DB1301-T508-2024毛皮動物細菌性肺炎診治技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.30

CCSB41

1301

石家莊市地方標準

DB1301/T508—2024

毛皮動物細菌性肺炎診治技術(shù)規(guī)程

2024-03-19發(fā)布2024-04-18實施

石家莊市市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB1301/T508—2024

毛皮動物細菌性肺炎診治技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件確立了毛皮動物1)細菌性肺炎2)診治的技術(shù)程序，規(guī)定了診斷、治療等環(huán)節(jié)的操作步驟及要

求，描述了各個程序環(huán)節(jié)的追溯記錄。

本文件適用于養(yǎng)殖場（戶）及動物診療單位對毛皮動物細菌性肺炎的診斷與防治的技術(shù)操作培訓

與指導。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文

件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適

用于本文件。

GB/T14926.43實驗動物細菌學檢測染色法、培養(yǎng)基和試劑

NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運輸技術(shù)規(guī)范

DB1301/T084規(guī)模養(yǎng)殖場病害動物無害化處理技術(shù)規(guī)范

3術(shù)語和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。

4技術(shù)流程圖

毛皮動物細菌性肺炎防控技術(shù)流程圖見圖1。

1)毛皮動物僅限水貂、銀狐、北極狐、貉。

2)細菌性肺炎指由綠膿桿菌、大腸桿菌、巴氏桿菌、克雷伯氏菌、鏈球菌等細菌性病原菌引起的終末氣道、肺泡和肺間質(zhì)炎癥。

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DB1301/T508—2024

圖1毛皮動物細菌性肺炎防控技術(shù)流程圖

5診斷

5.1流行病學調(diào)查

送診動物品種、年齡，是否處于易感期；是否與疑似或確診發(fā)病動物有接觸；水貂、銀狐、北極

狐、貉等毛皮動物均有易感性。

5.2臨床癥狀觀察

患病動物表現(xiàn)咳嗽，呼吸困難，腹式呼吸，精神沉郁，食欲減退，被毛逆亂，體溫升高。不同細

菌性肺炎表現(xiàn)如下：

a)綠膿桿菌：多數(shù)病獸死后鼻中流出血樣液體，部分病獸后肢麻痹現(xiàn)象，主要呈現(xiàn)急性發(fā)作，

少數(shù)病獸未見癥狀突然死亡；

b)大腸桿菌：前期咳嗽，逐漸出現(xiàn)哮喘，呼吸衰竭而死，急性病例通常出現(xiàn)口鼻流血的情況；

c)巴氏桿菌肺炎：除有部分呼吸道癥狀外，有時會伴隨嘔吐和下痢，出現(xiàn)不自覺的咀嚼等神經(jīng)

癥狀，常伴隨抽搐死亡等現(xiàn)象；

d)克雷伯氏菌：肩、背部、尾部、胯部出現(xiàn)膿腫，破潰后流出灰白色粘稠膿汁；

e)鏈球菌：眼中有膿性分泌物，鼻流清液，后期成膿性分泌物。

5.3病理剖檢

患病動物剖檢后肺臟出血、淤血、腫大，切開有泡沫樣血樣流出，具體表現(xiàn)如下：

a)綠膿桿菌肺炎剖檢為出血性肺炎，肺臟出血淤血，氣管內(nèi)充滿血色泡沫；

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b)大腸桿菌肺炎剖檢為間質(zhì)性肺炎，肺炎區(qū)質(zhì)地堅實，呈灰紅色或灰白色，部分病例有化膿灶；

c)巴氏桿菌肺炎剖檢為氣管出血，肺淤血腫大，全身多處粘膜和皮下組織有大量出血點，肝、

脾、腎都有出血點；

d)克雷伯氏菌肺炎剖檢為纖維素性肺炎；

e)鏈球菌肺炎剖檢為各器官廣泛出血，脾臟腫大紫紅色，表面粗糙，兼有小出血點和貧血性梗

死，肝臟充血腫大，呈紅色或淡黃色，腎腫大有出血點和淤血斑，并有化膿性壞死灶。

5.4病原學檢測

5.4.1分離培養(yǎng)

采樣應符合NY/T541要求。無菌采取鼻腔氣管吸取物、胸水、膿液、肺臟等病變組織。劃線接種

于含5%胎牛血清的胰蛋白胨大豆瓊脂平板（TSA）培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)18h～24h，觀察菌落生長情況，

