山羊胚胎移植技術(shù)規(guī)程

1件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的NY/T826綿羊羊胚胎移植技術(shù)規(guī)程將超數(shù)排卵及配種后優(yōu)種母羊體內(nèi)的早期胚胎取出或體外獲得的早期胚胎移植到同期發(fā)情受體母24胚胎移植材料及人員裝備5.1胚胎室設(shè)置5.2胚胎室要求手術(shù)室要寬敞、明亮、潔凈、密閉良好、地面硬化，面積不小于35m2，室內(nèi)溫度為25℃~30℃,胚胎操作室要求密閉良好、無菌、無塵，面積不小于20m2，室內(nèi)溫度為25℃~30℃,配備有照明品種優(yōu)良、系譜檔案完整、遺傳性能穩(wěn)定，且個(gè)體年齡1.5～5周歲產(chǎn)后3個(gè)月以上空懷母羊，體型外貌符合品種標(biāo)準(zhǔn)、生產(chǎn)性能好、膘情中等、繁3飼養(yǎng)環(huán)境應(yīng)穩(wěn)定、安靜、衛(wèi)生、通風(fēng)、干燥、溫度適宜根據(jù)山西省氣候特點(diǎn)和山羊的繁殖特性，最適超數(shù)排卵季節(jié)為1.5～5.5周歲產(chǎn)后3個(gè)月以上的空懷普通母羊，膘情良好，健康無病、繁殖機(jī)能正常。受體羊與供體羊同一時(shí)間放入CIDR，取出CIDR的時(shí)間比供體羊早8h～9h，取C4頸靜脈注射靜松靈0.5mL～1.0mL將供體羊麻醉后仰放手手術(shù)部位用濕棉紗清洗后覆蓋創(chuàng)口巾，然后用碘酒消毒，宮角，并將子宮、卵巢引出刀口外，觀察并記錄卵巢排卵情然后把8#～10#沖胚三通管頭朝子宮角方向插入子宮1其氣囊充2mL～3mL空氣，沖胚三通管的出水口接培養(yǎng)皿。在同側(cè)子宮的宮管結(jié)合處，將套管針插入子宮，取出針頭，連接已吸好沖胚液20mL（37℃沖胚結(jié)束后，用37℃左右生理鹽水將子宮、5合好后，傷口撒適量青霉素粉，再縫合皮膚?？p合160萬單位，然后將羊輕輕從手術(shù)架上抬下放到室外，胚液沖洗2～3次，移入盛有胚胎保存液的培養(yǎng)皿中。根據(jù)胚齡、胚胎形態(tài)學(xué)及胚胎發(fā)育情況將胚胎分從液氮罐中取出裝有胚胎的細(xì)管→迅速投入到32℃~35℃水浴中解凍10s左右→剪去封口端→將胚胎推入培養(yǎng)皿中→將胚胎依次放入含10%、6%、3油或在1M蔗糖的解凍液中平衡4min～10min→用胚胎保存液洗3次→鏡檢→胚從液氮罐中取出裝有胚胎的細(xì)管→迅速投入到32℃~35℃水浴中解凍10s左右→剪去封口端→將胚胎推入培養(yǎng)皿中→用胚胎保存液洗3次→鏡檢→胚胎卵管中去。每只受體羊移植1～2枚胚胎，卵巢上無用移胚器先吸少許空氣，再吸少量保存液和1～2枚胚胎，最后吸少許空氣。在受體羊卵點(diǎn)一側(cè)的輸卵管傘部將移胚器針管插入輸卵管2cm吸胚胎方法同11.5.1。在受體羊卵巢有排卵點(diǎn)一側(cè)離宮管結(jié)合處2.0cm～2.5cm的子宮壁上扎一小孔，從此孔將移胚器針管插入子宮腔內(nèi)，輕推移胚6受體羊術(shù)后一周內(nèi)，禁止劇烈運(yùn)動(dòng)，注意檢查創(chuàng)口愈合情移植胚胎的受體羊統(tǒng)一按妊娠母羊進(jìn)行管理，但要注意觀察其胚胎移植后2個(gè)發(fā)情周期內(nèi)是否發(fā)7A.1試劑、藥品及生物制劑磷酸氫二鈉(Na2HPO4)、鹽酸、丙酮酸鈉、葡萄糖、牛血清白蛋白、犢牛血清、青霉素、鏈霉素、生理析純，生物制劑及抗生素應(yīng)符合細(xì)胞培養(yǎng)要8名稱數(shù)量名稱數(shù)量放栓槍一次性創(chuàng)口巾體視顯微鏡2臺(tái)手術(shù)刀保溫板2個(gè)手術(shù)剪培養(yǎng)箱細(xì)管剪2把活動(dòng)手術(shù)架敷料手術(shù)燈平鑷活動(dòng)手術(shù)器械車4臺(tái)紫外線燈止血鉗高壓滅菌儀持針器干燥箱縫針2包天平（萬分之一）縫線超凈工作臺(tái)套管針超純水儀沖胚管(8g3cc、10g3cc)磁力攪拌器硅膠管酸度計(jì)培養(yǎng)皿(ф35mm、ф100mm）各30個(gè)水浴鍋檢胚器、移胚器超聲波清洗儀注射器（2mL、5mL、10mL、20mL）各30個(gè)溫度計(jì)燒杯（500mL、250mL、100mL）記號(hào)筆量筒（100mL、50mL、25mL）各2個(gè)紗布定量瓶（500mL、100mL、50mL）各2個(gè)碘酒棉球、酒精棉球各3廣口瓶試劑瓶（50mL、100mL、500mL）工作服、工作帽、口罩玻璃棒橡膠手套（一次性）50副濾膜過濾器（0.22μm、0.45μm）各20個(gè)PE手套（一次性）剪毛剪臉盆刮毛刀毛巾、肥皂9新購置的玻璃器皿使用前應(yīng)先用自來水刷洗，然后用5%稀鹽酸溶液浸泡12h以上。