分子生物學(xué)課件第七章-蛋白質(zhì)的生物合成-翻譯

第七章蛋白質(zhì)的生物合成－翻譯Chapter7proteinbiosynthesis（translation）11/24/20241一、遺傳密碼（geneticcodon）mRNA上存在遺傳密碼

遺傳密碼:DNA（或mRNA）中的核苷酸序列與蛋白質(zhì)中氨基酸序列之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系稱為遺傳密碼。

密碼子(codon)：mRNA上每3個(gè)相鄰的核苷酸編碼蛋白質(zhì)多肽鏈中的一個(gè)氨基酸，這三個(gè)核苷酸就稱為一個(gè)密碼子或三聯(lián)體密碼（tripletcodon）11/24/20242

1954，Gamov

提出三聯(lián)體密碼子1、遺傳密碼的證實(shí)

1961年Crick等證實(shí)了三聯(lián)密碼的真實(shí)性

Nirenberg以均聚物及核糖體結(jié)合實(shí)驗(yàn)破譯遺傳密碼

Khorana特定共聚物遺傳密碼

1966，64種密碼子全部測(cè)完11/24/20243他們的方法是:(1)去模板：用DNAase處理E.coli抽提物，使DNA降解，除去原有的細(xì)菌模板。(2)加入polU：合成了多聚苯丙氨酸這一結(jié)果不僅證實(shí)了無(wú)細(xì)胞系統(tǒng)的成功，同時(shí)還表明UUU是苯丙氨酸的密碼子。分別加入polyA，polyC和polyG結(jié)果相應(yīng)地獲得了多聚賴氨酸，多聚脯氨酸和多聚甘氨酸。11/24/20246(3)按比例加入２種核苷混合的多聚物由于當(dāng)時(shí)還未分離RNApol酶，無(wú)法按設(shè)計(jì)的模板來(lái)合成RNA，Nirenberg又想出了一種新的方法，就是按一定的堿基比例來(lái)合成RNA。比如在底物中加5份的UDP和1份的GDP，堿基比為U：G＝5：1，它們能組成8種三聯(lián)體：

UUU，UUG，UGU，GUU，GGG，GGU，GUG，UGG。U和G隨機(jī)加入到三聯(lián)體中，這樣按比例各個(gè)位置上進(jìn)入U(xiǎn)和G的概率不同，如氨基酸測(cè)定結(jié)果：11/24/20247如UUU：UGG＝（5

5

5）:（5

1

1）＝25：1同理UUU：UUG＝5：1，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果推測(cè):苯丙氨酸（UUU）：半胱氨酸（UGU）＝5：1苯丙氨酸（UUU）：纈氨酸（GUU）＝5：1苯丙氨酸（UUU）：甘氨酸（GGU）＝24：111/24/20248核糖體結(jié)合實(shí)驗(yàn)1964年Nirenberg又采用核糖體結(jié)合實(shí)驗(yàn)(1)tRNA和氨基酸及三聯(lián)體的結(jié)合是特異的；(2)上述結(jié)合的復(fù)合體大分子是不能通過(guò)硝酸纖維濾膜的微孔，而tRNA-氨基酸的復(fù)合體是可以通過(guò)的。11/24/2024911/24/202410以特定的共聚物為模板指導(dǎo)多肽的合成Khorara采用了有機(jī)合成一條短的單鏈DNA重復(fù)序列然后用DNApol合成其互補(bǔ)鏈，再用RNApol及不同的底物合成兩條重復(fù)的RNA共聚物，作為翻譯的mRNA，加入到體外表達(dá)系統(tǒng)中11/24/20241111/24/202412Ser絲氨酸;Thr蘇氨酸;Tyr酪氨酸;Phe苯丙氨酸11/24/202413起始密碼(initiationcodon):AUG

