基因編輯Cas9系列講座2CRISPR-Cas9dCas9相關(guān)應(yīng)用1

?CRISPR-Cas9dCas9相關(guān)應(yīng)用解螺旋|

知識(shí)金牌知識(shí)金牌解

螺

旋

| 陪

伴

醫(yī)

生

科

研

成

長(zhǎng)Contents課程目錄第一部分第二部分第三部分下節(jié)課程dCas9基本原理dCas9用于轉(zhuǎn)錄激活

dCas9用于轉(zhuǎn)錄抑制CRISPR-Cas9

dCas9相關(guān)應(yīng)用dCas9相關(guān)應(yīng)用2dCas9基本原理01知識(shí)金牌解

螺

旋

| 陪

伴

醫(yī)

生

科

研

成

長(zhǎng)dCas9基本原理Nishimasu

H,

et

al.

Crystal

structure

of

Cas9

incomplex

with

guide

RNA

and

target

DNA.Cell.2014

Feb27;156(5):935-49.

PMID:

24529477ABD互補(bǔ)鏈知識(shí)金牌解

螺

旋

| 陪

伴

醫(yī)

生

科

研

成

長(zhǎng)第一部分|

dCas9基本原理正向反向轉(zhuǎn)錄VP64(激活)KRAB(抑制)甲基化DNMT3A

or

MQ1(甲基化)TET1(去甲基化)組蛋白乙酰化p300(乙?；?LSD1(去甲基化)單堿基編輯胞苷脫氨酶切割FokI位點(diǎn)可視化GFP//xinwenzixun/168.htmldCas9融合不同蛋白實(shí)現(xiàn)不同的功能dCas9用于轉(zhuǎn)錄激活02知識(shí)金牌第二部分|

dCas9用于轉(zhuǎn)錄激活PI時(shí)間機(jī)制文獻(xiàn)PMIDRonald

D.Vale2014.10dCas9-SunTagCell25307933ZhangFeng2015.1dCas9-SAMNature.25494202Lim

WA2015.1scRNACell25533786George

Church2015.10dCas9-VPRNat

Methods25730490dCas9-SAM解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)dCas9-VPRdCas9-SunTag知識(shí)金牌第二部分|

dCas9用于轉(zhuǎn)錄激活VP64轉(zhuǎn)錄激活因子dCas9-SunTagTanenbaum

ME,

et

al.

A

protein-taggingsystem

for

signal

amplification

in

geneexpression

and

fluorescence

imaging.

Cell.2014

Oct

23;159(3):635-46.

PMID:

25307933解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)知識(shí)金牌第二部分|

dCas9用于轉(zhuǎn)錄激活dCas9-SunTagpHRdSV40-dCas9-10xGCN4_v4-P2A-BFPPlasmid

#60903pHRdSV40-scFv-GCN4-sfGFP-VP64-GB1-NLSPlasmid

#

60904解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)知識(shí)金牌第二部分|

dCas9用于轉(zhuǎn)錄激活dCas9-VPR020,00040,00060,00080,000100,000Median

fluorescence

intensity

(a.u.)*p65RtasgRNAdCas9VP64(GS)n

linkersC-terminusabReporter

ControlVP64VP64-p65VP64-RtaVP64-p65-Rta10-810-610-210010010210410610-4Basal

gene

expression解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)Relative

RNA

ExpressionTTNRHOXF2ASCL1MIATNEUROD1ACTC1VEGFNEUROG2Chavez

A

,

et

al.

Highly

efficient

Cas9-mediated

transcriptionalprogramming.

NatMethods.

2015

Apr;12(4):326-8.

PMID:25730490知識(shí)金牌第二部分|

dCas9用于轉(zhuǎn)錄激活dCas9-VPRSP-dCas9-VPRPlasmid

#63798SP-dCas9-VPR解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)lenti-EF1a-dCas9-VPR-PuroPlasmid

#99373知識(shí)金牌解

螺

旋

| 陪

伴

醫(yī)

生

科

研

成

長(zhǎng)dCas9-scRNA第二部分|

dCas9用于轉(zhuǎn)錄激活Zalatan

JG,

et

al.

Engineering

complex

synthetictranscriptional

programs

with

CRISPR

RNA

scaffolds.

Cell.2015

Jan

15;160(1-2):339-50.

PMID:

25533786https://www.addgene.org/browse/article/9593/知識(shí)金牌dCas9-SAM第二部分|

dCas9用于轉(zhuǎn)錄激活解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)知識(shí)金牌第二部分|

dCas9用于轉(zhuǎn)錄激活dCas9-SAM解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)知識(shí)金牌解

螺

旋

| 陪

伴

醫(yī)

生

科

研

成

長(zhǎng)第二部分|

dCas9用于轉(zhuǎn)錄激活lenti

sgRNA(MS2)_puro

optimized

backbonePlasmid

#73797Joung

J

,

et

al.Genome-scale

CRISPR-Cas9

knockoutand

transcriptional

activation

screening.

Nat

Protoc.2017

Apr;12(4):828-863.

PMID:

28333914lentiSAMv2Plasmid

#75112lentiMPH

v2Plasmid

#89308知識(shí)金牌解

螺

旋

| 陪

伴

醫(yī)

生

科

研

成

長(zhǎng)第二部分|

dCas9用于轉(zhuǎn)錄激活Chavez,

et

al.

Comparison

of

Cas9

activatorsin

multiple

species.

Nat

Methods.

2016Jul;13(7):563-567.PMID:

27214048知識(shí)金牌解

螺

旋

| 陪

伴

醫(yī)

生

科

研

成

長(zhǎng)第二部分|

dCas9用于轉(zhuǎn)錄激活dCas9用于轉(zhuǎn)錄抑制03知識(shí)金牌第三部分|

dCas9用于轉(zhuǎn)錄抑制dCas9-scRNAThakore

PI,

et

al.

Highly

specific

epigenome

editing

by

CRISPR-Cas9

repressors

for

silencing

of

distal

regulatory

elements.

NatMethods.

2015

Dec;12(12):1143-9.

PMID:26501517解螺旋|陪伴醫(yī)生科研成長(zhǎng)知識(shí)金牌Gilbert

LA

,

et

al.

CRISPR