌器）紫外線燈滅菌物品消毒滅菌效果監(jiān)測：空氣物表醫(yī)務人員手環(huán)境衛(wèi)生學監(jiān)測：三、醫(yī)院消毒效果監(jiān)測分類四、空氣消毒效果監(jiān)測

1、采樣時間：消毒處理后、操作前進行采樣。

2、布點及采樣方法：（1）Ⅰ類環(huán)境布點、采樣方法：依據(jù)《醫(yī)院潔凈手術部建筑技術規(guī)范、手術區(qū)：需要特別保護的手術臺及其周圍區(qū)域。

Ⅰ級手術室的手術區(qū)是指手術臺兩側(cè)邊至少各外推0.9m、兩端至少各外推0.4m后（包括手術臺）的區(qū)域；

Ⅱ級手術室的手術區(qū)是指手術臺兩側(cè)邊至少各外推0.6m、兩端至少各外推0.4m后(包括手術臺)的區(qū)域；

Ⅲ級手術室的手術區(qū)是指手術臺四邊至少各外推0.4m后（包括手術臺）的區(qū)域。

Ⅳ級手術室不分手術區(qū)和周邊區(qū)。周邊區(qū)：潔凈手術室內(nèi)除去手術區(qū)以外的其他區(qū)域。（1）Ⅰ類環(huán)境Ⅰ級手術室布點方法Ⅰ級手術室布點方法：13個點。其中：手術區(qū)5個點（雙對角線布點），周邊區(qū)8個點（每邊內(nèi)2點）。++++

+++++++++（1）Ⅰ類環(huán)境Ⅱ級手術室布點方法

Ⅱ級手術室布點方法：9個點。其中：手術區(qū)3個點（單對角線布點），周邊區(qū)6個點（長邊內(nèi)2點，短邊內(nèi)1點）。++

++

+++++（1）Ⅰ類環(huán)境Ⅲ級手術室布點方法

Ⅰ類環(huán)境Ⅲ級手術室共布7個點。其中：手術區(qū)3個點（單對角線布點），周邊區(qū)4個點（每邊內(nèi)1點）。+

++++++0102類環(huán)境采樣方法將普通營養(yǎng)瓊脂平皿（直徑為9cm）放在室內(nèi)手術區(qū)和周邊區(qū)各采樣點處，采樣高度離地面≤0.8米，采樣時將平皿蓋打開，扣放于平皿旁，暴露30分鐘，蓋好，于37℃培養(yǎng)24小時，分別計數(shù)手術區(qū)和周邊區(qū)的平均菌落數(shù)。（2）Ⅱ、Ⅲ類環(huán)境布點、采樣方法

依據(jù)《消毒技術規(guī)范》(衛(wèi)生部2002年版。室內(nèi)面積≤30M2，設內(nèi)、中、外對角線3點，內(nèi)、外點布點部位距墻壁1M處；室內(nèi)面積>30M2，設4角及中央5點（雙對角線），4角的布點部位距墻壁1M處。將普通營養(yǎng)瓊脂平皿(直徑為9cm)放在室內(nèi)各采樣點處，采樣高度距地面1.5米（GB15982-1995：0.8～1.5米），采樣時將平皿蓋打開，扣放于平皿旁，暴露5分鐘，蓋好立即送檢，于37℃培養(yǎng)48小時，計數(shù)平板菌落數(shù)，并計算出空氣細菌菌落總數(shù)。

依據(jù)《消毒技術規(guī)范要求進行。010102030405平板暴露法結(jié)果計算公式：細菌總數(shù)(cfu/m3)=50000N/(A×T)式中A為平板面積（cm2）；T為平板暴露時間（min）；N為平均菌落數(shù)（cfu）；020304053、空氣樣品檢測方法4、結(jié)果判定Ⅰ類區(qū)域結(jié)果判定：

等級手術室名稱空氣潔凈度級別細菌最大平均濃度(個30min)手術區(qū)周邊區(qū)手術區(qū)周邊區(qū)Ⅰ特別潔凈手術室100級1000級0.20.4Ⅱ標準潔凈手術室1000級10000級0.751.5Ⅲ一般潔凈手術室10000級100000級24Ⅳ準潔凈手術室300000級5類區(qū)域結(jié)果判定：細菌總數(shù)≤200cfu/m3，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格。類區(qū)域結(jié)果判定：細菌總數(shù)≤500cfu/m3，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格。4、結(jié)果判定空氣采樣時的注意事項

