實(shí)驗(yàn)一生物組織中還原糖脂肪蛋白質(zhì)的鑒定培訓(xùn)資料

實(shí)驗(yàn)一生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的鑒定教學(xué)內(nèi)容：知識(shí)點(diǎn)可溶性還原糖脂肪蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)原理

幻燈片４實(shí)驗(yàn)步驟

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成功關(guān)鍵注意事項(xiàng)

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幻燈片13討論練習(xí)

幻燈片14幻燈片16作業(yè)

幻燈片19一、實(shí)驗(yàn)原理1.可溶性還原糖生物組織中普遍存在的可溶性糖類(lèi)較多，有葡萄糖、果糖、麥芽糖和蔗糖。前三種糖的分子內(nèi)都含有游離的具還原性的半縮醛羥基，因此叫做還原糖；蔗糖分子內(nèi)沒(méi)有，為非還原糖。實(shí)驗(yàn)中所用的斐林試劑，只能鑒定生物組織中可溶性還原糖，而不能鑒定可溶性非還原糖及不能溶解的糖。斐林試劑為0.1g/mL的NaOH和0.05g/mL的CuSO４配制而成的淡藍(lán)色Cu(OH)2沉淀的懸濁液，葡萄糖溶液在加入斐林試劑后，在加熱條件下Cu(OH)2被還原為磚紅色的Cu2O沉淀，而葡萄糖氧化成葡萄糖酸。其反應(yīng)式為:-CHO+Cu(OH)2-COOH+Cu2O↓磚紅色2.脂肪的鑒定蘇丹Ⅲ(蘇丹Ⅳ)為一種脂肪染色劑(易溶解于酒精，不溶解于水)。蘇丹Ⅲ染液遇脂肪的顏色反應(yīng)為橘黃色，蘇丹Ⅳ染液遇脂肪的顏色反應(yīng)為紅色。其反應(yīng)式為:脂肪蘇丹Ⅲ（蘇丹Ⅳ）

橘黃色（紅色）選材：含糖量較高的白色或近于白色，蘋(píng)果、梨最好

。二、實(shí)驗(yàn)步驟與現(xiàn)象1.可溶性還原糖

制備組織樣液：制漿：去皮、切塊、研磨過(guò)濾：（用單層紗布）取液：（２mL）顯色反應(yīng)２mL組剛配制的斐現(xiàn)象：呈現(xiàn)藍(lán)色開(kāi)水加變成磚紅色2.脂肪的鑒定

取材：花生種子（浸泡３－４h），去皮，將子葉削成薄片制片：選取最薄的薄片移至載玻片中央在薄片上滴加蘇丹Ⅲ染液2－3滴，染色２－３min滴加體積分?jǐn)?shù)為50%的酒精溶液1—2滴，洗去浮色吸去余液，滴1-2滴蒸餾水，蓋上蓋玻片觀察：先在低倍鏡下找到已著色的薄片，后用高倍鏡觀察結(jié)果：有被染成橘黃色的脂肪微粒3.蛋白質(zhì)的鑒定選材與制備組織樣液：黃豆組織樣液（或雞蛋白稀釋液）［黃豆浸泡→去皮→切片→研磨→過(guò)濾→濾液］

顯色反應(yīng)２mL組雙縮脲試劑現(xiàn)象：無(wú)色雙縮脲試劑紫色或紫紅色三、實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵與注意事項(xiàng)：1.實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵在于實(shí)驗(yàn)材料的選擇：⑴．在做可溶性還原糖的鑒定實(shí)驗(yàn)中，最理想的實(shí)驗(yàn)材料是含糖量較高的生物組織(或器官)，而且組織的顏色較淺，最好是白色或近于白色的植物組織，這樣可以避免材料自身顏色對(duì)實(shí)驗(yàn)變化顏色的掩蓋。經(jīng)實(shí)驗(yàn)比較，顏色反應(yīng)的明顯程度依次為蘋(píng)果、梨、白色甘藍(lán)葉、白蘿卜。⑵．在做脂肪的鑒定實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)材料最好選用富含脂肪的種子，且徒手切片要成功，要求實(shí)驗(yàn)技能較高，不妨改成刮取花生子葉泥制作臨時(shí)裝片，易做，效果又好。⑶．在做糖和蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)時(shí)，最好選用富含蛋白質(zhì)的生物組織，植物材料常用的是大豆，動(dòng)物材料常用的是雞蛋，鑒定之前需要留出一部分樣液，以便與鑒定后的樣液的顏色做比較，這樣可增強(qiáng)說(shuō)服力。

(1)斐林試劑很不穩(wěn)定，故應(yīng)將組成斐林試劑的甲液(0.1g/mL的NaOH溶液)和乙液(0.05g/mL的CuSO４溶液)分別配制、儲(chǔ)存，使用時(shí)，再臨時(shí)配制，將4～5滴乙液滴入2mL甲液中，配完后立即使用。切勿將甲液和乙液分別加入組織樣液中。

(2)鑒定可溶性還原糖，加熱試管時(shí)，應(yīng)該用試管夾夾住試管上部，放入盛開(kāi)水的大燒杯加熱；注意試管底部不接觸燒杯底部，同時(shí)試管口不要朝向?qū)嶒?yàn)者，以免試管內(nèi)溶液沸騰時(shí)沖出試管，造成燙傷。如果試管內(nèi)溶液過(guò)于沸騰，可以提起試管夾，使試管與沸水接觸面減少，以免溶液溢出。

A.可溶性還原糖

2.注意事項(xiàng)：

(3)在鑒定脂肪的實(shí)驗(yàn)中，若用花生種子作實(shí)驗(yàn)材料，必須提前浸泡3～4小時(shí)，浸泡時(shí)間短了，不容易切片，浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，則組織太軟，切下的薄片不易成形，切片要盡可能的薄。

