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12TechnicalstandardsforidentificationofresistancetoimportantepidemicdiseaI本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件起草單位:天津科潤(rùn)農(nóng)業(yè)科技股份有限公司、天津市農(nóng)業(yè)科本文件主要起草人:孫德嶺、姚星偉、張小麗、牛國(guó)保、單曉政、文正華、劉莉莉、江漢1花椰菜主要流行病害抗性鑒定技術(shù)規(guī)程GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格g,可溶性淀粉0.5g,吐溫801.0g,胰酪胨5.0g,酵母膏5.0g和0.5gNaCl溶于蒸餾水并定容至250m4.2玉米粒培養(yǎng)基4.370%乙醇溶液量取10ml有效氯含量10%的次氯酸25.1恒溫?fù)u床回旋頻率范圍:40r/min~300r/min;溫度控制范圍:5℃~60℃。5.2恒溫培養(yǎng)箱5.3低溫冰柜箱內(nèi)溫度:-15℃~-25℃。5.4滅菌鍋溫度范圍:0℃~135℃;滅菌時(shí)間:4min~120min;最高工作壓力:0.22MPa。5.5超凈工作臺(tái)潔凈等級(jí):100級(jí)@≥0.5μ;平均風(fēng)速:0.25m/s~0.6m/s。5.7血球計(jì)數(shù)板28℃搖床恒溫培養(yǎng)1天后取出,加入適量無(wú)菌水稀釋,用血球采集花椰菜霜霉病病葉表面著生的霉層及其附著物用無(wú)菌水沖凈,再用無(wú)菌水沖洗3遍,將洗凈的病葉放入無(wú)菌培養(yǎng)皿中置于溫度20℃、相對(duì)濕度95%的培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)1d。之后用濕棉球?qū)⑿庐a(chǎn)生的3用雙層無(wú)菌紗布保濕48h,用無(wú)菌水洗刷孢子濃度至1×106CFU/ml,置于4將新鮮的花椰菜腫根取500g攪碎,4層紗布過濾,2500r/min離心5min,棄上清液;用浮沉淀,重復(fù)3次,用血球計(jì)數(shù)板統(tǒng)計(jì)接種液濃度至1×106CFU/ml,鑒定種子在1%次氯酸鈉溶液中浸泡10min,清水沖洗后置于25℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)催芽或直接播種于育苗盤內(nèi)。裝入準(zhǔn)備好的育苗基質(zhì)土,防蟲網(wǎng)內(nèi)或日光溫室內(nèi)育苗,室內(nèi)溫度白天控制在22℃~25℃,夜晚控制在17℃~20℃,待幼苗長(zhǎng)至4片~5片真葉時(shí)進(jìn)行抗病性鑒定。現(xiàn)露珠,第二天制備接種菌液并用小型噴霧器進(jìn)行噴霧接種,均勻噴施至葉片上,在人工氣候室內(nèi)24h采用噴霧法接種。將菌液倒入小型噴霧器中,在接種材料的葉片背面噴灑,每株100μL。接種后將溫度控制在18℃~25℃,黑暗條件下相對(duì)濕度95%~100%保濕24h,24h后降低相對(duì)濕度至80%~徑5mm菌片帶菌絲面貼于幼苗的第3片真葉,用保鮮膜保濕,接種后24h保持在20℃~23℃,相對(duì)濕度4采用噴霧法接種,將制備好的孢子懸液均勻噴灑于幼苗葉片表面,每株100μL。接種后將溫度控給根系造成機(jī)械傷害,將1×108CFU/ml接種菌液5m9病情調(diào)查9.1病情級(jí)別0水孔處有黑色枯接種點(diǎn)上有稀疏病病斑僅出現(xiàn)在接病斑面積占整個(gè)根腫只附著在側(cè)根,數(shù)量占根系全部的病斑從水孔向外發(fā)病葉片病斑面積占葉片面積的病斑面積占整個(gè)主根有根腫附著,側(cè)病斑從水孔向外擴(kuò)展,占葉面積葉片病斑向四處擴(kuò)發(fā)病葉片病斑面積占葉片面積的病斑面積占整個(gè)病斑從水孔向外擴(kuò)展,占葉面積病斑面積達(dá)50%~發(fā)病葉片病斑面積占葉片面積的病斑面積占整個(gè)病斑從水孔向外擴(kuò)展,占葉面積發(fā)病葉片病斑面積占葉片面積的病斑面積占整個(gè)
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