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文檔簡介

斑蘭葉及其制品中角鯊烯的測定

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了斑蘭葉及其制品中角鯊烯含量的三種測定方法:氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法和高

效液相色譜法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于斑蘭葉、斑蘭粉、斑蘭漿及斑蘭制品中角鯊烯的測定。

當(dāng)稱取樣品0.2g時(shí),氣相色譜法的定量限為50mg/kg,氣相色譜-質(zhì)譜法的定量限為2.5mg/kg,高效

液相色譜法的定量限為30mg/kg。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引用文件,

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本

文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

NY/T3673植物油中角鯊烯

SN/T4785出口植物油中角鯊烯的測定

LS/T6120糧油檢驗(yàn)植物油中角鯊烯的測定氣相色譜法

T/GDWJ001食用斑蘭葉(粉)

T/HIFSA0004斑蘭粉

T/HIFSA0005斑蘭漿

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

斑蘭葉pandanleaf

斑蘭葉,學(xué)名香露兜葉,采自人工種植的露兜樹科露兜樹屬植物香露兜(Pandanusamaryllifolius

Roxb)的葉片,經(jīng)挑選、清洗或挑選、清洗、干燥而成。

3.2

斑蘭烘干粉pandanleafdryingpowder

以人工種植的斑蘭葉為主要原料,經(jīng)預(yù)處理、打漿、提取、離心或不離心、過濾或不過濾、烘干、

粉碎、包裝等工藝制成的粉末。

3.3

斑蘭凍干粉pandanleaffreeze-driedpowder

以人工種植的斑蘭葉為主要原料,經(jīng)預(yù)處理、打漿、提取、離心或不離心、過濾或不過濾、低溫真

空干燥、粉碎、包裝等工藝制成的粉末。

3.4

斑蘭速溶粉pandanleafinstantpowder

以人工種植的斑蘭葉為主要原料,經(jīng)預(yù)處理、打漿、提取、離心或不離心、過濾或不過濾、真空干

燥、粉碎、噴霧干燥、包裝等工藝制成的粉末。

1

3.5

斑蘭漿pandansyrup

以人工種植的香露兜(PandanusamaryllifoliusRoxb)葉(斑蘭葉)鮮葉為主要原料,經(jīng)預(yù)處理、

榨汁、過濾或不過濾,添加或不添加適量的添加劑,經(jīng)殺菌或不殺菌、灌裝、速凍等生產(chǎn)工藝制成的勻

漿。

3.6

斑蘭制品

以斑蘭為輔料,經(jīng)相應(yīng)工藝加工制成的產(chǎn)品。

第一法氣相色譜法

4原理

樣品經(jīng)過氫氧化鉀-乙醇溶液皂化后,其中的角鯊烯用正己烷提取,采用氣相色譜法測定,外標(biāo)法

定量。

5試劑與材料

除另有說明,所有試劑均為分析純,水為GB/T6682規(guī)定的一級水。

5.1試劑

5.1.1氫氧化鉀。

5.1.2無水乙醇。

5.1.3正己烷:色譜純。

5.2試劑配制

氫氧化鉀-乙醇溶液(約2mol/L):準(zhǔn)確稱?。?12±0.1)g氫氧化鉀,加入200mL的無水乙醇(5.1.2),

進(jìn)行溶解,然后用無水乙醇(5.1.2)稀釋定容至1000mL。

5.3標(biāo)準(zhǔn)品

角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)品:純度≥98.0%。

5.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

5.4.1角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)儲備液(1.00mg/mL):準(zhǔn)確稱取按其純度折算為100%質(zhì)量的角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)品(5.3)

100mg(精確至0.1mg),加正己烷溶解并置于100mL棕色容量瓶(6.7)中,定容至刻度,搖勻,得到

濃度為1.00mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。標(biāo)準(zhǔn)儲備液可于4℃條件下避光保存3個(gè)月。

5.4.2角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)中間液(100μg/mL):準(zhǔn)確吸取1.00mL角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)儲備液(5.4.1)于10mL棕色容

