DB21∕T 2289.3-2016 海洋微藻成分分析 第3部分：酸值的測定

第3部分：酸值的測定ThirdPart:Determinati2016-03-28發(fā)布2016-05-28實施I本標準是按照GB/T1.1-200《標準化工作導則第1部分：標準的結(jié)構(gòu)和編寫》給出的規(guī)則起草DB21/T2289《海洋微藻成分分析》分為以下9個部分：—第1部分：中性脂的測定；—第2部分：極性脂的測定；——第3部分：酸值的測定；——第4部分：脂肪酸組成成分的測定；——第5部分：蛋白質(zhì)的測定；——第6部分：總糖的測定；——第7部分：淀粉的測定；——第8部分：色素的測定；—第9部分：灰分的測定。本部分為DB21/T2289《海洋微藻成分分析》的第3部分。本部分由大連市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局歸口。本部分主要起草人：薛松、姚長洪、劉嬌、姜君鵬、曹旭鵬、劉亞男。海洋微藻是海洋初級生產(chǎn)力的主要來源，其生長繁殖快，光合效率高，培養(yǎng)不占耕地，節(jié)約淡水資源，在水產(chǎn)養(yǎng)殖、生物能源、食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域有廣泛的應用前景，是未來海洋經(jīng)濟的潛在增長點。然而，目前缺少相應的海洋微藻成分測定的標準方法，不同方法測定的各成分含量差別較大，使得不同實驗室公布的數(shù)據(jù)可比性小，影響了海洋微藻天然產(chǎn)物代謝的研究，限制了海洋微藻生物質(zhì)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。海洋微藻中存在的脂酶使其在收獲后水解脂類生成游離脂肪酸，導致微藻油脂酸值升高，影響海洋微藻生物質(zhì)的品質(zhì)，進而影響微藻生物質(zhì)的下游煉制工藝。因此海洋微藻中酸值的大小是海洋微藻品質(zhì)的重要指標之一。不同的微藻培養(yǎng)方式、微藻生物質(zhì)的儲藏條件和儲藏時間等均對酸值造成影響。分析海洋微藻酸值有利于在微藻生物質(zhì)的培養(yǎng)、收獲和相關(guān)制品的制備過程中控制游離脂肪酸的含量，指導下游煉制工藝的選擇，提高海洋微藻制品的品質(zhì)，促進海洋微藻相關(guān)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。1海洋微藻成分分析第3部分：酸值的測定1范圍本部分規(guī)定了用滴定法進行海洋微藻酸值測定的術(shù)語和定義、原理、試劑、儀器設備、操作步驟、本部分適用于海洋微藻油脂酸值的測定。下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T601-2002化學試劑標準滴定溶液的制備微藻生物質(zhì)經(jīng)干燥、研磨、過80目篩后得到的粉狀物質(zhì)。試樣在氯仿-甲醇(v/v=2:1)溶液中經(jīng)超聲輔助萃取，所得到的油脂經(jīng)乙醚-乙醇(v/v=2:1)混合溶液溶解，加入飽和氯化鈉溶液，以酚酞為指示劑，用氫氧化鉀標準溶液滴定，由消耗的氫氧化5.4無水乙醇：分析純。25.11提取溶劑：體積比為2:1的氯仿(5.1)/甲醇(5.2)混合溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。5.12油脂溶解溶劑：體積比為2:1的乙醚(5.3)/乙醇(5.4)混合溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。5.130.01mol/L氫氧化鉀標準溶液：稱取0.14g氫氧化鉀固體(5.6),用95%的乙醇(5.5)溶解定容至250mL,按GB/T601-2002中5.1410mg/mL酚酞指示劑：稱取0.5g酚酞固體(5.7),用95%的乙醇(5.5)溶解定容至50mL。5.15飽和氯化鈉溶液：稱取400g氯化鈉(5.10)固體加入到1L水(5.9)中，攪拌至氯化鈉固體6.6烘箱：溫度不小于100℃。稱取0.5g~0.6g微藻藻粉(3.1),加入10mL提取溶劑(5.11),超聲清洗儀(6.2)輔助萃取10min,于離心機(6.3)上4000r/min離心10min,收集上層溶液于離心管(6.4)中；重復以上提取操作3次，合并提取液，用氮氣裝置(6.5)吹掃，待溶劑揮發(fā)至小于0.5mL后轉(zhuǎn)移至烘箱(6.6)中，60℃烘干16h。稱取7.1.1所述的微藻油脂樣品10mg~15mg于磨口錐形瓶(6.7)中，加入40mL油脂溶解溶劑(5.12),蓋上塞子，磁力攪拌器(6.8)攪拌溶解30min備用。每份油脂樣品制備2瓶。3向7.1.2所述的微藻油脂溶液中加入30mL飽和氯化鈉溶液(5.15)至分層，加入4滴～5滴酚酞指示劑(5.14),用3mL堿式滴定管(6.9)以不低于1mL/s的速度滴入氫氧化鉀標準溶液(5.13)7.2.2樣品的實際滴定向7.1.2所述的微藻油脂溶液中加入30mL飽和氯化鈉溶液(5.15)至分層，加入4滴～5滴酚酞指示劑(5.14),用3mL堿式滴定管(6.9)以不低于1mL/s的速度滴入80%滴定參考體積(V?)的氫氧化鉀標準溶液(5.13),再逐滴滴定至溶液變成淺粉紅色且30s內(nèi)不褪色，記錄此時所消耗的氫氧化鉀標準溶液(5.13)總體積(V?)。7.3空白試驗以40mL油脂溶解溶劑(5.12)代替微藻油脂溶液，按照7.2的方法滴定，記錄空白樣品所消耗的氫氧化鉀標準溶液(5.13)總體積(V?)。8結(jié)果表示樣品酸值按式(1)進行計算：A——微藻油脂的酸值，單位為毫克每克(mg/g);c——已標定的氫氧化鉀標準溶液的濃度，單位為摩爾每升(mol/L);V?——樣品分析時所消耗的氫氧化鉀標準溶液總體積，單位為毫升(mL);Vo——空白試驗時所消耗的氫氧化鉀標準溶液總體積，單位為毫升(mL);56.1——氫氧化鉀摩爾質(zhì)量，單位為克每摩爾(g/mol);m-—微藻油脂質(zhì)量，單位為克(g)。9重復性在同一實驗室、由同一操作人員完成的三個平行測定結(jié)果，相對偏差不大于10%,以三次平行測定4(資料性附錄)酸值(mg/g)相對標準偏差(%)新鮮微擬球藻(Nannochloropsissp.)存放兩年的微擬球藻(Nannochloropsissp.)新鮮湛江等鞭金