DB12T 1292-2023 花椰菜主要流行病害抗性鑒定技術(shù)規(guī)程　

12TechnicalstandardsforidentificationofresistancetoimportantepidemicdiseaI本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件起草單位：天津科潤農(nóng)業(yè)科技股份有限公司、天津市農(nóng)業(yè)科本文件主要起草人：孫德嶺、姚星偉、張小麗、牛國保、單曉政、文正華、劉莉莉、江漢1花椰菜主要流行病害抗性鑒定技術(shù)規(guī)程GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格g，可溶性淀粉0.5g，吐溫801.0g，胰酪胨5.0g，酵母膏5.0g和0.5gNaCl溶于蒸餾水并定容至250m4.2玉米粒培養(yǎng)基4.370%乙醇溶液量取10ml有效氯含量10%的次氯酸25.1恒溫?fù)u床回旋頻率范圍：40r/min～300r/min；溫度控制范圍：5℃~60℃。5.2恒溫培養(yǎng)箱5.3低溫冰柜箱內(nèi)溫度：-15℃~-25℃。5.4滅菌鍋溫度范圍：0℃~135℃;滅菌時(shí)間：4min～120min；最高工作壓力：0.22MPa。5.5超凈工作臺(tái)潔凈等級(jí)：100級(jí)@≥0.5μ;平均風(fēng)速：0.25m/s～0.6m/s。5.7血球計(jì)數(shù)板28℃搖床恒溫培養(yǎng)1天后取出，加入適量無菌水稀釋，用血球采集花椰菜霜霉病病葉表面著生的霉層及其附著物用無菌水沖凈，再用無菌水沖洗3遍，將洗凈的病葉放入無菌培養(yǎng)皿中置于溫度20℃、相對(duì)濕度95%的培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)1d。之后用濕棉球?qū)⑿庐a(chǎn)生的3用雙層無菌紗布保濕48h，用無菌水洗刷孢子濃度至1×106CFU/ml，置于4將新鮮的花椰菜腫根取500g攪碎，4層紗布過濾，2500r/min離心5min，棄上清液；用浮沉淀，重復(fù)3次，用血球計(jì)數(shù)板統(tǒng)計(jì)接種液濃度至1×106CFU/ml，鑒定種子在1%次氯酸鈉溶液中浸泡10min，清水沖洗后置于25℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)催芽或直接播種于育苗盤內(nèi)。裝入準(zhǔn)備好的育苗基質(zhì)土，防蟲網(wǎng)內(nèi)或日光溫室內(nèi)育苗，室內(nèi)溫度白天控制在22℃~25℃,夜晚控制在17℃~20℃,待幼苗長至4片～5片真葉時(shí)進(jìn)行抗病性鑒定。現(xiàn)露珠，第二天制備接種菌液并用小型噴霧器進(jìn)行噴霧接種，均勻噴施至葉片上，在人工氣候室內(nèi)24h采用噴霧法接種。將菌液倒入小型噴霧器中，在接種材料的葉片背面噴灑，每株100μL。接種后將溫度控制在18℃~25℃,黑暗條件下相對(duì)濕度95%～100%保濕24h，24h后降低相對(duì)濕度至80%~徑5mm菌片帶菌絲面貼于幼苗的第3片真葉，用保鮮膜保濕，接種后24h保持在20℃~23℃,相對(duì)濕度4采用噴霧法接種，將制備好的孢子懸液均勻噴灑于幼苗葉片表面，每株100μL。接種后將溫度控給根系造成機(jī)械傷害，將1×108CFU/ml接種菌液5m9病情調(diào)查9.1病情級(jí)別0水孔處有黑色枯接種點(diǎn)上有稀疏病病斑僅出現(xiàn)在接病斑面積占整個(gè)根腫只附著在側(cè)根，數(shù)量占根系全部的病斑從水孔向外發(fā)病葉片病斑面積占葉片面積的病斑面積占整個(gè)主根有根腫附著，側(cè)病斑從水孔向外擴(kuò)展，占葉面積葉片病斑向四處擴(kuò)發(fā)病葉片病斑面積占葉片面積的病斑面積占整個(gè)病斑從水孔向外擴(kuò)展，占葉面積病斑面積達(dá)50%~發(fā)病葉片病斑面積占葉片面積的病斑面積占整個(gè)病斑從水孔向外擴(kuò)展，占葉面積發(fā)病葉片病斑面積占葉片面積的病斑面積占整個(gè)