醫(yī)學-抗腫瘤的生物技術藥物

單克隆抗體藥物抗腫瘤的生物技術藥物楊春華講師2007年全球醫(yī)藥市場達到6750億美元左右，增速為5-6%，其中生物1制藥市場收入為450億美元，增速為13-14%。2生物制藥占醫(yī)藥產業(yè)8.8-10%，其中美國市場占62%，歐洲占25%，3日本占7%。4美國已產業(yè)化的基因工程藥物200種，占藥品總銷售額的10%。5我國生物技術藥物研究和開發(fā)起步較晚，已有20多種基因工程藥物和6疫苗上市，正在進行臨床試驗的品種近100種。72005年我國醫(yī)藥生物技術產品總銷售額達到350億元。8至2008年底，F(xiàn)DA共批準99種生物技術藥物上市2007年29/110種生物技術藥物的銷售額超過10億美元2007年銷售額超過40億美元的藥物有16種，基因工程藥物占據(jù)7種：1.治療非霍奇金淋巴瘤的anti-CD20抗體Rituxan2.治療乳腺癌的anti-EGFRII抗體Herceptin3.治療腫瘤放化療后出現(xiàn)的白細胞減少的G-CSF4.治療肺癌、乳腺癌和結直腸癌的anti-VEGF抗體Avastin5.治療類風濕關節(jié)炎的anti-TNFα抗體Enbrel、Remicade單克隆抗體藥物TypeProductMarketerApprovedChimericRituxanNon-Hodgkin'slymphomaGenentechNovember1997ChimericSimulectOrganrejectionprophylaxisNovartisMay1998ChimericRemicadeRheumatoidarthritis,Crohn'sdiseaseohnson&JohnsonAugust1998CDR-graftedZenapax

OrganrejectionprophylaxisRocheDecember1997CDR-graftedSynagis

RespiratorysyncytialvirusMedimmuneJune1998CDR-graftedHerceptin

MetastaticbreastcancerGenentechSeptember1998CDR-graftedMylotarg

AcutemyeloidleukemiaAmericanHomeProductsMay2000MonoclonalAntibodiesontheMarketTypeProductMarketerApprovedMurine

RadiolabeledZevalin

Non-Hodgkin'sLymphomaIDECPharmaceuticalsandScheringAGMarch2002PhageDisplayHumira

RheumatoidarthritisAbbottLaboratoriesDecember2002CDR-graftedXolair

ModeratetoseverepersistentasthmaGenentechandNovartisJune2003Murine

RadiolabeledBexxar

CD20positive,follicular,Non-Hodgkin'sLymphomaCorixaandGlaxoSmithKlineJune2003CDR-graftedRaptiva

Chronicmoderate-to-severepsoriasisGenentechandXomaOctober2003ChimericErbitux

ColorectalcancerImcloneandBristol-MyersSquibbFebruary2004CDR-graftedAvastin（Bevacizumab）colonandrectumcancerGenentechFebruary20041979-1980國內個別單位開始單抗的研制11984年以前基本是技術方法的建立和完善21985年以后單抗為基礎的診斷試劑用于研究和臨床31987年以后單抗的體內診斷和治療制劑被列入863計劃41992年我國第一個單抗衍生物被SDA批準進入臨床52005年第四軍醫(yī)大學研制的治療肝癌新藥——碘1316美妥昔單抗注射液，這是全球第一個專門用于7治療原發(fā)性肝癌的單抗導向同位素藥物.8單克隆抗體技術在我國的發(fā)展.由分化成熟的終末B細胞--漿細胞合成、分泌的一類能與相應抗原（antigen，Ag）特異性結合的具有免疫功能的糖蛋白。什么是抗體（Antibody，Ab）？Ag1234B抗體，Ab一個

