SZDBZ 129-2015 藍(lán)舌病病毒抗體檢測(cè) 競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附法

DetectionofantibodyagainstBlueton發(fā)布2015-02-27發(fā)布2015-03-01實(shí)施發(fā)布 2規(guī)范性引用文件 3檢測(cè)原理 4縮略語 6主要器械和設(shè)備 9樣品采集和處理 10競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)抗體檢測(cè)方法 附錄A(規(guī)范性附錄)溶液配方 前言彩虹、陶虹、陳兵、葉奕優(yōu)、黃超華、馮倩、盧體康、廖立珊、1藍(lán)舌病病毒抗體檢測(cè)競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附法本標(biāo)準(zhǔn)適用于藍(lán)舌病病毒抗體檢測(cè)、流行病學(xué)調(diào)查和免GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和SN/T2123出入境動(dòng)物檢疫實(shí)驗(yàn)樣品采集、反應(yīng)。本標(biāo)準(zhǔn)中被檢血清和藍(lán)舌病病毒VP7蛋白特異性單克隆抗體先后加入已用藍(lán)舌病病毒VP7蛋白包被的96孔酶標(biāo)板孔內(nèi)，二者競(jìng)爭(zhēng)與孔內(nèi)特異性包被抗原結(jié)合，加入酶標(biāo)辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠IgG，洗滌后，然后加入底物顯色。待檢血清中藍(lán)舌病病毒特異性抗體含量越高，則特異性單克隆抗體與包被抗原結(jié)合的就相對(duì)少，顯色越淺；反之，顯色越深。使用酶標(biāo)儀測(cè)定反應(yīng)物的OD450值，計(jì)算抑），BT：藍(lán)舌病。2SDS：十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰a)包被液、洗滌液、稀釋液、底物液、終止液,配制37.2.1.3按照病毒滴度=蝕斑數(shù)×病毒稀釋倍數(shù)/每孔體積數(shù)進(jìn)行計(jì)試驗(yàn)，在39ku處出現(xiàn)特異性反應(yīng)帶。與藍(lán)離心30min，收獲上清液。上清液經(jīng)35000r/min超速離心2h，按超速離心前體積的1/100，用滅菌4提取的蛋白抗原中加入1%硫柳汞至終濃度為0.01%和Leupeptin蛋白酶抑制劑至終濃度為5），取出酶標(biāo)板棄去液體，將酶標(biāo)板置于ELISA洗板機(jī)，用ELISA洗滌液洗3遍。6APPBCNNDEFGH用稀釋液將McAb-BTVVP7稀釋1000倍，即為McAb-BTPI=(1-檢測(cè)樣品OD450平均值/標(biāo)準(zhǔn)陰性樣品OD450平均值）×100%樣品需用重復(fù)檢測(cè)，若再次檢測(cè)仍為可疑，則判定為陽8A.2ELISA洗滌液（0.01mol/L、pH7.4PBS0.05%氯化鈉（NaCl）4.00g氯化鉀（KCl）牛血清白蛋白（BSA）A.5底物液