DB45T 2180-2020 甘蔗黃葉病毒檢測技術(shù)規(guī)程_第1頁
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DB45甘蔗黃葉病毒檢測技術(shù)規(guī)程Technicalcriterionfordetectionofsugarcaneyellowleafvirus廣西壯族自治區(qū)市場監(jiān)督管理局發(fā)布I1甘蔗黃葉病毒檢測技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了甘蔗黃葉病毒檢測技術(shù)規(guī)程的樣品采集與存放，組織免疫印跡法檢測和一步法3.14.1采樣工具4.2采樣方法4.2.1采樣前和采樣過程中應(yīng)避免樣本交叉污染，采樣及樣品前處理過程中應(yīng)戴一次性手套。4.2.3甘蔗蔗種采樣：取中部種莖，編號保存?zhèn)溆谩?.3運送和存放4.3.1用于組織免疫印跡檢測的樣品采集后，用保溫壺或保溫桶加25.1原理5.2儀器與設(shè)備5.2.4硝酸纖維膜、酒精燈、手術(shù)刀、載玻片、培養(yǎng)皿。5.3試劑5.3.2甘蔗黃葉病毒單克隆抗體。5.3.3堿性磷酸酯酶標二抗。5.3.8標準樣品：5.4操作步驟5.4.1樣品制備5.4.2操作流程5.4.2.1封閉35.4.2.2第一次洗滌5.4.2.3第一次孵育將清洗后的膜轉(zhuǎn)入含有1％脫脂奶粉的TBS-T緩沖液的培養(yǎng)皿中，同時在緩沖液中5.4.2.4第二次洗滌同5.4.2.2。5.4.2.5第二次孵育5.4.2.6第三次洗滌同5.4.2.2。5.4.2.7顯色和終止5.5檢測結(jié)果的判定5.5.1判定依據(jù)5.5.2陰性5.5.3陽性46.1原理6.2儀器與設(shè)備6.2.4組織研磨儀。6.2.5水平電泳系統(tǒng)。6.2.6凝膠成像系統(tǒng)。6.3試劑6.3.5檢測引物:6.3.8標準樣品:同5.3.7。6.4操作步驟5表1每個測試樣本反應(yīng)混合液配制的組分25μL反應(yīng)體系終濃度5×反應(yīng)緩存液5.00μL1×0.50μL0.25μL////6.4.3擴增產(chǎn)物的電泳檢測6.4.4凝膠成像分析6.5

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