量瓶(6.7)中,用正己烷定容至刻度,混勻備用。

5.4.3角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液:分別吸取適量角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)中間液(5.4.2),用正己烷稀釋,使標(biāo)準(zhǔn)

工作溶液濃度分別為10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、500μg/mL。

6儀器和設(shè)備

6.1氣相色譜儀:配氫火焰離子檢測器(FID)。

6.2分析天平:精度0.0001g。

6.3渦旋振蕩器。

2

6.4恒溫水浴鍋。

6.5離心機(jī)。

6.6氮吹儀。

6.7棕色容量瓶:10mL。

6.8微孔濾膜:0.22μm,有機(jī)系。

6.9離心管:15mL。

6.10玻璃試管:10mL。

6.11組織搗碎機(jī)。

6.12超聲儀。

7試樣制備

7.1斑蘭葉和斑蘭制品

取一定數(shù)量的具有代表性的樣品,用組織搗碎機(jī)(6.11)粉碎,樣品充分混合均勻后,備用。

7.2斑蘭粉和斑蘭漿

取一定數(shù)量的具有代表性的樣品,充分混合均勻后,備用。

8分析步驟

8.1稱樣

準(zhǔn)確稱取0.2g(精確至0.0001g)試樣,置15mL離心管(6.9)中。

8.2角鯊烯的提取

于裝有試樣的離心管中加入2mL氫氧化鉀-乙醇溶液(5.2),置超聲儀(6.12)超聲皂化30min(在

75℃條件下)后,取出離心管,冷卻至室溫;加入2mL水、1mL正己烷(5.1.3)提取,離心管至渦旋振

蕩器(6.3)混勻5min,充分提取;5000r/min離心5min,轉(zhuǎn)移上清液至10mL玻璃試管(6.10)中。再用

1mL正己烷(5.1.3)重復(fù)提取操作3次,并將4次提取的上清液合并至10mL玻璃試管(6.10)中,置于渦

旋振蕩器中混勻,用氮吹儀(6.6)吹干,立即加入1mL正己烷(5.1.3)復(fù)溶,振搖1min,過0.22μm

濾膜上機(jī)。

8.3氣相色譜參考條件

8.3.1色譜柱:HP-5毛細(xì)管柱(30m×0.25mm×0.25μm)色譜柱,或等效色譜柱。

8.3.2進(jìn)樣口溫度:280℃。

8.3.3升溫程序:160℃保持1min,以15℃/min速率升至220℃保持2min,以5℃/min速率升至280℃

保持22min。

8.3.4載氣:高純氮?dú)猓兌?9.999%),流速1.0mL/min,分流比4:1。

8.3.5FID檢測器溫度:280℃,氫氣流速40mL/min,空氣流速300mL/min,尾吹氣(N2)30mL/min。

8.3.6進(jìn)樣量:1μL。

8.3.7標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

將角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液(5.4.3)依次按上述推薦色譜條件上機(jī)測定,記錄色譜圖峰面積,以標(biāo)

準(zhǔn)工作溶液的濃度為橫坐標(biāo),以峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3

8.4試樣溶液的測定

在上述色譜條件下測得樣品溶液中角鯊烯的保留時(shí)間,與標(biāo)準(zhǔn)溶液的保留時(shí)間比較定性,以色譜峰

峰面積定量。

8.4.1空白試驗(yàn)

除不加試樣外,均按上述步驟進(jìn)行操作。

9結(jié)果計(jì)算

樣品中角鯊烯含量按式(1)計(jì)算:

······················································(1)

???0×?×?

式中:?=?

X—試樣中角鯊烯的含量,單位為毫克每千克(mg/kg);

c—試樣提取液中角鯊烯的質(zhì)量濃度,單位為微克每毫升(μg/mL);

c0—空白溶液中角鯊烯的質(zhì)量濃度,單位為微克每毫升(μg/mL);

—試樣提取液體積,單位為毫升(mL);

—樣品稱樣量,單位為克(g);

?—稀釋倍數(shù)。

計(jì)?算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示,結(jié)果保留三位有效數(shù)字。

?