B細胞只能生產一種抗體，對付某一抗原決定基。B1B2B3B4

多克隆抗體Ag341B4B4B4

單克隆抗體在V區(qū)中，某些特定位置的氨基酸殘基的組成和排列順序高度可變，稱為HVR，或互補決定區(qū)（CDR）。VL區(qū)和VH區(qū)各存在個3CDRFR1~4為骨架區(qū)，穩(wěn)定HVR的結構。Fab段：抗原結合片段Fc段：可結晶段FabFc單擊此處添加正文，文字是您思想的提煉，為了演示發(fā)布的良好效果，請言簡意賅地闡述您的觀點。您的內容已經簡明扼要，字字珠璣，但信息卻千絲萬縷、錯綜復雜，需要用更多的文字來表述；但請您盡可能提煉思想的精髓，否則容易造成觀者的閱讀壓力，適得其反。正如我們都希望改變世界，希望給別人帶去光明，但更多時候我們只需要播下一顆種子，自然有微風吹拂，雨露滋養(yǎng)。恰如其分地表達觀點，往往事半功倍。當您的內容到達這個限度時，或許已經不純粹作用于演示，極大可能運用于閱讀領域；無論是傳播觀點、知識分享還是匯報工作，內容的詳盡固然重要，但請一定注意信息框架的清晰，這樣才能使內容層次分明，頁面簡潔易讀。如果您的內容確實非常重要又難以精簡，也請使用分段處理，對內容進行簡單的梳理和提煉，這樣會使邏輯框架相對清晰。為了能讓您有更直觀的字數(shù)感受，并進一步方便使用，我們設置了文本的最大限度，當您輸入的文字到這里時，已瀕臨頁面容納內容的上限，若還有更多內容，請酌情縮小字號，但我們不建議您的文本字號小于14磅，請您務必注意。單擊此處添加正文，文字是您思想的提煉，為了演示發(fā)布的良好效果，請言簡意賅地闡述您的觀點。您的內容已經簡明扼要，字字珠璣，但信息卻千絲萬縷、錯綜復雜，需要用更多的文字來表述；但請您盡可能提煉思想的精髓，否則容易造成觀者的閱讀壓力，適得其反。正如我們都希望改變世界，希望給別人帶去光明，但更多時候我們只需要播下一顆種子，自然有微風吹拂，雨露滋養(yǎng)。恰如其分地表達觀點，往往事半功倍。當您的內容到達這個限度時，或許已經不純粹作用于演示，極大可能運用于閱讀領域；無論是傳播觀點、知識分享還是匯報工作，內容的詳盡固然重要，但請一定注意信息框架的清晰，這樣才能使內容層次分明，頁面簡潔易讀。如果您的內容確實非常重要又難以精簡，也請使用分段處理，對內容進行簡單的梳理和提煉，這樣會使邏輯框架相對清晰。為了能讓您有更直觀的字數(shù)感受，并進一步方便使用，我們設置了文本的最大限度，當您輸入的文字到這里時，已瀕臨頁面容納內容的上限，若還有更多內容，請酌情縮小字號，但我們不建議您的文本字號小于14磅，請您務必注意。單擊此處添加正文，抗體的發(fā)展過程01單克隆抗體02基因工程抗體03多克隆抗血清04抗體庫傳統(tǒng)抗血清抗原免疫所有抗體混合123412341234B淋巴細胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤細胞培養(yǎng)骨髓瘤細胞融合B淋巴細胞骨髓瘤細胞雜交瘤BBB瘤瘤瘤HAT選擇培養(yǎng)液（黃嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶）選擇培養(yǎng)骨髓瘤細胞因缺乏次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉移酶而死亡檢測到所需的X抗體分離單個細胞進行克隆化培養(yǎng)檢測到所需的X抗體注入小鼠腹腔擴大培養(yǎng)體外培養(yǎng)大量單克隆抗體鼠單抗人單抗大鼠小鼠產量高、操作比小鼠麻煩少用易操作、多用HAMA反應人人雜交瘤人B細胞、骨髓瘤細胞融合人鼠雜交瘤人B細胞、鼠骨髓瘤細胞融合細胞雜交瘤技術單克隆抗體的不足：目前單克隆抗體均是鼠源性抗體，應用于人體內可產生人抗鼠抗體（humanantimouseantibody,HAMA)人體的排斥反應人體內半衰期只有5-6小時到達靶組織的藥量僅有1％基因工程抗體鼠單抗100%鼠源鼠/人嵌合單抗(66-75%人源)人源化單抗(90-95%人源)100%人源為了降低免疫原性，降低相對分子量，增加穿透力，開發(fā)了新的基因工程抗體。恒定區(qū)人源化可變區(qū)人源化Pr鼠VH人CHPr鼠VL人CL免疫球蛋白基因載體的構建H鏈嵌合載體L鏈嵌合載體共轉染細胞啟動子人-鼠嵌合抗體基因工程改造策略鼠VH01鼠VL02人CL03人CH04抗體分泌細胞05CDR序列CDR序列鼠單克隆抗體人抗體人源化抗體CDR移植小分子抗體分子質量小，免疫原性低。易于進入實體瘤周圍的微循環(huán)。無Fc片段，不易與具有Fc受體的非靶細胞結合，用于免疫診斷時成像清晰。構建較簡單，易于操作和改造?？稍诩毦斜磉_，易于大量生產。與抗原結合活性相對較弱。半衰期短。小分子抗體的優(yōu)點：小分子抗體的缺點：抗體庫抗體庫技術：用基因克隆技術克隆全套抗體的重鏈和輕鏈的可變區(qū)基因，然后重組到特定的表達載體中，轉化特定的宿主細胞表達有功能的抗體分子，并通過親和篩選獲得特異性抗體可變區(qū)基因的技術。利用抗體庫技術篩選到的抗體可變區(qū)基因可被用于構建基因工程抗體。噬菌體抗體庫越過了細胞融合的步驟，省時省力。擴大了篩選容量，易于獲得高親和力抗體。不需進行人工體內免疫。抗體庫的優(yōu)點：重組DNA衍生的人源化單克隆抗體可單藥使用,不良反應輕，耐受性好,可在門診治療療效顯著，中位緩解時間長商品名：赫賽汀英文名：Herceptin通用名：注射用曲妥珠單抗(Trastuzumab)針對HER2的特異性單克隆抗體，用于治療HER2過度表達的轉移性乳腺癌HER2人類表皮生長因子受體-2