終止密碼(terminationcodon):UAA，UAG，UGA共６４個(gè)，其中６１個(gè)為有意義密碼（20種氨基酸？）開(kāi)放讀碼框：從mRNA5’端起始密碼子AUG到3’端終止密碼子之間的核苷酸序列，各個(gè)三聯(lián)體密碼連續(xù)排列編碼一個(gè)蛋白質(zhì)多肽鏈，稱為開(kāi)放讀碼框（openreadingframe,ORF）。11/24/202414遺傳密碼表11/24/2024152、遺傳密碼的基本特征（1）連續(xù)性編碼蛋白質(zhì)氨基酸序列的各個(gè)三聯(lián)體密碼連續(xù)閱讀，密碼間既無(wú)間斷也無(wú)交叉。如插入或缺失一堿基，可造成移碼突變。Thr蘇氨酸;Tyr酪氨酸11/24/202416（2）密碼子的簡(jiǎn)并性同一個(gè)氨基酸具有兩個(gè)或更多個(gè)密碼子的現(xiàn)象稱密碼子的簡(jiǎn)并性（degeneracy）。對(duì)應(yīng)于同一種氨基酸的不同密碼子稱同義密碼子（synonymouscodon）大多數(shù)簡(jiǎn)并性表現(xiàn)在密碼子的第三個(gè)核苷酸上，即第一、二個(gè)核苷酸確定后，第三個(gè)核苷酸可變。11/24/202417氨基酸密碼子的簡(jiǎn)并性簡(jiǎn)并密碼子越多，生物遺傳的穩(wěn)定性越大，氨基酸出現(xiàn)頻率越高意義：色氨酸11/24/202418（3）擺動(dòng)性（wobble）AUC123擺動(dòng)配對(duì)轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸的tRNA的反密碼需要通過(guò)堿基互補(bǔ)與mRNA上的遺傳密碼反向配對(duì)結(jié)合，但反密碼與密碼間不嚴(yán)格遵守常見(jiàn)的堿基配對(duì)規(guī)律，稱為擺動(dòng)配對(duì)。三中讀二（2outof3reading）11/24/202419密碼子、反密碼子配對(duì)的擺動(dòng)現(xiàn)象tRNA反密碼子第1位堿基IUGACmRNA密碼子第3位堿基U,C,AA,GU,CUG11/24/202420三中讀二一般可分為三種情況：(1)第１,２兩個(gè)堿基形成６個(gè)氫鍵時(shí)，可三中讀二。如CCX，CGＸ，GCX和GGX。(2)第1,2兩個(gè)堿基形成4個(gè)氫鍵時(shí),不可三中讀二。如AAX，AUX，UAX和UUX。(3)第1,２兩個(gè)堿基形成５個(gè)氫鍵時(shí),當(dāng)?shù)诙€(gè)堿基為嘧啶時(shí)，可三中讀二；如UCX，ACX，CUX和GUX。當(dāng)?shù)诙€(gè)堿基為嘌呤時(shí)則不能三中讀二，如CAX，GAX，UGX和AGX。11/24/202421密碼子的使用頻率與tRNA的數(shù)量有關(guān)（4）密碼子的偏愛(ài)性（codonusagebias）如：Leu有6種不同密碼子，但CUG使用很高，而CUA使用率就很低。同一物種中，編碼同一氨基酸的密碼子的使用頻率不同。不同物種間（原核和真核生物），編碼同一氨基酸的密碼子的使用頻率也不同。需要量多的蛋白質(zhì)有關(guān)codonusage高相應(yīng)tRNA量多11/24/202422CodonusageObservedforE.coliRibosomeProteincodons11/24/202423CodonusageinthegenesofAnimalscodons11/24/202424（5）通用性和變異性蛋白質(zhì)生物合成的整套密碼，從原核生物到人類都通用。動(dòng)物細(xì)胞的線粒體DNA（mtDNA）、支原體及少數(shù)纖毛類原生動(dòng)物的編碼方式與通用密碼子有所不同。11/24/202425CodonUsualmeaningAlternativeOrganelleororganismAGAAGGArgStop,SerSomeanimalmitochondriaAUAIleMetMitochondriaCGGArgTrpPlantmitochondriaCUNLeuThrYeastmitochondriaAUUGUGUUGIleValLeuStartSomeprotozoansUAAUAGStopGluSomeprotozoansUGAStopTrpMitochondria,mycoplasma線粒體密碼子的特殊性11/24/202426二、tRNA1.tRNA的結(jié)構(gòu)50~95nt組成，其中22nt是恒定的，呈三葉草結(jié)構(gòu);5’端和3’端配對(duì)（常為7bp）形成莖區(qū)，稱為受體臂（acceptorarm）或稱氨基酸臂。在3’端永遠(yuǎn)是4個(gè)堿基（XCCA）的單鏈區(qū)，在其末端有2’-OH或3’-OH，是被氨基?；稽c(diǎn),此臂負(fù)責(zé)攜帶特異的氨基酸。11/24/202427TψC常由5bp的莖和7nt的環(huán)組成，此臂負(fù)責(zé)和核糖體上的rRNA識(shí)別結(jié)合；反密碼子環(huán)(anticodonloop)常由5bp的莖區(qū)和7Nt的環(huán)區(qū)組成，它負(fù)責(zé)對(duì)密碼子的識(shí)別與配對(duì)。D環(huán)(Dloop)的莖區(qū)長(zhǎng)度常為4bp，也稱雙氫尿嘧啶環(huán)。負(fù)責(zé)和氨基酰tRNA聚合酶結(jié)合;額外環(huán)(extraloop)可變性大，從4Nt到21Nt不等，其功能是在tRNA的L型三維結(jié)構(gòu)中負(fù)責(zé)連接兩個(gè)區(qū)域（D環(huán)－反密碼子環(huán)和TψC-受體臂）。11/24/202428---aaacceptarm;loadingaaat3’end---DHUloop;