使用后的玻璃滌20min～30min。金屬器械套管針、檢胚器、移胚器等使用后立即用超純水（阻值16MΩ品采用紫外線消毒滅菌。塑料制品放在距紫外線燈50cm～80cm處，使每平方米厘米有0.06μW能量的沖胚管、硅膠管、套管針、檢胚器、移胚器等用70%～75%酒精浸泡消毒滅菌40min～60min，然PBS液配制及滅菌見D.1表、D.2表。成分分子量組分濃度（mM）含量（g/L）備注氯化鈉（NaCl）氯化鉀（KCl）氯化鈣（CaCl2）氯化鎂（MgCl2或MgCl2.6H2O）磷酸二氫鉀(KH2PO4)磷酸氫二鈉(Na2HPO4或Na2HPO4.7H2O或Na2HPO4.12H2O)配制方法：1.稱上述化學(xué)試劑置于1L燒杯中。58.4474.55147.0295.21或203.3136.09142.0或268.0或358.02.70.680.51.478.098.00.20.10.05或0.10.21.15或2.16或2.90L。2.向燒杯中加入約800mL的超純水（阻值16MΩ~18MΩ),充分?jǐn)嚢枞芙狻?.用鹽酸將PH值調(diào)節(jié)至7.2～7.6，然后加入超純水（阻值16MΩ~18MΩ)定溶至14.高溫（120℃)高壓（0.105Mpa）滅菌20min～30min，4℃保存。使用進(jìn)口成品PBS粉劑配制方法，根據(jù)產(chǎn)品使用說明書。名稱含量（g）含量（g）含量（g）備注A液100mL500mL1000mL為了便于保存，氯化鈉（NaCl）8.040.080.0可配制成A液和B氯化鉀（KCl）0.22.0氯化鈣（CaCl2）0.10.5縮10倍的原液。氯化鎂（MgCl2或MgCl2.6H2O）0.05或0.10.25或0.50.5或1.0A、B原液高壓B液100mL500mL1000mL滅菌后4℃保存。磷酸二氫鉀(KH2PO4)0.22.0磷酸氫二鈉(Na2HPO4或Na2HPO4.7H2O)1.15或2.165.75或10.811.5或21.6國際單位/ml、鏈霉素100國際單位/ml加入取含20%犢牛血清的保存液9.0mL，加入1.0mL甘油，混勻后用0.3%甘油的蔗糖解凍液，混合均勻，用0.22μ供體羊號(hào)CIDR生產(chǎn)廠家、批號(hào)放CIDR時(shí)間注射FSH日期FSH劑量每天劑量總劑量發(fā)情時(shí)間配種時(shí)間地點(diǎn)早第一次品種年齡胎次FSH生產(chǎn)廠家、批號(hào)換CIDR時(shí)間撤CIDR時(shí)間發(fā)情結(jié)束時(shí)間持續(xù)時(shí)間第二次第三次配種公羊號(hào)供體羊號(hào)卵泡數(shù)胚胎質(zhì)量桑椹胚致密桑椹胚早期囊胚囊胚擴(kuò)張囊胚孵化囊胚合計(jì)采胚總數(shù)備注采胚日期左側(cè)卵巢黃體數(shù)A級(jí)B級(jí)A級(jí)采胚開始時(shí)間卵泡數(shù)C級(jí)胚胎質(zhì)量桑椹胚致密桑椹胚早期囊胚囊胚擴(kuò)張囊胚孵化囊胚合計(jì)B級(jí)檢胚人員：地點(diǎn)：采胚結(jié)束時(shí)間右側(cè)卵巢黃體數(shù)A級(jí)B級(jí)受體羊號(hào)品種年齡CIDR批號(hào)放CIDR時(shí)間撤CIDR時(shí)間PMSG廠家、批號(hào)PMSG注射時(shí)間PMSG劑量發(fā)情日期備注同期發(fā)情處理人員：地點(diǎn)：發(fā)情鑒定人員：受體羊號(hào)年齡發(fā)情日期移植時(shí)間卵巢黃體、紅體數(shù)（左/右）卵泡數(shù)（左/右）子宮或輸卵管移植（左/右）胚胎移植數(shù)量供胚羊號(hào)鮮胚或凍胚胚胎解凍方法胚胎發(fā)育階段及等級(jí)返情日期產(chǎn)羔日期產(chǎn)羔數(shù)備注胚胎移植人員：檢胚人員：參加人員：