10精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測試結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。

第二法氣相色譜-質(zhì)譜法(GC/MS)

11原理

樣品經(jīng)過氫氧化鉀-乙醇溶液皂化后,其中的角鯊烯用正己烷提取,采用氣相色譜-質(zhì)譜儀測定,外

標(biāo)法定量。

12試劑與材料

除另有說明,所有試劑均為分析純,水為GB/T6682規(guī)定的一級水。

12.1.1試劑

同5.1。

12.1.2試劑配制

同5.2。

12.1.3標(biāo)準(zhǔn)品

角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)品:純度≥98.0%。

12.1.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

12.1.5角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)儲備液(1.00mg/mL):準(zhǔn)確稱取按其純度折算為100%質(zhì)量的角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)品(12.3)

100mg(精確至0.1mg),加正己烷溶解并置于100mL棕色容量瓶(13.7)中,定容至刻度,搖勻,得到

濃度為1.00mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。標(biāo)準(zhǔn)儲備液可于4℃條件下避光保存3個(gè)月。

12.1.6角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)中間液(100μg/mL):準(zhǔn)確吸取1.00mL角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)儲備液(12.4.1)于10mL棕色

4

容量瓶(13.7)中,用正己烷定容至刻度,混勻備用。

12.1.7角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液:分別吸取適量角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)中間液(12.4.2),用正己烷稀釋,使標(biāo)

準(zhǔn)工作溶液濃度分別為0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10μg/mL、20μg/mL。

13儀器和設(shè)備

13.1氣相色譜-質(zhì)譜儀:配有電子轟擊電離源(EI)。

13.2分析天平:精度0.0001g。

13.3渦旋振蕩器。

13.4恒溫水浴鍋。

13.5離心機(jī)。

13.6氮吹儀。

13.7棕色容量瓶:10mL。

13.8微孔濾膜:0.22μm,有機(jī)系。

13.9離心管:15mL。

13.10玻璃試管:10mL。

13.11組織搗碎機(jī)。

13.12超聲儀。

14試樣制備

同第一法7。

15分析步驟

15.1稱樣

同第一法8.1。

15.2角鯊烯的提取

同第一法8.2。

15.3氣相色譜參考條件

15.3.1色譜柱:HP-5MS(30m×0.25mm×0.25μm)色譜柱,或等效色譜柱。

15.3.2進(jìn)樣口溫度:280℃。

15.3.3升溫程序:180℃保持1min,以3℃/min升至280℃保持15min。

15.3.4載氣:高純氮?dú)猓兌?9.999%),流速:1.0mL/min。

15.3.5進(jìn)樣方式:分流,分流比50:1。

15.3.6進(jìn)樣量:1.0μL。

15.4質(zhì)譜參考條件

15.4.1質(zhì)譜儀:質(zhì)譜檢測器(配置電子轟擊離子源)。

15.4.2離子源:電子轟擊離子源(EI)。

5

15.4.3GC-MS接口溫度:280℃。

15.4.4離子源溫度:230℃。

15.4.5進(jìn)樣口溫度:280℃。

15.4.6EI離子源:70eV。

15.4.7檢測方式:選擇離子監(jiān)測(SIM)模式:定性離子為m/z69、81、95、137,定量離子為m/z69。

15.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

將角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液(12.4.3)分別注入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀中,測定相應(yīng)的角鯊烯的色譜

峰面積,以標(biāo)準(zhǔn)工作液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),以相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

15.6試樣溶液的測定

將試樣溶液分別注入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀中,得到相應(yīng)的角鯊烯的峰面積,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待

測液中角鯊烯的濃度。

15.7定性測定

將角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液(12.4.3)和樣品溶液依次按上述推薦氣相色譜-質(zhì)譜條件上機(jī)測定,在

相同試驗(yàn)條件下,待測物在樣品中的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)工作液中的保留時(shí)間,并且色譜圖中各組分定性例

子對的相對豐度與濃度接近標(biāo)準(zhǔn)工作液中相應(yīng)定性離子的相對豐度進(jìn)行比較,在偏差范圍內(nèi),則可判斷

為樣品中存在對應(yīng)的待測物。

角鯊烯的GC/MS色譜圖和選擇離子質(zhì)譜圖見附錄A.1和A.2。

15.8空白試驗(yàn)

除不加試樣外,均按上述步驟進(jìn)行操作。

15.9結(jié)果計(jì)算

樣品中角鯊烯含量按式(2)計(jì)算:

··············································(1)

(???0)×?×?