contactwithAARS---anti-codonloop;

34thiswobblebase---TΨCloop;

contactwith5srRNA---extraloop;

3411/24/202429tRNA的三級(jí)結(jié)構(gòu)示意圖(倒L形)11/24/2024302、氨基酸活化（1）氨基酰-tRNA分子的形成氨基酸的活化氨基酸+ATP+tRNA氨基酰-tRNA合成酶氨基酰-tRNA+AMP+PPi11/24/202431（2）氨基酰tRNA合成酶(aminoacyl-tRNAsynthetase，AARS)存在于胞液中，催化一個(gè)特定的aa結(jié)合到相應(yīng)的tRNA分子上。

每種氨基酰tRNA合成酶對(duì)相應(yīng)氨基酸以及攜帶氨基酸的數(shù)種tRNA具有高度特異性，保證tRNA能夠攜帶正確的氨基酸對(duì)號(hào)入座。11/24/202432（3）氨酰tRNA合成酶的鑒別功能動(dòng)力學(xué)校對(duì)（Kineticproofreading）化學(xué)校對(duì)（Chemicalproofreading）11/24/202433以aa為準(zhǔn)校正tRNA11/24/202434以tRNA為準(zhǔn)校正aa11/24/202435

原核和真核生物核糖體的組成及功能核糖體亞基rRNAs蛋白R(shí)NA的特異順序和功能

細(xì)菌

70S

50S23S=2904b31種(L1-L31）含CGAAC和GTψCG互補(bǔ)2.5×106D5S=120b66%RNA30S16S=1542b21種(S1-S21)16SRNA(CCUCCU)和S-D順序(AGGAGG)互補(bǔ)

