2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容課件

2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容2010年版《中國(guó)藥典》

生物檢定部分修訂內(nèi)容

2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容

主要內(nèi)容一、藥品生物檢定概況二、藥品生物檢定增修訂情況2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容藥品生物檢定概況定義應(yīng)用范圍作用2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容藥品生物檢定--定義

生物檢定法是利用生物體包括整體、離體組織、器官、細(xì)胞和微生物等評(píng)估藥物生物活性的一種方法。它以藥物的藥理作用為基礎(chǔ)，以生物統(tǒng)計(jì)為工具，運(yùn)用特定的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)在一定條件下比較供試品和相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌匪a(chǎn)生的特定反應(yīng)，通過(guò)等反應(yīng)劑量間比例的運(yùn)算或限值劑量引起的生物反應(yīng)程度，從而測(cè)定供試品的效價(jià)、生物活性或雜質(zhì)引起的毒性。

2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容藥品生物檢定體內(nèi)測(cè)定（invivo）--以整體動(dòng)物生物體體外測(cè)定（inbitro）--以離體器官、組織、微生物、酶和細(xì)胞（原代細(xì)胞、傳代細(xì)胞）為生物體，利用這些生物體評(píng)價(jià)藥品的生物活性（藥效、活力或毒力）2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容應(yīng)用范圍藥品（生化藥品、中藥）生物制品（疫苗、血液制品）安全性檢查2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容應(yīng)用范圍對(duì)從動(dòng)物臟器、微生物或體液等提取的，有效成分不夠確切，多組分、結(jié)構(gòu)復(fù)雜，理化方法不能有效鑒定并具有生物活性的天然生化藥物、中藥，以及有些生物技術(shù)藥物，由于空間結(jié)構(gòu)的細(xì)微變化，影響藥物的活性中心位點(diǎn)，目前質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中仍應(yīng)用生物檢定法評(píng)估藥物的生物活性。如生化藥物：一般是從生物體分離、純化所得如肝素鈉、魚(yú)精蛋白、促腎上腺皮質(zhì)激素。中藥：洋地黃制劑、人工麝香、水蛭等。

2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容藥品生物檢定—作用工藝與方法驗(yàn)證效價(jià)與活性鑒別2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容作用—工藝及方法驗(yàn)證對(duì)于新生產(chǎn)工藝、新檢測(cè)方法的改進(jìn)、變更，往往需要生物檢定來(lái)驗(yàn)證核對(duì)。中、外藥典在重組人生長(zhǎng)激素（rhGH）重組人胰高血糖素質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中明確規(guī)定，在生產(chǎn)研發(fā)階段，“生產(chǎn)過(guò)程中的產(chǎn)品必須用體內(nèi)生物檢定方法測(cè)定其生物效價(jià)”，直到生產(chǎn)穩(wěn)定為止。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容作用—效價(jià)與活性當(dāng)采用理化方法測(cè)定如HPLC替代胰島素等原有的生物效價(jià)測(cè)定法時(shí)，仍需作大量的方法比對(duì)、相關(guān)性研究等工作。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容作用—效價(jià)與活性定量的測(cè)定方法半定量的測(cè)定方法2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容定量的測(cè)定方法

效價(jià)（potency）測(cè)定是生物檢定的主要內(nèi)容，它是以藥理為基礎(chǔ)，生物統(tǒng)計(jì)為工具，運(yùn)用特定的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，利用生物體在一定條件下比較供試品與相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌匪a(chǎn)生的特定反應(yīng)（可測(cè)量、量化的生理指標(biāo)或生物藥效或毒力）的一種定量的方法，因而被稱為定量藥理學(xué)。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容定量的測(cè)定方法胰島素縮宮素肝素卵泡刺激素黃體生成素升壓素硫酸魚(yú)精蛋白洋地黃生長(zhǎng)激素降鈣素2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容半定量的測(cè)定方法（活性檢查）

當(dāng)理化測(cè)定占主導(dǎo)地位，效價(jià)測(cè)定一般來(lái)講可以不必精確，可歸于活性檢查項(xiàng)，采用半定量方法，設(shè)定限值，不需精密生物統(tǒng)計(jì)，盡可能減少實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用量或其他生物體用量；甚至只用于定性的鑒別。例如：新藥重組人胰高血糖素類多肽是治療糖尿病用藥，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中即采用該法（限值為小鼠血糖降低大于20%）進(jìn)行活性檢查。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容鑒別隨著對(duì)動(dòng)物保護(hù)意識(shí)提高，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物減少、替代、優(yōu)化（3R：Reduction、Replacement、Refinement）的實(shí)施，對(duì)能用理化測(cè)定的藥品，生物效價(jià)測(cè)定逐漸降為鑒別項(xiàng)的定性或半定量測(cè)定。如USP升壓素大鼠血壓升高法用于鑒別。2010年中國(guó)藥典縮宮素注射液將子宮收縮法放入鑒別項(xiàng)。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容二、附錄生物檢定方法增修訂情況2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容附錄生物檢定方法增修訂情況附錄增修訂主要特點(diǎn)增修訂主要內(nèi)容2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容附錄檢查法或指導(dǎo)原則藥典增修訂情況一部二部熱原檢查法修訂修訂細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法修訂修訂異常毒性檢查法新增修訂溶血與凝聚檢查法新增

過(guò)敏反應(yīng)檢查法新增修訂降壓物質(zhì)檢查法新增修訂生物檢定統(tǒng)計(jì)法

修訂中藥注射劑安全性檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則修訂

化學(xué)藥品注射劑安全性檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則

新增中藥生物活性測(cè)定指導(dǎo)原則新增

附錄生物檢定方法增修訂情況2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容附錄增修訂主要特點(diǎn)

中藥質(zhì)量控制評(píng)價(jià)模式轉(zhuǎn)變充分驗(yàn)證完善提高充分體現(xiàn)了“3R”原則

2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容附錄增修訂主要特點(diǎn)中藥質(zhì)量控制評(píng)價(jià)模式轉(zhuǎn)變生物活性引入實(shí)現(xiàn)了中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)由單一指標(biāo)成分定性定量向活性有效成分及生物測(cè)定的綜合檢測(cè)。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容附錄增修訂主要特點(diǎn)充分驗(yàn)證：遵循科學(xué)性、合理性、可操作性，新建或新設(shè)立項(xiàng)目必須經(jīng)不同實(shí)驗(yàn)室的共同驗(yàn)證或適用性研究，如注射劑安全性指導(dǎo)原則對(duì)方法學(xué)的適用性研究；中藥生物活性指導(dǎo)原則要求對(duì)方法的專屬性、準(zhǔn)確性、精密度（重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性）、適用性、科學(xué)性進(jìn)行了研究。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容附錄增修訂主要特點(diǎn)完善提高對(duì)2010藥典一、二部檢查法和指導(dǎo)原則進(jìn)行修訂和改進(jìn)，對(duì)影響結(jié)果準(zhǔn)確性的實(shí)驗(yàn)條件提出了要求，如熱原檢查法、溶血與凝聚、降壓物質(zhì)檢查法、過(guò)敏試驗(yàn)。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容附錄增修訂主要特點(diǎn)體現(xiàn)了“3R”原則如熱原檢查法取消家兔使用次數(shù)和體重上限規(guī)定。中藥生物活性指導(dǎo)原則中對(duì)動(dòng)物的使用等。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容

