2024淋球菌感染的實(shí)驗(yàn)室診斷方法：分離培養(yǎng)

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淋球菌感染的實(shí)驗(yàn)室診斷方法：標(biāo)本的采集和運(yùn)送

淋球菌感染的實(shí)驗(yàn)室診斷方法：革蘭染色鏡檢

1培養(yǎng)基

分離淋球菌一般選用營養(yǎng)豐富的選擇性培養(yǎng)基。常用的選擇性培養(yǎng)基有改

良的Thayer-Martin（T-M）培養(yǎng)基、含抗生素的血液瓊脂或巧克力瓊脂

培養(yǎng)基?？少徺I商品化的培養(yǎng)基或?qū)嶒?yàn)室自配，培養(yǎng)基應(yīng)密封在塑料袋

中，于4。（：冰箱貯存，貯存時(shí)間不應(yīng)超過3周，時(shí)間過久則分離率降低。

分述如下：

1.1Thayer-Martin（T-M）培養(yǎng)基

1）成分。包括GC基礎(chǔ)培養(yǎng)基,血紅蛋白粉，VCNT抑菌劑（含萬古霉

素、多粘菌素、三甲氧節(jié)胺喀碇和制霉菌素）,Eo-Vitalex增菌劑。

2）配制方法。以配制500mL培養(yǎng)基為例，步驟如下：

稱取GC瓊脂粉18g,置一燒瓶中,加235mL蒸播水，搖勻后置

沸水浴15min~30min,使瓊脂完全溶解;

稱取血紅蛋白粉5g,加于乳缽內(nèi)，用250mL蒸憎水分次研磨溶解

后，置沸水浴15min~30min;

將上述兩種溶液置于121T高壓滅菌15min,冷卻至50℃,在無菌

條件下將血紅蛋白溶液緩慢加入到瓊脂液內(nèi)，棄去可能存在的血紅蛋白

沉渣；

取1小瓶Iso-Vitalex增菌劑，用所附的一小瓶稀釋液溶解后加入到

步驟3所配的混合液中，邊加邊搖；

取一小瓶VCNT抑菌劑，用5mL無菌蒸儲(chǔ)水溶解后加入到步驟4

所配的混合液中，邊加邊搖；

在無菌條件下將配好的培養(yǎng)基分裝入無筐平皿中，待凝固后，用塑料

袋封存，置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2GC血液瓊脂培養(yǎng)基

1）成分。包括GC基礎(chǔ)培養(yǎng)基和脫纖維羊血。

2）配制方法：以配制500mL培養(yǎng)基為例，步驟如下：

取GC瓊脂粉18g,置一燒瓶中,加450mL蒸儲(chǔ)水，搖勻后置沸

水浴15min-30min,使瓊脂完全溶解;

將GC瓊脂溶液置于121。(：高壓滅菌15min,冷卻至50℃;

在無菌條件下將50mL脫纖維羊血(羊血在臨用前置37(水浴預(yù)熱)

加入到瓊脂溶液中，搖勻后分裝于無菌平皿中，待凝固后，置塑料袋封

存，置4。(：冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3Amies運(yùn)送培養(yǎng)基

1)成分?；罹€5g,氯化鈉(NaCI)1.5g,磷酸氫二鈉(Na2HPO4)0.575

g,磷酸二氫鉀(KH2PO4)0.1g,氯化鉀(KQ0.1g,硫代乙酸鈉0.5g,

氯化鈣(CaCI)0.05g，氯化鎂(MgCI)0.05g瓊脂2g，蒸儲(chǔ)水500mL。

2)配制方法：以配制500mL培養(yǎng)基為例，步驟如下：

將各種成分加到500mL蒸憎水中，充分混合；

121。(2高壓滅菌15min,冷卻至50℃;然后分裝于小管中，每管6

mL。在分裝時(shí)，不時(shí)搖動(dòng)混勻瓊脂，以使活性炭末處于均勻混懸狀態(tài)；

置2。08。(：可儲(chǔ)存6個(gè)月。

2接種標(biāo)本

取材后標(biāo)本應(yīng)盡可能及早接種。培養(yǎng)基應(yīng)先置于室溫中預(yù)溫。將取材的拭

子轉(zhuǎn)動(dòng)涂布于平皿的上1/4范圍，然后用接種環(huán)分區(qū)劃線，以保證獲得較

純的單個(gè)菌落。

3培養(yǎng)條件

接種標(biāo)本后，立即將平皿置于(36±1)℃,含5%~10%CO2，濕潤(70%

濕度)的環(huán)境中培養(yǎng)。淋球菌為需氧菌，但初代分離需要CO2。CO2

環(huán)境可由CO2培養(yǎng)箱、CO2產(chǎn)氣袋或燭缸提供。使用燭缸時(shí)，應(yīng)使用白

色、無芳香味的無毒蠟燭。在燭缸底部放些浸水棉球以保持一定的濕度。

4觀察結(jié)果

培養(yǎng)24h后檢查平皿，此時(shí)沒有菌生長的平皿應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)至72h，仍無

菌生長才可丟棄，做出淋球菌培養(yǎng)陰性的報(bào)告。因?yàn)槟承┚?，?/p>