1、（消毒前）前提將放置平皿的采樣臺準備好。

2、開門方式：自動門,推拉式彈簧門,有把手的門。

3、行走路線（盡可能少在室內(nèi)走動）動作要輕。先布皿后開蓋。

4、動態(tài)環(huán)境

5、同一房間空氣、物表采樣，先采空氣，后采物表；最好由同一人操作。

54321五、物體表面消毒效果監(jiān)測

1、采樣時間：消毒處理后進行采樣。

2、采樣方法：用5cm×5cm的標準滅菌規(guī)格板，放在被檢物體表面，用浸有含相應中和劑的無菌洗脫液的棉拭子1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各5次，并隨之轉(zhuǎn)棉拭子，連續(xù)采樣4個，剪去手接觸部位后，投入10ml含相應中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi)，進行細菌菌落總數(shù)和致病菌檢測。門把手等不規(guī)則物體表面用棉拭子直接涂擦采樣細菌總數(shù)檢測：檢測方法按《消毒技術規(guī)范》3.17.6.3（1）執(zhí)行。小型物體表面的結(jié)果計算，用cfu/件。致病菌檢測：檢測方法按《消毒技術規(guī)范原則執(zhí)行。、Ⅱ類區(qū)域：細菌總數(shù)≤5cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。類區(qū)域：細菌總數(shù)≤10cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。類區(qū)域：細菌總數(shù)≤15cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。檢測方法：結(jié)果判定五、物體表面消毒效果監(jiān)測空氣、物表采樣由同一人操作。1物表采樣應由近及遠，兼顧上下中左右2母嬰同室、血透室屬Ⅱ類環(huán)境3樣品標識一定要清楚，能朔源、追蹤，以便整改。4致病菌包括金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、溶血性鏈球菌（產(chǎn)房、新生兒科、母嬰同室加測沙門氏菌）5采樣棉簽在現(xiàn)場要做空白對照。6采樣注意事項采樣時間：消毒后立即采樣。01采樣方法：被檢人五指并攏，用浸有含相應中和劑的無菌洗脫液的棉拭子在雙手指屈面從指根到指端往返涂擦2次(一只手涂擦面積約30cm2)，并隨之轉(zhuǎn)動采樣的棉拭子，剪去操作者手接觸部位，將棉拭子投入10ml含相應中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi)，進行細菌菌落總數(shù)和致病菌檢測。02六、手消毒效果監(jiān)測3、手消毒效果監(jiān)測檢測方法

（1）細菌總數(shù)檢測：將采樣管在混勻器上振蕩20秒或用力振打80次，用無菌吸管吸取1.0ml待檢樣品接種于滅菌平皿，每一樣本接種2個平皿，內(nèi)加入已溶化的45℃～48℃的營養(yǎng)瓊脂15ml～18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置36℃±1℃溫箱培養(yǎng)48h，計數(shù)菌落數(shù)。采樣結(jié)果計算方法：細菌總數(shù)（cfu/cm2）=

（2）致病菌檢測：按《消毒技術規(guī)范原則執(zhí)行。

平板上菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)

采樣面積（cm2）類區(qū)域：細菌總數(shù)≤10cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格。類區(qū)域：細菌總數(shù)≤15cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格。母嬰同室、嬰兒室、新生兒科及兒科病房的工作人員手上，不得檢出沙門氏菌、大腸桿菌、溶血性鏈球菌、黃色葡萄球菌。、Ⅱ類區(qū)域工作人員：細菌總數(shù)≤5cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌為消毒合格。4、結(jié)果判定分清普通衛(wèi)生洗手和外科洗手衛(wèi)生手消毒。01外科洗手標準值?02類環(huán)境：金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌(產(chǎn)房、母嬰同室、新生兒科加測沙門氏菌、溶血性鏈球菌)03類環(huán)境：金黃色葡萄球菌、大腸桿菌04注意事項七、使用中消毒液或無菌器械保存液監(jiān)測

1、使用中消毒液有效成分的測定

2、使用中消毒液或無菌器械保存液染菌量的測定（1）涂抹法：（2）傾注法：用無菌吸管吸取消毒液1.0ml，加入到9ml含相應中和劑的無菌生理鹽水采樣管中混勻，分別取0.5ml放入2只滅菌平皿內(nèi)，加入已溶化的45℃～48℃的營養(yǎng)瓊脂15ml～18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，一平板置20℃培養(yǎng)7天，觀察霉菌生長情況；另一個平板置36℃±1℃溫箱培養(yǎng)72h，計數(shù)菌落數(shù)。同時按檢測致病菌。使用中消毒液或無菌器械保存液染菌量（cfu/ml）=每個平板上的菌落數(shù)×20