增修訂主要內(nèi)容一、熱原檢查法二、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法三、異常毒性檢查法四、溶血與凝聚檢查法五、過(guò)敏反應(yīng)檢查法六、降壓物質(zhì)檢查法七、生物檢定統(tǒng)計(jì)法八、中藥注射劑安全性檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則九、化藥注射劑安全性檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則十、中藥生物活性測(cè)定指導(dǎo)原則2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容熱原檢查法定義2010版與2005版區(qū)別修訂背景實(shí)驗(yàn)用兔靈敏度測(cè)試熱原檢查適用性研究2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容熱原檢查法定義：本法系將一定劑量的供試品，靜脈注入家兔體內(nèi)，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)，觀察家兔體溫升高的情況，以判定供試品中所含熱原的限度是否符合規(guī)定。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容

2010版與2005版區(qū)別2010版2005版1、體重1.7kg以上（三部未改變）體重1.7~3.0kg2、其中升溫達(dá)0.6℃的家兔應(yīng)休息2周以上

——3、

____*每一家兔的使用次數(shù)，用于一般藥品的檢查，不應(yīng)超過(guò)10次。*三部仍規(guī)定，對(duì)血液制品、抗毒素和其他同一過(guò)敏原的供試品在5天內(nèi)可重復(fù)使用1次。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容2010版2005版4、在做熱原檢查前1-2日在作熱原檢查前1-2日5、溫度相差不得大于3℃，且應(yīng)控制在17～25℃（指實(shí)驗(yàn)室和飼養(yǎng)室）實(shí)驗(yàn)室和飼養(yǎng)室的溫度相差不得大于5℃，實(shí)驗(yàn)室的溫度應(yīng)在17～25℃6、實(shí)驗(yàn)室溫度變化不得大于3℃應(yīng)注意實(shí)驗(yàn)室溫度變化不得大于3℃2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容2010版2005版7、應(yīng)防止動(dòng)物騷動(dòng)防止動(dòng)物騷動(dòng)8、置于寬松適宜的裝置中置于適宜的裝置中9、且同組各兔間正常體溫之差不得超過(guò)1℃且各兔間正常體溫之差不得超過(guò)1℃2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容2010版2005版10、與供試品接觸的試驗(yàn)用器皿應(yīng)無(wú)菌、無(wú)熱原。去除熱原通常采用干熱滅菌法（250℃、加熱30分鐘），也可采用其他適宜的方法試驗(yàn)用器的注射器、針頭及一切與供試品溶液接觸的器皿，應(yīng)置烘箱中用250℃加熱30分鐘，也可采用其他適宜的方法除去熱原2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容2010版2005版11、3只家兔體溫升高總和低于1.3℃

（三部未變，仍為1.4℃）3只家兔體溫升高總和低于1.4℃

2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容修訂背景１、熱原實(shí)驗(yàn)是一個(gè)整體的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，易受許多因素的影響。動(dòng)物自身的行為、生理、外部環(huán)境以及一些實(shí)驗(yàn)過(guò)程等都可影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。２、對(duì)家兔體重取消了上限3.0kg，同時(shí)取消家兔使用次數(shù)不超過(guò)１０次的規(guī)定。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容

修訂背景３、增加了升溫達(dá)0.6℃的家兔應(yīng)休息2周以上新要求。4、實(shí)驗(yàn)環(huán)境要求更加嚴(yán)格：實(shí)驗(yàn)室與飼養(yǎng)室溫度相差由不大于5℃改為3℃5、強(qiáng)調(diào)同組各家兔間溫差不大于1℃，對(duì)家兔固定方式：寬松。6、判定標(biāo)準(zhǔn)更加嚴(yán)格：初試的3只家兔體溫升高總和低于1.4℃改為低于1.3℃2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容實(shí)驗(yàn)用兔靈敏度測(cè)試每年不定期隨機(jī)抽取體重和使用次數(shù)不同的實(shí)驗(yàn)用兔，按熱原檢查法要求注射５EU/kg或10EU/kg內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品，應(yīng)得到不符合規(guī)定的結(jié)果。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容熱原檢查適用性研究新品種建立熱原檢查標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，建議進(jìn)行適用性研究，在不影響家兔正常生理的前提下，按人用每公斤體重每小時(shí)最大供試品劑量的２－５倍設(shè)定限值。

（化學(xué)藥品一般為２－３倍，中藥為３－５倍）。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容熱原檢查適用性研究適用性試驗(yàn)時(shí)設(shè)三組：⑴限值劑量的供試品組⑵10EU/kg內(nèi)毒素組⑶含10EU/kg內(nèi)毒素的供試品組。適用性試驗(yàn)判定：⑴組符合規(guī)定，⑵、⑶組不符合規(guī)定表明該品種可建立熱原檢查項(xiàng)。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容二、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法定義2010版與2005版區(qū)別修訂背景注射用藥品、生物制品建立細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法指導(dǎo)原則2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容二、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法定義：本法系利用鱟試劑來(lái)檢測(cè)或量化由革蘭氏陰性菌產(chǎn)生的細(xì)菌內(nèi)毒素，以判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容2010版與2005版區(qū)別2010版2005年版1、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水系指內(nèi)毒素含量小于0.015EU/ml（用于凝膠法）或0.005EU/ml（用于光度測(cè)定法）且對(duì)內(nèi)毒素試驗(yàn)無(wú)干擾作用的滅菌注射用水凝膠法細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水系指內(nèi)毒素含量小于0.015EU/ml的滅菌注射用水。光度測(cè)定法用的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水，其內(nèi)毒素的含量應(yīng)小于0.005EU/ml

2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容2010版2005年版2、常用干熱滅菌法（250℃、30分鐘以上）去除常用的方法是在250℃干烤至少60分鐘3、——或鱟試劑生產(chǎn)廠家推薦4、內(nèi)毒素限值按L=K/M計(jì)算，M為人用每公斤體重每小時(shí)的最大供試品劑量，以ml/（kg·h）、mg/（kg·h）或U/（kg·h）表示，人均體重按60kg計(jì)算，人體表面積按1.62m2計(jì)算。注射時(shí)間若不足1小時(shí)，按1小時(shí)計(jì)算。供試品每平方米體表面積劑量乘以0.027即可轉(zhuǎn)換為每千克體重劑量（M）內(nèi)毒素限值按L=K/M計(jì)算，M為人用每公斤體重每小時(shí)的最大供試品劑量，以ml/（kg·h）、mg/（kg·h）或U/（kg·h）表示，人均體重按60kg計(jì)算，注射時(shí)間若不足1小時(shí)，按1小時(shí)計(jì)算。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容