哺乳動(dòng)物

80S

60S28S=4718b49種有GAUC和tRNAfMet的TψCG互補(bǔ)4.2×106D5S=120b60%RNA5.8S=160b

40S18S=1874b33種和Capm7G結(jié)合

三、核糖體的結(jié)構(gòu)和功能11/24/202436核糖體的組成11/24/202437mRNA結(jié)合位點(diǎn)：與mRNA結(jié)合，位于30S亞基上P位：即肽位(peptidylsite)，或給位，在延長(zhǎng)成肽之后，3′端連接肽鏈的肽酰tRNA占據(jù)的位置，肽鏈轉(zhuǎn)位至此，延長(zhǎng)繼續(xù)。A位：即氨基酰位(aminoacylsite)，或稱受位，每次延長(zhǎng)，氨基酰tRNA就加入到A位上，延長(zhǎng)成肽中，此位因接受肽?；?，故名受位。E位：排出位(exitsite)，空載的tRNA從此位點(diǎn)被排出活性位點(diǎn)11/24/20243811/24/202439原核生物翻譯過(guò)程中核蛋白體結(jié)構(gòu)模式:A位：氨基酰位(aminoacylsite)P位：肽酰位(peptidylsite)E位：排出位(exitsite)11/24/202440蛋白質(zhì)生物合成體系n氨基酸蛋白質(zhì)mRNA、tRNA、rRNA酶、蛋白質(zhì)因子、ATP、GTP11/24/202441四、蛋白質(zhì)的翻譯過(guò)程肽鏈合成的方向：氨基端（N端）羧基端(C端)由多種蛋白因子和RNA分子參與包括氨酰－tRNA復(fù)合物的形成，翻譯的起始，延伸和終止過(guò)程11/24/2024421、氨酰－tRNA復(fù)合物的形成氨基酸+tRNA氨基酰-tRNAATP

AMP＋PPi氨基酰-tRNA合成酶氨基酰-tRNA合成酶(aminoacyl-tRNAsynthetase)11/24/202443◆氨基酰-tRNA的表示方法：Ala-tRNAAla

Ser-tRNASerMet-tRNAMet◆起始肽鏈合成的氨基酰-tRNA真核生物：Met-tRNAiMet原核生物：fMet-tRNAifMet11/24/2024442、翻譯的起始肽鏈合成起始階段，是指mRNA和起始氨基酰-tRNA分別與核糖體結(jié)合而形成翻譯起始復(fù)合物的過(guò)程。需要起始因子（IF或eIF）和ATP、GTP參與。

翻譯的起始是mRNA能忠實(shí)翻譯的關(guān)鍵步驟，也是調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)合成的部位。11/24/2024451.核糖體大、小亞基分離;2.mRNA在小亞基定位結(jié)合；

S-D序列：又稱核糖體結(jié)合位點(diǎn)(ribosomalbindingsite,RBS)，是mRNA起始密碼上游的一段富含嘌呤核苷酸的序列，該序列以…AGGA…為核心。

IF1、IF3協(xié)助3.起始氨基酰-tRNA（fMet-tRNAifMet

）在小亞基上就位；4.核糖體大亞基結(jié)合。（1）原核生物翻譯的起始11/24/202446小亞基與mRNA的結(jié)合S-D序列5’3’小亞基11/24/20244730S起動(dòng)復(fù)合物的形成30S小亞基30S小亞基+IF1+IF3IF1+IF330S小亞基＋mRNA+IF1+IF3mRNA30S小亞基+mRNA+IF1+IF2+IF3+GTP+甲酰蛋氨酰tRNAIF2+GTPAUG5'3'IF-3IF-1IF-2GTP甲酰蛋氨酰tRNA30S啟動(dòng)復(fù)合體11/24/202448三種起始因子IF1IF2

IF3功能輔助IF3結(jié)合30S小亞基，占據(jù)A位點(diǎn)特異識(shí)別fmet-tRNAifmet形成fmet-tRNAifmet-IF2-GTP有GTP酶活性結(jié)合30S小亞基使核糖體解離促進(jìn)30S小亞基與mRNA結(jié)合11/24/20244930S啟動(dòng)復(fù)合體30S小亞基+mRNA+IF1+IF2+GTP+甲酰蛋氨酰tRNAIF330S小亞基+mRNA+50S大亞基+IF1+IF2+GTP+甲酰蛋氨酰tRNA50S大亞基30S小亞基+mRNA+50S大亞基+甲酰蛋氨酰tRNAGDP+PiGTPIF1+IF2IF-3IF-1AUG5'3'IF-2GTPGDPPi70S起動(dòng)復(fù)合體的形成70S啟動(dòng)前復(fù)合體啟動(dòng)復(fù)合體11/24/202450起始和延伸Met-tRNAs的區(qū)別：⑴兩種tRNA本身有差別；⑵氨基酸的狀態(tài)不同。11/24/20245111/24/20245211/24/202453（2）真核生物蛋白質(zhì)合成的起始11/24/20245411/24/20245511/24/20245611/24/202457◆根據(jù)mRNA密碼序列的指導(dǎo),次序添加氨基酸從N端向C端,延伸肽鏈,直到合成終止的過(guò)程◆每次循環(huán)增加一個(gè)氨基酸，包括以下三步：