結(jié)果判定：消毒液染菌量≤100cfu/ml，并未檢出致病菌為合格。必須是使用中消毒液或無菌器械保存液。樣品名稱一定要標識清楚，不僅要注明采樣地點，而且要注明消毒液的名稱、有效濃度等，例：勁康消毒劑、0.1%健之素消毒液、80%漂白粉溶液、0.5%洗必泰等標識都是不正確的。致病菌檢測包括金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、沙門氏菌、溶血性鏈球菌。要求采樣后1h內(nèi)檢測，實際工作中由于各種原因做不到，采5ml樣品放在滅菌試管中（試管中不放中和劑）帶回實驗室。消毒液細菌菌落總數(shù)標準值≤100cfu/ml，無菌器械保存液細菌菌落總數(shù)標準值是不得檢出。12345注意事項：采樣時間：在滅菌處理后，存放有效期內(nèi)采樣。采樣方法：按《消毒技術規(guī)范原則執(zhí)行結(jié)果判定：陽性對照在24小時內(nèi)應有菌生長，陰性對照在培養(yǎng)期間應無菌生長,如需-厭氧菌及霉菌培養(yǎng)管內(nèi)均為澄清或雖顯渾濁但經(jīng)證明并非有菌生長，判為滅菌合格；如需-厭氧菌及霉菌培養(yǎng)管中任何1管顯渾濁并證實有菌生長，應重新取樣，分別同法復試2次，除陽性對照外，其他各管均不得有菌生長，否則判為滅菌不合格。八、滅菌物品消毒效果監(jiān)測無菌檢驗應在潔凈度為100級單向流空氣區(qū)域內(nèi)進行，最好把滅菌包帶回在百級實驗室打開。應嚴格遵守無菌操作，避免微生物污染。應采有效期內(nèi)的樣品（高壓滅菌：一般是兩周；還氧乙烷：兩年）4、滅菌物品消毒效果監(jiān)測注意事項01監(jiān)測方法：02工藝監(jiān)測03化學監(jiān)測（化學指示卡、指示膠帶）04生物監(jiān)測05常用滅菌器種類06壓力蒸汽滅菌器07環(huán)氧乙烷滅菌器08生物指示物09嗜熱脂肪桿菌芽胞（ATCC7953）,壓力蒸汽滅菌器10枯草桿菌黑色變種芽胞（ATCC9372）環(huán)氧乙烷滅菌器九、滅菌器滅菌效果監(jiān)測4、壓力蒸汽滅菌器滅菌效果監(jiān)測

檢測方法

生物指示菌片布放方法（《消毒技術規(guī)范》）（1）將兩個嗜熱脂肪桿菌芽胞菌片分別裝入滅菌小紙袋內(nèi)，置于標準試驗包中心部位。（2）下排氣壓力蒸汽滅菌器滅菌柜室內(nèi)，排氣口上方放置一個標準試驗包預真空和脈動真空壓力蒸汽滅菌器滅菌柜室內(nèi)，排氣口上方放置一個標準試驗包手提壓力蒸汽滅菌器：通用貯物盒代替標準試驗包，貯物盒內(nèi)盛滿中試管，指示菌片放于中心部位的兩支滅菌試管內(nèi)，貯物盒放于手提壓力蒸汽滅菌器底部。01將兩個嗜熱脂肪桿菌芽胞菌片分別裝入滅菌小紙袋內(nèi)，置于標準試驗包中心部位。03小型滅菌柜（兩層）在上層中央部位和下層前、后等三個部位各放一個試驗包；04小型滅菌柜（三層）在上、中、下層中央各放一個試驗包020.5M3以上的大滅菌柜在上層和中層中央部位，下層前、中、后等五個部位各放一個試驗包。05手提式或臺式滅菌器在下層（底部）放一個試驗包。生物指示菌片布放方法（《現(xiàn)代醫(yī)院消毒》）4、生物指示菌片布點方法經(jīng)一個滅菌周期后，在無菌的條件下取出標準試驗包或貯物盒中的指示菌片，投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，經(jīng)培養(yǎng)7天（自含式生物指示物按說明書執(zhí)行），觀察培養(yǎng)基顏色變化。檢驗時設陰性對照和陽性對照。01結(jié)果判定：每個指示菌片接種的溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基都不變色，判定為滅菌合格；指示菌片之一接種的溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基都由紫色變?yōu)辄S色時，則滅菌過程不合格。02枯草桿菌黑色變種芽胞（ATCC9372）菌片事先放入一次性注射器中（每個注射器中放1個菌片），然后封裝在一剝離式包裝袋內(nèi)。菌片在滅菌器內(nèi)布放的數(shù)量應足夠多，應放在那