修訂背景1、細(xì)菌內(nèi)毒素與檢查用水除了強(qiáng)調(diào)內(nèi)毒素含量外，還強(qiáng)調(diào)應(yīng)對(duì)內(nèi)毒素試驗(yàn)無(wú)干擾作用。2、強(qiáng)調(diào)用干熱滅菌法（250℃、30分鐘以上）去除內(nèi)毒素與熱原法同步。3、根據(jù)某些藥（如抗腫瘤藥）用體表面積計(jì)算給藥量的需要，增加了按體表面積給藥時(shí)的計(jì)算方法。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容注射用藥品、生物制品建立細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法指導(dǎo)原則

本原則依據(jù)2010年版藥典制訂，適用于注射用藥品、生物制品建立細(xì)菌內(nèi)毒素檢查項(xiàng)目時(shí)進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)及研究。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容需建立內(nèi)毒素檢查項(xiàng)目的品種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中有家兔熱原檢查法需轉(zhuǎn)換為細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法的品種。用于注射給藥，但未有熱原質(zhì)量控制的品種。注射用新藥需建立熱原質(zhì)量控制的品種。用于靜脈給藥的原輔料2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容建立方法時(shí)對(duì)鱟試劑及樣品的要求同時(shí)使用兩個(gè)鱟試劑廠家的鱟試劑每個(gè)品種至少三批樣品（上市品種應(yīng)檢測(cè)兩個(gè)以上生產(chǎn)廠家；新藥需檢測(cè)連續(xù)生產(chǎn)的樣品）。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容確定內(nèi)毒素限值一般按公式L=K/M計(jì)算。M為人每公斤每小時(shí)臨床最大用藥劑量，依據(jù)藥品使用說(shuō)明書(shū)，《臨床用藥須知》確定。兒童用藥如大于成人，以兒童為準(zhǔn)。為保障安全用藥，對(duì)于抗感染、抗腫瘤、治療心血管疾病等重癥用的藥品、需聯(lián)合用藥的藥品，可根據(jù)計(jì)算值適當(dāng)調(diào)整，嚴(yán)格至計(jì)算限值的1/2或1/3。對(duì)于體積在100ml以上（包括100ml）的復(fù)方靜脈輸液類品種，內(nèi)毒素限值一般按0.5EU/ml計(jì)。其他單方靜脈輸液品種除另有規(guī)定外也可按用藥劑量計(jì)算，以EU/mg或EU/U表示。對(duì)于美國(guó)、歐洲或日本藥典已收載的，并已建立細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的品種可參考國(guó)外藥典規(guī)定的限值，與按公式計(jì)算出的數(shù)值比較，以嚴(yán)格者為該品種的限值。如果使用的是國(guó)外藥典的限值，應(yīng)以最新版本藥典為準(zhǔn)。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容干擾實(shí)驗(yàn)建議使用較低靈敏度鱟試劑(0.5EU/ml或0.25EU/ml),以避免供試品中內(nèi)毒素的陽(yáng)性影響。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容三.異常毒性檢查法定義2010版與2005版區(qū)別2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容三.異常毒性檢查法定義：本法系給予小鼠一定劑量的供試品溶液，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)觀察小鼠出現(xiàn)的死亡情況，以判定供試品是否符合規(guī)定的一種方法。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容三.異常毒性檢查法異常毒性有別于藥物本身所具有的毒性特征，是指由生產(chǎn)過(guò)程中引入或其他原因所導(dǎo)致的毒性反應(yīng)。供試品如不合格，表明藥品中含有超過(guò)正常產(chǎn)品毒性的毒性雜質(zhì)，臨床用藥將可能增加急性不良反應(yīng)。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容2010版2005版1、本法系給予小鼠一定劑量的供試品溶液本法系將一定劑量的供試品溶液注入小鼠體內(nèi)或口服給藥2、制備配制2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容四.溶血與凝聚檢查法定義2010版與2005版區(qū)別修訂背景2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容四.溶血與凝聚檢查法定義：本法系將一定量供試品與2%的家兔紅細(xì)胞混懸液混合，溫育一定時(shí)間后，觀察其對(duì)紅細(xì)胞狀態(tài)是否產(chǎn)生影響的一種方法。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容2010版2005版1、2%的家兔紅細(xì)胞混懸液2%的兔（或羊）紅細(xì)胞混懸液2、取健康家兔血液取兔或羊血數(shù)毫升（約20ml）3、0.9%氯化鈉溶液、蒸餾水0.9%氯化鈉溶液或蒸餾水2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容2010版2005版4、如試管中的溶液呈澄明紅色如試驗(yàn)中的溶液呈澄明紅色5、但1、2號(hào)管和5號(hào)管肉眼觀察無(wú)明顯著差異但1號(hào)管和5號(hào)管比色無(wú)明顯著差異6、輕輕倒轉(zhuǎn)3次仍不分散

振搖后不分散2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容2010版2005版7、應(yīng)進(jìn)一步置顯微鏡下觀察，如可見(jiàn)紅細(xì)胞聚集為凝聚。如有紅細(xì)胞凝聚的現(xiàn)象，可按下法進(jìn)一步判定是凝聚還是假凝聚。若凝聚物在試管振蕩后又能均勻分散，或?qū)⒛畚镏糜谳d玻片上，在蓋玻片邊緣滴加2滴0.9%氯化鈉溶液，置顯微鏡下觀察，凝聚紅細(xì)胞能被沖散者為假凝聚，若凝聚物不被搖散或在玻片上不被沖散者為凝聚。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容

修訂背景1、考慮一般家兔容易得到，故將羊血?jiǎng)h去；采用兔紅細(xì)胞懸液；2、2010版用輕輕倒轉(zhuǎn)3次來(lái)觀察凝聚，規(guī)范了操作；3、在顯微鏡下見(jiàn)紅細(xì)胞凝集為凝聚，簡(jiǎn)單明確；4、同時(shí)觀察1、2號(hào)兩個(gè)平行管與5號(hào)管的對(duì)比，來(lái)判定是否溶血；5、考慮藥物與一次性試管（高分子材料）的相容性，強(qiáng)調(diào)用玻璃試管。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容五.過(guò)敏反應(yīng)檢查法定義2010版與2005版區(qū)別修訂背景2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容五.過(guò)敏反應(yīng)檢查法定義：本法系將一定量的供試品溶液注入豚鼠體內(nèi)，間隔一定時(shí)間后靜脈注射供試品溶液進(jìn)行激發(fā)，觀察動(dòng)物出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)的情況，以判定供試品是否引起動(dòng)物全身過(guò)敏反應(yīng)。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容

2010版與2005版區(qū)別2010版2005版1、供試品溶液進(jìn)行激發(fā)

供試品進(jìn)行攻擊2、制備配制3、腹腔或適宜的途徑注射腹腔注射4、稱量

測(cè)定2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容2010版2005版6、動(dòng)物有無(wú)過(guò)敏反應(yīng)癥狀動(dòng)物有無(wú)豎毛、呼吸困難、抽搐等過(guò)敏反應(yīng)7、如在同一只動(dòng)物上出現(xiàn)豎毛、發(fā)抖、干嘔、連續(xù)噴嚏3聲、連續(xù)咳嗽3聲，紫癜和呼吸困難等現(xiàn)象如有豎毛、噴嚏、干嘔、連續(xù)咳嗽3聲和呼吸困難等現(xiàn)象8、或出現(xiàn)二便失禁、步態(tài)不穩(wěn)或倒地、抽搐、休克、死亡現(xiàn)象之一者或出現(xiàn)抽搐、休克、死亡現(xiàn)象之一者2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容