式中:?=?

X—試樣中角鯊烯的含量,單位為毫克每千克(mg/kg);

c—試樣提取液中角鯊烯的質(zhì)量濃度,單位為微克每毫升(μg/mL);

c0—空白溶液中角鯊烯的質(zhì)量濃度,單位為微克每毫升(μg/mL);

—試樣提取液體積,單位為毫升(mL);

—樣品稱樣量,單位為克(g);

?—稀釋倍數(shù)。

計(jì)?算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示,結(jié)果保留三位有效數(shù)字。

?

15.10精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測試結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。

第三法高效液相色譜法(HPLC)

16原理

樣品經(jīng)過氫氧化鉀-乙醇溶液皂化后,其中的角鯊烯用正己烷提取,采用高效液相色譜測定,外標(biāo)

法定量。

17試劑與材料

6

除另有說明,所有試劑均為分析純,水為GB/T6682規(guī)定的一級水。

17.1試劑

17.1.1氫氧化鉀。

17.1.2無水乙醇。

17.1.3乙腈:色譜純。

17.1.4叔丁基甲醚:色譜純。

17.1.5正己烷:色譜純。

17.2試劑配制

氫氧化鉀-乙醇溶液(約2mol/L):準(zhǔn)確稱取(112±0.1)g氫氧化鉀,加入200mL的無水乙醇(17.1.2),

進(jìn)行溶解,然后用無水乙醇(17.1.2)稀釋定容至1000mL。

17.3標(biāo)準(zhǔn)品

角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)品:純度≥98.0%。

17.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)儲備液(1.00mg/mL):準(zhǔn)確稱取按其純度折算為100%質(zhì)量的角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)品(17.3)

100mg(精確至0.1mg),加正己烷溶解并置于100mL棕色容量瓶(18.7)中,定容至刻度,搖勻,得到

濃度為1.00mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。標(biāo)準(zhǔn)儲備液可于4℃條件下避光保存3個(gè)月。

17.4.1角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)中間液(100μg/mL):準(zhǔn)確吸取1.00mL角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)儲備液(17.4.1)于10mL棕色

容量瓶(18.7)中,用正己烷定容至刻度,混勻備用。

17.4.2角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液:分別吸取適量角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)溶液(17.4.1)或角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)中間液(17.4.2),

用正己烷稀釋,使標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度分別為10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、

400μg/mL。

17.4.3角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液:分別吸取適量角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)溶液(17.4.1)或角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)中間液(17.4.2),

用正己烷稀釋,使標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度分別為10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、

400μg/mL。

18儀器和設(shè)備

18.1高效液相色譜儀:配紫外檢測器。

18.2分析天平:精度0.0001g。

18.3渦旋振蕩器。

18.4恒溫水浴鍋。

18.5離心機(jī)。

18.6氮吹儀。

18.7棕色容量瓶:10mL。

18.8微孔濾膜:0.22μm,有機(jī)系。

18.9離心管:15mL。

18.10玻璃試管:10mL。

18.11組織搗碎機(jī)。

18.12超聲儀。

19試樣制備

7

同第一法7。

20分析步驟

20.1稱樣

同第一法8.1。

20.2角鯊烯的提取

同第一法8.2。

20.3液相色譜測定條件

20.3.1色譜柱:C18柱(250mm×4.6μm,5μm),或相當(dāng)者;

20.3.2流動相:乙腈/叔丁基甲醚(75+25,體積比);

20.3.3流速:1.0mL/min;

20.3.4柱溫:35℃;