HumanEpidermalgrowthFactorReceptor-2

分子量185kDa的糖蛋白:細胞外區(qū)（配體結合區(qū)）跨膜區(qū)（傳導信號）細胞內區(qū)（激酶活性）HER2細胞內細胞外細胞膜基因轉錄提高細胞運動抑制凋亡細胞生長和增殖轉移化療耐藥腫瘤生長EGFEGFREGFRTGF

TGF

EGFRHER2HER2HER3NRGNRGHER2HER4HER2HER2信號級聯(lián)放大核膜1=-

基因拷貝數(shù)2=-

mRNA

轉錄3=-

細胞表面受體蛋白表達4=-

細胞外受體功能域釋放A=HER2DNAB=HER2信使RNAC=HER2受體蛋白細胞核細胞質細胞膜1234CBAHER2陽性：過度表達/擴增HER2正常表達細胞(HER2–)(~2萬個受體）HER2過表達的細胞(HER2+)(100–200萬個受體）正常HER2表達HER2基因擴增導致HER2過表達HER2過表達導致腫瘤增殖促進細胞的生長和增殖------腫瘤發(fā)生抑制細胞的凋亡誘導血管新生提高細胞運動能力,增強腫瘤的浸潤轉移作用30％以上的人類腫瘤中存在HER2基因的擴增/過度表達（如乳腺癌、卵巢癌、子宮內膜癌、輸卵管癌、胃癌和前列腺癌等。A20％－30％的原發(fā)性浸潤性乳腺癌有HER2基因的擴增/過度表達。BHerceptin即為一種針對HER2受體的人源化單克隆抗體，是乳腺癌治療領域的第一個分子靶向性藥物，具有高效、低毒、選擇性強的特點。C2010年，歐洲和美國先后批準化療聯(lián)合使用曲妥珠單抗治療HER2陽性胃及胃食管交界癌患者。DHER2在癌癥中過表達：刺激刺激HER2タンパクがん細胞増殖刺激刺激HER2タンパク癌細胞増殖抑制Heceptin作用Heceptin癌細胞表面存在著Her-2蛋白，受刺激后促進癌細胞的增殖20～30％的癌細胞。Heceptin與Her-2結合阻斷和抑制細胞的增殖，用于