修訂背景1、適宜的途徑——考慮對(duì)腹腔有刺激性的藥物不適宜腹腔注射；2、強(qiáng)調(diào)同一只動(dòng)物上；3、增加部分嚴(yán)重的反應(yīng)指標(biāo)。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容六.降壓物質(zhì)檢查法定義2010版與2005版區(qū)別修訂背景2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容六.降壓物質(zhì)檢查法

定義：本法系比較組胺對(duì)照品（S）與供試品（T）引起麻醉貓血壓下降的程度，以判定供試品中所含降壓物質(zhì)的限度是否符合規(guī)定2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容2010版與2005版區(qū)別2010版2005版1、經(jīng)驗(yàn)證保持活性符合要求的條件下

如無(wú)沉淀析出2、制備配制3、按品種項(xiàng)下規(guī)定的限值，且供試品溶液與對(duì)照品稀釋液的注入體積應(yīng)相等的要求，制備適當(dāng)濃度的供試品溶液。按品種項(xiàng)下規(guī)定的限量，配成適當(dāng)濃度的供試品溶液。試驗(yàn)時(shí)，一般要求供試品溶液與對(duì)照品稀釋液的注入體積應(yīng)相等2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容2010版與2005版區(qū)別4、一般為13.3～20.0kPa一般為13.3~16.0kPa5、每次注射應(yīng)在前一次反應(yīng)恢復(fù)穩(wěn)定以后進(jìn)行，且相鄰兩次注射的間隔時(shí)間應(yīng)盡量保持一致相鄰兩次注射的間隔時(shí)間應(yīng)一致（3~5分鐘），每次注射應(yīng)在前一次反應(yīng)恢復(fù)穩(wěn)定以后進(jìn)行6、則判定即認(rèn)為2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容

修訂背景1、強(qiáng)調(diào)對(duì)照品的降壓活性要符合要求2、強(qiáng)調(diào)貓的正常血壓范圍為13.3~20.0kPa3、強(qiáng)調(diào)每次注射應(yīng)在前一次反應(yīng)恢復(fù)穩(wěn)定以后進(jìn)行，而不強(qiáng)調(diào)要3~5分鐘之內(nèi)。

2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容七.生物檢定統(tǒng)計(jì)法定義：生物檢定統(tǒng)計(jì)法主要敘述的是應(yīng)用生物檢定時(shí)必須注意的基本原則、一般要求、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及統(tǒng)計(jì)方法。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容

2010版與2005版區(qū)別2010版2005版1、生物檢定法是利用生物體包括整體動(dòng)物、離體組織、器官、細(xì)胞和微生物等評(píng)估藥物生物活性的一種方法。它以藥物的藥理作用為基礎(chǔ)，以生物統(tǒng)計(jì)為工具，運(yùn)用特定的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)在一定條件下比較供試品和相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌匪a(chǎn)生的特定反應(yīng)，通過(guò)等反應(yīng)劑量間比例的運(yùn)算或限值劑量引起的生物反應(yīng)程度，從而測(cè)定供試品的效價(jià)、生物活性或雜質(zhì)引起的毒性

生物檢定法是利用藥物對(duì)生物體或其離體器官組織等所起的藥理作用來(lái)檢定藥物效價(jià)的方法，用于無(wú)適當(dāng)理化方法進(jìn)行檢定的藥物2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容2010版2005版2、可信限和可信限率可信限3、效價(jià)的可信限率為可信限的高限與低限之差除以2倍平均數(shù)（或效價(jià)）后的百分率：

———2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容2010版2005版5、但刪除個(gè)別結(jié)果應(yīng)符合“特異反應(yīng)剔除”的要求

—2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容2010版2005版6、如果ｎ次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不均一性并非個(gè)別實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響,則按(42)式、(43)式計(jì)算校正權(quán)重W′，如經(jīng)公式（43）計(jì)算結(jié)果為負(fù)值，可以刪除減號(hào)后面一項(xiàng)，計(jì)算近似的Sm2和各次實(shí)驗(yàn)的W′。用W′和∑W′代替公式（37）（38）中W和∑W計(jì)算M、Sm

，再按(39)式、(40)式、(41)式計(jì)算M的FL、PT及其FL

(42)

(43)

f=n-1

如果n次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不均一性并非個(gè)別實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，則按（42）或（43）式計(jì)算n個(gè)M的不加權(quán)均值M及其SM，再按（39）式、（40）式、（41）式計(jì)算的M的FL、PT及其FL2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容2010版2005版7、經(jīng)特異反應(yīng)剔除計(jì)算（公式10），無(wú)個(gè)別刪除結(jié)果

—8、合并計(jì)算中M=lgPT

—9、Sm2合并計(jì)算中各次實(shí)驗(yàn)間的差方

—10、W′合并計(jì)算中各次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的校正權(quán)重

—2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容2010版2005版11、計(jì)算結(jié)果為負(fù)數(shù),可刪除減號(hào)后面項(xiàng)，Sm2=0.001007計(jì)算各次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的差方Sm2、差方和（SM2+Sm2）、校正權(quán)重W’、ΣW’M,見(jiàn)表7-2

—2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容2010版與2005版區(qū)別12、對(duì)結(jié)果不均一時(shí)進(jìn)行了舉例：如胰島素測(cè)定結(jié)果不均一時(shí)計(jì)算表及計(jì)算方法2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容

修訂背景1、生物檢定法的概念2、可信限率的定義及公式3、（42）、（43）公式修訂4、Sm2(各次實(shí)驗(yàn)差方)及W′(校正權(quán)重)的定義5、合并計(jì)算時(shí)Ｍ＝lgPT2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容八.中藥注射劑安全性檢查法

應(yīng)用指導(dǎo)原則2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容八.中藥注射劑安全性檢查法

應(yīng)用指導(dǎo)原則中藥安全性檢查項(xiàng)目的設(shè)定安全性檢查方法和檢查限值確定2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容八.中藥注射劑安全性檢查法

應(yīng)用指導(dǎo)原則本指導(dǎo)原則為中藥注射劑臨床使用的安全性和制劑質(zhì)量可控性而定。中藥注射劑安全性檢查包括：熱原（或細(xì)菌內(nèi)毒素）、異常毒性、降壓物質(zhì)、過(guò)敏反應(yīng)物質(zhì)、溶血與凝聚等項(xiàng)。根據(jù)處方、工藝、用法及用量等設(shè)定相應(yīng)檢查項(xiàng)目進(jìn)行適用性研究。·2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容（一）中藥安全性檢查項(xiàng)目的設(shè)定