進(jìn)位(entrance)轉(zhuǎn)肽(peptidebondformation)移位(translocation)◆延長(zhǎng)因子(elongationfactor,EF)

EF-Tu:促進(jìn)氨基酰-tRNA進(jìn)入A位EF-Ts:調(diào)節(jié)亞基EFG:轉(zhuǎn)位酶活性，促進(jìn)卸載tRNA釋放3、肽鏈的延長(zhǎng)（elongation）原核生物：11/24/202458根據(jù)mRNA下一組遺傳密碼指導(dǎo)，使相應(yīng)氨基酰-tRNA進(jìn)入核蛋白體A位。

TuTsGTPGDPAUG5'3'TuTsGDPTu-GTP進(jìn)位(entrance)11/24/202459延伸因子（elongationfactor）(1)當(dāng)GTP存在時(shí)，EF-Tu呈活性狀態(tài)。(2)當(dāng)GTP水解成GDP時(shí)，EF-Tu便失活。(3)GDP被GTP取代后，它又恢復(fù)活性。11/24/202460由轉(zhuǎn)肽酶(transpeptidase)催化的肽鍵形成過(guò)程肽基轉(zhuǎn)移酶轉(zhuǎn)肽（transpeptidation）11/24/202461轉(zhuǎn)肽酶肽鍵位置轉(zhuǎn)肽酶（大亞基）催化形成肽鍵P位：f-met-（肽酰）的α-COO-+A位：氨基酰的α-NH4+形成肽鍵A位：反應(yīng)在此位上進(jìn)行（P位上的f-met退至A位）生成的二肽在A位上。P位空留：P位上無(wú)負(fù)載的tRNA在肽鍵形成前脫落。（出位，E位）11/24/202462轉(zhuǎn)位（Translocation)EF-G有轉(zhuǎn)位酶(translocase)活性,可結(jié)合并水解GTP，促進(jìn)核糖體向mRNA的3'側(cè)移動(dòng)11/24/202463轉(zhuǎn)位

在A位的二肽鏈從A位進(jìn)入P位酶位置方向轉(zhuǎn)位酶----EF-G有GTP酶活性P位：肽-tRNA-mRNAA位：空留下一個(gè)AA進(jìn)入mRNA：從5’3’移動(dòng)1個(gè)帶有肽鏈的tRNA：從A位P位肽鏈合成：從N端C端延長(zhǎng)11/24/202464fMetAUG5'3'fMetTuGTP11/24/20246511/24/202466

真核生物翻譯的延伸11/24/2024674、翻譯的終止（termination）需要釋放因子（RF）的參與。

原核生物RF：RF-1、RF-2、RF-3

真核生物RF：eRF

RF1：作用于UAA、UAGRF2：作用于UGA、UAARF3：促進(jìn)釋放結(jié)合GTP/GTP酶活性當(dāng)核蛋白體出現(xiàn)mRNA的終止密碼后，多肽鏈合成停止，肽鏈從肽酰－tRNA中釋出，mRNA、核糖體大、小亞基等分離，這些過(guò)程稱為肽鏈合成終止。11/24/202468UAG5'3'RFCOO-11/24/202469真核細(xì)胞蛋白質(zhì)合成的特點(diǎn)核糖體為80S，由60S的大亞基和40S的小亞基組成起始密碼AUG起始tRNA為Met－tRNAiMet起始復(fù)合物結(jié)合在mRNA5’端AUG上游的帽子結(jié)構(gòu)，真核mRNA無(wú)富含嘌呤的SD序列（除某些病毒mRNA外）由多種起始因子參與（eIF1,eIF2,eIF3等十多種