(4)染色后一定要用50%的酒精溶液洗去浮色，染色和洗浮色時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)（否則酒精將脂肪溶解影響實(shí)驗(yàn)效果），觀察時(shí)找最薄處最好只有1—2層細(xì)胞。B.脂肪的鑒定

(5)在蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)中，若用蛋白質(zhì)作實(shí)驗(yàn)材料，必須稀釋?zhuān)绻♂尣粔?，與雙縮脲試劑發(fā)生反應(yīng)后會(huì)粘固在試管內(nèi)壁上，使反應(yīng)不徹底，且試管不易洗刷干凈。

(6)雙縮脲試劑的使用，應(yīng)先雙縮脲加試劑A(0.1g/mL的NaOH溶液)，造成堿性的反應(yīng)環(huán)境，再加試劑B(0.01g/mL的CuSO４溶液)。C.蛋白質(zhì)的鑒定例1將小麥種子分別置于20℃和30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4天，依次取等量的萌發(fā)種子分別制成提取液Ⅰ和提取液Ⅱ。取3支試管甲、乙、丙，分別加入等量的淀粉液，然后按下圖加入等量的提取液和蒸餾水，45℃水浴保溫5分鐘，立即在3支試管中加入等量斐林試劑并煮沸2分鐘，搖勻觀察試管中顏色。結(jié)果是 (

)A．甲呈藍(lán)色，乙呈磚紅色，丙呈無(wú)色B．甲呈無(wú)色，乙呈磚紅色，丙呈藍(lán)色C．甲、乙皆呈藍(lán)色，丙呈磚紅色D．甲呈淺磚紅色，乙呈磚紅色，丙呈藍(lán)色各種可供實(shí)驗(yàn)的材料梨黃桃胡蘿卜黃豆花生種子小麥種子①其中適合于鑒定糖的是

，理由是梨的組織細(xì)胞

，你打算用什么試劑鑒定?

。②小麥種子不如花生種子更適合用來(lái)鑒定脂肪，這是因?yàn)?/p>

，你打算用什么試劑鑒定?

.

③適合于鑒定蛋白質(zhì)的是

，理由是

，鑒定所用的試劑是

。

3.討論:做生物組織中可溶性還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇不同的實(shí)驗(yàn)材料。清根據(jù)下表所列各種材料回答問(wèn)題：梨顏色為白色，并且糖含量較高

斐林試劑或班氏試劑脂肪含量不如花生高，也不容易做切片

用蘇丹Ⅲ或蘇丹Ⅳ試劑黃豆和花生

蛋白質(zhì)含量高

雙縮脲試劑

1、某些單子葉植物，如韭菜、鳶尾的葉子內(nèi)含有大量的可溶性還原糖，但這些單子葉植物的葉子不宜作實(shí)驗(yàn)材料，原因是：

這些葉子的顏色較深，對(duì)還原性糖與斐林試劑的顏色反應(yīng)起遮蔽作用２、下列哪組試劑在使用過(guò)程中，必須加熱：

A.斐林試劑鑒定可溶性還原糖的過(guò)程中

B.蘇丹Ⅲ染液在鑒定動(dòng)物組織中的脂肪時(shí)

C.雙縮脲試劑鑒定蛋白質(zhì)時(shí)

D.碘化鉀溶液鑒定淀粉時(shí)（）Ａ課堂練習(xí):３、某學(xué)生在鑒定脂肪的實(shí)驗(yàn)中，在顯微鏡下觀察花生子葉切片，當(dāng)轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)節(jié)器時(shí)，有一部分細(xì)胞看的清楚，另一部分較模糊，這是由于

（

）

A.反光鏡未調(diào)節(jié)好

B.標(biāo)本切的厚薄不均

C.細(xì)調(diào)節(jié)器未調(diào)節(jié)好D.顯微鏡物鏡損壞Ｂ４、蘇丹Ⅲ溶液的配制的方法是：稱(chēng)取0.1g蘇丹Ⅲ干粉，溶于100mL酒精的體積分?jǐn)?shù)為95％溶液中，待全部溶解后再使用，為什么用酒精而不用蒸餾水？蘇丹Ⅲ染液易溶解于酒精中，不易溶解于水。５、鑒定蛋白質(zhì)樣品時(shí)加雙縮脲試劑的正確做法是

A．先加A液，混合后再加B液搖勻觀察（）

B．先加B液，混合后再加A液搖勻觀察

C．A、B混合后加入，搖勻觀察

D．A、B液同時(shí)加入樣液，搖勻后觀察

Ａ６、在生物組織中可溶性還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)中，對(duì)實(shí)驗(yàn)材料的選擇中，錯(cuò)誤的是（）

A、甘蔗莖的薄壁組織、甜菜的塊根等，都含有較多的糖且近于白色，因此可用于進(jìn)行可溶性還原糖的鑒定

B、花生種子含脂肪多且子葉肥厚，適用于脂肪鑒定

C、大豆種子蛋白質(zhì)含量高，可用于蛋白質(zhì)的鑒定

D、雞蛋清含蛋白質(zhì)多，是蛋白質(zhì)鑒定的理想材料Ａ五、作業(yè)：

1．將可溶性糖、脂肪、蛋白質(zhì)鑒定原理及結(jié)淪填寫(xiě)在《實(shí)驗(yàn)報(bào)告冊(cè)》上。

2．斐林試劑主要用來(lái)鑒定可溶性還原糖，其主要成分為NaOH和CuSO4的混合液，用你已有的化學(xué)知識(shí)判斷，這兩種物質(zhì)混合以后能發(fā)生了什么化學(xué)反應(yīng)?

，請(qǐng)解釋為什么斐林試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用，不能放置太久：

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