靜脈用注射劑：應(yīng)設(shè)熱原（或細(xì)菌內(nèi)毒素）、異常毒性、過(guò)敏反應(yīng)、溶血與凝聚等安全性檢查項(xiàng)，必要時(shí)考慮降壓物質(zhì)檢查項(xiàng)。（功能主治中具有與升壓相關(guān)內(nèi)容的注射劑除外）中藥注射劑中致熱成分復(fù)雜，可能干擾細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，一般首選熱原檢查項(xiàng)，如該藥本身具有清熱的藥理作用或?qū)彝糜卸拘苑磻?yīng)，也可選擇細(xì)菌內(nèi)毒素檢查項(xiàng)。

肌內(nèi)注射用注射劑：應(yīng)設(shè)異常毒性、過(guò)敏反應(yīng)等檢查項(xiàng)。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容（二）安全性檢查方法和檢查限值確定方法適用性（設(shè)定限值前研究）確定限值應(yīng)進(jìn)行三批以上供試品的檢查驗(yàn)證2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容1.熱原-細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法適用性（設(shè)定限值前研究）熱原檢查應(yīng)做適用性研究，求得對(duì)家兔無(wú)毒性反應(yīng)、不影響正常體溫和無(wú)解熱作用的劑量。細(xì)菌內(nèi)毒素檢查應(yīng)進(jìn)行干擾試驗(yàn)，求得最大無(wú)干擾濃度。檢查方法

參照熱原檢查法（附錄ⅩⅢA）或細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法（附錄ⅩⅢD）。品種項(xiàng)下可以增加稀釋濃度、調(diào)節(jié)pH和滲透壓或緩慢注射等排除干擾或影響的特殊規(guī)定。

2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容設(shè)定限值--熱原檢查限值根據(jù)臨床一小時(shí)內(nèi)最大用藥劑量計(jì)算。熱原檢查限值可參照臨床劑量計(jì)算，一般為人用每公斤體重每小時(shí)最大供試品劑量的3～5倍，供試品注射體積每公斤體重一般不少于0.5mL，不超過(guò)10mL。限值劑量應(yīng)不影響正常體溫。

2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容設(shè)定限值--內(nèi)毒素檢查限值根據(jù)臨床一小時(shí)內(nèi)最大用藥劑量計(jì)算內(nèi)毒素檢查限值按規(guī)定要求計(jì)算，由于藥物和適應(yīng)癥(如抗感染、抗腫瘤、心血管藥等急重病癥用藥、兒童老人用藥、復(fù)合用藥、大輸液等)的不同，限值可適當(dāng)嚴(yán)格，至計(jì)算值的1/3～1/2，以保證安全用藥。細(xì)菌內(nèi)毒素測(cè)定濃度應(yīng)無(wú)干擾反應(yīng)。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容2.異常毒性檢查

方法適用性（設(shè)定限值前研究）可參考文獻(xiàn)數(shù)據(jù)，并經(jīng)單次靜脈注射給藥毒性試驗(yàn)確定該注射劑的急性毒性數(shù)據(jù)（LD50或LD1及其可信限）?？捎啥鄠€(gè)實(shí)驗(yàn)室或多種來(lái)源動(dòng)物試驗(yàn)求得LD50和LD1數(shù)據(jù)。注射速度0.1ml/秒，觀察時(shí)間為72小時(shí)。如其它給藥途徑或延長(zhǎng)觀察時(shí)間應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)途徑或相應(yīng)觀察時(shí)間的急性毒性試驗(yàn)。

檢查方法參照異常毒性檢查法（附錄ⅩⅢE）。對(duì)動(dòng)物、給藥途徑和給藥次數(shù)、觀察指標(biāo)和時(shí)間等，方法和限值有特殊要求時(shí)，可在品種項(xiàng)下另作規(guī)定。

2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容設(shè)定限值限值應(yīng)低于該注射劑本身毒性的最低致死劑量考慮到實(shí)驗(yàn)室間差異、動(dòng)物反應(yīng)差異和制劑的差異，建議限值至少應(yīng)小于LD1可信限下限的1/3(建議采用1/3～1/6)，如難以計(jì)算最低致死量，可采用LD50可信限下限的1/4(建議采用1/4～1/8)。如半數(shù)致死量與臨床體重劑量之比小于20，可采用LD50可信限下限的1/4或LD1可信限下限的1/3。靜脈注射最大劑量0.8ml/20g仍未見(jiàn)毒性反應(yīng)或死亡，可以此作為檢查限值。

2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容3.降壓物質(zhì)檢查

方法適用性（設(shè)定限值前研究）供試品按一定注射速度靜脈注射不同劑量，觀察供試品對(duì)貓血壓反應(yīng)的劑量反應(yīng)關(guān)系。

供試品與對(duì)照品注射體積應(yīng)相同，通常為0.2～1ml/kg，求得供試品降壓物質(zhì)檢查符合規(guī)定的最大劑量（最大無(wú)降壓反應(yīng)劑量）。檢查方法參照降壓物質(zhì)檢查法（附錄ⅩⅢF）。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容設(shè)定限值臨床單次用藥劑量的1/5～5倍作為降壓反應(yīng)物質(zhì)檢查劑量限值，急重病癥用藥盡可能采用高限。特殊情況下，如供試品有一定降壓作用，則可按最大無(wú)降壓反應(yīng)劑量的1/2-1/4作為限值劑量。供試品原液靜脈注射1ml/kg劑量未見(jiàn)降壓反應(yīng)，該劑量可作為給藥限值

2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容4.過(guò)敏反應(yīng)檢查方法適用性（設(shè)定限值前研究）測(cè)定供試品對(duì)豚鼠腹腔(或皮下)和靜脈給藥的無(wú)毒性反應(yīng)劑量。可采用注射劑的半成品原輔料進(jìn)行致敏和激發(fā)研究，確定致敏方式和次數(shù)在首次給藥后14、21、28天中選擇最佳激發(fā)時(shí)間。檢查方法參照過(guò)敏反應(yīng)檢查法（附錄ⅩⅢG）。

2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容設(shè)定限值致敏和激發(fā)劑量應(yīng)小于該途徑的急性毒性反應(yīng)劑量,適當(dāng)參考臨床劑量一般激發(fā)劑量大于致敏劑量。常用腹腔或鼠鼷部皮下注射途徑致敏，每次每只0.5ml,每只1ml靜脈注射激發(fā)。如致敏劑量較小，可適當(dāng)增加致敏次數(shù)，方法和限值的特殊要求應(yīng)在品種項(xiàng)下規(guī)定。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容5.溶血與凝聚檢查

方法適用性（設(shè)定限值前研究）對(duì)注射劑原液和稀釋液進(jìn)行溶血與凝聚實(shí)驗(yàn)研究,指標(biāo)除目測(cè)外，可增加比色法和顯微鏡下紅細(xì)胞計(jì)數(shù)方法,確定無(wú)溶血和或凝聚的最大濃度檢查方法參照溶血與凝聚檢查法（附錄ⅩⅢH）。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容設(shè)定限值以無(wú)溶血和凝聚的最大濃度的1/2作為限值濃度一般應(yīng)高于臨床最大使用濃度。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容