）真核細(xì)胞核蛋白體沒(méi)有E位，轉(zhuǎn)位時(shí)卸載的tRNA直接從P位脫落肽鏈延伸因子（EF1,EF2）及釋放因子（RF可識(shí)別3種終止子）11/24/202470五、蛋白質(zhì)的運(yùn)輸及翻譯后修飾1974年，布洛貝爾發(fā)表了“信號(hào)假說(shuō)”，推測(cè)分泌出細(xì)胞的蛋白質(zhì)包含一內(nèi)在的轉(zhuǎn)運(yùn)與定位信號(hào)，決定著其到達(dá)并跨越相應(yīng)的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)。

后來(lái)，布洛貝爾發(fā)表了蛋白質(zhì)針對(duì)特定的細(xì)胞結(jié)構(gòu)排列定位的普遍原理：每一蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中都含有定位于細(xì)胞內(nèi)特異位置所需的信息；特定的氨基酸序列決定著蛋白質(zhì)是穿越細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，還是成為膜的組成部分，或是被轉(zhuǎn)運(yùn)出細(xì)胞外。

11/24/20247111/24/202472◆信號(hào)序列(signalsequence)所有靶向輸送的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中存在分選信號(hào)，主要為N末端特異氨基酸序列，可引導(dǎo)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞的適當(dāng)靶部位，這一序列稱為信號(hào)序列靶向輸送蛋白信號(hào)序列或成分分泌蛋白信號(hào)肽內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔蛋白信號(hào)肽C端-Lys-Asp-Glu-Leu-COO-(KDEL序列)線粒體蛋白N端靶向序列（20～35氨基酸殘基）核蛋白核定位序列（-Pro-Pro-Lys-Lys-Lys-Arg-Lys-Val）過(guò)氧化體蛋白-Ser-Lys-Leu-（PST序列）溶酶體蛋白Man-6-P（甘露糖-6-磷酸）靶向輸送蛋白的信號(hào)序列或成分（1）信號(hào)肽引導(dǎo)蛋白質(zhì)達(dá)到靶部位11/24/202473多位于多肽鏈的N端10－40個(gè)氨基酸殘基N端:帶正電荷氨基酸殘基中間:疏水的核心區(qū)C端:可被信號(hào)肽酶識(shí)別并裂解信號(hào)肽1—10aa15—20aa15—30aa1—3aa富含Arg+,Lys+-----富含Phe,Leu,Ile…親水螺旋疏水螺旋S.S.酶切割位點(diǎn)11/24/202474信號(hào)識(shí)別體（signalrecognitionparticle，SRP）由一分子RNA(長(zhǎng)300nt)和6個(gè)不同的多肽分子組成

SRP有兩個(gè)功能域：一個(gè)用以識(shí)別信號(hào)肽，另一個(gè)用以干擾進(jìn)入的氨酰-RNA和肽酰移位酶的反應(yīng)，以終止多肽鏈的延伸作用。

11/24/202475信號(hào)肽引導(dǎo)真核分泌蛋白進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)信號(hào)肽與SRP結(jié)合→肽鏈延伸終止→SRP與受體結(jié)合→SRP脫離信號(hào)肽→肽鏈在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上繼續(xù)合成，同時(shí)信號(hào)肽引導(dǎo)新生肽鏈進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔→信號(hào)肽切除→肽鏈延伸至終止→翻譯體系解散11/24/20247611/24/20247711/24/20247811/24/202479（2）線粒體蛋白的靶向輸送11/24/202480線粒體前體蛋白信號(hào)序列的特點(diǎn)是：①多位于肽鏈的N端，由大約20個(gè)氨基酸構(gòu)成；②沒(méi)有帶負(fù)電荷的氨基酸，形成一個(gè)兩性α螺旋，帶正電荷的氨基酸殘基和不帶電荷的疏水氨基酸殘基分別位于螺旋的兩側(cè)；③對(duì)所牽引的蛋白質(zhì)沒(méi)有特異性要求，非線粒體蛋白連接上此類信號(hào)序列，也會(huì)被轉(zhuǎn)運(yùn)到線粒體。