20.3.5檢測波長:210nm;

20.3.6進(jìn)樣量:10μL。

20.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

將角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液(17.4.3)依次按上述推薦色譜條件上機(jī)測定,記錄色譜圖峰面積,以

標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的濃度為橫坐標(biāo),以峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

20.5試樣溶液的測定

在上述色譜條件下測得樣品溶液中角鯊烯的保留時(shí)間,與標(biāo)準(zhǔn)溶液的保留時(shí)間比較定性,以色譜峰

峰面積定量。

21結(jié)果計(jì)算

樣品中角鯊烯含量按式(3)計(jì)算:

·························································(1)

?×?×?

式中:?=?

X—試樣中角鯊烯的含量,單位為毫克每千克(mg/kg);

c—試樣提取液中角鯊烯的質(zhì)量濃度,單位為微克每毫升(μg/mL);

—試樣提取液體積,單位為毫升(mL);

—樣品稱樣量,單位為克(g);

?—稀釋倍數(shù)。

計(jì)?算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示,結(jié)果保留三位有效數(shù)字。

?

22精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測試結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。

8

A

A

附錄A

附錄B(規(guī)范性)

附錄C色譜圖和質(zhì)譜圖

A.1角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)品的GC/MS色譜圖見圖A.1。

RT:0.00-41.06

RT:19.58NL:

1002.45E8

TICMS8

95

90

85

80

75

70

65

60

55

50

45

R

e40

l

a

t

i

v

e35

A

b

u30

n

d

a

n25

c

e

20

15

10

5

30.6233.4034.4036.0639.1040.23

3.414.766.529.6811.7313.6315.5418.1019.1820.5125.8326.7029.72

0

0510152025303540

Time(min)

圖A.1角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)品的選擇離子色譜圖

A.2角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)品的選擇離子質(zhì)譜圖見圖A.2。

4#1187RT:19.13AV:1NL:4.61E5

T:+cEISIMms[68.50-69.50,80.50-81.50,94.50-95.50,136.50-137.50]

69.00

100

95

90

85

80

75

81.00

70

65

60

5595.00

50

45

R

e40

l

a

t

i

v35

e

A

b

u30137.00

n

d

a

n25

c

e

20

15

10

5

0

707580859095100105110115120125130135

m/z

圖A.2角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)品的選擇離子質(zhì)譜圖

9

A.3角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)品的高效液相色譜圖見圖A.3。

圖A.3角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)品的液相色譜圖

A.4角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)品的氣相色譜圖見圖A.4

pA

7000

.

9

1

6006

500

400

300

2

2002

.

6

4

1008

0

051015202530min

圖A.4角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)品的氣相色譜圖

10

ICS67.050

CCSX44

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/HIFSAXXX-XXXX

斑蘭葉及其制品中角鯊烯的測定

Determinationmethodofsqualeneinpandanleavesandtheirproducts

(征求意見稿)

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實(shí)施

海南省食品安全協(xié)會發(fā)布

I

斑蘭葉及其制品中角鯊烯的測定

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了斑蘭葉及其制品中角鯊烯含量的三種測定方法:氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法和高

效液相色譜法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于斑蘭葉、斑蘭粉、斑蘭漿及斑蘭制品中角鯊烯的測定。

當(dāng)稱取樣品0.2g時(shí),氣相色譜法的定量限為50mg/kg,氣相色譜-質(zhì)譜法的定量限為2.5mg/kg,高效

液相色譜法的定量限為30mg/kg。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引用文件,

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本

文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

NY/T3673植物油中角鯊烯

SN/T4785出口植物油中角鯊烯的測定

LS/T6120糧油檢驗(yàn)植物油中角鯊烯的測定氣相色譜法

T/GDWJ001食用斑蘭葉(粉)

T/HIFSA0004斑蘭粉

T/HIFSA0005斑蘭漿

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

斑蘭葉pandanleaf

斑蘭葉,學(xué)名香露兜葉,采自人工種植的露兜樹科露兜樹屬植物香露兜(Pandanus

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