修訂背景

1、增加了中藥安全性檢查項(xiàng)目的設(shè)定原則。2、增加了限制前研究（即方法適用性研究），使方法更具科學(xué)性、可操作性。3、安全性檢查法內(nèi)容省略，檢查限值設(shè)定更加具體明確。4、家兔熱原檢查法檢查限值由人用每公斤體重每小時(shí)最大供試品劑量的1-3倍修改為3-5倍。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容九.化學(xué)藥品注射劑安全性檢查法

應(yīng)用指導(dǎo)原則2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容化學(xué)藥品注射劑安全性檢查法

應(yīng)用指導(dǎo)原則化學(xué)藥品（包括抗生素、生化藥品）安全性檢查項(xiàng)目的設(shè)定安全性檢查方法和檢查限值確定化藥與中藥注射劑安全性檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則的異同點(diǎn)2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容化學(xué)藥品注射劑安全性檢查法

應(yīng)用指導(dǎo)原則本指導(dǎo)原則為化學(xué)藥品注射劑臨床使用的安全性和制劑質(zhì)量可控性而定?；瘜W(xué)藥注射劑安全性檢查包括異常毒性、細(xì)菌內(nèi)毒素（或熱原）、降壓物質(zhì)（或組胺物質(zhì)）、過(guò)敏反應(yīng)等項(xiàng)。根據(jù)處方、工藝、用法及用量等設(shè)定相應(yīng)的檢查項(xiàng)目進(jìn)行適用性研究。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容（一）化學(xué)藥品（包括抗生素、生化藥品）安全性檢查項(xiàng)目的設(shè)定1、靜脈用注射劑應(yīng)設(shè)細(xì)菌內(nèi)毒素（或熱原）檢查項(xiàng)。所用原料系動(dòng)物來(lái)源或微生物發(fā)酵液提取物，組分結(jié)構(gòu)不清晰或有可能污染毒性雜質(zhì)，且又缺乏有效的理化分析方法的靜脈用注射劑，應(yīng)考慮設(shè)立異常毒性檢查項(xiàng)。

2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容安全性檢查項(xiàng)目的設(shè)定1、靜脈用注射劑所用原料系動(dòng)物來(lái)源或微生物發(fā)酵提取物時(shí),組分結(jié)構(gòu)不清晰，且有可能污染異源蛋白或未知過(guò)敏反應(yīng)物質(zhì)的靜脈用注射劑，如缺乏相關(guān)的理化分析方法且臨床發(fā)現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)，應(yīng)考慮設(shè)立過(guò)敏反應(yīng)檢查項(xiàng)。所用原料系動(dòng)物來(lái)源或微生物發(fā)酵提取物時(shí),組分結(jié)構(gòu)不清晰或有可能污染組胺、類組胺樣降血壓物質(zhì)的靜脈用注射劑，應(yīng)考慮設(shè)立降壓物質(zhì)或組胺類物質(zhì)檢查項(xiàng)。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容安全性檢查項(xiàng)目的設(shè)定2、肌內(nèi)注射用注射劑所用原料系動(dòng)物來(lái)源或微生物發(fā)酵提取物時(shí),組分結(jié)構(gòu)不清晰或有可能污染毒性雜質(zhì)，且又缺乏有效的理化分析方法的肌內(nèi)注射用注射劑，應(yīng)考慮設(shè)立異常毒性檢查項(xiàng)。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容安全性檢查項(xiàng)目的設(shè)定2、肌內(nèi)注射用注射劑所用原料系動(dòng)物來(lái)源或微生物發(fā)酵提取物時(shí),組分結(jié)構(gòu)不清晰或有可能污染異源蛋白或未知過(guò)敏反應(yīng)物質(zhì)的肌內(nèi)注射用注射劑，如缺乏相關(guān)理化分析方法且臨床發(fā)現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)，應(yīng)考慮設(shè)立過(guò)敏反應(yīng)檢查項(xiàng)。臨床用藥劑量較大，生產(chǎn)工藝易污染細(xì)菌內(nèi)毒素的肌內(nèi)注射用注射劑，應(yīng)考慮設(shè)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查項(xiàng)2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容安全性檢查項(xiàng)目的設(shè)定3、特殊途徑的注射劑椎管內(nèi)、腹腔、眼內(nèi)等特殊途徑的注射劑，其安全性檢查項(xiàng)目一般應(yīng)符合靜脈用注射劑的要求，必要時(shí)增加其它安全性檢查項(xiàng)目，如刺激性檢查、細(xì)胞毒性檢查。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容安全性檢查項(xiàng)目的設(shè)定4、注射劑輔料注射劑輔料使用面廣，用量大，來(lái)源復(fù)雜，與藥品的安全性直接相關(guān)。在質(zhì)量控制中，應(yīng)根據(jù)輔料來(lái)源、性質(zhì)、用途、用法用量，配合理化分析方法，設(shè)立必要的安全性檢查項(xiàng)目。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容安全性檢查項(xiàng)目的設(shè)定5、其它原料和生產(chǎn)工藝特殊的注射劑必要時(shí)應(yīng)增加特殊的安全性檢查項(xiàng)目，如病毒檢查、細(xì)胞毒性檢查等。

2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容（二）安全性檢查方法和檢查限值確定

---組胺檢查法定義：本法系將一定濃度的供試品和組胺對(duì)照品分別觀察出現(xiàn)的收縮反應(yīng)幅度并加以比較，以判定供試品是否符合規(guī)定的一種方法。不合格供試品表明含有組胺和類組胺物質(zhì)，在臨床上可能引起血壓下降和類似過(guò)敏反應(yīng)等嚴(yán)重的不良反應(yīng)。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容（二）安全性檢查方法和檢查限值確定

---組胺檢查法檢查方法

參照本附錄“附組胺類物質(zhì)檢查法”設(shè)定限值前研究在確定限值前，應(yīng)考察供試品對(duì)組胺對(duì)照品引起的離體豚鼠回腸收縮反應(yīng)的干擾（抑制或增強(qiáng)），求得最大無(wú)收縮干擾濃度。若供試品的處方、生產(chǎn)工藝等任何有可能影響試驗(yàn)結(jié)果的條件發(fā)生改變時(shí)，需重新進(jìn)行干擾試驗(yàn)。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容組胺檢查法干擾試驗(yàn)

按組胺類物質(zhì)檢查法，依下列順序準(zhǔn)確注入供試品稀釋液加對(duì)照品稀釋液低劑量、對(duì)照品稀釋液低劑量、供試品稀釋液加對(duì)照品稀釋液高劑量、對(duì)照品稀釋液高劑量（dSL+T、dSL、dSH+T、dSH

），重復(fù)一次，如dSL+T及dSH+T所致的反應(yīng)值與dSL及dSH所致的反應(yīng)值基本一致，可認(rèn)為供試品不干擾組胺物質(zhì)檢查；同時(shí)應(yīng)進(jìn)行本法與降壓物質(zhì)檢查法符合性的研究。否則該品種不適合設(shè)立組胺物質(zhì)檢查項(xiàng)，建議設(shè)立降壓物質(zhì)檢查項(xiàng)。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容組胺檢查法限值確定