無菌落判斷為非細菌性肺炎。

5.4.2涂片鏡檢

細菌染色按GB/T14926.43執(zhí)行。將培養(yǎng)的菌作涂片，干燥、固定。固定時通過火焰1次～2次即可，

不可過熱，以載玻片不燙手為宜。固定后按照如下步驟操作：

a)初染：加結(jié)晶紫液蓋滿標本處，染1min后水洗，并將玻片上積水輕輕甩凈；

b)媒染：加碘液蓋滿標本處，1min后水洗，甩凈玻片上積水；

c)脫色：加95%酒精蓋滿標本，輕輕搖動玻片，約20s后水洗、甩干；

d)復染：加稀釋石炭酸復紅液或沙黃溶液1滴～2滴蓋滿標本，染30s后水洗，待標本自干或

用吸水紙印干；

e)鏡檢：用香柏油覆蓋涂菌部位，置油鏡觀察，綠膿桿菌呈長棒形，紫紅色；大腸桿菌呈桿狀，

紫紅色；巴氏桿菌呈卵圓形，兩極濃染，紫紅色；克雷伯氏菌呈較短粗的桿菌，單獨、成雙

或短鏈狀排列；鏈球菌呈鏈狀排列，藍色。

5.4.3生化試驗

挑取單個分離菌接種于細菌微量發(fā)酵管中，37℃培養(yǎng)18h～24h，觀察記錄生化反應結(jié)果。

5.4.4分子生物學鑒定

5.4.4.1細菌培養(yǎng)

分離得到的菌種接種于1mL的胰蛋白胨大豆液體培養(yǎng)基(TSB)培養(yǎng)基中，37℃、220r/min培養(yǎng)8

h。

5.4.4.216SrRNA序列擴增

所用引物為16SrRNA通用引物，引物序列為:P1:5’—AGAGTTTGATCCTGGCTCAG－3’，P2:5’－

GGTTACCTTGTTACGACTT－3’。以提取的分離株DNA為模板進行PCR擴增。PCR擴增體系(總體為25μL):2

×EasyTaqPCRSuperMix12.5μL，上下游引物各0.5μL，DNA模板1μL，ddH2O10.5μL。PCR

擴增程序：95℃5min；95℃30s，55℃30s，72℃100s，共35個循環(huán)；72℃10min。預

期擴增的目的片段長度約為1500bp。

5.4.4.3測序分析

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將回收純化后的PCR擴增產(chǎn)物測序，根據(jù)測序比對結(jié)果（同源性比對結(jié)果＞96%）對分離株進行鑒

定和相應編號。

5.5診斷結(jié)果判定

5.5.1初步診斷

根據(jù)流行病學特征和典型臨床癥狀，結(jié)合病理剖檢，做出初步診斷。

5.5.2確診

根據(jù)病原學檢測結(jié)果，確定是何種細菌感染，結(jié)合初步診斷做出確診。

6治療

發(fā)病后立即對發(fā)病動物進行隔離，每天清掃糞便，對養(yǎng)殖場進行全面消毒。針對不同病原菌選擇

不同藥物，根據(jù)疾病嚴重程度選擇用藥量和用藥次數(shù)，連續(xù)用藥時間不超過1周，建議選擇藥物如下。

a)綠膿桿菌肺炎使用環(huán)丙沙星、慶大霉素、丁胺卡那、頭孢哌酮等藥物；

b)大腸桿菌性肺炎使用氟苯尼考、頭孢曲松、頭孢哌酮等藥物；

c)巴氏桿菌肺炎使用頭孢噻呋鈉、林可霉素、恩諾沙星、環(huán)丙沙星等藥物；

d)克雷伯氏菌肺炎使用亞胺培南及多粘菌素等藥物；

e)鏈球菌肺炎使用青霉素、阿莫西林、氨芐西林、恩諾沙星等藥物治療。

藥物使用量見附錄A。

7無害化處理

病死動物按照DB1301/T084的要求進行無害化處理。

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附錄A

（資料性）

常用抗生素用藥參考量

常用抗生素用藥參考量見表A.1。

表A.1常用抗生素用藥參考量

藥物名稱每公斤體重的藥物純含量

青霉素3萬～4萬單位

苯唑西林20mg～30mg

氨芐西林20mg～40mg

羧芐西林55mg～110mg

阿莫西林10mg～30mg

頭孢噻吩（先鋒I）35mg

頭孢噻啶（先鋒Ⅱ）30mg

頭孢氨芐（先鋒IV）10mg～30mg

頭孢唑啉（先鋒V）10mg～30mg

頭孢拉定（先鋒VI）50mg～100mg

頭孢呋辛25mg～50mg

頭孢哌酮20mg

頭孢噻夫鈉10mg

頭孢吡肟20mg

頭孢喹肟2mg

丁胺卡那30mg

慶大霉素10mg～15mg

卡那霉素15mg～25mg

新霉素10mg～20mg

鏈霉素10mg～30mg

大觀霉素20mg

四環(huán)素10mg～20mg

土霉素15mg～50mg

多西環(huán)素10mg～20mg

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表A.1常用抗生素用藥參考量（續(xù)）

藥物名稱每公斤體重的藥物純含量

氟苯尼考20mg

泰樂菌素10mg

泰妙菌素10mg

替米考星