11/24/202481信號(hào)序列定位轉(zhuǎn)運(yùn)裝置信號(hào)序列位置位于N端，富含帶正電荷的和疏水的氨基酸，形成兩性α螺旋，轉(zhuǎn)運(yùn)后被切除。基質(zhì)TOMTIM23不被切除，含疏水性的停止轉(zhuǎn)移序列，被安插到外膜。外膜TOM被切除，含疏水性的停止轉(zhuǎn)移序列，被安插到內(nèi)膜。內(nèi)膜TOMTIM23含兩個(gè)信號(hào)序列，首先轉(zhuǎn)運(yùn)到基質(zhì)，第一個(gè)信號(hào)序列被切除，第二個(gè)信號(hào)序列引導(dǎo)蛋白進(jìn)入內(nèi)膜或膜間隙。內(nèi)膜膜間隙TOMTIM23結(jié)構(gòu)類似于N端信號(hào)序列，但位于蛋白質(zhì)內(nèi)部。內(nèi)膜TOMTIM23為線粒體代謝物的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，如腺苷轉(zhuǎn)位酶，具有多個(gè)內(nèi)部信號(hào)序列和停止轉(zhuǎn)移序列，形成多次跨膜蛋白。內(nèi)膜TOMTIM22線粒體蛋白分選信號(hào)11/24/202482（3）細(xì)胞核蛋白的靶向輸送11/24/202483六、蛋白質(zhì)前體的共價(jià)修飾肽鏈N端殘基fMet或Met的切除；二硫鍵的形成；氨基酸側(cè)鏈的共價(jià)修飾；磷酸化、糖基化、乙?；?、甲基化、腺苷酸化等蛋白質(zhì)的剪切； 11/24/202484一級(jí)結(jié)構(gòu)的加工修飾：1．N端甲酰蛋氨酸或蛋氨酸的切除：N端甲酰蛋氨酸，必須在多肽鏈折迭成一定的空間結(jié)構(gòu)之前被切除。①去甲?；?/p>

甲?；讣柞５鞍彼?肽甲酸+蛋氨酸-肽

②去蛋氨酰基：

蛋氨酸氨基肽酶

蛋氨酰-肽

蛋氨酸

+肽

六、蛋白質(zhì)前體的共價(jià)修飾11/24/20248511/24/202486

2．氨基酸的修飾：由專一性的酶催化進(jìn)行修飾，包括糖基化、羥基化、磷酸化、甲?；?。

3．二硫鍵的形成：由專一性的氧化酶催化，將-SH氧化為-S-S-。

4．肽段的切除：

由專一性的蛋白酶催化，將部分肽段切除。

11/24/202487高級(jí)結(jié)構(gòu)的形成：1．構(gòu)象的形成：在分子伴侶及輔助酶的協(xié)助下，形成特定的空間構(gòu)象。2．亞基的聚合。3．輔基的連接。

11/24/20248811/24/20248911/24/202490Thefirstreactionisanattackbyan-OHor-SHsidechainofthefirstaminoacidintheinteinonthepeptidebondthatconnectsittothefirstextein.Thistransferstheexteinfromtheamino-terminalgroupoftheinteintoanN-OorN-Sacylconnection.Thenthisbondisattackedbythe-OHor-SHsidechainofthefirstaminoacidinthesecondextein.Theresultistotransferextein1tothesidechainoftheamino-terminalacidofextein2.Finally,theC-terminalasparagineoftheinteincyclizes,andtheterminalNHofextein2attackstheacylbondtoreplaceitwithaconventionalpeptidebond.Eachofthesereactionscanoccurspontaneouslyatverylowrates,buttheiroccurrenceinacoordinatemannerrapidlyenoughtoachieveproteinsplicingrequirescatalysisbytheintein11/24/202491（一）抗生素（antibiotics)

由微生物產(chǎn)生的具有抑制其它生物生長(zhǎng)的物質(zhì)。

1.四環(huán)素（tetracyclin）族

2.氯霉素（chloromycetin）

3.鏈霉素(streptomycin)和卡那霉素