除特殊要求外，原則上與降壓物質(zhì)檢查限值一致，以臨床單次用藥劑量的1/5～5倍量和每千克體重0.1μg組胺劑量計(jì)算注射劑含組胺類物質(zhì)檢查限值，其計(jì)算公式為：限值L=K/M，其中K值為人每千克體重接受的組胺量（0.1μg/kg），M為降壓物質(zhì)檢查限值（mg/kg、ml/kg、IU/kg）。供試品劑量應(yīng)低于最大無(wú)收縮干擾劑量?？鼓[瘤藥、心血管病藥等急重病癥用藥應(yīng)采用高限。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容組胺類物質(zhì)檢查法定義本法系比較組胺對(duì)照品（S）與供試品（T）引起豚鼠離體回腸收縮的程度，以判定供試品中含組胺類物質(zhì)的限度是否符合規(guī)定。

2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容

增訂背景1．降壓物質(zhì)檢查法使用的動(dòng)物為貓，現(xiàn)在貓來(lái)源復(fù)雜、而且難以得到，動(dòng)物數(shù)量、質(zhì)量都難以保證。因此使用組胺檢查法作為體外替代方法。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容增訂背景2．許多中藥注射劑品種在做降壓物質(zhì)檢查時(shí)，存在一過(guò)性降壓現(xiàn)象，如清開(kāi)靈注射液、復(fù)方苦參注射液等，但在臨床使用時(shí)并不存在降壓現(xiàn)象；還有一些活血化瘀類中藥注射劑品種如紅花注射液，丹參注射液，紅花黃色素注射液等，本身具有擴(kuò)張血管的作用，在做降壓物質(zhì)檢查時(shí)，在與臨床劑量等同的情況下，血壓出現(xiàn)大幅度下降的情況。究其原因，是中藥注射劑的成分復(fù)雜，還是其本身擴(kuò)張血管的作用，尚不清楚。因此，在中藥注射液的安全性評(píng)價(jià)中是否增加降壓物質(zhì)檢查項(xiàng)一直存在爭(zhēng)議。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容增訂過(guò)程組胺檢查法是豚鼠離體回腸收縮法在藥品檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用。豚鼠離體回腸收縮法本身是一種成熟的藥理實(shí)驗(yàn)方法，在基礎(chǔ)藥理研究領(lǐng)域應(yīng)用廣泛，其作用機(jī)制、拮抗劑與激動(dòng)劑的類型與劑量等基礎(chǔ)研究均細(xì)致深入。本法在借鑒的基礎(chǔ)上，對(duì)試驗(yàn)條件、結(jié)果判定等進(jìn)行了明確與改良。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容附組胺檢查法營(yíng)養(yǎng)液組成特點(diǎn)A液：試驗(yàn)當(dāng)日，取氯化鈉160.0g、氯化鉀4.0g、氯化鈣（按無(wú)水物計(jì)算）2.0g、氯化鎂（按無(wú)水物計(jì)算）1.0g與磷酸氫二鈉（含12個(gè)結(jié)晶水）0.10g，加注射用水700ml使溶解，再加入注射用水適量，使成1000ml。B液：取硫酸阿托品0.5mg、碳酸氫鈉1.0g、葡萄糖（含1個(gè)結(jié)晶水）0.5g，加適量注射用水使溶解，加A液50.0ml，混合后加注射用水使成1000ml。B液應(yīng)臨用前配制，并在24h內(nèi)應(yīng)用。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容結(jié)果判定方法如供試品溶液引起回腸收縮：則分別計(jì)算dSL、dT所致反應(yīng)的平均值。若dT

所致反應(yīng)的均值不大于dSL

所致反應(yīng)的均值，即判定供試品組胺類物質(zhì)檢查符合規(guī)定；若dT

所致反應(yīng)的均值大于dSL所致反應(yīng)的均值，即判定供試品組胺類物質(zhì)檢查不符合規(guī)定。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容結(jié)果判定方法如供試品不引起回腸收縮：則在供試品溶液中加入組胺對(duì)照品高、低劑量，并按下列次序準(zhǔn)確注入dSH、dSL+T、dSH+T、dSL,重復(fù)一次。若供試品組胺溶液產(chǎn)生的收縮與對(duì)應(yīng)組胺對(duì)照液高、低劑量的收縮基本一致，可判定供試品組胺類物質(zhì)檢查符合規(guī)定；若供試品組胺溶液產(chǎn)生的收縮與對(duì)應(yīng)組胺對(duì)照液高、低劑量產(chǎn)生的收縮不相符，即減少或無(wú)收縮，或不能重復(fù)出現(xiàn)，則此檢查結(jié)果無(wú)效，應(yīng)進(jìn)行供試品的降壓物質(zhì)檢查。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容技術(shù)要求與注意事項(xiàng)

動(dòng)物要求1、實(shí)驗(yàn)證實(shí)純種動(dòng)物對(duì)組胺的反應(yīng)更為靈敏，收縮值高，靈敏度也較為穩(wěn)定。因此使用純種動(dòng)物是保證實(shí)驗(yàn)順利的基礎(chǔ)。2、動(dòng)物體重應(yīng)嚴(yán)格控制在250-350g，動(dòng)物體重過(guò)大、過(guò)小靈敏度均難以重復(fù)。3、禁食時(shí)間對(duì)豚鼠的腸道平滑肌功能有直接影響，故動(dòng)物禁食應(yīng)控制在24h左右，禁食后未使用的動(dòng)物近期內(nèi)不應(yīng)用于本實(shí)驗(yàn)。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容技術(shù)要求與注意事項(xiàng)腸管處置1、剖腹取出回腸一段（選用遠(yuǎn)端小腸，因?yàn)榇硕巫蠲舾校⒁獗苊庖驙坷够啬c受損，腸系膜不必要全部分離，容易損傷腸管，少帶一些血管組織，腸管更有活力。2、新鮮取出的腸管宜立刻浸泡至營(yíng)養(yǎng)液B中。3、腸管剪取2～3cm長(zhǎng)，具體長(zhǎng)度應(yīng)依據(jù)浴桶高度取舍。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容技術(shù)要求與注意事項(xiàng)4、剪取后立即使其在營(yíng)養(yǎng)中平衡一段時(shí)間，并在20分鐘內(nèi)開(kāi)始給予組胺。

5、離體腸管可以保存于B液中，至2-8℃冰箱中冷藏，通入氧氣，24h內(nèi)可以使用。冰箱中保存的離體腸管使用時(shí)宜掛在浴桶內(nèi)1h左右后再開(kāi)始試驗(yàn)。

2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容技術(shù)要求與注意事項(xiàng)預(yù)負(fù)荷對(duì)于準(zhǔn)確記錄組胺引起的回腸收縮值十分重要，調(diào)零后應(yīng)預(yù)加負(fù)荷1g左右，調(diào)節(jié)使其對(duì)收縮的反應(yīng)最為靈敏。在腸管平衡的過(guò)程中，因腸管松弛，預(yù)加的負(fù)荷值會(huì)降低，必要時(shí)應(yīng)調(diào)整使其對(duì)收縮的反應(yīng)最為靈敏。但在確定了dSH、dSL后，則不應(yīng)調(diào)整，否則可能引起dSH、dSL的收縮高度改變，失去意義。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容技術(shù)要求與注意事項(xiàng)干擾的判斷干擾的判斷是試驗(yàn)過(guò)程的重要影響因素。試驗(yàn)中有時(shí)靈敏度的下降與樣品干擾引起的回腸收縮降低難以區(qū)分，應(yīng)靜置或沖洗浴筒使靈敏度恢復(fù)后重新試驗(yàn)。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容技術(shù)要求與注意事項(xiàng)