轉移性乳腺癌病人的治療。HER2檢測流程原位雜交免疫組織化學440mg 凍干粉針劑20ml 無菌注射用水赫賽汀?用法用量所需溶液的體積=體重（Kg）

劑量（4mg/Kg負荷量或2mg/Kg維持量）

21（mg/ml，配置好溶液的濃度）每周方案三周方案用法用量首劑

4mg/kg，90分鐘內靜脈滴注，觀察2小時維持劑量

2mg/kg，每周一次，30分鐘靜脈滴注首劑

8mg/kg，90分鐘內靜脈滴注，觀察2小時維持劑量

6mg/kg，每三周一次，30分鐘靜脈滴注療程建議轉移性乳腺癌至少6個月輔助治療一年單克隆抗體藥物：Rituximab商品名：美羅華英文名：Mabthera通用名：利妥昔單抗(Rituximab)針對CD20的特異性單克隆抗體，通過基因重組技術生產的一種嵌合鼠/人的單克隆抗體,用于治療非霍奇淋巴瘤。B細胞淋巴瘤（臨床多見）T細胞淋巴瘤非霍奇淋巴瘤（non-hodgkin’s

lymphoma，NHL）瘤細胞成分單一，大多起源于B淋巴細胞，部分來自T淋巴細胞，只有少數(shù)來自組織細胞。故目前多傾向于根據(jù)細胞形態(tài)結合免疫功能分類：CD20抗原在從前B細胞到活化B細胞的各個階段都表達,但在正常造血干細胞、分化成熟的漿細胞及其他類型造血細胞系卻未見表達，且CD20在超過90%的B細胞性NHL中均有表達。因此CD20成為腫瘤治療的一個較好的靶點。Rituximab：通過ADCC，CDC促凋亡與化療藥物協(xié)同作用CD20Rituxi-CD20淋巴瘤治療單克隆抗體Epratuzumab：人源性IgG1抗CD22單抗60%－80％的B-NHL細胞表達CD22濾泡性淋巴瘤、套細胞淋巴瘤和邊緣區(qū)B細胞性淋巴瘤高表達CD22Anti-CD22與CD22結合后迅速內在化03040201抗CD22單抗其他針對B,T細胞的單抗

復發(fā)濾泡性淋巴瘤劑量組總有效率（CR＋PR）中位TTP360mg/m243％23.7月480mg/m227％彌漫大B細胞淋巴瘤240mg/m233％8.1月360mg/m215％480mg/m220％EpratuzumabI/II期臨床試驗結果抗CD30單抗CD30在霍奇金淋巴瘤的RS細胞和間變大細胞淋巴瘤高度表達，是治療淋巴瘤的理想靶點嵌合性CD30單抗SGN-30及人源化CD30單抗MDX-60治療耐藥性HD、ALCL和其他CD30+淋巴瘤的I/II期臨床試驗正在進行中CD40在惡性T和B淋巴細胞中表達，CD40被認為與細胞的增殖及分化相關。SGN-40是一種人源化IgG1型抗CD40抗體，臨床前研究表明其對淋巴瘤細胞具有明顯的殺傷效應。目前正在DLBCL中進行兩項II期臨床試驗，一項為SGN-40單用，另一項為SGN-40與細胞毒