建議先取一段腸管，以組胺對(duì)照液10-9、10-8、10-7、10-6g/ml…依次給予，觀察腸管收縮，以確定所用動(dòng)物的最佳劑量范圍；要注意的是如果組胺對(duì)照液的濃度過(guò)高，有可能使腸管收縮難以恢復(fù)，應(yīng)更換腸管。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容（三）化藥與中藥注射劑安全性檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則的異同點(diǎn)

1.安全性檢查法和檢查限值確定中異常毒性檢查、細(xì)菌內(nèi)毒素、熱原檢查、降壓物質(zhì)檢查、過(guò)敏反應(yīng)檢查兩者一致。2.化學(xué)安全性檢查項(xiàng)目設(shè)定原則中增加了特殊途徑的注射劑、注射劑輔料及其它。3.化學(xué)注射劑增加了組胺類物質(zhì)檢查項(xiàng),而中藥注射劑增加了溶血與凝聚檢查。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容十、中藥生物活性測(cè)定

指導(dǎo)原則生物活性測(cè)定法是以藥物的生物效應(yīng)為基礎(chǔ)，以生物統(tǒng)計(jì)為工具，運(yùn)用特定的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，測(cè)定藥物有效性的一種方法，從而達(dá)到控制藥品質(zhì)量的作用。其測(cè)定方法包括生物效價(jià)測(cè)定法和生物活性限值測(cè)定法。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容概念控制中藥有效性的一種方法；方法基礎(chǔ)：生物效應(yīng)；方法工具：統(tǒng)計(jì)學(xué)；目的：控制質(zhì)量；分類：定量法—生物效價(jià)測(cè)定法定性法—生物活性限值測(cè)定法2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容背景中藥的藥材來(lái)源廣泛、多變，制備工藝復(fù)雜，使得中藥制劑的質(zhì)量控制相對(duì)困難中藥往往含有多種活性成分和具有多種藥理作用，僅僅控制少數(shù)成分不能完全控制其質(zhì)量和反映臨床療效為了使中藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)能更好地保證每批藥品的臨床使用安全有效，有必要在現(xiàn)有含量測(cè)定的基礎(chǔ)上增加生物活性測(cè)定，以綜合評(píng)價(jià)其質(zhì)量。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容（一）基本原則

符合藥理學(xué)研究基本原則

應(yīng)符合藥理學(xué)研究隨機(jī)、對(duì)照、重復(fù)的基本原則；具備簡(jiǎn)單、精確特點(diǎn)；判斷標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)明確。體現(xiàn)中醫(yī)藥特點(diǎn)

建立的方法，其測(cè)定指標(biāo)應(yīng)與該中藥的“功能與主治”相一致。品種選擇合理

研究的中藥材或中成藥應(yīng)功能主治明確，優(yōu)先考慮適應(yīng)癥明確，成分單一的中藥注射劑品種，對(duì)急重癥用藥、保護(hù)品種應(yīng)重點(diǎn)進(jìn)行研究。方法科學(xué)可靠

優(yōu)先選用生物效價(jià)測(cè)定法，不能建立生物效價(jià)測(cè)定的品種可考慮采用生物活性限值測(cè)定法2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容體現(xiàn)中醫(yī)藥特色

難度大；判定指標(biāo)和中醫(yī)的“功能主治”如何銜接？多功能主治中藥指標(biāo)的選擇。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容品種選擇合理功能主治明確；適應(yīng)癥單一；中藥注射劑；急重癥用藥；保護(hù)品種；新藥？2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容方法科學(xué)可靠

生物效價(jià)法生物活性限值測(cè)定法2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容（二）基本內(nèi)容

1、實(shí)驗(yàn)條件試驗(yàn)系選擇供試品選擇標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌愤x擇2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容試驗(yàn)系的選擇

應(yīng)與試驗(yàn)原理和測(cè)定指標(biāo)密切相關(guān)；背景資料清楚、影響因素少、檢測(cè)指標(biāo)靈敏、成本低廉；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的要求。盡可能使用小鼠和大鼠，應(yīng)遵循“優(yōu)化、減少、替代”的“3R”原則。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容供試品的選擇

工藝穩(wěn)定、質(zhì)量合格（目前的標(biāo)準(zhǔn)要求）；飲片應(yīng)基源清楚；使用三批供試品（方法學(xué)研究時(shí)）。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品選擇

首選中藥標(biāo)準(zhǔn)品；可考慮化學(xué)藥作為對(duì)照品；生物效價(jià)測(cè)定法必須要有標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定相對(duì)效價(jià)；生物活性限值測(cè)定法用對(duì)照品作為驗(yàn)證。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容2、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

設(shè)計(jì)原理設(shè)計(jì)類型劑量設(shè)計(jì)

給藥途徑給藥次數(shù)指標(biāo)選擇2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容設(shè)計(jì)原理

所選實(shí)驗(yàn)方法的原理應(yīng)明確；所選擇的檢測(cè)指標(biāo)應(yīng)客觀、專屬性強(qiáng)；能夠體現(xiàn)供試品的功能與主治或藥理作用；如果選擇機(jī)理研究也應(yīng)考慮指標(biāo)的專屬性2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容設(shè)計(jì)類型

采用生物效價(jià)測(cè)定法，應(yīng)按中國(guó)藥典二部附錄“生物檢定統(tǒng)計(jì)法”的要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)研究；采用生物活性限值測(cè)定法，試驗(yàn)設(shè)計(jì)可考慮設(shè)供試品組、陰性對(duì)照組或陽(yáng)性對(duì)照組，測(cè)定方法需建立動(dòng)物模型時(shí)，應(yīng)考慮設(shè)置模型對(duì)照組。重現(xiàn)性好的試驗(yàn)，也可以不設(shè)或僅在復(fù)試時(shí)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照組。2010年版《中國(guó)藥典》生物檢定部分修訂內(nèi)容劑量設(shè)計(jì)

如采用生物效價(jià)測(cè)定法，供試品和標(biāo)準(zhǔn)品均采用多劑量組試驗(yàn)，并按生物檢定的要求進(jìn)行合理的劑量設(shè)計(jì)，使不同劑量之間的生物效應(yīng)有顯著性差異。如采用生物活性限值測(cè)定法，建議只設(shè)一個(gè)限值劑量，限值劑量應(yīng)以產(chǎn)生生物效應(yīng)為宜；但在方法學(xué)研究時(shí)，應(yīng)采用多劑量試驗(yàn)，充分說(shuō)明標(biāo)準(zhǔn)中設(shè)定限值劑量的依據(jù)。2010年版《中國(guó)藥典》生物